CN111751335A - 一种检测氟离子的荧光方法及传感器 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种检测氟离子的荧光方法及传感器，属于纳米生物材料和分析化学技术领域样品溶液中检测氟离子的方法。所述方法包括采用40个胸腺嘧啶碱基的DNA单链作为模板，在pH＝7.8的3‑(N‑吗啉)丙磺酸缓冲溶液中,以抗坏血酸为还原剂，在模板上将Cu2+原位还原为Cu0，生成具有荧光的铜纳米簇CuNCs。然后，加入铝离子Al3+，与所述铜纳米簇CuNCs形成CuNCs/Al3+络合物。引入氟离子F‑到CuNCs/Al3+络合物中，通过检测铜纳米簇的荧光值来定量检测氟离子。本方法简单、选择性强、绿色、经济、快速，可直接用于水介质中,是一种很有前途的实际应用材料。

Description

一种检测氟离子的荧光方法及传感器
技术领域
本发明涉及一种检测氟离子的荧光方法，属于纳米生物材料和分析化学技术领域。
背景技术
传统检测氟离子的方法包括离子色谱法或离子选择电极。尽管这些检测方法可以用于痕量氟离子的检测，但是这些检测方法存在成本高，耗时，技术复杂，需要专业操作等缺点，使其在实际生产生活中的应用受到较大的限制。
为了克服这些局限性，基于光致发光的方法受到人们的关注：利用氢键、超分子识别、Lewis酸碱相互作用等不同的传感机制设计了不同荧光探针。然而这些氟化物探针大多用于有机溶液或有机溶剂含量高的溶液中，合成往往需要大量的时间。此外，需要较长的检测时间。
发明内容
针对上述现有技术的缺陷，本发明提出一种简单、选择性强、绿色、经济、快速，可直接用于水介质中的检测水样中氟离子的方法，所述方法为：采用40个胸腺嘧啶(T)碱基的DNA单链作为模板，在pH＝7.8的3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中,以抗坏血酸(AA)为还原剂，在模板上将Cu2+原位还原为Cu0，生成具有荧光的铜纳米簇(CuNCs)，在520nm到654nm内有强烈的荧光信号。该传感器可以对Al3+做出响应，显示CuNCs的强荧光猝灭，从而提供Al3+离子的定量响应。铝离子的浓度和铜纳米簇的荧光值有线性关系。因此可以通过检测铜纳米簇的荧光值实现定量检测铝离子。此外，引入F-到Cu NCs/Al3+络合物中时，F-可以捕获络合物中的Al3+，铜纳米簇荧光强度恢复。氟离子的浓度和铜纳米簇的荧光值有线性关系。因此可以通过检测铜纳米簇的荧光值来定量检测氟离子。
所述铜纳米簇可简称为CuNCs；
所述抗坏血酸可简称为AA；
所述pH＝7.8的3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液可简称MOPS缓冲溶液；
所述40个胸腺嘧啶(T)碱基的DNA单链可简称为Poly T40；
本发明所述的铜纳米簇是由数个至数十个尺度范围在1-2nm的铜原子形成金属纳米材料。在波长520-654nm内，Cu NCs具有了十分显著的荧光信号。
进一步，形成所述铜纳米簇CuNCs的反应时间设定为10分钟。所述抗坏血酸浓度为300μmol/L。
本发明所述的方法可应用于检测水溶液中的氟离子浓度，尤其是可应用于检测牙膏中银离子的浓度。
步骤一：配制n个不同浓度的铝离子溶液，制备n个反应液；采用荧光光谱仪测量各反应液在640nm处的荧光值，得到不同浓度的铝离子溶液与空白对照品的荧光值之差，计算出标准线性方程；
在252μLMOPS中，将42μL不同浓度的铝离子与42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/LT40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL3000μM AA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
本发明提出的铝离子检测，线性范围是0.1μmol/L到60μmol/L(R2＝0.997)，最低检测线达到0.062μmol/L，远低于世界卫生组织规定的饮用水中铝离子标准(7.4μmol/L)。本发明所述的方法针对性极强，其它金属离子未对检测结果产生明显影响。与其他方法相比，本发明所述的方法准确度高、简单、易操作、检测时间短、成本低，并且能检测极低浓度的铝离子溶液。
步骤二：配制n个不同浓度的氟离子溶液，制备n个反应液；采用荧光光谱仪测量各反应液在640nm处的荧光值，得到不同浓度的氟离子溶液与空白对照品的荧光值之差，计算出标准线性方程；
在210μLMOPS中，将42μL不同浓度的氟离子与42μL300μmol/L Al3+孵育30分钟。再加入42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL3000μMAA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
本发明提出的氟离子检测，线性范围是2μmol/L到150μmol/L(R2＝0.993)，最低检测线达到1μmol/L。本发明所述的方法针对性极强，其它金属离子未对检测结果产生明显影响。与其他方法相比，本发明所述的方法准确度高、简单、易操作、检测时间短、成本低，并且能检测极低浓度的氟离子溶液
步骤三：采集待检测牙膏样品40mg，溶于4.0mL超纯水中。将混合物在50摄氏度下超声15分钟，室温下平衡2小时。固体被过滤掉，滤液与等量的超纯水混合。然后,在210μLMOPS中，将42μL不同浓度的牙膏样本与42μL300μmol/L Al3+孵育30分钟。接下来的步骤与步骤二相同。根据步骤二所获得的线性方程计算待检测牙膏中氟离子的浓度。
附图说明
图1所示为基于铝离子为桥梁的铜纳米簇用于氟离子检测的原理图。
图2A为a:T40/AA；b:T40/Cu2+/AA；c:T40/Al3+/Cu2+/AA；d:Al3+/F-/T40/Cu2+/AA在3-(n-吗啡)丙磺酸缓冲液(MOPS buffer)对应的荧光谱图。
图2B为a:T40/AA；b:T40/Cu2+/AA；c:T40/Al3+/Cu2+/AA；d:Al3+/F-/T40/Cu2+/AA在640纳米(nm)处铜纳米簇对应的荧光强度值。
图2C为A:CuNCs+F-,B:CuNCs,C:PolyT+Al3++Cu2+，D:CuNCs+Al3+的荧光谱图。
图3A为不同类型还原剂下铜纳米簇荧光谱图。
图3B为不同浓度AA下铜纳米簇荧光谱图。
图3C为不同类型缓冲下铜纳米簇荧光谱图。
图3D为不同反应时间下铜纳米簇荧光谱图。
图3E为不同浓度铜离子下铜纳米簇荧光曲线。
图3F为不同金属对铜纳米簇荧光影响荧光谱图。
图4A为加入铝离子之后和铜离子反应时间的谱图。
图4B为不同铝离子浓度影响反应效果的谱图。
图4C为不同铝离子浓度影响反应效果的回归曲线。
图4D为不同金属离子影响的谱图。
图5A为加入不同浓度的氟离子，在波长在520nm到654nm的紫外吸收光谱图。
图5B为不同氟离子浓度影响反应效果的折线图和回归曲线。
图6A为检测不同离子的效果图。
图6B为检测不同离子的柱状图。
图7为四种不同牙膏实际样品检测的柱状图。
具体实施方式
如图所示，图1所示为基于铝离子为桥梁的铜纳米簇用于氟离子检测的原理图。在图中：图中数字分别表示如下：1、PolyT40；2、Al3+；3、F-；4、Al3+与F-形成的络合物；5、Cu2+；6、AA作用下，以PolyT40为模板合成的CuNCs。如图1所示，采用40个胸腺嘧啶(T)碱基的DNA单链(1、PolyT40)作为模板，在pH＝7.8的3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液(MOPS缓冲溶液)中,以抗坏血酸(AA)为还原剂，在模板上将Cu2+原位还原为Cu0，生成具有荧光的铜纳米簇(6、AA作用下，以PolyT40为模板合成的CuNCs)，在520nm到654nm内有强烈的荧光信号(ON)。该传感器可以对Al3+做出响应，显示CuNCs的强荧光猝灭(OFF)，从而提供Al3+离子的定量响应。铝离子的浓度和铜纳米簇的荧光值有线性关系。因此可以通过检测铜纳米簇的荧光值实现定量检测铝离子。此外，引入F-到Cu NCs/Al3+络合物中时，F-可以捕获络合物中的Al3+，铜纳米簇荧光强度恢复。氟离子的浓度和铜纳米簇的荧光值有线性关系。也就是说，向含有pH＝7.8的3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中加入含有氟离子的牙膏样品溶液，再加入硝酸铝溶液和DNA溶液充分反应。然后加入硫酸铜溶液和抗坏血酸溶液，即得反应液。测量反应液的荧光值，计算出牙膏样品中氟离子的含量。
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
本发明实施例采用的仪器和试剂如下：
Ca(NO3)2·4H2O、Co(NO3)2·6H2O、Cd(NO3)2、Zn(NO3)2·6H2O、CuSO4·5H2O、Al(NO3)3·9H2O、Pb(NO3)2、FeCl3·6H2O购自北京化工厂(中国北京)。
Mn(CH3COO)2·4H2O购自国药控股(北京)化学试剂有限公司。
特定长度的寡核苷酸(T40:5-TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTTTTT TTT T-3)购自上海生工生物科技有限公司。
3-(n-吗啡)丙磺酸(MOPS)购自阿拉丁公司(上海)。
抗坏血酸(AA)购自北京拜尔迪生物科技有限公司。
所有试剂和化学品均至少达到分析试剂等级以上。超纯水采用毫q系统(Millipore,Bedford,MA,U.S.A.)纯化。
从超市买了四种不同的牙膏。
荧光光谱采用FLS-920荧光分光光度计(英国爱丁堡)。激发和发射的狭缝宽度均为7.0nm。取520～654nm的荧光信号，步长2.0nm。在640nm处记录发射光谱，在340nm处记录激发。
以下实施例中所使用的铜纳米簇溶液采用如下方法制备：
采用40个胸腺嘧啶(T)碱基的DNA单链(Poly T40)作为模板，在pH＝7.8的3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中,以抗坏血酸(AA)为还原剂，在模板上将Cu2+原位还原为Cu0，即得具有荧光的铜纳米簇(CuNCs)，在520nm到654nm内有强烈的荧光信号。
实施例1
图2A为a:T40/AA；b:T40/Cu2+/AA；c:T40/Al3+/Cu2+/AA；d:Al3+/F-/T40/Cu2+/AA在3-(n-吗啡)丙磺酸缓冲液(MOPS buffer)对应的荧光谱图。图2B为a:T40/AA；b:T40/Cu2+/AA；c:T40/Al3+/Cu2+/AA；d:Al3+/F-/T40/Cu2+/AA在640纳米(nm)处铜纳米簇对应的荧光强度值。图2C为A:CuNCs+F-,B:CuNCs,C:PolyT+Al3++Cu2+，D:CuNCs+Al3+的荧光谱图。
1.Al3+离子的添加顺序对系统荧光的影响。
在252微升(μL)MOPS中，将42μL，300微摩尔/升(μmol/L)浓度的铝离子与42μL200μmol/L Cu2+，42μL300纳摩尔/升(nmol/L)T40混合并且孵化10分钟(min)。然后,添加42μL3000微摩(μM)AA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
在252μL MOPS中，42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40，42μL3000μM AA混合并且孵化10分钟，将42μL，300μmol/L浓度的铝离子加入，充分反应8-12分钟测量荧光值。
如图2C所示，在CuNCs形成后，将Al3+离子引入系统中。强度荧光仅降低约40％。然而将Al3+离子与T40一起孵育，然后加入到Cu2+/AA溶液中。荧光强度几乎完全淬灭。可以合理地假设Al3+离子可以影响DNA和Cu2+离子之间的配位，这有效地防止了DNA模板CuNCs的形成。在Al3+和F-离子孵育后，系统的荧光大大增强。
2.F-离子单独存在对系统荧光的影响。
在252μL MOPS中，42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40，42μL3000μM AA混合并且孵化10分钟，将42μL，150μmol/L浓度的氟离子加入，充分反应8-12分钟测量荧光值。
如图2C所示，F-离子的单独存在对DNA模板化CuNCs的强度荧光没有显着影响。F诱导的荧光增加源于Al(HO)3F-的形成，但不是来自F-和CuNCs之间的相互作用。
实施例2
由于合成的CuNCs的荧光强度肯定会影响检测灵敏度，因此研究了还原剂，缓冲溶液和响应时间对所提方法的灵敏度和荧光响应特性的影响(图3A-3F)。图3A为不同类型还原剂下铜纳米簇荧光谱图。图3B为不同浓度AA下铜纳米簇荧光谱图。图3C为不同类型缓冲下铜纳米簇荧光谱图。图3D为不同反应时间下铜纳米簇荧光谱图。图3E为不同浓度铜离子下铜纳米簇荧光曲线。图3F为不同金属对铜纳米簇荧光影响荧光谱图。图中，Blank表示无，即未加其他离子或物质、成分、溶液等。
1.还原剂种类对铜纳米簇荧光的影响。
在294μL MOPS中，加入42μL 300nmol/L T40，42μL 3000μM不同还原剂(硼氢化钠NaBH4和柠檬酸钠Na3C6H5O7)，42μL 200μmol/L Cu2+，混合并且充分反应8-12分钟测量荧光值。
从图3A中可以看出，加入抗坏血酸(AA)后CuNCs的强度高于硼氢化钠(NaBH4)和柠檬酸钠(Na3C6H5O7)，因此，选择还原剂AA用于进一步测定。
2.还原剂浓度对铜纳米簇荧光的影响。
在294μLMOPS中，加入42μL 300nmol/L T40，42μL不同浓度AA(500,1000,1500,2000,2500,3000,3500,4000,5000μM)，42μL 200μmol/L Cu2+，混合并且充分反应8-12分钟测量荧光值。
在图3B中，在最终浓度为300μmol/L的浓度下发现纳米簇的荧光强度最高。因此，选择300μmol/L AA用于进一步测定。
3.不同种类缓冲对铜纳米簇荧光的影响。
在294μL不同缓冲(MOPS,HEPES,PB,Tris-HCl)中，加入42μL300nmol/L T40，42μL3000μM AA，42μL200μmol/L Cu2+，混合并且充分反应8-12分钟测量荧光值。
MOPS缓冲液中的铜纳米簇在图3C中显示出最高的荧光增强。因此，在随后的实验中选择MOPS缓冲液。
4.不同时间对铜纳米簇荧光的影响。
在294μL MOPS缓冲中，加入42μL300nmol/L T40，42μL 3000μM AA，42μL 200μmol/L Cu2+，混合并且充分反应，分别在0，1，5，10，15，20分钟测量荧光值。
在图3D中，CuNCs的荧光强度在1.0分钟内荧光增长率达到90％以上。为了获得更稳定的实验结果，形成CuNCs的反应时间设定为10分钟。
5.不同时间对铜纳米簇荧光的影响。
在294μL MOPS缓冲中，加入42μL 300nmol/L T40，42μL 3000μM AA，42μL不同浓度(100,110,120,130,140,150,170,180,190,200,220,240,260μmol/L)Cu2+，混合并且充分反应，分别在8-12分钟测量荧光值。
如图3E所示，随着Cu2+的最终浓度从0增加到26μmol/L，荧光强度逐渐增强并且20μmol/L逐渐稳定。因此，在以下测定中选择最终浓度为20μmol/L的Cu2+的最终浓度，因为该浓度将有利于以下定量检测。
6.不同金属离子对铜纳米簇荧光的影响。
在294μL MOPS缓冲中，加入42μL 300nmol/L T40，42μL 3000μM AA，42μL200μmol/L不同金属离子(Al3+，Ca2+，Cd2+，Co2+，Fe3+，Mn2+，Na+，Ni2+，Pb2+和Zn2+)，混合并且充分反应，分别在8-12分钟测量荧光值
如图3F所示，与其他离子相比，Cu2+在640nm处获得独特的荧光发射峰。很容易发现这些金属离子(各自浓度最终为20μmol/L)不会引起明显的荧光变化，这是由于金属离子对在AA存在下从Cu2+到荧光T40-模板化CuNCs的转化反应的高选择性。
实施例3
图4A为加入铝离子之后和铜离子反应时间的谱图。图4B为不同铝离子浓度影响反应效果的谱图。图4C为不同铝离子浓度影响反应效果的回归曲线。图4D为不同金属离子影响的谱图。图中，Blank表示无，即未加其他离子或物质、成分、溶液等。
1.铝离子淬灭铜纳米簇的时间优化。
在252μL MOPS中，将42μL 300μmol/L的铝离子与42μL200 μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL3000μM AA，分别反应0，1，3，5，7，10分钟测量荧光值。
如图4A所示，CuNCs的荧光强度在1.0分钟达到了有效淬灭。为了获得更稳定的实验结果，淬灭CuNCs的反应时间设定为10分钟。
2.不同浓度铝离子对铜纳米簇的影响。
在252μL MOPS中，将42μL不同浓度的铝离子与42μL 200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL3000μM AA，充分反应8-12分钟测量荧光值。得到不同浓度的铝离子溶液与空白对照品的荧光值之差，计算出标准线性方程。
如图4C所示；本发明提出的铝离子检测，线性范围是0.1μmol/L到60μmol/L(R2＝0.997)，最低检测线达到0.062μmol/L，远低于世界卫生组织规定的饮用水中铝离子标准(7.4μmol/L)。本发明所述的方法针对性极强，其它金属离子未对检测结果产生明显影响。与其他方法相比，本发明所述的方法准确度高、简单、易操作、检测时间短、成本低，并且能检测极低浓度的铝离子溶液。
3.不同金属离子对铝离子淬灭铜纳米簇荧光的影响。
在252μL MOPS中，将42μL300μmol/L不同金属离子(Al3+,Ca2+,Cd2+,Co2+,Fe3+,Mg2+,Mn2+,K+,Zn2+,and Na+)与42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL3000μM AA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
如图4D所示，荧光猝灭仅在CuCNs/Al3+溶液中发现，并且没有在其他阴离子中引起可观察到的变化，这表明该系统可以选择性地靶向Al3+离子。
实施例4
实际样品中铝离子检测
自来水，湖水样品以12,000转/分(r/min)离心10分钟。收集上清液以除去杂质并稀释10倍。将水滑石咀嚼片粉碎成粉末。将约0.4克(g)加重的粉末用3毫升(mL)HCl(6摩尔/升(mol/L))溶解并用水浴加热15分钟。冷却后，通过NaOH(2mol/L)将样品溶液调节至中性，然后转移至50mL容量瓶中并用水稀释至刻度。通过0.22微米(μm)膜过滤以除去悬浮固体并在4摄氏度(℃)下保存，获得最终样品溶液。在测试之前，必须用去离子水将样品稀释到合适的浓度范围内。将包括馒头，大白菜，宽粉丝(1.0g)的其他样品捣碎并分别加入浓硝酸(20mL)中12小时。然后通过NaOH(2.0mol/L)将样品溶液调节至中性，将它们以8000r/min离心10分钟以除去残余物。通过0.2μm膜过滤以除去悬浮固体，获得最终样品溶液。在实际测试中，将蒸馒头和宽粉丝溶液稀释20倍。将大白菜溶液稀释100倍。然后，将42μL四种不同类型的实际样品和Al3+(0.6,1,10μmol/L)分别与Cu2+(20μmol/L)，T40(30nmol/L)溶液混合并孵育10分钟。然后，实验程序与铝离子检测相同。测量来自未知样品的荧光强度，并用图4C中校准曲线来确定样品中存在的Al3+的浓度。实验结果如表1所示。
表1：检测铝离子实际样品
Figure BDA0002006950370000111
Figure BDA0002006950370000121
实施例5
1.氟离子的定量检测
在210μL MOPS中，将42μL不同浓度的氟离子与42μL300μmol/L Al3+孵育30分钟。再加入42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL300μMAA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
如图5A和5B所示，本发明提出的氟离子检测，线性范围是2μmol/L到150μmol/L(R2＝0.993)，最低检测线达到1μmol/L。
2.氟离子的选择性检测
在210μL MOPS中，将42μL不同离子(F-,Br-,Cl-,Ac-,I-,HPO4 2-NO2 -,NO3 -,B4O7 2-,CO3 2-,and SO4 2-)与42μL300μmol/L Al3+孵育30分钟。再加入42μL200μmol/L Cu2+，42μL300nmol/L T40混合并且孵化10分钟。然后,添加42μL3000μM AA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
如图6A和6B所示，CuNCs的荧光强度只有在氟离子存在的情况下才能恢复。然而，其他阴离子的反应微弱或可以忽略。这种高选择性可以归因于Al3+相对于其他离子对氟离子的特异性强的相互作用。
实施例6
牙膏样品中对氟离子的检测
采集待检测牙膏样品40毫克(mg)，溶于4.0mL超纯水中。将混合物在50摄氏度下超声15分钟，室温下平衡2小时。固体被过滤掉，滤液与等量的超纯水混合。然后,在210μLMOPS中，将42μL不同浓度的牙膏样本与42μL300μmol/L Al3+孵育30分钟。接下来的步骤与氟离子定量测量步骤相同。根据图7所获得的线性方程计算待检测牙膏中氟离子的浓度。实验结果如图7所示。
以上所述仅为本发明的较佳实例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种检测氟离子的荧光方法,其特征在于，采用40个胸腺嘧啶碱基的DNA单链作为模板，在pH＝7.8的3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中,以抗坏血酸为还原剂，在模板上将Cu2+原位还原为Cu0，生成具有荧光的铜纳米簇CuNCs。
2.根据权利要求1或2所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，形成所述铜纳米簇CuNCs的反应时间设定为10分钟。
3.根据权利要求1或2所述的检测氟离子的荧光方法，所述抗坏血酸浓度为300μmol/L。
4.根据权利要求1或2所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，还包括如下步骤：加入铝离子Al3+，与所述铜纳米簇CuNCs形成CuNCs/Al3+络合物。
5.根据权利要求4所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，所述铝离子Al3+与40个胸腺嘧啶碱基的DNA单链一起孵育。
6.根据权利要求5所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，还包括如下步骤：引入氟离子F-到Cu NCs/Al3+络合物中，通过检测铜纳米簇的荧光值来定量检测氟离子。
7.根据权利要求1所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，还包括如下步骤：配制n个不同浓度的铝离子溶液，制备n个反应液；采用荧光光谱仪测量各反应液在640nm处的荧光值，得到不同浓度的铝离子溶液与空白对照品的荧光值之差，计算出标准线性方程；
在252μL3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中，将42μL不同浓度的铝离子与42μL 200μmol/L Cu2+，42μL 300nmol/L 40个胸腺嘧啶碱基的DNA单链混合并且孵化10分钟，然后,添加42μL 3000μM抗坏血酸，充分反应8-12分钟测量荧光值。
8.根据权利要求1所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，还包括如下步骤：配制n个不同浓度的氟离子溶液，制备n个反应液；采用荧光光谱仪测量各反应液在640nm处的荧光值，得到不同浓度的氟离子溶液与空白对照品的荧光值之差，计算出标准线性方程；
在210μL 3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中，将42μL不同浓度的氟离子与42μL300μmol/L Al3+孵育30分钟，再加入42μL 200μmol/L Cu2+，42μL 300nmol/L T40混合并且孵化10分钟，然后,添加42μL 3000μM AA，充分反应8-12分钟测量荧光值。
9.根据权利要求8所述的检测氟离子的荧光方法，其特征在于，还包括如下步骤：采集待检测牙膏样品40mg，溶于4.0mL超纯水中，将混合物在50摄氏度下超声15分钟，室温下平衡2小时，固体被过滤掉，滤液与等量的超纯水混合，然后,在210μL 3-(N-吗啉)丙磺酸、氯化钠缓冲溶液中，将42μL不同浓度的牙膏样本与42μL 300μmol/L Al3+孵育30分钟，根据所述标准线性方程计算待检测牙膏中氟离子的浓度。
10.一种传感器，其特征在于，其为铜纳米簇CuNCs，由数个至数十个尺度范围在1-2nm的铜原子形成的金属纳米材料。
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