CN111748055A - 低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，以紫杉醇为模板，低共熔溶剂为功能单体，偶氮二异丁腈为引发剂，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，进行聚合反应，然后去除紫杉醇模板分子，制备得到。本发明采用绿色无毒的低共熔溶剂作为功能单体，然后通过本体聚合制备了紫杉醇分子印迹聚合物。将DES‑MIPs用作固相萃取柱的吸附剂，用于分离和纯化紫杉醇。由于特定的识别位点，该聚合物具有识别和吸附紫杉醇的特殊能力。最大吸附量和选择性分离因子分别为87.08mg/g和6.20。具有较好的稳定性和可重复性。同时，所制备的固相萃取柱对紫杉醇具有出色的萃取和洗脱能力。

Description

低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物及其应用
技术领域
本发明涉及化合物制备技术领域，尤其涉及一种低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物及其应用。
背景技术
紫杉醇是一种二萜化合物，具有极其独特的结构，在临床上已经被批准用于治疗各种癌症，包括卵巢癌，乳腺癌，非小细胞肺癌等。因此，紫杉醇在临床肿瘤学中具有巨大的应用价值。
天然的紫杉醇主要来源于红豆杉的树皮中，随着紫杉醇的应用，红豆杉不断被砍伐，因此，紫杉醇的天然来源非常稀缺。科研人员不断尝试全合成制备紫杉醇，但是全合成的紫杉醇包含较多的中间体，而且具有相对较低的产率。目前制备紫杉醇最常见的方法是半合成法，以10-DAB作为起始原料。但是在制备的过程中，由于存在许多结构相似的化合物，导致分离和纯化成本较高。因此，紫杉醇的分离和纯化受到了广泛的关注。选择一种快速灵敏的方法，选择性地从其他类似化合物中捕获并分离紫杉醇就变得非常重要。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物及其应用，可以从紫杉醇粗提物中有效的富集、分离、纯化紫杉醇。
本发明提供了一种低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，以紫杉醇为模板，低共熔溶剂为功能单体，偶氮二异丁腈为引发剂，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，进行聚合反应，然后去除紫杉醇模板分子，制备得到。
本发明优选的，所述低共熔溶剂包括咖啡酸，氯化胆碱和甲酸。
优选的，所述咖啡酸，氯化胆碱和甲酸的摩尔比为1：(1～6)：(3～6)。
在本发明的一些具体实施例中，所述咖啡酸，氯化胆碱和甲酸的摩尔比为1:5:5，1:6:6，1:6:3，优选1:6:3。在该比例下，制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物对紫杉醇具有较高的吸附性能。
本发明优选的，所述紫杉醇，低共熔溶剂，偶氮二异丁腈，乙二醇二甲基丙烯酸酯的用量比为(20-22)mg：(0.5-2)mL：(18-21)mg：(0.5-2)mL。
进一步优选为21.4mg：0.5mL：20mg：0.5mL。
本发明优选的，所述聚合反应的溶剂为三氯甲烷。
本发明提供了上述低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物的制备方法，包括：
S1)紫杉醇和低共熔溶剂在三氯甲烷溶剂中进行预聚合；
S2)将预聚合后的物料与偶氮二异丁腈和乙二醇二甲基丙烯酸酯混合，进行聚合反应；
S3)用甲醇-乙酸洗涤聚合反应后得到的固体，去除紫杉醇模板分子，得到低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物。
所述低共熔溶剂优选由咖啡酸，氯化胆碱和甲酸反应得到。
在本发明的一些具体实施例中，所述咖啡酸，氯化胆碱和甲酸的摩尔比为1:5:5，1:6:6，1:6:3，优选1:6:3。
所述预聚合的温度优选为室温。
所述步骤S2)中，聚合反应优选为50-70℃，进一步优选60℃，聚合5～8h，然后60-80℃，进一步优选70℃，聚合15～20h。
本发明优选的，聚合反应后，将聚合产物研磨过筛，并在甲醇中反复清洗，以获得小颗粒。
所述步骤S3)中，甲醇-乙酸的体积比优选为9:1-9:2。
实验结果表明，本发明制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物为均匀分散的微球，具有良好的热稳定性，对紫杉醇具有优良的吸附性和选择性。
本发明提供了上述低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物或上述制备方法制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物在富集、分离、纯化紫杉醇中的应用。
本发明提供了一种分离纯化紫杉醇的方法，包括：
以上述低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物或上述制备方法制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物作为固相萃取剂，从含紫杉醇的混合物中分离得到紫杉醇纯品。
本发明中，所述含紫杉醇的混合物优选为紫杉醇粗提物。
所述紫杉醇粗提物含有10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ，三尖杉宁碱，多烯紫杉醇等杂质。
与现有技术相比，本发明提供了一种低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，以紫杉醇为模板，低共熔溶剂为功能单体，偶氮二异丁腈为引发剂，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，进行聚合反应，然后去除紫杉醇模板分子，制备得到。本发明采用绿色无毒的低共熔溶剂作为功能单体，然后通过本体聚合制备了紫杉醇分子印迹聚合物(DES-MIPs)。将DES-MIPs用作固相萃取柱的吸附剂，用于分离和纯化紫杉醇。分别采用SEM，FT-IR，TGA，EDX和BET表征了DES-MIPs的表面形貌，热稳定性，结构特点以及比表面积。结果表明DES-MIPs成功制备。由于特定的识别位点，该聚合物具有识别和吸附紫杉醇的特殊能力。最大吸附量和选择性分离因子分别为87.08mg/g和6.20。此外，通过连续六个吸附和解吸循环，DES-MIPs被证明具有较好的稳定性和可重复性。同时，所制备的固相萃取柱对紫杉醇具有出色的萃取和洗脱能力。基于所有实验结果，制备的DES-MIPs非常有希望被开发为用于从天然提取物和合成产物中选择性分离紫杉醇的高效吸附材料。
附图说明
图1为不同功能单体、溶剂、DES用量、EGDMA用量对合成分子印迹聚合物的影响比较柱状图；
图2为DES和DES-MIPs的红外光谱图、热重曲线图、SEM图和EDX图；
图3为DES-MIPs的氮吸附曲线图和BET曲线；
图4为DES-MIPs和DES-NIPs的吸附曲线图；
图5为DES-MIPs和DES-NIPs的选择性吸附图和吸附前后PTX的液相色谱图；
图6为DES-MIPs的吸附-解吸附图；
图7为固相萃取柱示意图、萃取条件以及萃取紫杉醇的液相色谱图。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物及其应用进行详细描述。
紫杉醇粗提物由重庆豪泰医药有限公司提供，并保存于冰箱中。
实施例1制备低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物
1-1)制备低共熔溶剂
选择不同摩尔比的咖啡酸，氯化胆碱，甲酸(摩尔比分别为1：1：5，1：5：5，1：6：6和1：6：3，如表1所示)，加入到100mL的圆底烧瓶中，在90℃的油浴锅中不断搅拌直至形成均匀的黑褐色液体，冷却至室温，分别记为样品DES-1、样品DES-2、样品DES-3和样品DES-4，选择最佳状态的(液体)低共熔溶剂，用于分子印迹聚合物的制备。
表1咖啡酸，氯化胆碱，甲酸摩尔比及编号
Figure BDA0002573159510000041
结果显示DES-1(1:1:5)在90℃下不能形成均匀的液体。DES-2(1:5:5)，DES-3(1:6:6)和DES-4(1:6:3)在室温下均为透明液体。
1-2)制备低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物
首先，准确称取21.4mg紫杉醇溶于5mL三氯甲烷中，随后加入1mL低共熔溶剂DES-4，在常温下预聚合反应12h。反应结束后，加入1mL交联剂乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，20mg引发剂偶氮二异丁腈(AIBN)，然后，将该混合物用氮气鼓泡5min，并在氮气保护下密封三颈瓶，然后将反应容器置于水浴锅中60℃下反应6h，70℃下反应18h。聚合反应结束后，为了获得小颗粒，将聚合物研磨过筛，并在甲醇中反复清洗。所得的产物通过使用甲醇-乙酸(9:1，v/v)混合物溶液的索氏提取法洗脱模板分子，洗脱24h后，在常温下烘干产物，从而获得具有一定空腔的紫杉醇分子印迹聚合物(DES-MIPs)，然后干燥备用。
实施例2
按照实施例1的方法，将功能单体替换为甲基丙烯酸(MAA)或4-乙烯基吡啶(4-VP)，其余条件同实施例1，分别制备得到紫杉醇分子印迹聚合物MAA-MIPs，4-VP-MIPs。
吸附实验结果如图1中图A所示，图A是不同功能单体对合成分子印迹聚合物的影响比较。可以看出，实施例1制备的DES-MIPs具有与紫杉醇的最高结合能力。
实施例3
按照实施例1的方法，分别选择乙腈，甲醇，三氯甲烷和甲醇/三氯甲烷的混合物(2:3、2:5，v/v)作为DES-MIPs聚合反应的溶剂体系，制备紫杉醇分子印迹聚合物DES-MIPs。
吸附实验结果如图1中图B所示，图B是不同溶剂对合成分子印迹聚合物的影响比较。可以看出，在三氯甲烷溶剂体系中制备的DES-MIPs对紫杉醇具有最大的吸附能力。
实施例4
按照实施例1的方法，以低共熔溶剂DES-4作为功能单体，其加入量分别为0.2、0.5、1、2、3mL，制备紫杉醇分子印迹聚合物DES-MIPs。
吸附实验结果如图1中图C所示，图C是不同DES用量对合成分子印迹聚合物的影响比较。可以看出，当DES的用量小于0.5mL时，吸附量Q值与功能单体DES的体积呈正相关。其可能的原因是，足量的DES能够与紫杉醇充分反应，当模板分子被洗脱后能够形成大量的识别位点。而当DES的体积大于0.5mL时，吸附量Q值降低。其主要原因是过量的功能单体与紫杉醇反应形成较厚的印迹聚合物层，使得空间结构和识别腔的数量减少。因此，DES的最佳用量为0.5mL。
实施例5
按照实施例1的方法，交联剂EGDMA的用量分别为0.2、0.5、1、2、3mL，制备紫杉醇分子印迹聚合物DES-MIPs。
吸附实验结果如图1中图D所示，图D是不同交联剂用量对合成分子印迹聚合物的影响比较。可以看出，交联剂的量不足会导致分子印迹材料空化，从而降低识别能力。相反，过量的交联剂会导致形成过分刚性的聚合物并使结合能力降低。最佳的交联剂用量为0.5mL。
比较例1
不加入模板分子紫杉醇，其余步骤同实施例5，制备非分子印迹的聚合物(DES-NIPs)。
实施例6
按照实施例1的方法，咖啡酸，氯化胆碱，甲酸摩尔比为1：6：3，溶剂体系为三氯甲烷，DES用量0.5mL，交联剂EGDMA用量0.5mL，制备紫杉醇分子印迹聚合物DES-MIPs，并进行以下表征：
5-1)红外光谱分析
DES和DES-MIPs的红外光谱(FT-IR)如图2中图A所示。FT-IR光谱具有两个区域：官能团区域(4000-1333cm-1)和指纹区域(1333-400cm-1)。对于DES-MIPs，在3500-3000cm-1处有一个很强的宽峰，与O-H振动峰相对应，这归因于DES在聚合物中形成了大量的氢键。在1700cm-1处的强峰对应于聚合物中C＝O的拉伸振动峰。1400cm-1处的峰与DES和DES-MIPs中苯环的振动有关。因此，基于以上结果，可以说明作为功能单体的DES被成功地应用到所制备的DES-MIPs中。
5-2)热重分析
DES-MIPs的热稳定性通过热重分析(TGA)进一步表征。其热重曲线如图2中图B所示，DES-MIPs的热稳定性分析是在空气中以10℃/min的加热速率进行的。DES-MIPs的TGA热分析图表明，当温度从室温升至200℃时，DES-MIPs的重量损失约为3.8％，这是由于聚合物中的游离物质和物理物质的损失所致。当温度继续升高到400℃时，由于剩余有机溶剂的热分解，DES-MIPs的重量损失约为75％。TGA实验结果表明，DES-MIPs在200℃下具有良好的热稳定性。
5-3)形貌表征和元素分析
通过扫描电子显微镜(SEM)分析了DES-MIPs和DES-NIPs的表面形态。结果如图2中图C和图D所示，其中，图C是DES-MIPs的SEM见图，图D是DES-MIPs的SEM图。可以看出，DES-MIPs呈球形，表面粗糙，均一分布，表明分子印迹聚合物已经形成。
图2中图E为能量色散X射线(EDX)光谱图，表明DES-MIPs含57.01％的C，17.58％的N，14.72％的O和3.47％的Cl，结果说明低共熔溶剂作为功能单体已经成功用于制备紫杉醇分子印迹聚合物。
5-4)孔径分析
DES-MIPs的比表面积和孔径分析通过氮吸附-解吸附方法进行了表征。其结果如图3所示，其中，图A为DES-MIPs的氮吸附曲线图，图B为DES-MIPs的BET数据图。
根据Barrett-Joyner-Halenda(BJH)方法，DES-MIPs的表面积和孔体积分别为340.354m2/g和0.195cm3/g。此外，DES-MIPs的平均孔径约为3.775nm，这可归因于纳米球中的单个孔穴。
实施例7吸附性能考察
为了研究DES-MIPs的吸附性能，进行了动态吸附，静态吸附和选择性吸附实验。
7-1)动态吸附实验
选择动态吸附实验主要是考察紫杉醇分子印迹材料不同时间段的吸附性能。具体实验步骤如下：首先利用60％的甲醇水溶液制备浓度为50μg/mL的紫杉醇标准溶液。选择10mL的离心管，将10.0mg DES-MIPs材料加入到离心管中，然后加入5mL紫杉醇标准溶液，将装有上述混合物的离心管在25℃分别振荡5、10、20、40、60、120、180、240和300min。振摇结束后，离心取上清液，然后上清液用0.45μm的滤膜过滤。通过高效液相色谱仪(HPLC)分析不同时间点样品中的紫杉醇浓度。DES-MIPs在不同时间的平衡吸附容量(Q，mg/g)通过以下公式计算：
Q＝(C0-Ct)×V/m (3.2)
其中Q(mg·g-1)表示DES-MIPs或DES-NIPs对紫杉醇的吸附量，C0(mg·mL-1)，Ct是时间为t时上清液中紫杉醇的浓度，V(mL)是加入的紫杉醇标准溶液的体积，m(mg)代表的是DES-MIPs的重量。
DES-MIPs和DES-NIPs的吸附动力学曲线如图4中图A所示，图A为DES-MIPs和DES-NIPs的动态吸附数据曲线。随着吸附时间的增加，DES-MIPs的吸附量在180min内达到动态平衡(38.98mg/g)。在180min内，吸附量不断增加其原因很可能是由于DES-MIP中存在较多的吸附空穴。与DES-MIPs相比，DES-NIPs的吸附能力要低很多，这可能是由于DES-NIPs聚合物表面特殊的结合位点不足所致。
动态吸附实验数据通过使用二级动力学方程进行拟合，其拟合方程如下：
t/Qt＝t/Qe+1/Qe 2K (3.3)
其中，K(g/(mg×min))二级速率常数。t是吸附时间。Qe和Qt分别是平衡时的吸附量和在t的时间点的吸附量。拟合曲线如图4中图B所示，所有相关数据均已计算并列于表1。
表1 一级动力学模型和二级动力学模型参数
Figure BDA0002573159510000081
7-2)静态吸附实验
选择静态吸附实验主要是考察紫杉醇分子印迹材料在不同紫杉醇母液浓度中的吸附性能。在进行静态吸附实验前，选择60％甲醇水溶液制备一系列具有不同浓度(5μg/mL-500μg/mL)紫杉醇标准液。其主要过程如下：在10mL的离心管中，加入10.0mg DES-MIPs，然后加入5mL的紫杉醇标准溶液。将装有上述混合物的离心管在恒温振荡器上选用105rpm的转速，25℃震摇萃取12h，每组实验平行3次。萃取结束后，离心，取上清液。将上清液用0.45μm的滤膜过滤，然后用高效液相色谱仪(HPLC)分析溶液中紫杉醇的浓度。使用以下公式计算DES-MIPs对PTX的吸附容量：
Q＝(C0-Ce)×V/m (3.1)
其中Q(mg·g-1)表示DES-MIP或DES-NIP对紫杉醇的吸附量，C0(mg·mL-1)和Ce(mg·mL-1)是紫杉醇溶液的初始浓度和平衡浓度，V(mL)是加入的紫杉醇标准溶液的体积，m(mg)代表的是DES-MIPs重量。
实验结果如图4中图C所示，图C是DES-MIPs和DES-NIPs的静态吸附数据曲线。当紫杉醇浓度在10-400μg/mL时，DES-MIPs和DES-NIPs的吸附量逐渐增加，并在浓度为250μg/mL时达到最大值。DES-MIPs和DES-NIPs的吸收最大容量分别为83.87和15.68mg/g。显然，DES-NIPs的吸附能力远低于DES-MIPs。吸附水平的显着差异可能是因为DES-MIPs的特定识别位点所致。
使用Langmuir，Scatchard和Freundlich方程拟合吸附等温线，表示为：
Langmuir模型：1/Qe＝1/(KLCeQm)+1/Qm (3.4)
Freundlich模型：logQe＝mlogCe+logα (3.5)
Scatchard模型：Qe/Cc＝(Qmax-Qe)/Kd (3.6)
其中Qm(mg/g)和Qe(mg/g)分别是达到吸附平衡时的吸附量和在浓度Ce(μg/mL)下的吸附量，Cc是最终平衡溶液中紫杉醇的浓度(mg/mL)。KL(mL/mg)是Langmuir常数，Kd是Scatchard方程的解离常数(mg/mL)，m和α分别是Freundlich等温吸附模型常数。
计算结果如表2所示，Langmuir和Freundlich模型的拟合系数(R2)分别为0.998和0.978。这说明了Langmuir方程更适合用于描述DES-MIPs静态吸附的数据。其拟合曲线显示在图4中图D。
Scatchard分析用于评估DES-MIPs对紫杉醇的结合特性和亲和力。如图4中图E所示，图E是DES-MIPs的Scatchard拟合曲线。DES-MIPs的Scatchard拟合曲线由两个线性部分组成，这表明DES-MIPs存在两种类型的结合位点。左右部分的线性回归方程分别为Qe/Cc＝-12.69Qe+1976.2和Qe/Cc＝-339.2Qe+29302.1。左侧部分的Kd和Qmax值分别计算为0.078mg/mL和155.7mg/g，右侧部分的Kd和Qmax值分别为0.003mg/mL和86.38mg/g。相比之下，DES-NIPs仅显示一条直线(图4中图F，DES-NIPs的Scatchard拟合曲线)。线性回归方程为Qe/Cc＝-339.2Qe+29302.1(Kd为0.202，Qmax为29.01)。以上结果证实了所制备的DES-MIPs对紫杉醇具有良好的结合能力和较高的吸附能力。
表2 Langmuir和Freundlich拟合参数
Figure BDA0002573159510000101
7-3)选择性吸附实验
选择紫杉醇的结构类似物10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB)，多西他赛(DTX)和黄酮类化合物淫羊藿苷(ICA)作为干扰物质，比较紫杉醇分子印迹聚合物的选择性。实验过程如下：将10.0mg的DES-MIPs聚合物材料加入到5.0mL紫杉醇(100μg/mL)，10-去乙酰基巴卡亭III(100μg/mL)，多西他赛(100μg/mL)和淫羊藿苷(100μg/mL)混合物中，并将该混合物在25℃的恒温振荡器中振荡12h。然后，通过离心除去DES-MIPs聚合物后，按前述方法计算PTX，10-DAB，DTX和ICA的吸附量，每组实验平行重复3次。
结果如图5中图A所示，图A为DES-MIPs和DES-NIPs的选择性吸附图，显示了DES-MIPs和DES-NIPs对紫杉醇，多西他赛，10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ和淫羊藿苷的吸附能力结果。可以看出，DES-MIPs对紫杉醇，多西他赛，10-去乙酰基巴卡亭III和淫羊藿苷的吸附量分别为44.15、34.08、5.23和2.09mg/g。吸附的明显差异可能是由于DES-MIPs上具有与模板分子紫杉醇相似的特殊空间结构所致。因此，DES-MIPs可以特异性地识别紫杉醇。
为了更好地说明DES-MIPs的选择性，引入印迹因子(α)和选择性因子(β)来评估DES-MIPs的选择性吸附能力。印迹因子(α)和选择性因子(β)通过以下公式计算：
α＝QMIPs/QNIPs (3.6)
β＝αtem/αana (3.7)
其中QMIPs和QNIPs分别是DES-MIPs和DES-NIPs的吸附能力，αtem和αana分别是模板和干扰物的印迹因子。计算结果如表3所示，从表3可以看出，紫杉醇，多西他赛，10-去乙酰基巴卡亭III和淫羊藿苷的印迹因子分别为6.34、4.35、1.38和1.02。此外，所有的选择性因子(β)均大于1.0，最大值为6.20，说明DES-MIPs对紫杉醇具有特定的识别能力。值得注意的是，从图5中图B(DES-MIPs吸附前后PTX的液相色谱图)，可以清楚地看到，DES-MIPs对紫杉醇的吸收量比10-去乙酰基巴卡亭Ⅲ高很多。
表3 DES-MIPs的印迹因子和选择性参数
Figure BDA0002573159510000111
7-4)可重用性实验
研究所制备的DES-MIPs的稳定性和重复应用效果。在本次重复性实验考察中，选择甲醇-乙酸(9:1v/v)的混合物作为脱附溶剂，以除去吸附的紫杉醇分子。首先，准确称取60.0mg DES-MIPs聚合物材料加入到离心管，然后加入5.0mL紫杉醇标准溶液，将该离心管置于恒温振荡中，于25℃，105rpm振荡12h。振荡结束后，离心，取上清液测定紫杉醇浓度。第一轮吸附结束之后，用甲醇-乙酸(9:1v/v)的混合物洗涤DES-MIPs材料，烘干，将再生的DES-MIPs聚合物用于下一吸附循环。进行六次吸附-解吸循环，通过与之前相同的方法计算吸附量。
实验结果如图6所示。结果表明，DES-MIPs具有良好的稳定性和可重复性。
实施例8应用实验
8-1)固相萃取柱的制备：选择1mL的注射器，注射器底端固定0.45μm的滤膜。示意图如图7中图A所示。
8-2)选择PTX标准溶液进行分离纯化。图7中图B为优化后的固相萃取条件。图7中图C为从紫杉醇标准溶液中萃取紫杉醇的液相色谱图，其中，曲线a为萃取前紫杉醇的液相色谱图，曲线b为萃取后紫杉醇的液相色谱图，曲线c为洗脱液中紫杉醇的液相色谱图。
可以清楚地看到，在经SPE柱分离萃取后紫杉醇的峰(曲线b)显着降低，并且在洗脱液中可以观察到紫杉醇的峰，并且具有较大的峰面积(曲线c)。这表明SPE色谱柱可以有效分离紫杉醇。
8-2)紫杉醇分子印迹聚合物的应用：选用DES-MIPs聚合物材料作为固相萃取剂，用于从半合成紫杉醇中分离纯化紫杉醇。其实验过程如下：将60.0mg DES-MIPs添加到空的SPE柱中，将5.0mL PTX样品上样至SPE柱，并用1.0mL去离子水洗涤。使用3.0mL甲醇-乙酸(9:1，v/v)混合溶液从SPE柱上洗脱分析物。收集洗脱的溶液并用HPLC测定紫杉醇的浓度。每组分析实验重复3次。
图7中图D为紫杉醇粗提物中紫杉醇的液相色谱图，其中，曲线a为萃取前紫杉醇的液相色谱图，曲线b为萃取后紫杉醇的液相色谱图，曲线c为洗脱液中紫杉醇的液相色谱图。
可以看出，SPE柱可以将紫杉醇从粗提物中分离，并具有较高的分离效率，这为DES-MIPs的实际应用提供了理论基础。
高效液相色谱仪为Agilent 1260。色谱分离条件：选用C18色谱柱(250×4.6mm，5μm)柱温设定为30℃，流速为0.8mL/min。流动相为乙腈：甲醇(70:30，v:v)。进样量设置为10μL，检测波长设置为227nm。
由上述实施例可知，本发明制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物对紫杉醇具有较高的选择性，可以选择性的从紫杉醇粗提物中分离、纯化紫杉醇。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (10)

1.一种低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，以紫杉醇为模板，低共熔溶剂为功能单体，偶氮二异丁腈为引发剂，乙二醇二甲基丙烯酸酯为交联剂，进行聚合反应，然后去除紫杉醇模板分子，制备得到。
2.根据权利要求1所述的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，其特征在于，所述低共熔溶剂包括咖啡酸，氯化胆碱和甲酸。
3.根据权利要求2所述的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，其特征在于，所述咖啡酸，氯化胆碱和甲酸的摩尔比为1：(1～6)：(3～6)。
4.根据权利要求1所述的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，其特征在于，所述紫杉醇，低共熔溶剂，偶氮二异丁腈，乙二醇二甲基丙烯酸酯的用量比为(20-22)mg：(0.5-2)mL：(18-21)mg：(0.5-2)mL。
5.根据权利要求1所述的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物，其特征在于，所述聚合反应的溶剂为三氯甲烷。
6.低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物的制备方法，包括：
S1)紫杉醇和低共熔溶剂在三氯甲烷溶剂中进行预聚合；
S2)将预聚合后的物料与偶氮二异丁腈和乙二醇二甲基丙烯酸酯混合，进行聚合反应；
S3)用甲醇-乙酸洗涤聚合反应后得到的固体，去除紫杉醇模板分子，得到低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述低共熔溶剂由咖啡酸，氯化胆碱和甲酸反应得到。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述咖啡酸，氯化胆碱和甲酸的摩尔比为1：(1～6)：(3～6)。
9.权利要求1～5任一项所述的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物或权利要求6～8任一项所述的制备方法制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物在富集、分离、纯化紫杉醇中的应用。
10.一种分离纯化紫杉醇的方法，包括：
以权利要求1～5任一项所述的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物或权利要求6～8任一项所述的制备方法制备的低共熔溶剂作为功能单体的分子印迹聚合物作为固相萃取剂，从含紫杉醇的混合物中分离得到紫杉醇纯品。
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