CN111714638A - 致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用 - Google Patents

致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111714638A
CN111714638A CN202010580162.2A CN202010580162A CN111714638A CN 111714638 A CN111714638 A CN 111714638A CN 202010580162 A CN202010580162 A CN 202010580162A CN 111714638 A CN111714638 A CN 111714638A
Authority
CN
China
Prior art keywords
dna damage
dna
group
damage repair
composition
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010580162.2A
Other languages
English (en)
Inventor
王建华
温浩
赵军
巩月红
高旖
卢帅
文丽梅
陈蓓
耿伟
高惠静
吕国栋
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University
Xinjiang Medical University
Original Assignee
First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University
Xinjiang Medical University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Xinjiang Medical University filed Critical First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University
Priority to CN202010580162.2A priority Critical patent/CN111714638A/zh
Publication of CN111714638A publication Critical patent/CN111714638A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7028—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages
    • A61K31/7034—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin
    • A61K31/704—Compounds having saccharide radicals attached to non-saccharide compounds by glycosidic linkages attached to a carbocyclic compound, e.g. phloridzin attached to a condensed carbocyclic ring system, e.g. sennosides, thiocolchicosides, escin, daunorubicin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/12—Cyclic peptides, e.g. bacitracins; Polymyxins; Gramicidins S, C; Tyrocidins A, B or C
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/10—Anthelmintics

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及制备治疗包虫病药物技术领域，是一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用，前者包括致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱衍生物、阿霉素、放线霉素D、道诺梅素、依托泊苷和替尼泊苷中的一种以上，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂和BRCA1抑制剂中的一种以上。本发明通过联合使用致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，用于治疗包虫病，可实现致DNA损伤化合物对虫体DNA损伤的同时，DNA损伤修复抑制剂实现DNA损伤修复的抑制，完全阻断虫体的DNA损伤修复过程，最终导致虫体凋亡，发挥抗包虫作用，提高了抗包虫的治疗效果。

Description

致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物及制备方 法和应用
技术领域
本发明涉及制备治疗包虫病药物技术领域，是一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用。
背景技术
囊型包虫病（Cystic Echinococcosis，CE）又称细粒棘球蚴病，是一种人畜共患寄生病，呈世界性分布，严重威胁公共卫生事业和畜牧业的发展，每年造成约30亿的经济损失。在我国主要分布于新疆、青海、西藏等西部牧业地区，约有16万该病患者，位居全球首位。目前，包虫病的治疗方法有外科手术治疗、药物治疗、免疫预防和放射疗法等，一直以手术治疗为首选方案，但由于该病的复杂性，致使术后复发率高，及对患者损伤严重，又因高昂的治疗费用使患者因病返贫。因此，对于改善复发、多发、晚期包虫病患者的生活质量，药物治疗的地位是不可取代的。
目前，对于大多数患者来说，服用苯并咪唑类药物是主要的治疗手段，其中，苯并咪唑类药物包括阿苯达唑和甲苯达唑，但是由于受药物吸收差等因素的影响，药物治疗的治愈率不高，仅为30％左右，并且阿苯达唑仅抑制囊型包虫，而不具有杀死囊型包虫的作用，加大剂量又易造成药物的毒性反应，所以，现有药物难以满足目前包虫病治疗的需求，因此，亟待找到新的有效替代药物和药物靶点，加速包虫病药物研发，最终，提高药物治疗效果，减轻患者疾病负担。
经研究表明，新疆民间沿用已久的地方特色药材骆驼蓬(Peganumharmala L)籽提取物去氢骆驼蓬碱(Harmine，HM)具有良好的抗囊型包虫病作用，是一种极具开发潜力的杀灭包虫药物。去氢骆驼蓬碱属三环β-咔啉类生物碱，具有中枢神经系统毒性、单胺氧化酶抑制作用、细胞毒性及广泛的抗肿瘤活性，同时，显示出植物杀虫剂的潜力。
经基因芯片结果显示，去氢骆驼蓬碱可导致同源重组修复通路相关基因Rad51的表达上调，提示去氢骆驼蓬碱可能导致囊型包虫虫体DNA损伤，囊型包虫在去氢骆驼蓬碱及其衍生物干预后，囊型包虫中EgATM、EgP53和EgTopo2a表达上调，证实ATM-P53-Topo2a通路可能为去氢骆驼蓬碱及其衍生物致囊型包虫DNA损伤的通路之一，造成DNA损伤。又采集囊型包虫样本，克隆DNA损伤修复相关功能基因EgRad54，通过聚合酶链反应（PCR）及测序验证克隆基因的正确性，并对EgRad54基因进行生物学分析，包括理化性质预测、蛋白二级结构分析、蛋白三级结构分析、Rad54蛋白多序列比对及生物进化树的构建，再结合荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测各药物组EgRad54 mRNA表达水平。综合分析，再次证实去氢骆驼蓬碱及其衍生物致囊型包虫DNA损伤作用。
囊型包虫DNA损伤发生后，细胞中的DNA损伤受体可以快速识别DNA损伤断点，并在损伤部位募集大量DNA损伤修复因子以修复受损的DNA，从而完成DNA修复。启动修复机制，Rad51在去氢骆驼蓬碱修复机制中起到关键的作用，DNA损伤修复因子MRE11、BRCA1、Rad52和BRCA2在调控Rad51参与去氢骆驼蓬碱过程中有至关重要的作用，初步探明，细粒棘球绦虫DNA损伤修复相关基因MRE11、BRCA1和RAD51在去氢骆驼蓬碱及其衍生物致虫体DNA损伤修复过程中的作用。
上述RAD51抑制剂是一种抑制中央重组蛋白RAD51的小分子，其半数致死浓度（IC50）为5µM至30µM。RAD51抑制剂RI-1是通过直接和特异破坏HsRAD51和抑制RAD51，并与半胱氨酸319处的RAD51蛋白共价结合，可能破坏RAD51单体在DNA上寡聚成细丝的界面，相应地，该分子抑制DNA损伤后细胞中RAD51亚核病灶的形成，而不影响复制蛋白的病灶形成，形成对单链DNA细丝的能力，提高细胞对DNA损伤的敏感性，最后，RAD51抑制剂RI-1能增强DNA交联药物对细胞的致死作用。
发明内容
本发明提供了一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用，克服了上述现有技术之不足，其能有效解决现有治疗包虫病药物存在作用靶点单一、治疗效果差和毒副作用大的问题。
本发明的技术方案之一是通过以下措施来实现的：一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，包括致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱衍生物、阿霉素、放线霉素D、道诺梅素、依托泊苷和替尼泊苷中的一种以上，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂和BRCA1抑制剂中的一种以上。
对上述发明技术方案之一的进一步优化或/和改进：
上述RAD51抑制剂为RAD51抑制剂RI-1、RAD51抑制剂RI-2、RAD51抑制剂AmuvatinibMP470、RAD51抑制剂B02、RAD51抑制剂IBR2和RAD51抑制剂RAD51-IN-2中的一种以上。
上述BRCA1抑制剂为BRCA1抑制剂BRCA1-IN-1。
上述致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂RI-1，去氢骆驼蓬碱与RAD51抑制剂RI-1的摩尔比为5：1。
本发明的技术方案之二是通过以下措施来实现的：一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，按下述方法进行：将致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂通过任何一种药学上可接受的剂型进行装载，得到致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物。
下面是对上述发明技术方案之二的进一步优化或/和改进：
上述药学上可接受的剂型为混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂、纳米制剂、凝胶剂、缓控释制剂和靶向制剂中的一种。
上述药学上可接受的剂型是通过药学上允许的和药学上可接受的辅料或与其他抗包虫病药物制成。
上述装载材料为药学上允许的和药学上可接受的载体材料。
本发明的技术方案之三是通过以下措施来实现的：一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物在制备治疗包虫病药品中的应用。
上述包虫病为囊型包虫病。
本发明通过联合使用致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，用于治疗包虫病，可实现致DNA损伤化合物对虫体DNA损伤的同时，DNA损伤修复抑制剂实现DNA损伤修复的抑制，完全阻断虫体的DNA损伤修复过程，最终导致虫体凋亡，发挥抗包虫作用，提高了抗包虫的治疗效果。
附图说明
附图1为本发明各给药组对细粒棘球蚴体外干预后的伊红染色图（100×）。
附图2为本发明各给药组对细粒棘球蚴体外干预后的细粒棘球蚴存活率的折线图。
附图3为本发明各给药组对细粒棘球蚴体外干预后的细粒棘球蚴DNA损伤的彗星图像。
附图4为本发明各给药组对感染细粒棘球蚴的小鼠进行干预后的细粒棘球蚴囊泡组织病理图（200×）。
附图5为本发明各给药组对感染细粒棘球蚴的小鼠进行干预后的小鼠肝脏组织病理图（200×）。
附图6为本发明各给药组对感染细粒棘球蚴的小鼠进行干预后的小鼠肾脏组织病理图（200×）。
具体实施方式
本发明不受下述实施例的限制，可根据本发明的技术方案与实际情况来确定具体的实施方式。本发明中所提到各种化学试剂和化学用品如无特殊说明，均为现有技术中公知公用的化学试剂和化学用品；本发明中的百分数如没有特殊说明，均为质量百分数；本发明中的溶液若没有特殊说明，均为溶剂为水的水溶液，例如，盐酸溶液即为盐酸水溶液；本发明中的常温、室温一般指15℃到25℃的温度，一般定义为25℃。
下面结合实施例对本发明作进一步描述：
实施例1：该致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，包括致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱衍生物、阿霉素、放线霉素D、道诺梅素、依托泊苷和替尼泊苷中的一种以上，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂和BRCA1抑制剂中的一种以上。
本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，联合采用致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂药物，在致DNA损伤化合物对抗囊型包虫DNA损伤的同时，DNA损伤修复抑制剂阻断抗囊型包虫的DNA损伤修复，多靶点发挥抗包虫作用，提高了抗包虫的治疗效果，相比现有技术，本发明有效解决现有治疗包虫病药物存在作用靶点单一、治疗效果差和毒副作用大的问题。
实施例2：作为上述实施例的优化，RAD51抑制剂为RAD51抑制剂RI-1、RAD51抑制剂RI-2、RAD51抑制剂Amuvatinib MP470、RAD51抑制剂B02、RAD51抑制剂IBR2和RAD51抑制剂RAD51-IN-2中的一种以上。
所述RAD51抑制剂RI-1即为RAD51 Inhibitor RI-1，RAD51抑制剂RI-2即为RAD51Inhibitor RI-2，RAD51抑制剂Amuvatinib MP470即为RAD51 Inhibitor AmuvatinibMP470，RAD51抑制剂B02即为RAD51 Inhibitor B02，RAD51抑制剂IBR2即为RAD51Inhibitor IBR2，RAD51抑制剂RAD51-IN-2即为RAD51 Inhibitor RAD51-IN-2。
实施例3：作为上述实施例的优化，BRCA1抑制剂为BRCA1抑制剂BRCA1-IN-1。
实施例4：作为上述实施例的优化，致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂RI-1，去氢骆驼蓬碱与RAD51抑制剂RI-1的摩尔比为5：1。
实施例5：该致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，按下述方法进行：将致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂通过任何一种药学上可接受的剂型进行装载，得到致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物。
实施例6：作为上述实施例的优化，药学上可接受的剂型为混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂、纳米制剂、凝胶剂、缓控释制剂和靶向制剂中的一种。
实施例7：药学上可接受的剂型是通过药学上允许的和药学上可接受的辅料或与其他抗包虫病药物制成。
实施例8：装载材料为药学上允许的和药学上可接受的载体材料。
所述装载方法为现有所述药物剂型常规的装载方法。
实施例9：致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物在制备治疗包虫病药品中的应用。
实施例10：作为上述实施例的优化，包虫病为囊型包虫病。
实施例11：该致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，包括致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂RI-1，该致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，按下述方法进行：将去氢骆驼蓬碱和RAD51抑制剂RI-1通过任何一种药学上可接受的剂型进行装载，得到致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，其中，去氢骆驼蓬碱与RAD51抑制剂RI-1的摩尔比为5：1。
以下为本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的具体药理试验。
（一）体外抗细粒棘球蚴的药效学试验
1.细粒棘球蚴体外给药活性试验
细粒棘球蚴的制备：在乌鲁木齐市郊区屠宰场采集自然感染绵羊的细粒棘球蚴囊，无菌吸取含有细粒棘球蚴的囊液至50ml的圆底离心管中，自然沉淀20min后，弃上清，然后用生理盐水将含细粒棘球蚴的沉淀物洗涤5次至8次，加入适量的1％胃蛋白酶并在37℃水浴中消化30min，在倒置显微镜下计数，并观察细粒棘球蚴存活状况。
细粒棘球蚴的体外培养：将上述处理后的细粒棘球蚴放入25cm2培养瓶中，加入RPMI1640培养基，该培养基中含有10％的胎牛血清，置于含量为5％CO2、相对湿度为95％的37℃温箱培养，每2天至3天换液一次，备用。
试验方法：将培养的细粒棘球蚴加入96孔培养板中，每孔加入200μL培养基，分别给予质量浓度为100μM的阿霉素（DOX）,100μM的阿苯达唑（ABZ），20μM的RAD51抑制剂RI-1，100μM的去氢骆驼蓬碱，100μM的去氢骆驼蓬碱联合20μM的RAD51抑制剂RI-1的组合物，其中，阿霉素（DOX）作为组1，阿苯达唑（ABZ）作为组2，RAD51抑制剂RI-1作为组3，去氢骆驼蓬碱作为组4和去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物作为组5，同时，设立空白组，将稀释剂二甲基亚砜(DMSO)作为阴性对照组，各组给药治疗5天，给药后每隔1天进行取样，用1%伊红染液对细粒棘球蚴进行染色，细粒棘球蚴会被染成红色，计数进行细粒棘球蚴活性计算，每组实验平行进行三次，细粒棘球蚴活性＝活的细粒棘球蚴数目/细粒棘球蚴总数×100％。
试验结果：经过各组药物治疗5天后细粒棘球蚴的形态，如图1所示，其中，A为空白组，B为阴性对照组：二甲基亚砜(DMSO)，C为组1：阿霉素（DOX），D为组2：阿苯达唑（ABZ），E为组3：RAD51抑制剂RI-1，F为组4：去氢骆驼蓬碱，G为组5：去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物，由图1可知，正常的细粒棘球蚴多为内陷状态，内部结构和边缘均较整齐清晰，小钩排列整齐；而经过药物干预后，死亡的细粒棘球蚴一部分呈现外翻状态，细粒棘球蚴整体形态发生改变，出现边缘模糊，钙颗粒、小钩出现脱落现象。
经过各组药物治疗5天后细粒棘球蚴的存活率，如图2所示，其中，组1：阿霉素（DOX），组2：阿苯达唑（ABZ），组3：RAD51抑制剂RI-1，组4：去氢骆驼蓬碱，组5：去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物，由图2可知，各组随着药物作用时间的增加，细粒棘球蚴的存活率逐渐降低，其中，组4细粒棘球蚴的存活率相比阴性对照组差异显著不同（P<0.01），组5相比组4差异显著（P<0.05），结果表明，去氢骆驼蓬碱能有效抑制细粒棘球蚴的活性，去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物抑制细粒棘球蚴的活性作用更强。
彗星试验
试验分组：将培养的细粒棘球蚴分别加入质量浓度为100μM的阿霉素（DOX），20μM的RAD51抑制剂RI-1，100μM的去氢骆驼蓬碱，100μM的去氢骆驼蓬碱联合20μM的RAD51抑制剂RI-1的组合物，其中，将稀释剂二甲基亚砜(DMSO)作为阴性对照组，其中，阿霉素（DOX）作为组1，RAD51抑制剂RI-1作为组2，去氢骆驼蓬碱作为组3和去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物作为组4，同时，设立空白组，将体积百分数为1%的二甲基亚砜(DMSO)作为阴性对照组，各组药物干预48h后，将细粒棘球蚴用磷酸盐缓冲液(PBS)洗涤两次，收集细粒棘球蚴进行彗星测定。
试验方法：将各组的细粒棘球蚴用90µL 0.75％的低密度琼脂糖重悬，使用双层胶水铺展方法，将细粒棘球蚴铺展在载玻片上，置于细胞裂解液（0.1M乙二胺四乙酸二钠(Na2EDTA),2.5M氯化钠（NaCl），0.01M 三羟甲基氨基甲烷（Tris）和1％聚乙二醇辛基苯基醚（Triton-X-100））中放置4.5h，将载玻片在磷酸盐缓冲液(PBS)中洗涤两次，每次5分钟后，将所有载玻片置于电泳槽中，用冷碱性缓冲液（0.2M氢氧化钠（NaOH）和1mM乙二胺四乙酸（EDTA），pH≥13）覆盖，并在20分钟内放开DNA，然后，在4℃以25V（1V /cm）进行电泳30min，电泳结束后，再用pH为7.5的三(羟甲基)氨基甲烷（Tris-HCl）中和15分钟，在黑暗中，用碘化丙锭（PI）染色溶液染色20分钟后，在荧光倒置显微镜下观察，同时，使用彗星图像分析（CASP）软件分析OTM值。
试验结果：彗星试验用于细粒棘球蚴DNA损伤的程度。经过各组药物作用后的细粒棘球蚴DNA损伤的彗星图像，如图3所示，其中，A为空白组，B为阴性对照组：二甲基亚砜(DMSO)，C为组1：阿霉素（DOX），D为组2：RAD51抑制剂RI-1，E为组3：去氢骆驼蓬碱，F为组4：去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物，由图3可知，空白组中，PSC的细胞核结构紧密，没有拖尾现象，而各给药组药物作用后细粒棘球蚴的DNA片段从细胞核迁移到阳极并形成一条尾巴。
本OTM值结果，如表1所示，其中，组1：阿霉素（DOX），组2：RAD51抑制剂RI-1，组3：去氢骆驼蓬碱，组4：去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物，由表1可知，与空白组相比，组1和组3的彗尾距离的OTM值分别有显着性差异（P<0.01），与组3相比，组4中彗尾距离的OTM值具有统计学意义（P<0.05），结果表明，经过阿霉素（DOX）和去氢骆驼蓬碱干预后对细粒棘球蚴DNA损伤作用均强，而经过去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物干预后对细粒棘球蚴DNA损伤作用更强。
由上可知，去氢骆驼蓬碱能有效抑制细粒棘球蚴的活性，而本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物抑制细粒棘球蚴的活性作用更强；经过阿霉素（DOX）和去氢骆驼蓬碱干预后对细粒棘球蚴DNA损伤作用均强，而经过本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物干预后对细粒棘球蚴DNA损伤作用更强。
（二）体内抗细粒棘球蚴的药效学试验
试验方法：通过腹膜内注射向昆明小鼠中注射1500个细粒棘球蚴，以制备囊型棘球蚴虫病模型，并经过B超检查观察小鼠的腹部，在建模成功后，通过管饲法正常饲养，分别给予给药剂量为50mg/kg阿苯达唑（ABZ），10mg/kg阿霉素（DOX），5mg/kgRAD51抑制剂RI-1，25mg/kg低剂量去氢骆驼蓬碱，50mg/kg中剂量去氢骆驼蓬碱，100mg/kg高剂量去氢骆驼蓬碱，50mg/kg中剂量去氢骆驼蓬碱联合5mg/kgRAD51抑制剂RI-1的组合物，其中，阿苯达唑（ABZ）作为组1，阿霉素（DOX）作为组2，RAD51抑制剂RI-1作为组3，低剂量去氢骆驼蓬碱作为组4，中剂量去氢骆驼蓬碱作为组5，高剂量去氢骆驼蓬碱作为组6，中剂量去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物作为组7，同时，设立模型组，将各组药物加入适量吐温80（Tween80）进行研磨，然后添加无菌水制备成悬浮液以供使用，小鼠胃内给药每天1次，给药4周后结束，处死小鼠，剥去小鼠体内的细粒棘球蚴囊泡，统计分析囊泡重量和囊泡减轻率，并收集小鼠的器官和囊泡用于病理组织学观察。
试验结果：囊泡重量和囊泡减轻率结果，如表2所示，其中，组1：阿苯达唑（ABZ），组2：阿霉素（DOX），组3：RAD51抑制剂RI-1，组4：低剂量去氢骆驼蓬碱，组5：中剂量去氢骆驼蓬碱，组6：高剂量去氢骆驼蓬碱，组7 ：中剂量去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物,由表2可知，模型组中的囊泡重量为8.29g±4.35g，组2、组4和组5与模型组的囊泡重量比较差异有统计学意义（P< 0.05），组1、组6和组7与模型组的囊泡重量比较差异有统计学意义（P<0.01），组7和组5的囊泡重量比较差异有统计学意义（P<0.05）；组1的囊泡减轻率为53.92％，组6和组7的囊泡减轻率均高于组1。在相同剂量下，组7的囊泡重量减轻率高于组5。结果表明：去氢骆驼蓬碱对细粒棘球蚴囊泡生长的抑制作用呈剂量依赖性，剂量越大，对细粒棘球蚴囊泡生长抑制作用越强，但由于药物用量大，毒性相应增大，因此，本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物对细粒棘球蚴囊泡的抑制作用效果最好。
细粒棘球蚴囊泡组织、小鼠肝脏组织和肾脏组织的病理学结果，如图4至图6所示。
其中，细粒棘球蚴囊泡组织病理结果，如图4所示，其中，A为模型组，B为组1：阿苯达唑（ABZ），C为组2：阿霉素（DOX），D为组3：RAD51抑制剂RI-1，E为组4：低剂量去氢骆驼蓬碱，F为组5：中剂量去氢骆驼蓬碱，G为组6：高剂量去氢骆驼蓬碱，H为组7 ：中剂量去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物,LL为角质层，GL为生发层，由图4可知，模型组的角质层具有均匀且透明的质地，生发层具有完整的结构，其余各给药组中，角质层和生发层具有不同程度的破坏和脱落，与组5相比，组7对囊泡组织的角质层和生发层的损伤更明显。
其中，小鼠肝脏组织病理结果，如图5所示，其中，A为模型组，B为组1：阿苯达唑（ABZ），C为组2：阿霉素（DOX），D为组3：RAD51抑制剂RI-1，E为组4：低剂量去氢骆驼蓬碱，F为组5：中剂量去氢骆驼蓬碱，G为组6：高剂量去氢骆驼蓬碱，H为组7 ：中剂量去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物,由图5可知，模型组的肝组织病理损害严重，肝组织水肿，坏死，炎症细胞浸润；其余各给药组与模型组相比，核结构清晰，肝组织损伤不明显，细胞水肿减轻；组1、组4和组5中，肝组织损伤不明显，细胞水肿减少，观察到少量淋巴细胞浸润，并且没有明显的肝组织变性，水肿和坏死；组6和组7中，肝小叶结构完整，肝细胞排列整齐，大小正常，无炎性细胞浸润；与模型组相比，组6和组7在肝组织炎症和水肿方面的改善程度不同，组7在肝组织方面的改善比组6更显著。
其中，小鼠肾脏组织病理结果，如图6所示，其中，A为模型组，B为组1：阿苯达唑（ABZ），C为组2：阿霉素（DOX），D为组3：RAD51抑制剂RI-1，E为组4：低剂量去氢骆驼蓬碱，F为组5：中剂量去氢骆驼蓬碱，G为组6：高剂量去氢骆驼蓬碱，H为组7 ：中剂量去氢骆驼蓬碱联合RAD51抑制剂RI-1的组合物,由图6可知，模型组和其余各给药组均无明显的肾小球充血，肾间质内炎性细胞浸润，肾脏无明显病理性炎症。
由上可知，本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物对细粒棘球蚴囊泡的抑制作用效果最好，同时，本发明致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物对细粒棘球蚴囊泡组织的角质层和生发层的损伤更明显，对肝脏组织的炎症细胞浸润情况有一定程度的改善，具有较好的抗包虫效果。
综上所述，本发明通过联合使用致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，用于治疗包虫病，可实现致DNA损伤化合物对虫体DNA损伤的同时，DNA损伤修复抑制剂实现DNA损伤修复的抑制，完全阻断虫体的DNA损伤修复过程，最终导致虫体凋亡，发挥抗包虫作用，提高了抗包虫的治疗效果。
以上技术特征构成了本发明的实施例，其具有较强的适应性和实施效果，可根据实际需要增减非必要的技术特征，来满足不同情况的需求。
Figure 904380DEST_PATH_IMAGE001
Figure 480855DEST_PATH_IMAGE002

Claims (10)

1.一种致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，其特征在于包括致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂，致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱、去氢骆驼蓬碱衍生物、阿霉素、放线霉素D、道诺梅素、依托泊苷和替尼泊苷中的一种以上，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂和BRCA1抑制剂中的一种以上。
2.根据权利要求1所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，其特征在于RAD51抑制剂为RAD51抑制剂RI-1、RAD51抑制剂RI-2、RAD51抑制剂Amuvatinib MP470、RAD51抑制剂B02、RAD51抑制剂IBR2和RAD51抑制剂RAD51-IN-2中的一种以上。
3.根据权利要求1或2所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，其特征在于BRCA1抑制剂为BRCA1抑制剂BRCA1-IN-1。
4.根据权利要求1或2或3所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物，其特征在于致DNA损伤化合物为去氢骆驼蓬碱，DNA损伤修复抑制剂为RAD51抑制剂RI-1，去氢骆驼蓬碱与RAD51抑制剂RI-1的摩尔比为5：1。
5.一种根据权利要求1或2或3或4所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，其特征在于按下述方法进行：将致DNA损伤化合物和DNA损伤修复抑制剂通过任何一种药学上可接受的剂型进行装载，得到致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物。
6.根据权利要求5所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，其特征在于药学上可接受的剂型为混悬剂、乳剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液、注射剂、纳米制剂、凝胶剂、缓控释制剂和靶向制剂中的一种。
7.根据权利要求6所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，其特征在于药学上可接受的剂型是通过药学上允许的和药学上可接受的辅料或与其他抗包虫病药物制成。
8.根据权利要求6或7所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物的制备方法，其特征在于装载材料为药学上允许的和药学上可接受的载体材料。
9.一种根据权利要求1或2或3或4所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物在制备治疗包虫病药品中的应用。
10.根据权利要求9所述的致DNA损伤化合物联合DNA损伤修复抑制剂的组合物在制备治疗包虫病药品中的应用，其特征在于包虫病为囊型包虫病。
CN202010580162.2A 2020-06-23 2020-06-23 致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用 Pending CN111714638A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010580162.2A CN111714638A (zh) 2020-06-23 2020-06-23 致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010580162.2A CN111714638A (zh) 2020-06-23 2020-06-23 致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111714638A true CN111714638A (zh) 2020-09-29

Family

ID=72568390

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010580162.2A Pending CN111714638A (zh) 2020-06-23 2020-06-23 致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111714638A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113405881A (zh) * 2021-06-10 2021-09-17 华东理工大学 单细胞dna损伤的快速检测方法及试剂盒

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105998014A (zh) * 2016-06-08 2016-10-12 新疆医科大学第附属医院 去氢骆驼蓬碱衍生物作为制备治疗囊型包虫病药物的应用
WO2019014315A1 (en) * 2017-07-11 2019-01-17 Cyteir Therapeutics, Inc. RAD51 INHIBITORS
CN110283820A (zh) * 2019-04-29 2019-09-27 新疆医科大学第一附属医院 抑制细粒棘球蚴原头节dna氧化损伤修复基因表达的干扰rna及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105998014A (zh) * 2016-06-08 2016-10-12 新疆医科大学第附属医院 去氢骆驼蓬碱衍生物作为制备治疗囊型包虫病药物的应用
WO2019014315A1 (en) * 2017-07-11 2019-01-17 Cyteir Therapeutics, Inc. RAD51 INHIBITORS
CN110283820A (zh) * 2019-04-29 2019-09-27 新疆医科大学第一附属医院 抑制细粒棘球蚴原头节dna氧化损伤修复基因表达的干扰rna及其应用

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
巩月红等: "去氢骆驼蓬碱体外诱导细粒棘球蚴原头节凋亡过程中caspase-3及抗氧化酶活性检测分析", 《中国病原生物学杂志》 *
李丽华等: "去氢骆驼蓬碱和阿苯达唑联合治疗小鼠腹腔细粒棘球蚴病的实验研究", 《中国病原生物学杂志》 *
李亚芬等: "Veliparib联合青蒿琥酯体外抗细粒棘球蚴作用机制的研究", 《中国病原生物学杂志》 *
李红玲等: "去氢骆驼蓬碱抗细粒棘球蚴原头节作用研究", 《中国病原生物学杂志》 *
赵晋明等: "骆驼蓬总碱治疗小鼠腹腔细粒棘球蚴病的实验研究", 《新疆医科大学学报》 *
高旖等: "去氢骆驼蓬碱致细粒棘球蚴DNA损伤修复相关基因表达量的检测", 《中国病原生物学杂志》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113405881A (zh) * 2021-06-10 2021-09-17 华东理工大学 单细胞dna损伤的快速检测方法及试剂盒

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114191552B (zh) 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的药物及其应用
CN1383381A (zh) 一种含有五羟黄酮衍生物活性成分的骨质疏松症治疗剂
CN111714638A (zh) 致dna损伤化合物联合dna损伤修复抑制剂的组合物及制备方法和应用
CA2995132C (en) Method for treating pulmonary fibrosis comprising application of dimethylamino micheliolide
WO2023272831A1 (zh) 水苏糖在制备用于治疗去势抵抗性前列腺癌药物中的应用
CN101095668A (zh) 迷迭香酸在制备治疗或预防肝纤维化和肾纤维化的药物中的应用
CN111840561B (zh) S100a9抑制剂在制备治疗胰腺炎的药物中的应用
WO2004060360A1 (de) Verwendung von wirksubstanzen zur prophylaxe und/oder therapie von viruserkrankungen
CN111110666B (zh) 一种治疗消化道癌症的药物组合物
Niikura Effect of a V-ATPase inhibitor, FR202126, in syngeneic mouse model of experimental bone metastasis
CN111939179A (zh) 眼镜蛇蛇毒或其提取物在制备降尿酸和/或抗痛风性关节炎的药物中的应用
EP3957314A1 (en) Use of extract from rabbit skin inflamed by vaccinia virus in treating hematopoietic system damage
CN115887471A (zh) 瑞德西韦在制备治疗皮肤纤维化疾病药物中的应用
CN116685333A (zh) 一种治疗肝纤维化的siRNA及其递送制剂
CN111671756A (zh) TGF-βSmad信号通路抑制剂作为制备治疗肝囊型包虫病药物的应用
CN107569493B (zh) 氟维司群在制备治疗无功能垂体腺瘤的药物中的用途
US20220339175A1 (en) Application of Stachyose in Preparation of Drug for Treating Castration-Resistant Prostate Cancer
CN111434336A (zh) 一种化合物及其药物组合物在腹膜纤维化防治中的应用
CN114949184A (zh) Glp-1代谢物在制备减轻急性肾损伤药物中的用途
CN109718365B (zh) 重组人角质细胞生长因子的应用
CN114617969A (zh) 乐伐替尼和Aurora-A激酶抑制剂在制备抑制癌症的药物中的应用
CN116270655A (zh) 一种治疗关节炎的可注射药物、制备方法及用法
CN117653645A (zh) 仙茅苷在防治椎间盘退变中的应用
CN116870182A (zh) 一种具备靶向抑制阿霉素诱导心肌细胞铁死亡的小分子多肽纳米药物的制备方法
CN106518972B (zh) 含有磷酸化酪氨酸的多肽、其应用及药物组合物

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200929

RJ01 Rejection of invention patent application after publication