CN111670846B - 一种海绵稚体原位培育的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种海绵稚体原位培育的方法，首先原位使用网兜裹住成熟海绵母体收集海绵幼体，将幼体置于培养皿中进行自然附着；然后室内倒扣培育14～15天，得到生长出完整出水管的海绵幼体；接着以60～80目的网兜将塑料网片、载体和培养皿包裹在内，将培养皿开口向下悬挂于海区中，定期抖动，培养28～32天；最后，去除网兜，保持培养皿开口向下悬挂，定期抖动，培育3～4个月，得到具有成体形态的海绵稚体。本发明的方法采用原位培育得到海绵稚体，可以进一步将海绵稚体养成成体形态，并且具有相对较高的存活率以及生长率。
Description
技术领域
本发明属于海水养殖领域，具体涉及一种海绵稚体原位培育的方法。
背景技术
海绵动物不仅是最原始的多细胞动物，而且也是医学上的重要物种之一，因为其体内具有大量新颖的活性物质，例如：沐浴角骨海绵(Spongia officinalis)具有的多孔柔软骨架是重要的海洋生物材料；相似蜂海绵(Haliclona simulans)具有的双尖骨针可应用于经皮给药。
开发海绵动物体内的化合物可能会需要大量的海绵生物量。为了满足这一需求，人工养殖海绵被认为是最可行的方式。关于人工养殖海绵成功的案例已经有不少报道，但是这些案例都是利用海绵突出的无性再生能力，采用移植块增殖的方式来实现海绵动物生物量的扩增。移植块增殖需要采集野生海绵，在产业规模上将受限于野生资源可持续利用的约束，另一方面，连续多代的移植块增殖会使海绵种质衰退。因此，就像其他鱼虾贝等经济物种一样，通过幼体培育至成体，以有性繁殖的方式获得更新的种质将是获取海绵生物量的重要环节。
有多项研究开展了海绵动物幼体的培育，比如Caralt等人2007年，研究比较了两种海绵(Dysidea avara和Crambe crambe)稚体在室内和在海上生长的区别，结果显示这两种海绵在海区的生长状况并不良好，D.avara的稚体在培育60天以后就全部死亡了，C.crambe海区的生长状况也不如在实验室的环境中良好(de Caralt et al.2007)。Xue等人2009年在实验室的环境中研究了多种物理因素对海绵Hymeniacidon perlevis稚体生长的影响，将海绵稚体在43天内培育到了4mm2的大小(Xue and Zhang 2009)；Abdul Wahab等人，2014年在实验室环境中搭建了一个高密度聚乙烯的跑道用于长期对海绵稚体进行培育。跑道内保持水流流动，采用10μm过滤的天然海水，养殖周期保持了2年之久(AbdulWahab et al.2014)。在这样比较严格的条件下，两年时间内获得的最大的海绵稚体也只有5cm的大小。因此，目前的报道都不能提供一种经济适用的海绵稚体培育方法。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了一种海绵稚体原位培育的方法，解决了上述背景技术中的问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：提供了一种海绵稚体原位培育的方法，包括如下步骤：
1)收集自然排放的海绵幼体，海水清洗后，放入培养皿内在平整并黑暗的环境下培养，得到附着变态的海绵幼体；
2)在养殖箱内加入天然海水，安装造流泵制造水流使水体中氧气充足，将步骤1)附着有海绵幼体的培养皿倒扣并以载体压住防止其漂浮，每天100％换水，不投喂任何饵料，培养14～15天，得到生长出完整出水管的海绵幼体；
3)以塑料网片将培养皿的底部固定至载体，并以60～80目的网兜将塑料网片、载体和培养皿包裹在内，将培养皿开口向下悬挂于海区中，定期抖动，培养28～32天；
4)去除网兜，将塑料网片、载体和培养皿悬挂到海区中，保持培养皿开口向下悬挂，定期抖动，培育3～4个月，得到具有成体形态的海绵稚体。
在本发明一较佳实施例中，还包括：5)将海绵稚体的单个培养皿使用扎带绑在绳子上悬挂于海区，任其自然生长，得到沿着绳子附着的海绵成体。
在本发明一较佳实施例中，1)采用90～110目的悬浮网兜将海绵母体兜住，收集自然排放的海绵幼体；收集到的海绵幼体转移到室内，采用0.4～0.5μm滤膜过滤的海水清洗2遍；在培养皿中加入过滤海水和海绵幼体，二者的用量比为20mL：28～30只；将装有幼体的培养皿转移到平整并黑暗的地方，让海绵幼体自然附着22～26小时。
在本发明一较佳实施例中，所述载体包括瓷砖。
在本发明一较佳实施例中，步骤2)中，所述养殖箱内加入二分之一至四分之三体积的90～110目筛绢网过滤的天然海水。
在本发明一较佳实施例中，所述塑料网片的孔径为0.8～1.2cm。
在本发明一较佳实施例中，所述步骤3)和步骤4)中，定期抖动的频率为每5天抖动2～3分钟。
在本发明一较佳实施例中，所述步骤3)中，将培养皿开口向下悬挂于海区的水体中，距海面深度为0.5～0.6m。
在本发明一较佳实施例中，所述海绵幼体采集自沐浴角骨海绵或相似蜂海绵。
本技术方案与背景技术相比，它具有如下优点：
1.本发明以沐浴角骨海绵和相似蜂海绵幼体为材料，成功完成了蜂海绵稚体和沐浴角骨海绵稚体的海区培养，将海绵幼体培养成具有成体形态的稚体，实现了海绵种质的低成本地人工更新；
2.本发明能在前期保证了海绵幼体的生长环境，并提高后期在海区养殖的存活率以及生长率，操作简单，经济效益佳，可以进行大规模生产。
附图说明
图1为实施例1中网兜悬挂在海区的示意图；
图2为沐浴角骨海绵稚体海区培养存活率图；
图3为沐浴角骨海绵稚体海区培养生长率图；
图4为沐浴角骨海绵稚体海区生长图，其中a.幼体养成装置；b.幼体附着10天后；c和d.幼体附着3个月后；
图5为培养皿不同放置方式示意图；
图6为前置的室内培养和直接海区培养15天存活率图(左-室内，右-海区)；
图7为不同保护方式蜂海绵稚体海区培育30天存活率图；
图8为不同保护方式蜂海绵稚体海区培育生长情况示意图(左-0天，中-30天，右-90天)；
图9为蜂海绵置气海区生长情况实物图；
图10为实施例3中步骤5)操作示意图，a.去掉培养皿的边；b.借助网片和扎带固定在绳子上。
具体实施方式
实施例1
本实施例为沐浴角骨海绵稚体海区培育，包括如下步骤：
1)2018年8月，海南琼海，以100目网兜兜住沐浴角骨海绵成体，收集自然排放的幼体；收集到的海绵幼体转移到室内，采用0.45μm滤膜过滤的海水清洗2遍；准备好装有20mL过滤海水的塑料培养皿(6cm直径)，使用胶头滴管吸取海绵幼体约30只加入其中，将装有幼体的培养皿转移到平整并黑暗的地方，让海绵幼体自然附着24小时。
2)准备一个大约1米立方的帆布箱，加入四分之三体积的100目筛绢网过滤的天然海水，安装造流泵制造水流，保持水流流动使水体当中氧气满足海绵生长；将步骤1)避光附着变态一天后的海绵幼体连同培养皿转移至帆布箱，倒扣并用瓷砖压住防止其漂浮，每天采用水泵100％换水，不投喂任何饵料，培养15天；
3)15天后，使用1㎝孔径的塑料网片，包裹培养皿以及瓷砖，培养皿底部贴瓷砖；使用80目网兜将塑料网片-培养皿-瓷砖的组合包裹住，注意培养皿开口方向向下放置，然后悬挂在琼海海区潮间带海域中，水深约0.5m即可(如图1所示)；每5天抖动悬挂在海区当中的网兜2分钟，除去沉积在网兜上的沉积物；
4)在80目网兜中培养约30天后，将网兜除去，将塑料网片-培养皿-瓷砖的组合在没有网兜的保护情况下，直接悬挂到海区当中，保持培养皿开口方向向下；每隔5天抖动悬挂在海区当中的设施，保持不被沉积物掩埋；培育3～4个月，得到具有成体形态的海绵稚体。
5)将具有成体形态的海绵稚体的单个培养皿使用扎带绑在绳子(成体附着基)上悬挂在海区，任其自然生长，海绵稚体会沿着绳子生长成为个体很大的海绵成体。
实施例2
实施例2与实施例1的区别在于：实施例2采用60目网兜。
一、不同规格网兜对比实验
比较实施例1和实施例2的稚体在45天和90天的存活率以及生长率(如图2～4)，结果显示，60目网兜和80目网兜培养条件下，海绵稚体的生长率差异不显著，但是相对而言，80目网兜培养条件下，海绵稚体具有更高的存活率，平均存活率达到了40.15±15.93％。可见80目的网兜对海绵稚体的保护更为周全。90天后海绵稚体形态为图3中c和d白色箭头所示，具初步的成体形态。
实施例3
本实施例为蜂海绵稚体海区培育，包括如下步骤：
1)2019年6月，在福建东山诏安湾鱼排，采用网兜收集5株成熟蜂海绵释放的幼体，每株收获约2000只幼体；收集到的海绵幼体转移到室内，采用0.45μm滤膜过滤的海水清洗2遍；准备好装有20mL过滤海水的塑料培养皿(6cm直径)，使用胶头滴管吸取海绵幼体约30只加入其中，将装有幼体的培养皿转移到平整并黑暗的地方，让海绵幼体自然附着24小时。
2)准备一个大约1米立方的帆布箱，加入四分之三体积的100目筛绢网过滤的天然海水，安装造流泵制造水流保持水体当中氧气充足；将步骤1)避光附着变态一天后的海绵幼体连同培养皿转移至帆布箱，倒扣并用瓷砖压住防止其漂浮，每天采用水泵100％换水，不投喂任何饵料，培养15天；
3)15天后，使用1㎝孔径的塑料网片，包裹培养皿以及瓷砖，培养皿底部贴瓷砖；使用80目网兜将塑料网片-培养皿-瓷砖的组合包裹住，注意培养皿开口方向向下放置，然后悬挂在东山海区中，水深约0.5m即可；每5天抖动悬挂在海区当中的网兜2分钟，除去沉积在网兜上的沉积物；
4)在80目网兜中培养约30天后，将网兜除去，将塑料网片-培养皿-瓷砖的组合在没有网兜的保护情况下，直接悬挂到海区当中，保持培养皿开口方向向下；每隔5天抖动悬挂在海区当中的设施，保持不被沉积物掩埋；培育3～4个月，得到具有成体形态的海绵稚体。
5)将具有成体形态的海绵稚体的单个培养皿使用扎带绑在绳子(成体附着基)上悬挂在海区，由于培养皿具有一个深度，培养皿的边不利于稚体后期的生长，因此需要使用剪刀将培养皿的边去掉(如图10中的a)，由于培养皿本身很难独自固定在绳子上，因此采用网片以及扎带等辅助方式将培养皿牢固固定在绳子上(如图10中的b)，绳子是成体的附着基，海绵稚体顺着绳子自然生长，最终可以成长成个体很大的海绵成体。
二、室内培育、培养皿放置方式对存活率的影响
按如下方式设置对比例1～3，其余条件与实施例3的相同：
对比例1，如图5中的a：培养皿开口方向向上，瓷砖在下(UA)；
对比例2，如图5中的b：培养皿开口方向向上，瓷砖在上(UU)；
对比例3，如图5中的c：培养皿开口方向向下，瓷砖在下(DA)；
实施例3，如图5中的d：培养皿开口方向向下，瓷砖在上(DU)；
同时，上述对比例1～3和实施例3均设置前置的室内培养15天和直接海区培养15天作为对照。
四种培养皿和瓷砖不同放置方式条件下，比较室内培养的稚体15天的存活率以及直接在海区中培育15天的存活率，结果如图6所示。不同的培养皿放置条件下，室内培育15天的稚体存活率显著高于直接海区培养15的稚体存活率。室内培育15天的稚体存活率范围为84.87％-97.91％，其中培养皿开口方向向下的培养方式存活率都在95％以上。而海区培养15天的存活率最高也只有51.81％。因此，海绵稚体在转移到海区之前在室内培育一段时间可显著提升存活率。
三、蜂海绵稚体海区培育存活率和生长率对比
将实施例3中步骤2)培养了15天的蜂海绵稚体转移到海区当中进行培养，培养皿的方向保持向下。采用不做任何保护、60目网兜和80目网兜包裹保护三种条件，比较海绵稚体的存活率以及生长率。结果如图7，可以看出，在海区培养30天后(从挂入海区的时候开始计算)，80目网兜条件下获得海绵稚体存活率最高，平均存活率可以达到41.66±11.71％。比较三种培养方式的生长率发现，30天的稚体生长率相差不大，但是在没有网兜的组别在培养90天后的生长率显著高于网兜组，个体大小可达12.62±6.37mm(图8)，在颜色、出水管和分枝形态上与成体极为接近(图9)。因此，在30天后网兜的保护并不利于海绵稚体的生长，去除网兜的保护会促进海水中的饵料接近海绵稚体从而促进其生长。
以上所述，仅为本发明较佳实施例而已，故不能依此限定本发明实施的范围，即依本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰，皆应仍属本发明涵盖的范围内。
Claims (8)
1.一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)收集自然排放的海绵幼体，海水清洗后，放入培养皿内，在平整并黑暗的环境下培养，得到附着变态的海绵幼体；
2)在养殖箱内加入二分之一至四分之三体积的90～110目筛绢网过滤的天然海水，安装造流泵制造水流使水体中氧气充足，将步骤1)附着有海绵幼体的培养皿倒扣并以载体压住防止其漂浮，每天换水100％体积，不投喂任何饵料，培养14～15天，得到生长出完整出水管的海绵幼体；
3)以塑料网片将培养皿的底部固定至载体，并以60～80目的网兜将塑料网片、载体和培养皿包裹在内，将培养皿开口向下悬挂于海区中，定期抖动，培养28～32天；
4)去除网兜，将塑料网片、载体和培养皿悬挂到海区中，保持培养皿开口向下悬挂，定期抖动，培育3～4个月，得到具有成体形态的海绵稚体；
5)将海绵稚体的单个培养皿使用扎带绑在绳子上悬挂于海区，任其自然生长，得到沿着绳子附着的海绵成体。
2.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：
1)采用90～110目的悬浮网兜将海绵母体兜住，收集自然排放的海绵幼体；收集到的海绵幼体转移到室内，采用0.4～0.5μm滤膜过滤的海水清洗2遍；在培养皿中加入过滤海水和海绵幼体，二者的用量比为20mL：28～30只；将装有幼体的培养皿转移到平整并黑暗的地方，让海绵幼体自然附着22～26小时。
3.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：所述载体包括瓷砖。
4.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：所述塑料网片的孔径为0.8～1.2cm。
5.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：所述步骤3)和步骤4)中，定期抖动的频率为每5天抖动2～3分钟。
6.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：所述步骤3)中，将培养皿开口向下悬挂于海区的水体中，距海面深度为0.5～0.6m。
7.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：所述海绵幼体采集自沐浴角骨海绵或相似蜂海绵。
8.根据权利要求1所述的一种海绵稚体原位培育的方法，其特征在于：所述海绵稚体的存活率达41.66±11.71％，个体大小达12.62±6.37mm。
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