CN111650293A - 金丹丸的质量检测方法 - Google Patents

金丹丸的质量检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111650293A
CN111650293A CN202010332607.5A CN202010332607A CN111650293A CN 111650293 A CN111650293 A CN 111650293A CN 202010332607 A CN202010332607 A CN 202010332607A CN 111650293 A CN111650293 A CN 111650293A
Authority
CN
China
Prior art keywords
jindan
solution
methanol
pill
psoralen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202010332607.5A
Other languages
English (en)
Inventor
冯倩玲
赖远豪
焦逸帆
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangzhou Baiyunshan Qixing Pharmaceutical Co ltd
Original Assignee
Guangzhou Baiyunshan Qixing Pharmaceutical Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangzhou Baiyunshan Qixing Pharmaceutical Co ltd filed Critical Guangzhou Baiyunshan Qixing Pharmaceutical Co ltd
Priority to CN202010332607.5A priority Critical patent/CN111650293A/zh
Publication of CN111650293A publication Critical patent/CN111650293A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
    • G01N30/06—Preparation
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
    • G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
    • G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/86—Signal analysis
    • G01N30/8675—Evaluation, i.e. decoding of the signal into analytical information

Landscapes

  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Library & Information Science (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)

Abstract

本发明涉及一种金丹丸的质量检测方法，包括如下步骤：对照品溶液制备：精密称取补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，加溶剂溶解，得所述对照品溶液；供试品溶液制备：取待测金丹丸样品，研碎后精密称定，然后加入一元醇进行提取，提取液滤过，取续滤液，得所述供试品溶液；检测：利用高效液相色谱法对所述对照品溶液与供试品溶液进行测定；所述高效液相色谱法采用等梯度洗脱，流动相为甲醇和水。该质量检测方法能够满足金丹丸中补骨脂素、异补骨脂素成分的定性和定量分析，且操作简单、方便，检测速度快，检测方法专属性强、精密度高、重复性好、准确度高。

Description

金丹丸的质量检测方法
技术领域
本发明涉及中药检测技术领域，特别是涉及金丹丸的质量检测方法。
背景技术
补骨脂为豆科植物的干燥成熟果实，具有补肾壮阳，固精缩尿，肾虚腰痛，小便频数，小儿遗尿，肾漏，温脾止泻，纳气平喘等功效。补骨脂提取物中化学成分十分复杂，包括香豆素类、黄酮类、单萜酚类、苯并呋喃类等化合物。2015年版《中国药典》中规定补骨脂药材中补骨脂素和异补骨脂素的总量不得低于0.70％，可见补骨脂素和异补骨脂素是十分重要的指标性成分。
金丹丸是由26味中药材组成。具有补肾温阳，益气健脾的作用，用于肾气亏虚，脾气虚弱所致的腰膝酸软，耳鸣，神疲乏力，畏寒肢冷，食欲不振，便溏，夜尿频多等症。但是，由于金丹丸同时包含的药材种类众多，各药材又包含了多种化学成分，这些化学成分在定性和定量中会互相干扰，给金丹丸的质量控制、质量检测造成困难。现行的一些针对中药制剂中补骨脂素和/或异补骨脂素的质量检测方案，如以甲醇-水(55:45)为流动相对12味药材的腰痛丸中补骨脂素和异补骨脂素进行液相色谱检测，或先对供试品(包含补骨脂素、异补骨脂素的壮肾丸)进行超声提取，再以乙腈-0.125％磷酸(25:75)为流动相进行液相色谱检测，或对供试品进行长达5天的索氏提取，再进行薄层层析等，均无法满足金丹丸中多种类药材、多种类化学成分的同时定性和定量，不适用于金丹丸的质量检测。
发明内容
基于此，有必要提供一种金丹丸的质量检测方法。该质量检测方法能够满足金丹丸中补骨脂素、异补骨脂素成分的定性和定量分析，且操作简单、方便，检测速度快，检测方法专属性强、精密度高、重复性好、准确度高。
具体技术方案如下：
一种金丹丸的质量检测方法，包括如下步骤：
对照品溶液制备：精密称取补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，加溶剂溶解，得所述对照品溶液；
供试品溶液制备：取待测金丹丸样品，研碎后精密称定，然后加入一元醇进行提取，提取液滤过，取续滤液，得所述供试品溶液；
检测：利用高效液相色谱法对所述对照品溶液与供试品溶液进行测定；所述高效液相色谱法采用等梯度洗脱，流动相为甲醇和水。
在其中一个实施例中，所述流动相为体积比为30～34：66～70的甲醇和水。
在其中一个实施例中，所述流动相为体积比为32：68的甲醇和水。
在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法采用的条件还包括：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温25～40℃，流动相的流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为245～247nm。
在其中一个实施例中，所述检测波长为246nm，柱温30℃，流动相的流速为1mL/min。
在其中一个实施例中，所述高效液相色谱法的理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
在其中一个实施例中，所述对照品溶液制备中，所述溶剂为甲醇。
在其中一个实施例中，每1mL所述对照品溶液含补骨脂素0.01～0.03mg、异补骨脂素0.01～0.03mg。
在其中一个实施例中，所述供试品溶液制备中，所述一元醇为甲醇或乙醇，所述提取的方法为加热回流提取或索氏回流提取。
在其中一个实施例中，所述供试品溶液制备中，所述一元醇为甲醇，所述提取的方法为加热回流提取，提取时间为0.5～4h。
在其中一个实施例中，所述供试品溶液制备中，所述一元醇的用量为每1.5g待测金丹丸样品加入20～30mL。
在其中一个实施例中，所述检测步骤中，根据所述测定的结果计算所述待测金丹丸样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量，所述计算的方法为外标法。
与现有技术相比较，本发明具有如下有益效果：
本发明所述的金丹丸的质量检测方法，采用高效液相法进行检测，合理控制检测条件，能够快速、准确的对供试品溶液中的补骨脂素和异补骨脂素进行定性和定量。同时经过系统的方法学考察，本发明所建立的质量检测方法准确、简单易行、重复性好，且各项指标均符合2015版《中国药典》(四部)9101药品质量标准分析方法验证指导原则的规定，值得推广应用。
附图说明
图1为实施例1中对照品溶液(含补骨脂素和异补骨脂素对照品)的高效液相色谱图；
图2为实施例1中供试品溶液(含金丹丸样品)的高效液相色谱图；
图3为实施例2中补骨脂素190～500nm波长扫描；
图4为实施例2中异补骨脂素190～500nm波长扫描；
图5为实施例2中金丹丸供试品各波长色谱图；
图6为实施例3中空白溶剂色谱图；
图7为实施例3中阴性样品色谱图；
图8为实施例3中金丹丸供试品色谱图；
图9为实施例3中补骨脂素对照品溶液的标准曲线图；
图10为实施例3中异补骨脂素对照品溶液的标准曲线图；
其中，a为补骨脂素，b异补骨脂素，c干扰峰。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的金丹丸的质量检测方法作进一步详细的说明。本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明公开内容理解更加透彻全面。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明的实施例提供一种金丹丸的质量检测方法，包括如下步骤：
对照品溶液制备：精密称取补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，加溶剂溶解，得所述对照品溶液；
供试品溶液制备：取待测金丹丸样品，研碎后精密称定，然后加入一元醇进行提取，提取液滤过，取续滤液，得所述供试品溶液；
检测：利用高效液相色谱法对所述对照品溶液与供试品溶液进行测定；所述高效液相色谱法采用等梯度洗脱，流动相为甲醇和水。
在其中一个具体的实施例中，所述流动相为体积比为30～34：66～70的甲醇和水。具体的，所述甲醇和水的体积比可以选自如下比例：30：70、32：68、33：67、34：66。作为优选的，所述流动相为体积比为32：68的甲醇和水。
在其中一个具体的实施例中，所述高效液相色谱法采用的条件还包括：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温25～40℃，流动相的流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为245～247nm。作为优选的，所述检测波长为246nm，柱温30℃，流动相的流速为1mL/min。
在其中一个具体的实施例中，所述高效液相色谱法的理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
在其中一个具体的实施例中，所述对照品溶液制备中，所述溶剂为甲醇。
在其中一个具体的实施例中，每1mL所述对照品溶液含补骨脂素0.01～0.03mg、异补骨脂素0.01～0.03mg。
在其中一个具体的实施例中，所述供试品溶液制备中，所述一元醇为甲醇或乙醇，所述提取的方法为加热回流提取或索氏回流提取。作为优选地，所述供试品溶液制备中，所述供试品溶液制备中，所述一元醇为甲醇，所述提取的方法为加热回流提取，提取时间为0.5～4h。以甲醇加热回流处理，可以大幅的节约预处理时间，操作简单、方便，分析速度快，且供试品溶液的稳定性好、结果更为准确。所述提取时间进一步优选为2～3h。
在其中一个具体的实施例中，所述供试品溶液制备中，所述一元醇的用量为每1.5g待测金丹丸样品加入20～30mL。
在其中一个具体的实施例中，所述检测步骤中，根据所述测定的结果计算所述待测金丹丸样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量，所述计算的方法为外标法。
在其中一个具体的实施例中，所述检测步骤中，所述对照品溶液和/或所述供试品溶液的进样量为5～15μL。所述对照溶液和所述供试品溶液的进样量可以相同，也可以不同。更为具体地，所述对照溶液和/或所述供试品溶液的进样量包括但不限于如下体积：5μL、7μL、8μL、10μL、13μL、15μL。
本发明实施例中所用仪器和试剂相关信息如下表1～3所示：
表1仪器
Figure BDA0002465492650000061
表2试剂
名称 级别 厂家
甲醇 色谱纯 Merck
表3标准品
Figure BDA0002465492650000062
实施例1
本实施例为金丹丸的质量检测方法，步骤如下：
(1)色谱条件与适应性试验：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比32:68)为流动相；检测波长为246nm；柱温30℃；流速1.0ml/min；理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
(2)对照品溶液的制备：精密称取补骨脂素和异补骨脂素对照品，置容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成每1mL含补骨脂素0.02mg、异补骨脂素0.02mg的混合液，摇匀，即得。
(3)供试品溶液的制备：取金丹丸样品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)14g，研碎，精密称定1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2小时，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
(4)测定方法：分别吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪中，进样量各10μL，测定，结果如图1和2所示。
(5)含量计算：计算公式如下，计算结果为0.57mg/g。
Figure BDA0002465492650000071
式中：AX—供试品溶液的峰面积；AR—对照品溶液的峰面积；CR—对照品溶液的浓度(mg/ml)；W—供试品的取样量(g)；1-补骨脂素；2-异补骨脂素。
实施例2
本实施例为实施例1所述金丹丸的质量检测方法的条件考察实验。
1、检测波长对检测结果的影响
供试品溶液的制备：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研碎，精密称定1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2小时，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比32:68)为流动相；柱温30℃；流速1.0ml/min。精密吸取金丹丸供试品溶液10μL进样检测。使用高效液相色谱二极管阵列检测器扫描吸收波长。
补骨脂素在205nm、245nm、295nm处有吸收峰(图3)，异补骨脂素在199nm、247nm、301nm处有吸收峰(图4)。通过对补骨脂素和异补骨脂素的吸收峰提取对应的色谱图(图5)。通过色谱图可得对应波长补骨脂素、异补骨脂素和各杂质峰的响应，见表4，结果显示补骨脂素和异补骨脂素在245nm～247nm处有最大吸收，且吸收峰峰形较好，结合补骨脂素和异补骨脂素在199nm、205nm、245nm、246nm、247nm、295nm、301nm处出现的最大吸收峰，我们通过二极管阵列检测器提取对应的色谱图，从色谱图可见，245nm～247nm处，补骨脂素和异补骨脂素灵敏度和响应值最高，杂峰干扰少，故波长为245nm～247nm时，适用于金丹丸检测。
表4各波长响应值
波长(nm) 补骨脂素和异补骨脂素响应值 杂质峰响应值
199 高 高
205 高 高
245 高 低
246 高 低
247 高 低
295 中 高
301 中 高
2、流动相比例对检测结果的影响
供试品溶液的制备：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研碎，精密称定1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2小时，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；检测波长为246nm，柱温30℃；流速1.0ml/min。精密吸取金丹丸供试品溶液10μL进样检测。按流动相体积比为甲醇-水(30:70)、甲醇-水(32:68)、甲醇-水(34:66)、甲醇-水(36:64)、甲醇-水(40:60)，分别测定其(补骨脂素与异补骨脂素)含量，结果见表5，当流动相比例为甲醇-水(30:70)～(34:66)时，各组份的分离度都能大于1.5。
表5流动相比例试验
Figure BDA0002465492650000091
3、流速对检测结果的影响
供试品溶液的制备：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研碎，精密称定1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2小时，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；检测波长为246nm，柱温30℃。精密吸取金丹丸供试品溶液10μL进样检测。在流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min，分别测定补骨脂素与异补骨脂素含量含量。结果如表6和7所示。在流速为0.8ml/min、1.0ml/min、1.2ml/min时，都可测定补骨脂素与异补骨脂素含量，但流速为0.8ml/min时，分析时间偏长。流速为1.2ml/min时，液相系统压力会比较高。因此，选择1.0ml/min作为最适流速。
表6补骨脂素流速试验
Figure BDA0002465492650000101
表7异补骨脂素流速试验
Figure BDA0002465492650000102
4、色谱柱温度对检测结果的影响
供试品溶液的制备：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研碎，精密称定1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2小时，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水为流动相；检测波长为246nm。精密吸取金丹丸供试品溶液10μL进样检测。分别在柱温为25℃、30℃、35℃、40℃测定补骨脂素与异补骨脂素含量。结果如表8和9所示。在柱温为25℃和30℃时，补骨脂素与异补骨脂素的总含量高，且峰分离度较好，但是30℃时，进样时间相对较短，故选择30℃作为最佳柱温。
表8补骨脂素柱温试验
Figure BDA0002465492650000111
表9异补骨脂素柱温试验
Figure BDA0002465492650000112
5、样品前处理方式对检测结果的影响
5.1样品提取方式对检测结果的影响
供试品溶液分别采用如下(1)-(3)的方法进行制备：
(1)加热回流提取：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研碎，精密称定1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2小时，放冷，再称定重量，以甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
(2)超声提取：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研细，精密称取1.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定重量，超声(250W，25kHz)提取2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
(3)索氏回流提取：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研细，精密称取1.5g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇80mL回流提取2h，提取液置水浴蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定量转移至25mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，即得。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比32:68)为流动相；检测波长为246nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。分别精密吸取上述金丹丸供试品溶液各10μL，测定补骨脂素与异补骨脂素含量。实验结果如下表10。可见，加热回流提取和索氏回流提取比超声提取更充分，得到的样品含量高，提取方式更完全、更充分。
表10提取方式试验
Figure BDA0002465492650000121
5.2提取溶剂对检测结果的影响
供试品溶液的制备：取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研细，分别精密称取1.5g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入乙酸乙酯、乙醇、甲醇各25mL，称定重量，加热回流提取2h，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液进行测定。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比32:68)为流动相；检测波长为246nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。分别精密吸取上述金丹丸供试品溶液各10μL，测定其含量。实验结果如下表11。可见，样品采用甲醇或乙醇作为提取溶剂时，金丹丸供试品都可以提取完全，测定的总含量最高，优选甲醇为提取溶剂。
表11样品提取溶剂选择试验
Figure BDA0002465492650000131
5.3供试品浓度对检测结果的影响
取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A),研细，分别精密称取0.5g、1.0g、1.5g、2.0g、2.5g，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇25mL，称定重量，加热回流提取2h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液进行测定。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比32:68)为流动相；检测波长为246nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。分别精密吸取上述金丹丸供试品溶液各10μL，测定补骨脂素与异补骨脂素含量。实验结果如下表12，样品取样量试验，取样量少，补骨脂素与异补骨脂素含量的误差会越大。取样量越多，则杂质峰较多，影响与主峰的分离度，综合多个因素选择1.5g取样量的供试品浓度方案。
表12样品取样量试验
Figure BDA0002465492650000141
5.4样品提取时间
取金丹丸供试品(来源广州白云山奇星药业有限公司，批号为K8001A)，研细，分别精密称取1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入25mL，称定重量，分别加热回流提取0.5h、1h、2h、3h、4h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液进行测定。
色谱条件：色谱柱为CAPCELL PAK C18 4.6*250mm 5μm，其以十八烷基键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比32:68)为流动相；检测波长为246nm；柱温30℃；流速1.0ml/min。分别精密吸取上述金丹丸供试品溶液各10μL，测定补骨脂素与异补骨脂素含量。实验结果如下表13，样品回流提取时间达到2h时，测得补骨脂素与异补骨脂素的总含量最高，说明2h回流提取基本完全，继续加热回流含量不会增高，故选择2h作为样品回流提取时间。
表13提取时间试验
Figure BDA0002465492650000142
Figure BDA0002465492650000151
实施例3
本实施例为实施例1所述金丹丸的质量检测方法的方法学考察。
1、专属性考察
按照与金丹丸相同的制备工艺制备不含补骨脂的阴性对照品，并将其按照实施例1中“供试品溶液的制备”项相同的方法制备成的阴性样品溶液，再取空白溶剂(甲醇)、金丹丸供试品溶液，按实施例1中“色谱条件与适应性试验”项相同的色谱条件分别测定，结果见图6、图7和图8。可知，空白溶剂，阴性样品图谱与补骨脂素、异补骨脂素对照品相同保留时间位置未出峰，说明空白溶剂、阴性样品对测定无干扰，该方法专属性强。
2、线性考察
精密称取补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别加甲醇制成含补骨脂素0.005087mg/ml、0.01017mg/ml、0.02035mg/ml、0.03025mg/ml、0.04070mg/ml，含异补骨脂素0.005584mg/ml、0.01117mg/ml、0.02234mg/ml、0.03574mg/ml、0.04468mg/ml的溶液。按实施例1中“色谱条件与适应性试验”项相同的色谱条件分别测定。
以峰面积为纵坐标，补骨脂素、异补骨脂素浓度为横坐标绘制标准曲线。实验结果见图9-10，以及表14、表15、表16。结果表明，补骨脂素在0.005087～0.04070mg/ml范围内呈现良好的线性关系，异补骨脂素在0.005584～0.04468mg/ml范围内呈现良好的线性关系，R2≥0.999。
表14补骨脂素标准曲线测定结果
Figure BDA0002465492650000161
表15异补骨脂素标准曲线测定结果
Figure BDA0002465492650000162
计算回归方程：
表16标准曲线测定结果
Figure BDA0002465492650000163
3、准确度考察
取已知含量的金丹丸样品，精密称定约1.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入一定量的补骨脂素、异补骨脂素混合对照品溶液，精密加入甲醇25mL，按照实施例1中“供试品溶液的制备”项相同的方法制备成供试品溶液，测定。实验结果见表17、表18。结果表明，金丹丸中补骨脂素平均回收率为100.3％，RSD为1.3％,异补骨脂素平均回收率为100.4％，RSD为0.9％，回收率结果符合2015年版《中国药典第四部通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则》。
表17补骨脂素准确度试验结果
Figure BDA0002465492650000171
表18异补骨脂素准确度试验结果
Figure BDA0002465492650000172
4、样品溶液的稳定性考察
取同一批金丹丸供试品(广州白云山奇星药业有限公司，批号为18001)，按照实施例1中“供试品溶液的制备”项相同的方法制备成相应浓度的供试品溶液，所得供试品溶液室温放置，在0、3、6、9、12、24小时分别进样测定含量。结果表明，供试品溶液在室温条件下，放置24小时补骨脂素和异补骨脂素含量RSD≤2％，溶液稳定。实验结果见表19、表20。
表19补骨脂素稳定性试验结果
Figure BDA0002465492650000181
表20异补骨脂素稳定性试验结果
Figure BDA0002465492650000182
5、重复性考察
取同一批金丹丸供试品(广州白云山奇星药业有限公司，批号为18001)，按照实施例1中“供试品溶液的制备”项相同的方法制备9份供试品溶液，分别精密进样10μL，测定含量。结果表明，9份样品含量测定补骨脂素RSD为1.1％，异补骨脂素RSD为1.9％，2种组份含量RSD均小于2％，该方法重复性好。结果见表21、表22。
表21补骨脂素重复性试验结果
Figure BDA0002465492650000183
Figure BDA0002465492650000191
表22异补骨脂素重复性试验结果
Figure BDA0002465492650000192
6、精密度考察
取同一批供试品(广州白云山奇星药业有限公司，批号为18001)，以不同实验者、不同实验仪器，按照与实施例1相同的方法进行测定。结果表明，不同实验者、不同实验仪器测得补骨脂素和异补骨脂素总含量RSD为0％，三者总含量的RSD≤2％，中间精密度良好。
表23中间精密度考察试验
Figure BDA0002465492650000201
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (12)

1.一种金丹丸的质量检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
对照品溶液制备：精密称取补骨脂素对照品和异补骨脂素对照品，加溶剂溶解，得所述对照品溶液；
供试品溶液制备：取待测金丹丸样品，研碎后精密称定，然后加入一元醇进行提取，提取液滤过，取续滤液，得所述供试品溶液；
检测：利用高效液相色谱法对所述对照品溶液与供试品溶液进行测定；所述高效液相色谱法采用等梯度洗脱，流动相为甲醇和水。
2.根据权利要求1所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述流动相为体积比为30～34：66～70的甲醇和水。
3.根据权利要求2所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述流动相为体积比为32：68的甲醇和水。
4.根据权利要求1所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用的条件还包括：色谱柱以十八烷基键合硅胶为填充剂，柱温25～40℃，流动相的流速为0.8～1.2mL/min，检测波长为245～247nm。
5.根据权利要求4所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述检测波长为246nm，柱温30℃，流动相的流速为1mL/min。
6.根据权利要求1所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱法的理论塔板数按补骨脂素峰计算应不低于3000。
7.根据权利要求1～6任一项所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述对照品溶液制备中，所述溶剂为甲醇。
8.根据权利要求1～6任一项所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，每1mL所述对照品溶液含补骨脂素0.01～0.03mg、异补骨脂素0.01～0.03mg。
9.根据权利要求1～6任一项所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备中，所述一元醇为甲醇或乙醇，所述提取的方法为加热回流提取或索氏回流提取。
10.根据权利要求9所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备中，所述一元醇为甲醇，所述提取的方法为加热回流提取，提取时间为0.5～4h。
11.根据权利要求1～6任一项所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述供试品溶液制备中，所述一元醇的用量为每1.5g待测金丹丸样品加入20～30mL。
12.根据权利要求1～6任一项所述的金丹丸的质量检测方法，其特征在于，所述检测步骤中，根据所述测定的结果计算所述待测金丹丸样品中补骨脂素和异补骨脂素的含量，所述计算的方法为外标法。
CN202010332607.5A 2020-04-24 2020-04-24 金丹丸的质量检测方法 Pending CN111650293A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010332607.5A CN111650293A (zh) 2020-04-24 2020-04-24 金丹丸的质量检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010332607.5A CN111650293A (zh) 2020-04-24 2020-04-24 金丹丸的质量检测方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN111650293A true CN111650293A (zh) 2020-09-11

Family

ID=72346540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010332607.5A Pending CN111650293A (zh) 2020-04-24 2020-04-24 金丹丸的质量检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111650293A (zh)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040058982A1 (en) * 1999-02-17 2004-03-25 Bioavailability System, Llc Pharmaceutical compositions
CN110196295A (zh) * 2019-05-31 2019-09-03 贵州联盛药业有限公司 一种生精片中补骨脂素、异补骨脂素含量的测定方法

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20040058982A1 (en) * 1999-02-17 2004-03-25 Bioavailability System, Llc Pharmaceutical compositions
CN110196295A (zh) * 2019-05-31 2019-09-03 贵州联盛药业有限公司 一种生精片中补骨脂素、异补骨脂素含量的测定方法

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHWAN-FWU LIN等: "Analysis of Bakuchiol, Psoralen and Angelicin in Crude Drugs and Commercial Concentrated Products of Fructus Psoraleae", 《JOURNAL OF FOOD AND DRUG ANALYSIS》 *
俞忠明等: "HPLC法测定祛癜复色软膏中的补骨脂素和异补骨脂素的含量", 《中华中医药学刊》 *
忻志鸣: "HPLC法测定丹芪和血片中补骨脂素和异补骨脂素的含量", 《安徽医药》 *
邓亚利等: "HPLC测定血宝片中补骨脂素和异补骨脂素的含量", 《中成药》 *
郭强等: "HPLC法同时测定强肾片中补骨脂素与异补骨脂素的含量", 《中医研究》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106124639A (zh) 杜仲药材的多成分含量测定方法
CN111487344B (zh) 益母草颗粒指纹图谱的检测方法
CN112730674B (zh) 一种罗汉茶的质量检测方法
CN108845062B (zh) 测定复方虎杖氨敏片组分含量的高效液相色谱法
CN111624295B (zh) 一种首荟通便胶囊质量检测方法
CN110031564B (zh) 基于hplc指纹图谱的天然植物抗球虫饲料添加剂的质量检测方法
CN103926350A (zh) 康复新液制剂指纹图谱的检查方法及标准指纹图谱
CN106053696B (zh) 一种鉴别药材溪黄草的植物来源的方法
CN111650293A (zh) 金丹丸的质量检测方法
CN111351883B (zh) 一种槐芩软膏中芦丁的含量测定方法
CN114646690B (zh) 一种枳实薤白桂枝汤中化学成分的检测方法及指纹图谱的建立方法
CN112051352B (zh) 一种腹可安片质量控制的新方法
CN113759010B (zh) 一种月季花特征图谱的构建方法
CN111983120B (zh) 化风丹药母特征图谱建立及7种核苷类成分含量测定方法
CN104034823B (zh) 一种蟾酥药材中吲哚类生物碱成分的检测方法
CN113341007A (zh) 一种基于hplc特征图谱的枣仁安神胶囊全药味多成分含量测定方法
CN115420827B (zh) 一种全面控制叶下珠质量的检测方法
CN113917001B (zh) 清肺排毒颗粒中黄芩有效成分的检测方法
CN113960234B (zh) 一种白前及白前配方颗粒的质量控制方法
CN115015418B (zh) 一种矮地茶汤剂质量检测方法
CN105510451B (zh) 一种中药组方的质量检测方法
CN115144507B (zh) 桑仁清肺口服液中活性成分的同时测定方法
CN109001307B (zh) 三金制剂的hplc特征图谱及其构建方法
CN113899844B (zh) 一测多评法评价白术质量的方法
CN110068640B (zh) 基于hplc指纹图谱的蒙药紫檀香心药材质量检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200911