CN111635872A - 一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，包括以下步骤：将干粉乳酸菌菌种放置到培养基上，然后将培养基送入培养箱中一次培养，得到乳酸菌菌落；挑选培养后的乳酸菌菌落，然后将乳酸菌菌落送入到培养箱中二次培养。本发明所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，能够对乳酸菌进行人体胃液模拟，使得乳酸菌菌株适应人体胃液环境，从而使得制备的乳酸菌在人体中存活的时间更长，更加有利于人体吸收，发酵时的乳酸菌均为符合乳酸菌标准形态的菌株，而且在发酵前进行发酵培养，使得乳酸菌在培养和发酵过程中存在平缓的过度，能够提高乳酸菌的存活率，提高乳酸菌的产量，带来更好的使用前景。
Description
技术领域
本发明涉及益生菌制备领域，特别涉及一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺。
背景技术
随着社会的快速发展，人们的生活水平不断的提高，人们对于自身健康越来越重视，为了改善人们的体质，人们发现了一些用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌，其中就有乳酸菌，为了满足人们对于乳酸菌的需求，人们发明了乳酸菌制备工艺；
现有的乳酸菌制备工艺存在一定的弊端，现有的乳酸菌制备工艺通常直接采用干粉乳酸菌菌种添加糖和水进行发酵，其制备出的乳酸菌含量较低，而且其制备的乳酸菌的活性不高，容易失活，不能够满足人们的要求，为此，我们提出一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，可以有效解决背景技术中的问题。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：
(1)、将干粉乳酸菌菌种放置到培养基上，然后将培养基送入培养箱中一次培养，得到乳酸菌菌落；
(2)、挑选培养后的乳酸菌菌落，然后将乳酸菌菌落送入到培养箱中二次培养，得到乳酸菌菌株；
(3)、将乳酸菌菌株接种到人工模拟胃液环境中进行筛选，得到优势菌株；
(4)、将优势菌株加入到培养箱中进行发酵培养，然后将培养后的菌液送入发酵箱中进行发酵，得到乳酸菌；
(5)、将乳酸菌送入到冷冻箱中进行冷冻，然后将冷冻后的优势菌株放置于超低温冰箱中保存。
优选的，步骤(1)中一次培养的培养基采用MRS固体琼脂培养基，培养温度为30-40℃，培养的时间为40-50h。
优选的，步骤(2)中采用革兰氏染色法筛选出符合乳酸菌标准形态的菌落。
优选的，步骤(2)中二次培养时培养箱的培养温度为32-40℃，培养的时间为16-20h。
优选的，步骤(3)中筛选的步骤为：
①、将人工胃液添加到培养箱中，然后调整培养箱温度，将人工胃液温度调整到36-38℃；
②、将乳酸菌菌株接种到升温后的人工胃液中，并且采用搅拌器进行搅拌，再进行静置；
③、静置后采用革兰氏染色法在人工胃液中筛选出符合乳酸菌标准形态的菌株。
优选的，步骤②中搅拌器的搅拌速度为20-30r/min，搅拌3-4次，每次搅拌间隔15-20min，搅拌后静置6-8h。
优选的，步骤(4)中发酵培养的温度培养温度为35-39℃，培养的时间为16-24h，培养时培养液的PH为6-7，发酵前采用搅拌器进行搅拌，搅拌速度为35-40r/min，搅拌3-4次，每次搅拌间隔40-50min，发酵的温度为30-35℃，发酵时间为5-7d。
优选的，步骤(5)中冷冻时先将乳酸菌菌液和灭菌甘油放置到冻存管中，乳酸菌菌液和灭菌甘油的比例为1:1，然后将冻存管放置到3-4℃的冰箱中进行降温处理，降温1-1.5h，再将降温后的冻存管放置到-15℃的冰箱中冷冻5-6小时，最后置于-80℃的冰箱中冷冻保存。
与现有技术相比，本发明一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，具有如下有益效果：
1、本方法在培养过程中对乳酸菌进行多次筛选，使得发酵时的乳酸菌均为符合乳酸菌标准形态的菌株，而且进一步对乳酸菌进行人体胃液模拟，使得乳酸菌菌株适应人体胃液环境，从而使得制备的乳酸菌在人体中存活的时间更长，更加有利于人体吸收；
2、本方法在培养过程中对乳酸菌进行多次筛选，使得发酵时的乳酸菌均为符合乳酸菌标准形态的菌株，而且在发酵前进行发酵培养，使得乳酸菌在培养和发酵过程中存在平缓的过度，能够提高乳酸菌的存活率，提高乳酸菌的产量，而且整个用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺简单，操作方便，使用效果相对于传统方式更好。
附图说明
图1为本发明一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺的整体流程图。
具体实施方式
为使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施方式，进一步阐述本发明。
实施例1
一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，包括以下步骤：
(1)、将干粉乳酸菌菌种放置到培养基上，然后将培养基送入培养箱中一次培养，得到乳酸菌菌落；
一次培养的培养基采用MRS固体琼脂培养基，培养温度为36℃，培养的时间为42h。
(2)、挑选培养后的乳酸菌菌落，然后将乳酸菌菌落送入到培养箱中二次培养，得到乳酸菌菌株，采用革兰氏染色法筛选出符合乳酸菌标准形态的菌落；
二次培养时培养箱的培养温度为35℃，培养的时间为17h；
(3)、将乳酸菌菌株接种到人工模拟胃液环境中进行筛选，得到优势菌株；
筛选的步骤为：
①、将人工胃液添加到培养箱中，然后调整培养箱温度，将人工胃液温度调整到37℃；
②、将乳酸菌菌株接种到升温后的人工胃液中，并且采用搅拌器进行搅拌，再进行静置；
搅拌器的搅拌速度为15r/min，搅拌3次，每次搅拌间隔17min，搅拌后静置6h；
③、静置后采用革兰氏染色法在人工胃液中筛选出符合乳酸菌标准形态的菌株。
(4)、将优势菌株加入到培养箱中进行发酵培养，然后将培养后的菌液送入发酵箱中进行发酵，得到乳酸菌；
发酵培养的温度培养温度为37℃，培养的时间为20h，培养时培养液的PH为6，发酵前采用搅拌器进行搅拌，搅拌速度为36r/min，搅拌3次，每次搅拌间隔42min，发酵的温度为33℃，发酵时间为6d。
(5)、将乳酸菌送入到冷冻箱中进行冷冻，然后将冷冻后的优势菌株放置于超低温冰箱中保存；
冷冻时先将乳酸菌菌液和灭菌甘油放置到冻存管中，乳酸菌菌液和灭菌甘油的比例为1:1，然后将冻存管放置到4℃的冰箱中进行降温处理，降温1.2h，再将降温后的冻存管放置到-15℃的冰箱中冷冻6小时，最后置于-80℃的冰箱中冷冻保存。
实施例2
一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，包括以下步骤：
(4)、将干粉乳酸菌菌种放置到培养基上，然后将培养基送入培养箱中一次培养，得到乳酸菌菌落；
一次培养的培养基采用MRS固体琼脂培养基，培养温度为36℃，培养的时间为42h。
(5)、挑选培养后的乳酸菌菌落，然后将乳酸菌菌落送入到培养箱中二次培养，得到乳酸菌菌株，采用革兰氏染色法筛选出符合乳酸菌标准形态的菌落；
二次培养时培养箱的培养温度为35℃，培养的时间为17h；
(6)、将乳酸菌菌株接种到人工模拟胃液环境中进行筛选，得到优势菌株；
筛选的步骤为：
①、将人工胃液添加到培养箱中，然后调整培养箱温度，将人工胃液温度调整到37℃；
②、将乳酸菌菌株接种到升温后的人工胃液中，并且采用搅拌器进行搅拌，再进行静置；
搅拌器的搅拌速度为15r/min，搅拌3次，每次搅拌间隔17min，搅拌后静置6h；
③、静置后采用革兰氏染色法在人工胃液中筛选出符合乳酸菌标准形态的菌株。
(4)、将优势菌株加入到培养箱中进行发酵培养，然后将培养后的菌液送入发酵箱中进行发酵，得到乳酸菌；
发酵培养的温度培养温度为37℃，培养的时间为20h，培养时培养液的PH为6.5，发酵前采用搅拌器进行搅拌，搅拌速度为36r/min，搅拌3次，每次搅拌间隔42min，发酵的温度为33℃，发酵时间为6d。
(5)、将乳酸菌送入到冷冻箱中进行冷冻，然后将冷冻后的优势菌株放置于超低温冰箱中保存；
冷冻时先将乳酸菌菌液和灭菌甘油放置到冻存管中，乳酸菌菌液和灭菌甘油的比例为1:1，然后将冻存管放置到4℃的冰箱中进行降温处理，降温1.2h，再将降温后的冻存管放置到-15℃的冰箱中冷冻6小时，最后置于-80℃的冰箱中冷冻保存。
实施例3
一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，包括以下步骤：
(7)、将干粉乳酸菌菌种放置到培养基上，然后将培养基送入培养箱中一次培养，得到乳酸菌菌落；
一次培养的培养基采用MRS固体琼脂培养基，培养温度为36℃，培养的时间为42h。
(8)、挑选培养后的乳酸菌菌落，然后将乳酸菌菌落送入到培养箱中二次培养，得到乳酸菌菌株，采用革兰氏染色法筛选出符合乳酸菌标准形态的菌落；
二次培养时培养箱的培养温度为35℃，培养的时间为17h；
(9)、将乳酸菌菌株接种到人工模拟胃液环境中进行筛选，得到优势菌株；
筛选的步骤为：
①、将人工胃液添加到培养箱中，然后调整培养箱温度，将人工胃液温度调整到37℃；
②、将乳酸菌菌株接种到升温后的人工胃液中，并且采用搅拌器进行搅拌，再进行静置；
搅拌器的搅拌速度为15r/min，搅拌3次，每次搅拌间隔17min，搅拌后静置6h；
③、静置后采用革兰氏染色法在人工胃液中筛选出符合乳酸菌标准形态的菌株。
(4)、将优势菌株加入到培养箱中进行发酵培养，然后将培养后的菌液送入发酵箱中进行发酵，得到乳酸菌；
发酵培养的温度培养温度为37℃，培养的时间为20h，培养时培养液的PH为7，发酵前采用搅拌器进行搅拌，搅拌速度为36r/min，搅拌3次，每次搅拌间隔42min，发酵的温度为33℃，发酵时间为6d。
(5)、将乳酸菌送入到冷冻箱中进行冷冻，然后将冷冻后的优势菌株放置于超低温冰箱中保存；
冷冻时先将乳酸菌菌液和灭菌甘油放置到冻存管中，乳酸菌菌液和灭菌甘油的比例为1:1，然后将冻存管放置到4℃的冰箱中进行降温处理，降温1.2h，再将降温后的冻存管放置到-15℃的冰箱中冷冻6小时，最后置于-80℃的冰箱中冷冻保存。
按照上述实施例1-3的方法生产乳酸菌，并且选取相同重量的菌液，并且将其置于相同环境下，24小时后测量菌液中的活菌数，测试结果如下表：
| 发酵培养培养液PH | 活菌数(×10<sup>7</sup>CFU/ml) | |
| 实施例1 | 6 | 24 |
| 实施例2 | 6.5 | 28 |
| 实施例3 | 7 | 16 |
| 现有 | - | 14 |
由上表实验数据可知，本发明用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，使得发酵时的乳酸菌均为符合乳酸菌标准形态的菌株，而且进一步对乳酸菌进行人体胃液模拟，使得乳酸菌菌株适应人体胃液环境，从而使得制备的乳酸菌在人体中存活的时间更长，更加有利于人体吸收，本方法在培养过程中对乳酸菌进行多次筛选，使得发酵时的乳酸菌均为符合乳酸菌标准形态的菌株，而且在发酵前进行发酵培养，使得乳酸菌在培养和发酵过程中存在平缓的过度，能够提高乳酸菌的存活率，提高乳酸菌的产量，另由上表可知实施例2为最优的选择。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (8)
1.一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：包括以下步骤：
(1)、将干粉乳酸菌菌种放置到培养基上，然后将培养基送入培养箱中一次培养，得到乳酸菌菌落；
(2)、挑选培养后的乳酸菌菌落，然后将乳酸菌菌落送入到培养箱中二次培养，得到乳酸菌菌株；
(3)、将乳酸菌菌株接种到人工模拟胃液环境中进行筛选，得到优势菌株；
(4)、将优势菌株加入到培养箱中进行发酵培养，然后将培养后的菌液送入发酵箱中进行发酵，得到乳酸菌；
(5)、将乳酸菌送入到冷冻箱中进行冷冻，然后将冷冻后的优势菌株放置于超低温冰箱中保存。
2.根据权利要求1所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤(1)中一次培养的培养基采用MRS固体琼脂培养基，培养温度为30-40℃，培养的时间为40-50h。
3.根据权利要求1所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤(2)中采用革兰氏染色法筛选出符合乳酸菌标准形态的菌落。
4.根据权利要求3所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤(2)中二次培养时培养箱的培养温度为32-40℃，培养的时间为16-20h。
5.根据权利要求3所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤(3)中筛选的步骤为：
①、将人工胃液添加到培养箱中，然后调整培养箱温度，将人工胃液温度调整到36-38℃；
②、将乳酸菌菌株接种到升温后的人工胃液中，并且采用搅拌器进行搅拌，再进行静置；
③、静置后采用革兰氏染色法在人工胃液中筛选出符合乳酸菌标准形态的菌株。
6.根据权利要求5所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤②中搅拌器的搅拌速度为20-30r/min，搅拌3-4次，每次搅拌间隔15-20min，搅拌后静置6-8h。
7.根据权利要求1所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤(4)中发酵培养的温度培养温度为35-39℃，培养的时间为16-24h，培养时培养液的PH为6-7，发酵前采用搅拌器进行搅拌，搅拌速度为35-40r/min，搅拌3-4次，每次搅拌间隔40-50min，发酵的温度为30-35℃，发酵时间为5-7d。
8.根据权利要求1所述的一种用于改善阴虚体质的调理肠道的益生菌制备工艺，其特征在于：步骤(5)中冷冻时先将乳酸菌菌液和灭菌甘油放置到冻存管中，乳酸菌菌液和灭菌甘油的比例为1:1，然后将冻存管放置到3-4℃的冰箱中进行降温处理，降温1-1.5h，再将降温后的冻存管放置到-15℃的冰箱中冷冻5-6小时，最后置于-80℃的冰箱中冷冻保存。
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