CN111632127B - 短链胜肽组合物及其于皮肤保护的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明关于一种短链胜肽组合物及其于保护皮肤的应用。本发明的短链胜肽组合物具有促进皮肤增生、伤口修复愈合及滋润保湿、增加皮肤弹性的功效。
Description
技术领域
本发明关于一种具有皮肤保护功效的短链胜肽组合物。更特别地是,本发明关于一种包含一或多种其结构是具有5~10个选自丝氨酸(Serine)与赖氨酸(Lysine)和其他氨基酸的组合的氨基酸的寡肽的短链胜肽组合物,具有促进皮肤增生、伤口修复愈合及滋润保湿、增加皮肤弹性的功效。
背景技术
皮肤是人体抵挡外来环境侵害的天然屏障,对外来的刺激有一定的防护作用,这得益于皮肤致密角质层的保护作用。但因此也把化妆品的营养成分挡在了皮肤表面,营养物质需要渗透过角质层细胞膜才能进入真皮内,大分子及脂溶性物质只有少量可以通过毛孔、汗孔被吸收。所以我们平常所使用的化妆品,大部分只是停留在皮肤表面,而具有生物活性的美容胜肽,却可以比较容易地穿过角质层间隙进入到真皮内,从而发挥作用。
胜肽最初是被一些欧美药妆厂商直接使用在保养产品中,其作用机制类似于蛋白质,能促进胶原蛋白、弹力纤维和透明质酸增生,提高肌肤的含水量,增加皮肤厚度以及减少细纹。由于含有的氨基酸的种类不同,因而可以发挥不同的作用,满足肌肤不同功能的需求。目前市面上常见用于化妆品或保养品的胜肽种类有三胜肽、五胜肽、六胜肽等。其中,五胜肽:促进胶原蛋白,弹力纤维和透明质酸增生,提高肌肤的含水量,增加皮肤厚度;六胜肽:具有类肉毒杆菌功能,可以放松脸部肌肉,抚平因肌肉紧张而形成的动态纹、静态纹和细纹;九胜肽:可阻断促黑激素,有美白效果。
皮肤是一个不断自我更新的器官,可动态管理人体内外的外部关系,积极参与主体防御。角质形成细胞代表95%的表皮细胞。它们主要发挥表皮的结构和屏障功能,但它们在皮肤炎症和免疫反应的起始和延续以及伤口修复方面的作用也被广泛认可。在稳态条件下,角质形成细胞从增殖的有核基底细胞分化并成熟为高度分化的无核角膜细胞。
伤口愈合或创伤愈合是创伤后人体皮肤和表皮组织再生的自然过程。正常来说,皮肤的表皮和真皮存在于一个平衡的状态,以形成一个保护伤口的屏障。而当焦痂破裂,正常的伤口愈合过程便会迅速地开始。其基本过程包括:止血期、炎症期、增生期、成熟及重塑期。
虽然目前已有将胜肽添加于化妆品,但在促进受伤皮肤修复、伤口愈合及保护皮肤干燥伤害方面较少有相关的报导。
发明内容
为了解决上述问题,本发明的目的即在于提供一种具有促进皮肤增生、伤口修复愈合及滋润保湿、增加皮肤弹性等皮肤保护功效的短链胜肽组合物,经由试验证明,可促进上皮细胞的迁移,有效修复烫伤伤口及增加皮肤保湿度与弹性。
为了实现上述,本发明提供一种具有皮肤保护功效的短链胜肽组合物,包含一或多种具有5~10个选自丝氨酸 与赖氨酸和其他氨基酸的组合的氨基酸的短链胜肽,其中丝氨酸和赖氨酸必须同时存在该短链胜肽中。较佳地,所述的,所述的短链胜肽具有分子量为550 ~1100 Da。
在本发明的一些具体实施例,所述的皮肤保护功效包括增进皮肤上皮细胞增生、促进伤口修复愈合、加强皮肤滋润度、及增加皮肤弹性。
在本发明的另一方面,关于一种由具有5~10个选自丝氨酸与赖氨酸和其他氨基酸的组合的氨基酸的短链胜肽用于制备皮肤修复组成物的用途。较佳地,所述的短链胜肽具有分子量为550 ~1100 Da。
在本发明的一些具体实施例,所述的皮肤修复为促进伤口的修复愈合。在本发明的一些具体实施例,所述的伤口指创伤伤口。在本发明的其他具体实施例,所述的伤口指烫伤伤口。
本发明的有益效果在于:
本发明提供一种具有促进皮肤增生、伤口修复愈合及滋润保湿、增加皮肤弹性等皮肤保护功效的短链胜肽组合物,经由试验证明,可促进上皮细胞的迁移,有效修复烫伤伤口及增加皮肤保湿度与弹性。
附图说明
图1为HaCaT细胞的单层膜进行创面划伤,在药物处理前(预处理)及以无药物(对照组)与不同浓度的短链胜肽(AE50、AE100、AE250、AE500、AE1000)进行处理18小时后,用显微镜影像拍照所得的图像。
图2显示在切除皮肤实验中的伤口最周边所围面积的测量结果。显示经过AE250凝胶涂抹可加速创伤伤口的修复。
图3A和图3B显示切除皮肤实验的伤口外观状态。图3A. 为切除皮肤实验第一天的外观观察结果;图2B. 为切除皮肤实验第三天的外观观察结果,显示AE250处理组的伤口中心有明显较早结痂与修复的现象。
图4显示在皮肤烫伤实验中的伤口最周边所围面积的测量结果。显示经过AE250凝胶涂抹可加速烫伤伤口的修复。
图5显示皮肤烫伤实验第8天的伤口状态。左图为无药物处理的对照组皮肤,其中白黄白黄是显示正在结痂;右图为AE250处理组的皮肤,显示右侧伤口已接近完全愈合。
具体实施方式
胜肽是两个以上的氨基酸通过脱水缩合而成的聚合物,由第一个氨基酸分子的羧基与第二个氨基酸分子的胺基缩合,而形成具有两个氨基酸的短链就称为二胜肽;由三个氨基酸缩合而成的肽链称为三胜肽,依此类推。通常,具有小于10个氨基酸的胜肽链称为寡肽。
在本发明使用的短链胜肽组合物是一种由一或多种具有5~10个选自丝氨酸与赖氨酸和其他氨基酸的组合的氨基酸的短链胜肽与必要载剂或赋形剂组成的组合物,各短链胜肽的分子量为550 ~1100 Da。构成本发明短链胜肽结构的氨基酸必定包括丝氨酸与赖氨酸。丝氨酸是一种具有羟基(hydroxyl group)的极性、不带电氨基酸氨基酸,是生合成反应中最主要捐出一个碳的化合物,可促进脂肪和脂肪酸的新陈代谢,促进肌肉生长,协助体内制造抗体有助于维持,帮助神经纤维形成髓鞘;赖氨酸是一种人体必需的氨基酸,胶原蛋白中含有的羟基赖氨酸是由赖氨酸经羟基化而来,常被用于需要蛋白质修复的患者及需要额外增加肌肉量的运动员。
用于本发明的实施例,将具有五肽序列(Ala-Asn-Ser-Ile-Lys,SEQ ID No. 1)的短链胜肽溶于生理食盐水,制得不同浓度的短链胜肽溶液(50、100、250、500、1000 mg/ml,以下简称AE50、AE100、AE250、AE500、AE1000等),再用过滤膜无菌处理后备用。
本发明的其他特色及优点将在下列实施范例中被进一步举例与说明,而该实施范例仅作为辅助说明,并非用于限制本发明的范围。
实施例一、短链胜肽组合物促进表皮细胞的迁移及皮肤修复
本实例使用人工伤刮法,并藉由所获得定量和定性的资料,分析本发明的短链胜肽组合物对上皮细胞的迁移性能-修护。细胞划痕实验(Wound Healing)是一种用于研究细胞迁移/肿瘤侵袭的操作简单的体外试验方法,其在细胞生长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为制造一个空白区域,称为“划痕”。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域,而使“划痕”愈合。通过机械手段破坏表皮细胞的完整性产生了一个现实的模型,且显微技术是最理想用于研究上皮细胞迁移的。
本实例使用的人永生化表皮细胞(HaCaT)是一种非肿瘤性单克隆细胞系,源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤,为角蛋白、角化细胞交联外膜蛋白、中间丝相关蛋白阳性,能适应长期生长而无需补料层或补充生长因子。
将含有1mL 细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL DMEM培养基(85% DMEM,GIBCO;15%北美胎牛血清 ,United States,GIBCO)混合均匀。 在1000RPM 条件下离心4 分钟,弃去上清液,补加1-2mL 培养基后吹匀。 然后将所有细胞悬液加入培养瓶中,在空气,95%;二氧化碳,5%;温度,37℃;培养箱湿度为70%-80%的培养条件下培养过夜(或将细胞悬液加入10 cm培养皿中,加入约8 ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS缓冲液润洗细胞1-2次。加2 ml分解液(0.25% Trypsin-0.53 mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中进行分解1-2分钟,然后在显微镜下观察细胞的分解情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 按6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在1000 RPM 条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2 mL培养液。将细胞悬液按1:2的比例分到新的含8 ml培养基的新培养皿中。
将HaCaT细胞的单层膜进行创面划伤,并获得一预处理图像。取100μl本发明的短链胜肽溶液加入细胞培养物中进行处理18小时。之后,用显微镜影像拍照,并分析于处理前及细胞与短链胜肽组合物培育后的两组图像,确定中心间隙区,计算空白区域减少量。实验重复运行三次。将细胞以不同浓度的短链胜肽组合物处理后的迁移修护量积分作表,所得如表1所示,数值以3重复实验次平均所得。标准差亦同列于表1中。
表1. HaCaT细胞以不同浓度的短链胜肽组合物处理后的迁移修护量积分
如图1及表1所示,本发明的短链胜肽不论在低浓度或高浓度,都有明显修护的效果。对照组空白区域是15.1±2.5 cm2,经过了18小时迁移修护测试后空白区域是12.7±2.5 cm2。空白区域明显降低了16%。AE50处理后,空白区域是9.1±1.7 cm2,空白区域明显降低了40%,表示迁移修护有增加了40%,明显修护的效果。AE100处理后,空白区域是4.8±1.6,空白区域明显降低了70%,表示迁移修护有增加了70%,已产生明显修护的效果。AE250处理后,空白区域是3.4± 1.1,空白区域明显降低了77%,表示迁移修护有增加了77%,具有明显修护的效果。AE500处理后,空白区域是0.7± 0.3,空白区域明显降低了95%,表示迁移修护有增加了95%,其表皮修护的效果最为显著。
综合上述结果,本发明的短链胜肽组合物具有诱导表皮细胞迁移及促进皮肤修复的功效,且以剂量依赖型式呈现。
实施例二、短链胜肽组合物促进伤口修复及愈合
切除皮肤实验
SD鼠皮肤除毛后,予以台币5圆的实际圆形,以手术刀切除掉真皮层以上的皮肤,造成皮肤损伤(全损),实验SD鼠皮肤先施以优碘消毒;再施以AE250凝胶涂抹擦拭。第一天予以AE250凝胶涂抹擦拭1次。第二天予以AE250凝胶(4次/天),AE250凝胶涂抹擦拭7天。测量伤口最周边所围的面积。是用玻璃纸实际量测伤口结痂的面积,再用厚纸板画出玻璃纸面积,最后秤重厚纸板,当作伤口的面积。
结果如图2所示,切除皮肤实验中以AE250凝胶涂抹擦拭后,与无药物处理的损伤组比较,AE250确实能明显逐渐地改善SD鼠皮肤,AE250处理组,从开始即展现相当良好伤口周边修复能力,由16%的改善修复面积一直进步到47%的改善修复面积。证实AE250具有改善的伤口修复功能。另以外观观察结果证明,AE250处理组在伤口中心有明显较早结痂与修复的现象(图3)。
烫伤实验
将SD鼠皮肤除毛后,以95℃装水玻璃瓶 (25 ml 装15 ml自来水) 均匀按压3分钟,造成皮肤损伤(未全损),其引起SD鼠皮肤第二天起红症,SD鼠皮肤第三天起水泡,SD鼠皮肤第四天呈现第三级烫伤,此实验处理方法能造成皮肤损伤,并且在第4天逐渐达到最大损伤面积。处理组在实验第一天予以AE250凝胶涂抹擦拭1次。第二天开始予以AE250凝胶(4次/天),持续涂抹擦拭14天。以玻璃纸测量伤口最周边所围的面积,接着用玻璃纸实际测量伤口的面积,再用厚纸板画出玻璃纸面积,最后秤重厚纸板,当作伤口的面积。计算时用AE250凝胶涂抹擦拭伤口为100%比较。
结果如图4所示,AE250处理组,在急性期即展现相当良好的防护效果。确实能改善36~84 % 的烫伤面积。证实AE250具有烫伤伤口改善修复功能。以外观观察结果亦证明,AE250处理组在伤口中心有明显较早结痂与修复的现象(图5)。
实施例三、短链胜肽组合物增加皮肤滋润保湿及弹性
本实例测试本发明的短链胜肽对于滋润保湿及增加皮肤弹性的效果。在本实例,使用购自禾丰春实业有限公司的SG-S TSII皮肤检测仪(数位显微影像分析系统,ARAM,新北市,中国台湾),透过探头的方式,针对需检测的项目来进行检测,所得的数据经由量化后,即可知道自己的肤质状况。
皮肤角质层水分含量越多越容易导电,介电常数也会越高,所以介电常数越高表示保水程度越好。其度量所用的单位以a.u. (arbitrary units)表达,而测量范围从0到120 a.u.,这些值相对于上表皮的含水量,其中数值落于30-40 a.u.为干性皮肤,120 a.u.以上为高含水量皮肤。皮肤弹性测定利用负压吸引原理,检测皮肤弹力的表现,并透过光穿透皮肤深度不同以及皮肤被负压吸入所造成的阻力,测量其回复力。
将本发明的短链胜肽组成物制成凝胶(乳霜),涂于受测者的左脸,右脸不擦拭作为对照组比较。15分钟后,使用清水液清洗,轻轻用拭镜纸沾脸,等5分钟后进行测试。利用SG-S TSII皮肤多功能检测仪,透过探头的方式,针对滋润保湿与皮肤弹性的项目来进行检测,所得的数据经由量化后,即可知道受测者的肤质状况。结果如表2,其中对照组是指擦拭不含有短链胜肽组成物的凝胶(乳霜)。
表2. 短链胜肽组合物对于滋润保湿与皮肤弹性的增进效果
由上列的结果显示,本发明的短链胜肽组合物应用于滋润保湿与皮肤弹性的效果,以样本AE250组最为明确:滋润保湿增加22%,皮肤弹性增加8%。在AE100组,皮肤弹性增加8%。AE500组的滋润保湿度增加12%。AE1000组的皮肤弹性增加11%。另外,AM03滋润保湿度增加7%。而AE50组没有明确的滋润保湿与皮肤弹性增加的效果。
SEQUENCE LISTING
<110> 三凡生技研发股份有限公司
<120> 短链胜肽组合物及其于皮肤保护的用途
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Ala Asn Ser Ile Lys
1 5
Claims (6)
1. 一种具有皮肤保护功效的短链胜肽组合物,其特征在于,包含一或多种由5个氨基酸组成的短链胜肽,其中该氨基酸选自丝氨酸和赖氨酸和其他氨基酸的组合,条件为丝氨酸和赖氨酸同时存在该短链胜肽中;该短链胜肽分子量为550~1100 Da;
该短链胜肽为五肽,具有结构 Ala-Asn-Ser-Ile-Lys。
2.如权利要求1所述的组合物,其特征在于,该皮肤保护功效包含增进皮肤上皮细胞增生、促进伤口修复愈合、加强皮肤滋润度或增加皮肤弹性。
3.一种由5个氨基酸组成的短链胜肽作为制备皮肤修复组成物的用途,其特征在于,该氨基酸选自丝氨酸和赖氨酸和其他氨基酸的组合,条件为丝氨酸和赖氨酸同时存在该短链胜肽中;
该短链胜肽具有分子量为550~1100 Da;
该短链胜肽为五肽,具有结构 Ala-Asn-Ser-Ile-Lys。
4.如权利要求3所述的用途,其特征在于,该皮肤修复为促进伤口的修复愈合。
5.如权利要求4所述的用途,其特征在于,该伤口指创伤伤口。
6.如权利要求4所述的用途,其特征在于,该伤口指烫伤伤口。
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