CN111632084B - 一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物及其应用,所述复合益生菌组合物包含罗伊氏乳杆菌活菌数1‑2×1010CFU/g、约氏乳杆菌活菌数3‑4×1010CFU/g,其他组分按重量份计为:低聚果糖80‑160份、抗性糊精400‑600份、低聚半乳糖200‑400份、甘草提取物8‑12份、草莓提取物4‑6份、麦芽糊精余量、组合物总量为2000份。本发明复合益生菌组合物所包含的益生菌抑制幽门螺旋杆菌能力强,各添加的组分有助于益生菌的定植和提高其活力,能显著改善胃部环境,因此能有效根除幽门螺旋杆菌,在治疗幽门螺旋杆菌所致疾病方面具有较大的应用潜力。
Description
技术领域
本发明涉及生物医药领域,尤其涉及一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物及其应用。
背景技术
幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)与慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌和胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤等疾病密切相关,在世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单中,Hp被列为Ⅰ类致癌原。对于Hp的一线治疗方案,从三联疗法发展到今天的四联疗法,然而都不可避免的需要使用抗生素,易导致胃肠道正常菌群失调,患者出现恶心、腹泻、腹痛等不良反应,抗生素的使用也诱导了耐药菌的产生。
相比于抗生素,益生菌在Hp治疗中的优势明显。现有研究表明,益生菌具有加强胃黏膜生物屏障、释放细胞毒素及产生短链脂肪酸来抵御Hp感染、竞争抑制Hp定植、平衡多种细胞因子水平等功能。
专利文献CN104000185A公开了一种抗幽门螺旋杆菌的益生菌组合物,所述益生菌组合物包含如下重量份的组分:2~4份低聚果糖、2~4份水苏糖、2~4份橘子果汁粉、2~4份葡萄糖、3~10份山药粉、10~20份麦芽糊精、50~60乳杆菌干粉。
专利文献CN111166776A公开了一种根除幽门螺杆菌引起的慢性胃炎的配方,该根除幽门螺杆菌引起的慢性胃炎的配方为:低聚异麦芽糖0.5份-2.0份;低聚半乳糖0.1份-2.0份;沙棘粉0.1份-5.0份;罗伊氏乳杆菌10亿份-300亿份;STP2复合菌10亿份-200亿份;山梨糖醇0.5份-1.5份。
期刊文献(周雪莲.(2014).益生菌制剂联合标准三联方案对幽门螺杆菌根除率及复发率的影响.临床合理用药杂志,007(010),55-56.)探讨了益生菌制剂联合标准三联方案治疗幽门螺杆菌感染的临床疗效。方法:将300例幽门螺杆菌(Hp)阳性的慢性胃炎患者随机分为A组、B组和C组各100例。A组给予标准三联方案即克拉霉素缓释片+奥美拉唑+阿莫西林,连服1周;B组给予相同的三联方案,连服2周;C组给予相同的三联方案加服双歧杆菌四联活菌片,服药1周。观察比较3组Hp根除率、复发率和不良反应发生情况。结果:C组的Hp根除率高于A组和B组(P<0.05),A组和B组Hp根除率差异无统计学意义(P>0.05);C组Hp复发率低于A组及B组(P<0.05),A组和B组Hp复发率差异无统计学意义(P>0.05),C组不良反应发生率较A、B两组低(P<0.05),B组味觉紊乱发生率高于A组(P<0.05)。结论:标准三联方案联合应用双歧杆菌四联活菌片口服,不仅提高Hp的根除率,降低其复发率,还明显减轻抗生素使用过程中出现的不良反应,提高了治疗的耐受性和依从性。
而关于本发明的复合益生菌制剂,目前尚未见报道。
发明内容
本发明基于大量的实验研究和分析,提供了一种新的抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,并通过动物实验验证了其对Hp的根除效果。
本发明首先提供了一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,包含罗伊氏乳杆菌活菌数1-2×1010CFU/g、约氏乳杆菌活菌数3-4×1010CFU/g,其他组分按重量份计为:
低聚果糖80-160份
抗性糊精400-600份
低聚半乳糖200-400份
甘草提取物8-12份
草莓提取物4-6份
麦芽糊精余量
组合物总量为2000份。
较佳地,所述罗伊氏乳杆菌活菌数为1.5×1010CFU/g、约氏乳杆菌活菌数为3.5×1010CFU/g。
较佳地,所述其他组分按重量份计为:
低聚果糖100份
抗性糊精400份
低聚半乳糖400份
甘草提取物10份
草莓提取物5份
麦芽糊精余量
组合物总量为2000份。
本发明还提供了一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌制剂,由以上任一所述的复合益生菌组合物制成。
较佳地,所述复合益生菌制剂的剂型为粉剂、片剂、胶囊剂或液体制剂。
本发明还提供了如上任一所述的复合益生菌组合物在制备治疗幽门螺旋杆菌所致疾病的药物中的用途。
较佳地,所述幽门螺旋杆菌所致疾病为慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌或胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤,但不仅限于此。
本发明的有益效果为:
1、本发明选择约氏乳杆菌和罗伊氏乳杆菌,与益生元包括低聚果糖、低聚半乳糖和抗性糊精,还有甘草提取物和草莓提取物组配得到复合益生菌组合物,其中,约氏乳杆菌和罗伊氏乳杆菌均有抗Hp感染的作用,并可抑制Hp胃部的定植,调整肠道菌群;甘草和草莓提取物的添加一方面调节消化系统环境抑制Hp的增殖,另一方面有助于改善胃部环境促进益生菌的定植和提升益生菌的活力,增强抗Hp能力;其中的益生元低聚果糖起到调节肠道菌群和免疫调节等作用,低聚半乳糖为益生菌提供良好的营养源和有效的增殖因子。各组分相互促进,表现出显著的抗Hp的作用。动物实验表明,其治疗4周,Hp根除率与三联法疗效相当。
2、本发明证明当配方同时存在约氏乳杆菌和草莓提取物时,对Hp的根除率有所显著提升,说明约氏乳杆菌和草莓提取物的使用具有一定的协同作用。
3、在研究过程中,本发明对所添加的益生元进行了筛选,表明对于约氏乳杆菌和罗伊氏乳杆菌来说,低聚果糖、低聚半乳糖和抗性糊精的组合相比于其他益生元能更好地促进其定植和提升抑制Hp的活力。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步的详细说明。
实施例1
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例2
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 160mg |
抗性糊精 | 400mg |
低聚半乳糖 | 300mg |
甘草提取物 | 12mg |
草莓提取物 | 4mg |
麦芽糊精 | 1067.34mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 16.66mg,其中活菌数为2×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 40mg,其中活菌数为8×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例3
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 80mg |
抗性糊精 | 500mg |
低聚半乳糖 | 300mg |
甘草提取物 | 8mg |
草莓提取物 | 6mg |
麦芽糊精 | 1037.67mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 33.33mg,其中活菌数为4×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 35mg,其中活菌数为7×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例4
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 120mg |
抗性糊精 | 600mg |
低聚半乳糖 | 200mg |
甘草提取物 | 10mg |
草莓提取物 | 5mg |
麦芽糊精 | 1010mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 25mg,其中活菌数为3×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 30mg,其中活菌数为6×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例5
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 100mg |
抗性糊精 | 400mg |
低聚半乳糖 | 300mg |
甘草提取物 | 8mg |
草莓提取物 | 5mg |
麦芽糊精 | 1123.67mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 33.33mg,其中活菌数为4×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 30mg,其中活菌数为6×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例6
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例7
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 150mg |
抗性糊精 | 525mg |
低聚半乳糖 | 400mg |
甘草提取物 | 10mg |
草莓提取物 | 5mg |
麦芽糊精 | 850mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 25mg,其中活菌数为3×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 35mg,其中活菌数为7×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例8
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 100mg |
抗性糊精 | 400mg |
低聚半乳糖 | 250mg |
甘草提取物 | 8mg |
草莓提取物 | 5mg |
麦芽糊精 | 1177mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 25mg,其中活菌数为3×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 35mg,其中活菌数为7×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例9
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 100mg |
抗性糊精 | 400mg |
低聚半乳糖 | 400mg |
甘草提取物 | 10mg |
草莓提取物 | 5mg |
麦芽糊精 | 1001.67mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 83.33mg,其中活菌数为10×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例10
本实施例提供一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,配方为:
组分 | 含量 |
低聚果糖 | 100mg |
抗性糊精 | 400mg |
低聚半乳糖 | 400mg |
甘草提取物 | 15mg |
麦芽糊精 | 1025mg |
罗伊氏乳杆菌粉 | 25mg,其中活菌数为3×1010CFU |
约氏乳杆菌粉 | 35mg,其中活菌数为7×1010CFU |
总重量 | 2g |
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤。合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
实施例11
通过动物模型评价本发明复合益生菌组合物对体内Hp的根除作用。
1实验方法
1.1实验动物
选取SPF级昆明种小鼠,体重18-22g,雌雄各半,共62只,于无菌环境适应性饲养7天。
1.2模型制备
选取52只小鼠给予环磷酰胺腹腔注射,剂量200mg/kg。第2天,制备浓度为1*109CFU/ml的Hp菌悬液(Sydney strain I,SSI),给予小鼠0.4Hp菌悬液灌胃,隔日1次,共5次。灌胃前禁食24h,灌胃后禁食水2h。于末次灌胃2周时,随机挑选2只小鼠,断颈处死。取部分胃窦部组织,加入RUT试剂,常温下静置,12小时内试剂转为红色即为阳性,反之则为阴性。取胃窦-胃体组织,用4%多聚甲醛固定,包埋,切片,进行HE染色,判断感染是否为阳性。RUT和HE染色结果均显示阳性表明造模成功。
1.3分组及给药
将造模后小鼠随机分为5个组别,包括模型组、复合益生菌一组、复合益生菌二组、复合益生菌三组和阳性对照组,每组10只。未造模小鼠作为空白对照。各组给药方式如下:
复合益生菌一组:给予实施例1的复合益生菌,用5ml 37℃以下无菌水溶解,灌胃,150mg·kg-1·d-1,连续给药4周。
复合益生菌二组:给予实施例9的复合益生菌,用5ml 37℃以下无菌水溶解,灌胃,150mg·kg-1·d-1,连续给药4周。
复合益生菌三组:给予实施例10的复合益生菌,用5ml 37℃以下无菌水溶解,灌胃,150mg·kg-1·d-1,连续给药4周。
阳性对照组:予兰索拉唑12.33·kg-1·d-1、甲硝唑164.40·kg-1·d-1、克拉霉素205.54·kg-1·d-1,连续给药1周,后续3周注射灭菌水0.4ml·d-1。
模型组:注射灭菌水0.4ml·d-1,连续4周。
空白对照组:不采取干预措施。
1.4 Hp根除率的判定
按照1.2所述的方法进行RUT和组织病理染色,结果均为阴性判定为彻底根除,统计Hp根除率。
1.5胃粘膜组织观察
取部分胃组织,用4%多聚甲醛固定,包埋,切片,进行HE染色,参照慢性胃炎新悉尼系统观察Hp感染情况和炎症情况。
1.5.1 Hp感染
观察胃黏膜黏液层、表面上皮、小凹上皮和腺管上皮表面,0:未见Hp;+:偶见或小于标本全长1/3有少数Hp;++:分布等于或超过标本全长1/3而未达2/3或连续性、薄而稀疏地存在于上皮表面;+++:Hp成堆存在,基本分布于标本全长。
1.5.2慢性炎症(单个核细胞浸润)
0:每高倍视野下单个核细胞(包括光镜下无法区分的淋巴细胞、浆细胞等)不超过5个;+:慢性炎性细胞较少并局限于黏膜浅层,不超过黏膜层的1/3;++:慢性炎性细胞较密集,不超过黏膜层的2/3;+++:慢性炎性细胞密集,占据黏膜全层。
2实验结果
2.1 Hp根除率
各组Hp根除率的统计结果见表1。从结果可以看出,模型组均感染Hp,各给药组对于Hp均具有一定的抑制作用,部分小鼠Hp消失,其中复合益生菌一组的Hp根除率达到应用三联法根除Hp的同等水平,表明本发明的复合益生菌组合物优势明显。
表1各组Hp根除率
2.2胃粘膜组织观察结果
取各组小鼠胃部组织,HE染色,观察Hp感染情况和炎症情况,结果见表2。从结果可以看出,模型组小鼠均有Hp定植,胃部慢性炎症情况较为严重。而各给药组Hp定植小鼠数量相比于模型组下降,胃部慢性炎症程度也有所降低,表明各药物对于Hp均有一定的抑制作用。其中复合益生菌一组的胃粘膜组织Hp定植和慢性炎症较阳性对照组略好,表明本发明复合益生菌组合物对于Hp具有显著的抑制作用。
表2各组胃粘膜组织观察结果
最后所应当说明的是,以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制,尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明,本领域的普通技术人员应当理解,可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换,而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (7)
1.一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,其特征在于,由罗伊氏乳杆菌、约氏乳杆菌和其他组分组成,其中,罗伊氏乳杆菌活菌数1-2×1010CFU/g、约氏乳杆菌活菌数3-4×1010CFU/g,其他组分按重量份计为:
低聚果糖80-160份
抗性糊精400-600份
低聚半乳糖200-400份
甘草提取物8-12份
草莓提取物4-6份
麦芽糊精余量
组合物总量为2000份;
其中,甘草提取物制备方法为:将甘草原料粉碎,过40目筛,按料液比1:10加入体积分数75%乙醇浸泡8小时,过滤,滤渣加入8倍量75%乙醇回流提取,过滤;合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg;
草莓提取物制备方法为:将新鲜草莓用搅拌机打至糊状,按料液比1:10加入体积分数80%乙醇回流提取2小时,共提取两次,合并滤液,减压浓缩,60℃条件下烘干至生药含量为0.5g/mg。
2.根据权利要求1所述的抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,其特征在于,所述罗伊氏乳杆菌活菌数为1.5×1010CFU/g、约氏乳杆菌活菌数为3.5×1010CFU/g。
3.根据权利要求2所述的抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌组合物,其特征在于,所述其他组分按重量份计为:
低聚果糖100份
抗性糊精400份
低聚半乳糖400份
甘草提取物10份
草莓提取物5份
麦芽糊精余量
组合物总量为2000份。
4.一种抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌制剂,其特征在于,由权利要求1-3任一权利要求所述的复合益生菌组合物制成。
5.根据权利要求4所述的抑制幽门螺旋杆菌的复合益生菌制剂,其特征在于,所述复合益生菌制剂的剂型为粉剂、片剂、胶囊剂或液体制剂。
6.如权利要求1-3任一权利要求所述的复合益生菌组合物在制备治疗幽门螺旋杆菌所致疾病的药物中的用途。
7.根据权利要求6所述的用途,其特征在于,所述幽门螺旋杆菌所致疾病为慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌或胃黏膜相关淋巴样组织淋巴瘤。
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