CN111632082B - 一种西洋参枳椇子组合物及其在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用 - Google Patents
一种西洋参枳椇子组合物及其在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111632082B CN111632082B CN202010728038.6A CN202010728038A CN111632082B CN 111632082 B CN111632082 B CN 111632082B CN 202010728038 A CN202010728038 A CN 202010728038A CN 111632082 B CN111632082 B CN 111632082B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- american ginseng
- composition
- hovenia dulcis
- dulcis thunb
- liver
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 240000005373 Panax quinquefolius Species 0.000 title claims abstract description 86
- 235000003140 Panax quinquefolius Nutrition 0.000 title claims abstract description 85
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 76
- 244000010000 Hovenia dulcis Species 0.000 title claims abstract description 52
- 235000008584 Hovenia dulcis Nutrition 0.000 title claims abstract description 52
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 title claims abstract description 22
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 title claims abstract description 20
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims description 13
- 240000006365 Vitis vinifera Species 0.000 claims abstract description 23
- 235000014787 Vitis vinifera Nutrition 0.000 claims abstract description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 23
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 7
- 238000009777 vacuum freeze-drying Methods 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 abstract description 11
- 230000006872 improvement Effects 0.000 abstract description 10
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 abstract description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 abstract description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 abstract description 6
- 230000009471 action Effects 0.000 abstract description 5
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 abstract description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 abstract description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 32
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 32
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 20
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 16
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 16
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 15
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 description 14
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 description 13
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 13
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 10
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 8
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 7
- 208000022309 Alcoholic Liver disease Diseases 0.000 description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 5
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 4
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 4
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 4
- 230000003859 lipid peroxidation Effects 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 108090000340 Transaminases Proteins 0.000 description 3
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 238000003304 gavage Methods 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000014898 transaminase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 208000007848 Alcoholism Diseases 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 2
- 235000008586 Hovenia Nutrition 0.000 description 2
- 241000405398 Hovenia Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 201000007930 alcohol dependence Diseases 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000005034 decoration Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 206010036067 polydipsia Diseases 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 2
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 241000208340 Araliaceae Species 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 1
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 1
- 238000013218 HFD mouse model Methods 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000008589 Obesity Diseases 0.000 description 1
- 241000219100 Rhamnaceae Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 231100000439 acute liver injury Toxicity 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000011363 dried mixture Substances 0.000 description 1
- 230000035622 drinking Effects 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000005485 electric heating Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 229940089161 ginsenoside Drugs 0.000 description 1
- 229930182494 ginsenoside Natural products 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 231100000234 hepatic damage Toxicity 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 208000006575 hypertriglyceridemia Diseases 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000008818 liver damage Effects 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000027939 micturition Effects 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 235000020824 obesity Nutrition 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000004792 oxidative damage Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 238000005502 peroxidation Methods 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000002574 poison Substances 0.000 description 1
- 231100000614 poison Toxicity 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000000451 tissue damage Effects 0.000 description 1
- 231100000827 tissue damage Toxicity 0.000 description 1
- 229940126680 traditional chinese medicines Drugs 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000004916 vomit Anatomy 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/25—Araliaceae (Ginseng family), e.g. ivy, aralia, schefflera or tetrapanax
- A61K36/258—Panax (ginseng)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
- A61K36/72—Rhamnaceae (Buckthorn family), e.g. buckthorn, chewstick or umbrella-tree
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/331—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using water, e.g. cold water, infusion, tea, steam distillation or decoction
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供了一种西洋参枳椇子组合物，由质量比为(1～2)：(1～2)的西洋参和枳椇子制备而成。本发明通过西洋参与枳椇子配伍后提取出有效成分，并发现其对酒精性肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与改善脂质代谢和提高抗氧化能力有关，这一结果为西洋参与枳椇子配伍应用提供了理论基础。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种西洋参枳椇子组合物及其在制备具有防治酒精性肝损伤的药物中的应用。
背景技术
酒精性肝病(Alcoholic liver disease,ALD)是长期过量饮酒导致的肝脏疾病，严重时可发展为肝纤维化、肝硬化、肝癌等，已成为严重危害人类健康的常见疾病[7-8]。几十年来，医治ALD仍未找到特效药物，因此，开展中药配伍理论的研究思路可能是治疗疾病的新方向。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种西洋参枳椇子组合物及其在制备具有防治酒精性肝损伤的药物中的应用，本发明提供的西洋参枳椇子组合物对急性酒精诱导的肝损伤有明显的预防保护作用。
本发明提供了一种西洋参枳椇子组合物，由质量比为(1～2)：(1～2)的西洋参和枳椇子制备而成。
本发明还提供了一种上述西洋参枳椇子组合物的制备方法，包括以下步骤：
A)将干燥粉碎后的西洋参和枳椇子与水混合浸泡，回流提取，得到提取液；
将所述提取液离心后得到上清液和残渣；
B)将所述残渣与水混合进行回流提取，得到提取液；
将所述提取液离心后得到上清液和经过二次提取后的残渣；
C)将步骤A)的上清液与步骤B)的上清液合并后真空冷冻干燥，得到西洋参枳椇子组合物。
优选的，步骤A)中，所述干燥粉碎后的西洋参和枳椇子与水的质量比为1:8～1:10。
优选的，步骤A)中，所述浸泡的时间为1～1.5h；所述回流提取的时间为1～1.5h。
优选的，步骤B)中，所述残渣与水的质量比为1:5～1:6。
优选的，步骤B)中，所述回流提取的时间为0.5～1h。
优选的，步骤C)中，所述真空冷冻干燥的温度为-50℃～-55℃，时间为46～48h。
本发明还提供了一种上述西洋参枳椇子组合物在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明提供了一种西洋参枳椇子组合物，由质量比为(1～2)：(1～2)的西洋参和枳椇子制备而成。本发明通过西洋参与枳椇子配伍后提取出有效成分，并发现其对酒精性肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与改善脂质代谢和提高抗氧化能力有关，这一结果为西洋参与枳椇子配伍应用提供了理论基础。
结果表明，与模型组小鼠比较，西洋参枳椇子组合物能够明显降低由急性酒精摄入引起的血清中AST、ALT活力的升高(p<0.05)，降低血清中TG的水平(p<0.05)和肝组织中MDA含量(p<0.05)；提高肝组织中抗氧化酶SOD和GSH-Px的活力(p<0.05)，且升高肝组织中GSH水平(p<0.05)。病理切片观察表明模型组以出现脂肪滴为变性为主，部分出现炎性细胞浸润，各给药组对小鼠肝脏病理改变有不同程度的作用。
附图说明
图1为西洋参枳椇子组合物对小鼠血清ALT(A)和AST(B)活力的影响；
图2为西洋参枳椇子组合物对小鼠血清TG含量的影响；
图3为西洋参枳椇子组合物对小鼠肝组织中GSH-Px、SOD活性和MDA、GSH含量的影响；
图4为西洋参枳椇子组合物对小鼠肝组织病理形态(苏木精-伊红染色，×400)。
具体实施方式
本发明提供了一种西洋参枳椇子组合物，由质量比为(1～2)：(1～2)的西洋参和枳椇子制备而成。
西洋参Panax quinquefolium Linn.为五加科植物西洋参的干燥根，是具有补气养阴、清热生津的功效[1]。由于西洋参主要活性成分人参皂苷成分和多糖成分的存在，现代药理学研究证明西洋参具有抗肿瘤、免疫调节，抗氧化和抗炎等多种作用，且有研究究报道西洋参对高脂饮食小鼠肥胖、脂肪肝和高甘油三酯血症有明显的预防和治疗作用。2018年西洋参被列为药食同源食品名录，增加了对西洋参作用的关注。西洋参的特别之处在于补而无燥，作为单味中药经常出现在复方当中。
枳椇子(Hovenia dulcis Thunb)为鼠李科拐枣属植物枳椇的种子，具有解酒毒，止呕，清热利尿等功效，常被应用到解酒护肝的方剂和产品中。
本发明以西洋参枳椇子为原料进行配伍获得有效成分，并发现其对酒精性肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与改善脂质代谢和提高抗氧化能力有关，这一结果为西洋参与枳椇子配伍应用提供了理论基础。
在本发明的一些具体实施方式中，所述西洋参枳椇子组合物，由质量比为1:1的西洋参和枳椇子制备而成；
在本发明的另一些具体实施方式中，所述西洋参枳椇子组合物，由质量比为2:1的西洋参和枳椇子制备而成；
在本发明的另一些具体实施方式中，所述西洋参枳椇子组合物，由质量比为1:2的西洋参和枳椇子制备而成。
作为最优选的，所述西洋参枳椇子组合物，由质量比为2:1的西洋参和枳椇子制备而成，该比例条件得到的组合物相比其他配比，具有显著的对酒精性肝损伤具有保护作用。
其中，所述西洋参枳椇子组合物的制备方法，包括以下步骤：
A)将干燥粉碎后的西洋参和枳椇子与水混合浸泡，回流提取，得到提取液；
将所述提取液离心后得到上清液和残渣；
B)将所述残渣与水混合进行回流提取，得到提取液；
将所述提取液离心后得到上清液和经过二次提取后的残渣；
C)将步骤A)的上清液与步骤B)的上清液合并后真空冷冻干燥，得到西洋参枳椇子组合物。
本发明首先将西洋参和枳椇子进行干燥，本发明对所述干燥的方法并没有特殊限制，本领域技术人员公知的干燥方法即可。
将干燥后的西洋参和枳椇子粉碎，然后过筛，得到混合物粉末。
然后，将所述混合物粉末与水混合，进行浸泡。其中，所述混合物粉末与水的质量比为1:8～1:10，优选为1:8。所述浸泡的时间为1～1.5h，优选为1h。
接着，进行回流提取。所述回流提取的时间为1～1.5h，优选为1h。
将回流提取后的提取液进行离心，得到上清液和残渣。
将所述残渣进行二次提取，即将所述残渣与水混合，进行回流提取，得到提取液。其中，所述残渣与水的质量比为1:5～1:6，优选为1:5。所述回流提取的时间为0.5～1h，优选为0.5h。
将所述提取液离心后得到上清液和经过二次提取后的残渣；
然后，将两次提取的上清液合并，得到混合上清液。将所述混合上清液真空冷冻干燥，得到西洋参枳椇子组合物。其中，在进行真空冷冻之前，将所述上清液进行冷冻，所述冷冻的温度为-70～-80℃，时间为2～4h。所述真空冷冻干燥的温度为-50～-55℃，时间为46～48h。
本发明还提供了一种西洋参枳椇子组合物在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用。
本发明将西洋参枳椇子配伍探讨其对酒精性肝损伤的作用，结果表明，西洋参枳椇子组合物对酒精性肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与改善脂质代谢和提高抗氧化能力有关，这一结果为西洋参与枳椇子配伍应用提供了理论基础。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的西洋参枳椇子组合物及其在制备具有防治酒精性肝损伤的药物中的应用进行说明，本发明的保护范围不受以下实施例的限制。
以下实施例中所用的材料与仪器如下：
清洁级ICR健康雄性小鼠40只，体重为20-22g，辽宁长生生物技术股份有限公司，动物生产许可证SCXK(辽)2015-0001，合格编号211002300023526；西洋参 吉林省抚松县；枳椇子 山东济南秦越人农业发展有限公司；天冬氨酸氨基转移酶(Aspartateaminotransferase，AST)试剂盒、丙氨酸氨基转移酶(Alanineaminotransferase，ALT)试剂盒、甘油三酯(Triglyceride，TG)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)试剂盒、谷胱甘肽(Glutathione，GSH)试剂盒、超氧化物歧化酶(Superoxidedismutase，SOD)、谷胱甘肽过氧化酶(Glutathione peroxidase，GSH-Px)试剂盒、BCA法总蛋白定量测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
Heraeus Megafuge 8R型超高速冷冻离心机 赛默飞世尔科技有限公司；IX51型显微镜 奥林巴斯公司；Epoch2型酶标仪 美国博腾仪器有限公司；MS204S型电子分析天平 瑞士Mettler Toledo公司；EG1150型生物组织包埋机、RM2265型切片机、HI1210型水浴锅、HI1220型烤片台徕卡显微系统(上海)贸易有限公司。
实施例1
1、西洋参枳椇子提取物的制备：
将西洋参和枳椇子放置于电热恒温鼓风干燥箱中，在60℃条件下干燥12h，分别按质量比1:1，2:1和1:2混合，将干燥的混合物粉碎，过60目筛网，向混合物中加入重量比为8倍量的蒸馏水，浸泡1h，回流提取1h，然后以5000r/min，离心10min，获得上清液；再向残渣中加入按重量比为5倍量的蒸馏水，回流提取0.5h，离心，获得上清液，合并两次上清液，将混合上清液放置于-80℃条件下冷冻4h后，置于真空冷冻干燥机中48h，即为组合物I(西洋参和枳椇子原料质量比1:1)、组合物Ⅱ(西洋参和枳椇子原料质量比2:1)和组合物Ⅲ(西洋参和枳椇子原料质量比1:2)，产率分别为16.7％、19.3％和16.75％。
2、动物分组与给药方法
ICR小鼠在控温22±3℃并在相对湿度为55±15％的环境中饲养，自由进食、饮水适应一周后，随机分为五组，每组8只，即为正常组，模型组，组合物I组、组合物Ⅱ组和组合物Ⅲ组。
西洋参枳椇子组合物组(组合物I组、组合物Ⅱ组和组合物Ⅲ组)以100mg/kg·bw的剂量连续灌胃小鼠14d，正常组及模型组给予生理盐水。末次灌胃30min后，除正常组外，24h内灌胃小鼠3次酒精(5g/kg)。末次灌胃后6h，麻醉处死小鼠，取血分离肝脏。
3、血液和组织样本的采集
末次给予酒精6h后，麻醉摘眼球取血，分离肝脏，选取左叶常温保存于福尔马林中，其余肝脏保存于-80℃。
4、生化指标的检测
血液中AST、ALT和TG与肝组织中GSH-Px、SOD、GSH和MAD指标的检测按照试剂盒提供的说明书严格进行操作。
实验结果以
表示，采用SAS 9.2软件GLM过程进行单因素方差分析，两两比较利用Duncan法进行显著性分析，p<0.05为差异显著，p<0.01为差异极显著。
(1)西洋参枳椇子组合物对小鼠血清转氨酶的影响
肝细胞受损会释放出血清转氨酶ALT和AST，其在血清中的含量是检测肝损伤的主要指标。参见图1和表1，图1为西洋参枳椇子组合物对小鼠血清ALT(A)和AST(B)活力的影响。图1中，小写字母不同为显著差异(p<0.05)，大写字母不同为差异极显著(p<0.01)；字母相同为差异不显著(p>0.05)；图2～图4同。如图1和表1所示，与正常组相比，模型组中ALT和AST的活力显著升高(p<0.05，p<0.01)，表明酒精引起小鼠肝组织损伤；与模型组相比，组合物I显著降低AST的水平(p<0.05)，组合物Ⅱ、Ⅲ极显著降低了ALT和AST的水平，给药组各组间无显著性差异，说明西洋参枳椇子对酒精导致小鼠急性肝损伤具有一定的保护作用。
表1西洋参枳椇子组合物对小鼠血清ALT(A)和AST(B)活力的影响
(2)西洋参枳椇子组合物对血清中甘油三酯的影响
急性酒精的摄入容易引起的肝脂肪变性，其特征为甘油三酯在肝细胞内过度积累。结果见图2和表2，图2为西洋参枳椇子组合物对小鼠血清TG含量的影响。由图2和表2可知，与正常组相比，酒精导致小鼠血清中TG含量极显著升高(p<0.01)；与模型组比较，组合物I、Ⅱ组小鼠血清中TG含量无显著性差异，组合物Ⅲ极显著降低TG的含量(p<0.01)，表明小鼠肝组织中脂类物质含量下降。
表2西洋参枳椇子组合物对小鼠血清TG含量的影响
(3)西洋参枳椇子对小鼠肝组织抗氧化能力的影响
氧化应激的产生主要源于活性氧与抗氧化剂和还原性物质之间的失衡，活性氧可能与脂质发生反应，导致脂质过氧化，从而破坏细胞膜。而丙二醛是脂质过氧化的主要产物，其含量作为衡量氧化损伤的重要指标。结果见图3和表3，图3为西洋参枳椇子组合物对小鼠肝组织中GSH-Px、SOD活性和MDA、GSH含量的影响。由图3和表3可知，与正常组相比，模型组的肝组织内抗氧化酶SOD、GSH-Px的活力明显降低(p<0.001)，还原型GSH的含量极显著降低(p<0.001)和MDA含量极显著升高(p<0.001)；与模型组相比，组合物I极显著升高了SOD的活力(p<0.01)，GSH和MDA的含量(p<0.01)，组合物Ⅱ、Ⅲ极显著提高了SOD与GSH-Px的活力(p<0.001)，GSH和MDA的含量(p<0.001)，提示小鼠肝组织中氧化应激状况得以改善。
表3西洋参枳椇子组合物对小鼠肝组织中GSH-Px、SOD活性和MDA、GSH含量的影响
由表1～表3的数据可知，组合物Ⅱ中GSH-Px、SOD的活力和GSH的含量高于组合物I，具有显著性差异，同时也高于组合物Ⅲ，但无统计学差异；组合物Ⅱ中MDA含量显著高于组合物I和组合物Ⅲ，由此可说明组合物Ⅱ的抗氧化能力高于组合物I和组合物Ⅲ。
5、肝脏病理学检测
将肝组织标本包埋在石蜡中，然后用旋转切片机将肝脏包埋块切成5μm厚度，用于苏木精和伊红(H&E)染色，中性树胶封片，显微镜下观察肝组织病理学变化。结果见图4，图4为西洋参枳椇子组合物对小鼠肝组织病理形态(苏木精-伊红染色，×400)，图4中，A正常组；B模型组；C组合物I组；D组合物Ⅱ组；E组合物Ⅲ组。肝脏H&E染色结果显示，正常组小鼠肝细胞条索排列规则，形态正常，未出现的变性、坏死(图4A)；模型组小鼠肝组织中细胞细胞间出现大量的白色脂滴，和炎性细胞浸润，变性以中央静脉为主(图4B)；西洋参枳椇子组中小鼠肝细胞排列逐渐紧密、逐渐减少脂滴数量并且减轻炎性浸润程度(图4C-D)。
肝脏是药物和毒物代谢过程中的重要器官，日常生活中过量饮酒或饮用中药都会引发肝脏的损伤。ALD早期损伤多可逆转，如及时进行针对性治疗可防止发展到肝硬化、肝癌等疾病。肝细胞中储存了大量的血清转氨酶AST和ALT，当细胞膜受损时，膜通透性增加，胞内大量AST、ALT扩散到血中，以AST、ALT的水平高低判断肝细胞是否损伤。而且在ALD早期发病机理研究表明，酒精进入机体后，乙醇可影响脂肪代谢，导致TG在肝细胞内沉积，大量蓄积导致病变。
本发明中24h内灌胃3次灌胃酒精建立小鼠急性酒精性肝损伤模型。结果显示模型组小鼠血清中AST、ALT的活力和TG的含量显著高于正常组，且病理组织切片中，观察到较多的脂肪滴，出现炎性浸润的情况，表明急性酒精引起小鼠肝损伤。西洋参枳椇子组合物治疗可以使损伤小鼠血清中AST和ALT水平明显降低，改善了肝细胞病理形态学变化，降低血清中TG的含量，提示西洋参枳椇子组合物对酒精性肝损伤具有保护作用。
机体进入酒精后，经酶代谢时，能够诱导细胞内产生氧自由基(ROS)，消耗大量还原性物质如GSH，从而无法清除过多的自由基，引起氧化应激，导致细胞脂质过氧化产物迅速增加，肝细胞膜受损，因此还原型GSH的多少是衡量抗氧化能力的重要因素，脂质过氧化发生的最终代谢产物MDA的含量可以反映过氧化损伤和细胞受损的程度。
实验结果显示与正常组比较，模型组小鼠肝组织中GSH-Px、SOD的活力和GSH水平显著降低，MDA的含量显著升高，而西洋参枳椇子组合物可以提高肝组织中SOD和GSH-Px的活力，减少肝组织中GSH的消耗，并抑制肝组织中MDA含量增加，降低氧化应激水平，提高机体抗氧化能力。
综上结果所述，本发明通过西洋参与枳椇子配伍后提取出有效成分，并发现其对酒精性肝损伤具有保护作用，其作用机制可能与改善脂质代谢和提高抗氧化能力有关且组合物Ⅱ抗氧化应激能力较强，这一结果为西洋参与枳椇子配伍应用提供了理论基础。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种西洋参枳椇子组合物，其特征在于，由质量比为(1～2)：(1～2)的西洋参和枳椇子制备而成。
2.一种如权利要求1所述的西洋参枳椇子组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
A)将干燥粉碎后的西洋参和枳椇子与水混合浸泡，回流提取，得到提取液；
将所述提取液离心后得到上清液和残渣；
B)将所述残渣与水混合进行回流提取，得到提取液；
将所述提取液离心后得到上清液和经过二次提取后的残渣；
C)将步骤A)的上清液与步骤B)的上清液合并后真空冷冻干燥，得到西洋参枳椇子组合物。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述干燥粉碎后的西洋参和枳椇子与水的质量比为1:8～1:10。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤A)中，所述浸泡的时间为1～1.5h；所述回流提取的时间为1～1.5h。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤B)中，所述残渣与水的质量比为1:5～1:6。
6.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤B)中，所述回流提取的时间为0.5～1h。
7.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤C)中，所述真空冷冻干燥的温度为-50℃～-55℃，时间为46～48h。
8.一种如权利要求1所述的西洋参枳椇子组合物在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010728038.6A CN111632082B (zh) | 2020-07-23 | 2020-07-23 | 一种西洋参枳椇子组合物及其在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010728038.6A CN111632082B (zh) | 2020-07-23 | 2020-07-23 | 一种西洋参枳椇子组合物及其在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111632082A CN111632082A (zh) | 2020-09-08 |
| CN111632082B true CN111632082B (zh) | 2022-03-11 |
Family
ID=72323944
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010728038.6A Active CN111632082B (zh) | 2020-07-23 | 2020-07-23 | 一种西洋参枳椇子组合物及其在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111632082B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113713013B (zh) * | 2021-08-20 | 2022-09-02 | 河北御芝林生物科技有限公司 | 一种抗肝损伤的组合物及其制备方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103006822A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-04-03 | 何忠梅 | 西洋参组合物在防治酒精性肝损伤的药物中的应用 |
| CN111000906A (zh) * | 2018-10-08 | 2020-04-14 | 中国农业科学院特产研究所 | 一种人参枳椇子组合物及其制备方法与应用 |
-
2020
- 2020-07-23 CN CN202010728038.6A patent/CN111632082B/zh active Active
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103006822A (zh) * | 2013-01-08 | 2013-04-03 | 何忠梅 | 西洋参组合物在防治酒精性肝损伤的药物中的应用 |
| CN111000906A (zh) * | 2018-10-08 | 2020-04-14 | 中国农业科学院特产研究所 | 一种人参枳椇子组合物及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Semen Hoveniae extract protects against acute alcohol-induced liver injury in mice;Jian Du;《Pharmaceutical Biology》;20100802;第48卷(第8期);953-958 * |
| 枳椇水提液改善慢性酒精性肝损伤作用研究;楚胜;《智慧健康》;20190930;第5卷(第25期);第27-29和32页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111632082A (zh) | 2020-09-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101501433B1 (ko) | 비알코올성 지방간 질환의 예방 및 치료용 조성물 | |
| Wu et al. | Hypoglycemic effect of okra aqueous extract on streptozotocin-induced diabetic rats | |
| CN105770514A (zh) | 一种抗辐射的黑茶组合物及制备方法 | |
| CN111632082B (zh) | 一种西洋参枳椇子组合物及其在制备防治酒精性肝损伤的药物中的应用 | |
| CN111437310A (zh) | 一种高活性白花蛇舌草总黄酮的制备方法及其在过氧化肝损伤中的应用 | |
| CN105724642A (zh) | 一种抗氧化抗衰老的黑茶组合物及制备方法 | |
| CN114632101A (zh) | 一种治疗肥胖及相关综合症的广东虫草减肥降脂护肝复方及其制备方法和应用 | |
| Li et al. | Amelioration of alcohol-induced acute liver injury in C57BL/6 mice by a mixture of TCM phytochemicals and probiotics with antioxidative and anti-inflammatory effects | |
| KR102005031B1 (ko) | 알코올성 간 손상 예방 기능성 성분을 포함하는 인삼열매 추출물 및 그 제조 방법 | |
| CN102091117B (zh) | 一种提高轮叶党参抗癌活性的方法 | |
| CN115006494B (zh) | 一种显脉旋覆花复合解酒组合物、解酒护肝制剂及其应用 | |
| CN109925445A (zh) | 金线莲提取物在制备预防和/或治疗d-氨基半乳糖致小鼠急性肝损伤药物中的应用 | |
| CN114504615B (zh) | 一种具有保肝降酶作用的提取物组合物 | |
| CN113694104B (zh) | 一种对化学性肝损伤有保护作用、促进肝脏再生的中药组合物、制备方法及其用途 | |
| CN106632716B (zh) | 石仙桃多糖在制备保肝药物中的应用 | |
| CN102370593A (zh) | 厚朴花提取方法及其提取物的应用 | |
| JP2003171303A (ja) | 特定植物含有組成物と該組成物を有効成分とする医薬品と保健用食品 | |
| CN114887069A (zh) | 一种降低药物肝毒性的甘草炭包衣材料及其制备方法和用途 | |
| Cui et al. | Antitumor effects of ethanol extracts from Hyptis rhomboidea in H22 tumor-bearing mice | |
| CN112915150A (zh) | 一种用于预防和/或治疗糖尿病的药物组合物 | |
| CN108175801B (zh) | 具有化学性肝损伤保健功能的中药组合物及其制备方法 | |
| CN110882319A (zh) | 衢枳壳、衢枳壳提取物和含有他们的产品在预防和/或治疗代谢性肝病中的应用 | |
| Li et al. | Antihyperglycemic and antioxidant effect of the total flavones of Potentilla kleiniana Wight et Arn. in streptozotocin induced diabetic rats. | |
| CN115068512B (zh) | 白雪茶提取物及提取方法、含白雪茶提取物的组合及应用 | |
| KR102559079B1 (ko) | 한약재 복합 추출물을 유효 성분으로 포함하는 암 예방 또는 치료용 약학적 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240123 Address after: No. 71, Gaoer Nanqiu Village, Zhonggong Town, Licheng District, Jinan City, Shandong Province, 250000 Patentee after: Shandong Qinyue Human Biotechnology Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: No. 4899 Juye street, Jingyue Economic Development Zone, Changchun City, Jilin Province Patentee before: INSTITUTE OF SPECIAL ANIMAL AND PLANT SCIENCES OF CAAS Country or region before: China |