CN111632012B - 一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提出了一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物及其应用。本发明具有美白功能的复合益生菌发酵组合物，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。

Description

一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物及其应用
技术领域
本发明涉及化妆品技术领域，具体涉及一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物及其应用。
背景技术
近年来，随着人们对皮肤表观审美水平的提高，美白类化妆品受到越来越多东方女性的青睐。在西方国家，美白产品还被应用于无规律色素过度沉着的预防和治疗中，如老年斑和雀斑等。因此，众多化妆品公司在改变皮肤色素沉着方面开展大量的研究，进行高效美白产品的开发工作。
面膜是利用覆盖在脸部的短暂时间，使脸部暂时与外界的空气和污染隔离，肌肤温度提高而使皮肤的毛孔扩张，促进汗腺分泌与新陈代谢，使肌肤的含氧量上升，有利于肌肤排除表皮细胞新陈代谢的产物和累积的油脂类物质。同时，面膜中的水分渗入表皮的角质层，皮肤变得柔软，肌肤自然光亮有弹性。
益生菌(Probiotics)是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥对肠道有益作用的活性有益微生物的总称。人体、动物体内有益的细菌或真菌主要有：酪酸梭菌、乳酸菌、双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、放线菌、酵母菌等。目前世界上研究的功能最强大的产品主要是以上各类微生物组成的复合活性益生菌，其广泛应用于生物工程、工农业、食品安全以及生命健康领域。
市面上面膜产品琳琅满目，一般都含有醇类、增塑剂、防腐剂、表面活性剂等化学添加剂，尤其是具有美白作用的面膜，有的为了提亮皮肤甚至会添加荧光剂，这些添加成分和化学成分或多或少对皮肤都有一定的刺激性，特别是敏感肌肤尤为显著。CN107233295A中公开了一种具有美白保湿作用的丝瓜酵素液及其面膜产品，发明以酵素与丝瓜相结合，通过微生物作用，将丝瓜原料的营养与功效成分充分释放，激活人体细胞相应的酶的基因表达，提高肌肤代谢活力。CN104586737A公开了一种益生菌美白修复面膜精华液及其制备方法，该发明以酵母菌溶胞物、明串球菌/萝卜跟发酵产物滤液、乳酸杆菌发酵溶胞产物、二裂酵母发酵产物溶胞物和嗜酸菌/葡萄发酵产物五种天然益生菌为原料制备出具有美白修复面膜精华液。抗氧化肽是指具有抑制或清除体内各种自由基产物的寡肽。虽然现有技术中已经有天然提取物或者微生物发酵产物来替换传统化工产品的报道，但微生物发酵获得的精华液稳定性较差，尤其是在25℃以上的温度下，不仅会使产品质量下降，而且给储存和运输带来了很大挑战。南京中医药大学王令充团队(食品工业科技，2011,32(10)：285-291)以四角蛤蜊提取多糖的蛋白质残渣为原料，采用胰蛋白酶进行酶解获得抗氧化肽，但其酶解液pH碱性较强，对皮肤刺激性较强，不适合作为皮肤直接接触的精华液；若是对酶解液进行酸碱调节又会影响酶解液抗氧化性。
发明内容
本发明的目的在于提出一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物及其应用，选择特定的菌株对植物进行发酵后可以显著提升其美容功效，经过多年的研究和实践，发现一种来源于纯天然植物，通过益生菌剂发酵后可以起到非常显著的美白祛斑效果，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物，将天山雪莲、甘草、黄柏、百合提取成中药液后，加入益生元，用牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种进行发酵获得。
本发明进一步保护一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将天山雪莲、甘草、黄柏、百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按比例加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取8-10h，过滤，滤液留用，滤渣按比例加入乙醇溶液中，加热至50-70℃，不断搅拌，提取3-7h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：向培养基中含中药液、豆粕、玉米、麸皮、益生元，用PBS溶液调节培养基pH值为7.5-8.0，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，厌氧培养，然后分别培养成种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别接种于步骤S2得到的培养基中，厌氧培养；
S4.灭菌：经过高压高温蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将20-50重量份天山雪莲、10-20重量份甘草、15-30重量份黄柏、5-10重量份百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：(5-10)g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取8-10h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：(3-7)g/mL加入55-75wt％的乙醇溶液中，加热至50-70℃，不断搅拌，提取3-7h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液40-70g、豆粕1-3g、玉米1-3g、麸皮2-4g、益生元5-15g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.5-8.0，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照1-2％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.5-2个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
作为本发明的进一步改进，所述益生元选自异麦芽低聚糖、低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、大豆低聚糖、菊粉中的一种或几种混合。
本发明进一步保护一种上述具有美白功能的复合益生菌发酵组合物在化妆品中的应用。
作为本发明的进一步改进，其是在美白淡斑化妆品中的应用。
本发明具有如下有益效果：益生元是通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，从而提高益生菌的生物活性，得到更多更高含量的营养物质，本发明在制备具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的培养基中不仅添加了中药液，还添加了促进益生菌生长的益生元，益生元使得益生菌能够快速、健康的生长，加快了益生菌将中药液中的有效成分降解发酵得到容易吸收的氨基酸、小分子化合物、寡糖、小分子肽等，从而该类营养物质能很容易被皮肤吸收而不会造成皮肤的负担，起到美白淡斑的效果；
牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉(Clonostachys rogersoniana)菌种能有效将中药液中的活性物质发酵转化，是珍稀的药用真菌，其厌氧发酵过程将中药液中的有效成分降解发酵得到容易吸收的氨基酸、小分子化合物、寡糖、小分子肽，促进皮肤吸收；
天山雪莲，除寒，壮阳，调经，止血，美容。用于阳痿、腰膝软弱、妇女崩带、月经不调、风湿性关节炎、外伤出血、美白皮肤；
甘草，清热解毒、祛痰止咳、脘腹等，外用还具有美白祛斑的效果；
黄柏，清热解毒，泻火燥湿；
百合，养阴润肺；清心安神。主阴虚久嗽；痰中带血；热病后期；余热未清，或情志不遂所致的虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍惚；痈肿；湿疮；
天山雪莲、甘草、黄柏、百合为美白抗衰的中药，将其以君臣佐使原则配伍后提取得到的中药液含有大量美白活性成分如肽、三萜类、多糖类等，将其进一步用益生菌发酵后得到小分子化合物，具有显著美白皮肤、抗衰祛斑的效果；
本发明通过大量的研究发现，选择特定的菌株对植物进行发酵后可以显著提升其美容功效，经过多年的研究和实践，发现一种来源于纯天然植物，通过益生菌剂发酵后可以起到非常显著的美白祛斑效果，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
低聚半乳糖CAS号6587-31-1，低聚木糖CAS号308066-66-2，菊粉CAS号9005-80-5。均购于国药集团。
牛樟芝和罗杰斯无性穗霉菌种均购于阿拉丁试剂有限公司。
实施例1
具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将20g天山雪莲、10g甘草、15g黄柏、5g百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：5g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取8h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：3g/mL加入55wt％的乙醇溶液中，加热至50℃，不断搅拌，提取3h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液40g、豆粕1g、玉米1g、麸皮2g、低聚半乳糖5g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.5，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照1％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.5个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
实施例2
具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将50g天山雪莲、20g甘草、30g黄柏、10g百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：10g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取10h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：7g/mL加入75wt％的乙醇溶液中，加热至70℃，不断搅拌，提取7h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液70g、豆粕3g、玉米3g、麸皮4g、菊粉15g，用PBS溶液调节培养基pH值为8.0，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照2％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、2个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
实施例3
具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将35g天山雪莲、15g甘草、22g黄柏、7g百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：7g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取9h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：5g/mL加入65wt％的乙醇溶液中，加热至60℃，不断搅拌，提取5h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液55g、豆粕2g、玉米2g、麸皮3g、低聚木糖10g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.8，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照1.5％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.7个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
对比例1
与实施例3相比，未添加低聚木糖，其他条件均不改变。
具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将35g天山雪莲、15g甘草、22g黄柏、7g百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：7g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取9h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：5g/mL加入65wt％的乙醇溶液中，加热至60℃，不断搅拌，提取5h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液55g、豆粕2g、玉米2g、麸皮3g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.8，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照1.5％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.7个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
对比例2
与实施例3相比，仅仅添加牛樟芝菌种，其他条件均不改变。
具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将35g天山雪莲、15g甘草、22g黄柏、7g百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：7g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取9h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：5g/mL加入65wt％的乙醇溶液中，加热至60℃，不断搅拌，提取5h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液55g、豆粕2g、玉米2g、麸皮3g、低聚木糖10g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.8，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种的发酵：取一环牛樟芝菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成2*108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种的种子液分别按照1.5％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.7个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
对比例3
与实施例3相比，仅仅添加罗杰斯无性穗霉菌种，其他条件均不改变。
具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的制备方法，包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将35g天山雪莲、15g甘草、22g黄柏、7g百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按固液比1：7g/mL加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取9h，过滤，滤液留用，滤渣按固液比1：5g/mL加入65wt％的乙醇溶液中，加热至60℃，不断搅拌，提取5h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液55g、豆粕2g、玉米2g、麸皮3g、低聚木糖10g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.8，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：取一环罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成2*108cfu/mL的种子液；将罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照1.5％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.7个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物。
测试例1细胞毒性测试：
实验分组：实施例1-3和对比例1-3过滤后的发酵组合物溶于无血清DMEM培养液中，以无血清DMEM培养液为阴性对照样组，每个样品设置3个重复。
MTT检测：将生长良好的L929细胞调整浓度为1×105个/mL，按照100μL/孔接种至96孔板，在37℃，5％CO2环境中，无血清DMEM培养液培养24h。贴壁生长后，吸弃有培养液，按照实验分组方案每孔加入100μL不同质量分数的样品溶液，阴性对照样组继续无血清DMEM培养，常规培养48h。向细胞培养板中每孔加入5mg/mL MTT溶液20μL，置培养箱内避光孵育4h。吸弃上清，每孔加入DMSO100μL。细胞培养板用铝箔纸包裹，置于摇床低速振荡20min，在570nm波长处测定吸光度。按下式计算其他各组细胞相对存活率(β)。结果如表一所示。
β＝An/A0
式中，An为实验组吸光度，A0为阴性对照组吸光度。
表1不同组别中细胞存活率的影响
Figure GDA0003567825550000091
根据ISO 10993-5:2009所述的毒性分级评价方法，细胞存活率大于70％，可视为无毒性。
测试例2DPPH自由基的清除作用试验：
设置5组，分别为阳性对照组(Vc组)，实施例1-3组、对比例1-3组。选用维生素C作为阳性对照组用药，无水乙醇为溶剂，将维生素C配成待测溶液(浓度为80μg/ml)。同样按此方法，将实施例1-3和对比例1-3所得到的发酵组合物，按照重量来配置出不同浓度的实验组溶液(浓度为80μg/ml)。
新鲜配制200umol/L DPPH乙醇溶液。将待检测溶液(1ml)+DPPH乙醇溶液(5ml)混匀，在37℃避光孵育30min后在517nm处测吸光度(A1)；将待检测溶液(1ml)+无水乙醇(5ml)混匀，在37℃避光孵育30min测吸光度(A2)；空白对照组为无水乙醇(1ml)+DPPH乙醇溶液(5ml)，在37℃避光孵育30min测吸光度记为A0。按下式计算样品对DPPH自由基的相对清除率(γ)，清除率越大表示抗氧化能力越强。每个受试物设置5个平行重复。结果如表2所示。
Figure GDA0003567825550000101
统计学处理：使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差,采用组间t检验。
表2各组对DPPH自由基的相对清除率
Figure GDA0003567825550000102
注：t检验,*：P<0.05(与阳性实验组比较)。
可见，实施例1-3和使用Vc的阳性实验组相比较，其对DPPH自由基的相对清除率更高，有统计学差异(P＜0.05)；而单独只用一种菌株发酵得到的发酵组合物或者未添加益生元低聚木糖的对比例，和阳性组以及实施例组比较，对DPPH自由基的相对清除率显著下降，清除自由基的效果都要差。说明两种菌种其相互之间有协同作用，能够加强自由基清除效果。益生元的添加能够高效促进菌种的活性，提高自由基清除效果。
测试例3体外抑制酪氨酸酶实验
溶液配制：配制包含0.025mol/L Na2HPO4和0.02mol/L KH2PO4的PBS溶液(pH＝6.8)；用PBS配制1mg/ml的酪氨酸溶液和200U/ml的酪氨酸酶溶液。
将实施例1-3、对比例1-3做为处理组，维生素C乙基醚溶液为阳性对照组。PBS配制维生素C乙基醚溶液，质量分数分别为0.50％；PBS配制实施例1-3组、对比例1-3组溶液，质量分数分别为0.50％。
酶活检测：使用微量移液器分别按照表3移取a、b、c、d四组样液置于1.5mlEP管(配制反应体系为1000ul)，35℃水浴10min；加入酪氨酸酶溶液200ul，35℃水浴30min，各反应管分别取150ul加入96孔板，酶标仪测定475nm吸光度A值。每组重复试验3次。
表3各组反应液的组成
Figure GDA0003567825550000111
注：a组：无底物，不含抑制剂；b组：有底物，不含抑制剂；c组：无底物，含抑制剂；d组：有底物，含络氨酸酶抑制剂。
计算各处理组的酪氨酸酶抑制率(I)，I＝[1-(Ad-Ac)/(Ab-Aa)]*100％。试验结果如表4所示。
统计学处理：使用SPSS16.0,进行统计学分析，计量资料的结果表示为均值±标准差,采用组间t检验。
表4
Figure GDA0003567825550000112
注：t检验,*：P<0.05(与阳性实验组比较)
从表4可见，随着浓度的增加，酪氨酸酶抑制率均逐渐升高。在相同浓度下，实施例1-3组和阳性对照组比较，实施例3组的酪氨酸酶抑制率更好，有统计学差异(P＜0.05)。对比例1-3组和阳性对照组比较，其酪氨酸酶抑制率低；可见，单独只用一种菌株发酵得到的发酵组合物，或者未添加益生元低聚木糖的对比例，其酪氨酸酶抑制的效果欠佳。
与现有技术相比，益生元是通过选择性的刺激一种或几种细菌的生长与活性，从而提高益生菌的生物活性，得到更多更高含量的营养物质，本发明在制备具有美白功能的复合益生菌发酵组合物的培养基中不仅添加了中药液，还添加了促进益生菌生长的益生元，益生元使得益生菌能够快速、健康的生长，加快了益生菌将中药液中的有效成分降解发酵得到容易吸收的氨基酸、小分子化合物、寡糖、小分子肽等，从而该类营养物质能很容易被皮肤吸收而不会造成皮肤的负担，起到美白淡斑的效果；
牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉(Clonostachys rogersoniana)菌种能有效将中药液中的活性物质发酵转化，是珍稀的药用真菌，其厌氧发酵过程将中药液中的有效成分降解发酵得到容易吸收的氨基酸、小分子化合物、寡糖、小分子肽，促进皮肤吸收；
天山雪莲，除寒，壮阳，调经，止血，美容。用于阳痿、腰膝软弱、妇女崩带、月经不调、风湿性关节炎、外伤出血、美白皮肤；
甘草，清热解毒、祛痰止咳、脘腹等，外用还具有美白祛斑的效果；
黄柏，清热解毒，泻火燥湿；
百合，养阴润肺；清心安神。主阴虚久嗽；痰中带血；热病后期；余热未清，或情志不遂所致的虚烦惊悸、失眠多梦、精神恍惚；痈肿；湿疮；
天山雪莲、甘草、黄柏、百合为美白抗衰的中药，将其以君臣佐使原则配伍后提取得到的中药液含有大量美白活性成分如肽、三萜类、多糖类等，将其进一步用益生菌发酵后得到小分子化合物，具有显著美白皮肤、抗衰祛斑的效果；
本发明通过大量的研究发现，选择特定的菌株对植物进行发酵后可以显著提升其美容功效，经过多年的研究和实践，发现一种来源于纯天然植物，通过益生菌剂发酵后可以起到非常显著的美白祛斑效果，其祛斑脱色效果极佳，尤其是对黄褐斑和顽固性色素沉着效果十分显著。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种具有美白功能的复合益生菌发酵组合物，其特征在于，将天山雪莲、甘草、黄柏、百合提取成中药液后，加入益生元，用牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种进行发酵获得；包括以下步骤：
S1.中药液的制备：将20-50重量份天山雪莲、10-20重量份甘草、15-30重量份黄柏、5-10重量份百合分别洗净、干燥、粉碎后过100目筛，得到中药粉，将中药粉按g/mL计固液比1：(5-10)加入水中，加热至沸，不断搅拌，提取8-10h，过滤，滤液留用，滤渣按g/mL计固液比1：(3-7)加入55-75wt％的乙醇溶液中，加热至50-70℃，不断搅拌，提取3-7h，过滤，合并2次滤液，减压浓缩，得到中药液；
S2.培养基的制备：每100mL培养基中含中药液40-70g、豆粕1-3g、玉米1-3g、麸皮2-4g、益生元5-15g，用PBS溶液调节培养基pH值为7.5-8.0，装液量均为100mL，紫外线灭菌备用；
S3.牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的发酵：分别取一环牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种接种到高氏培养基中划线，37℃厌氧培养24h，然后分别培养成108cfu/mL的种子液；将牛樟芝菌种和罗杰斯无性穗霉菌种的种子液分别按照1-2％的接种量接种于步骤S2得到的培养基中，37℃厌氧培养24h；
S4.灭菌：经过105℃、1.5-2个大气压的蒸汽灭菌后，将培养基经0.22μm滤膜过滤除菌后得到具有美白功能的复合益生菌发酵组合物；所述益生元为低聚木糖。
2.如权利要求1所述具有美白功能的复合益生菌发酵组合物在制备化妆品中的应用。
3.如权利要求1所述具有美白功能的复合益生菌发酵组合物在制备美白祛斑化妆品中的应用。
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