CN111620928B - 一种六胜肽的规模化合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种六胜肽的规模化合成方法，该方法是以2‑Chlorotrityl Chloride Resin为载体，固相合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑OH全保护肽酸，然后以全保护肽酸为原料，通过液相酰胺化反应合成Ac‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Met‑Gln(Trt)‑Arg(Pbf)‑Arg(Pbf)‑NH2全保护酰胺，并选用1‑羟基苯并三唑和N,N′‑二异丙基碳二亚胺为缩合试剂，采用2,4‑二甲氧基苄胺进行二次酰胺化反应除去少量未反应完全的全保护肽酸，最后脱除保护基、反相制备色谱纯化，得到目标肽。本发明制备纯化难度低的优点，可用于规模化合成六胜肽。

Description

一种六胜肽的规模化合成方法
技术领域
本发明属于多肽合成技术领域，具体涉及一种固-液结合的六胜肽合成方法。
背景技术
六胜肽，又叫阿基瑞林、乙酰基六肽-8，最初是从南极湾冰河泥中所发现的菌种，是一种具有除皱功能的活性多肽，序列为Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，是由突触蛋白SNAP-25的氮端(AA12～17)衍生而来的六个氨基酸肽链，能与SNARE三元复合物相互作用，抑制嗜铬细胞中受Ca2+调控的儿茶酚胺释放，从而阻止神经-肌肉间的乙酰胆碱传导，引起肌肉麻痹。六胜肽是肉毒毒素类的安全替代品，由于能够阻断神经肌肉间的信息传导，避免肌肉过度收缩，皮下新合成的胶原蛋白得以重排，皱纹缓解甚至消除。10％乳液涂抹眼角30天，可使眼角鱼尾纹深度减少30％。因此，多用于化妆品内作为抗皱成分。
Figure BDA0002518459030000011
目前，六胜肽的合成方法主要有固相合成法和液相分段合成法。目前已公开的几种合成方法，均存在不同的局限性。固相合成法的特点是将肽链连接在固相载体，通过过量反应物提高反应收率，同时反复洗涤就能除去杂质，节省了反应时间。然而，固相载体多选用氨基型Linker树脂，如Rink Amide AM Resin或者Rink Amide MBHA Resin，这一类树脂的特点是上载量较小，价格普遍昂贵，达到规模化合成原料成本就足以昂贵，一般只能进行小批量合成，限制了六胜肽的产业化。例如，CN 103694316A采用Rink Amide MBHA Resin作为树脂载体固相合成，取代度仅为0.5mmol/g，且价格昂贵，必然造成成本昂贵，不适用于大规模生产。
液相分段合成法的特点是原料成本降低，但液相反应时间普遍较长，中间过程需柱层析或重结晶等纯化分离步骤，人工成本骤升。如CN 103613642A采用液相分段合成，原料成本降低，但合成周期长，效率低，纯化成本高，不适用于规模化合成。CN 106632609A采用固-液结合的合成策略，优先液相合成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH片段，再与RinkAmide AM Resin连接。精氨酸二肽片段在多肽合成领域作为困难序列，不管作为氨基组分和羧基组分，液相合成都较为困难且难以保证纯度，本质上固相载体未发生改变，不适用于大规模合成。CN 196749529A采用固-液结合的合成策略，改变了合成载体，选用六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、1-羟基苯丙三唑合成活化酯，选用氯化铵作为氨试剂，但氯化铵作为无机盐，在有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺溶解度很小，故此酰胺化反应转化率不超过70％，原料剩余同时存在消旋风险，合成收率低且纯度无法保证，不利于规模合成。
CN 110684077A公开了一种可规模化合成六胜肽的方法，该合成方法选用2-Chlorotrityl Chloride Resin为载体，固相合成全保护肽酸，所述全保护肽酸进行液相酰胺化反应，得到全保护酰胺粗品，全保护酰胺粗品经柱层析分离未转化完全的原料后，脱保护得到六胜肽粗品。该方法树脂价格相对氨基树脂便宜，而上载量增加近一倍，同样投料量下，树脂肽产率增加，目标肽总收率增加；采取低温控制，有效抑制了液相酰胺化反应消旋；选用的氨试剂为氨水，廉价易得；切割工艺弃用苯酚与乙二硫醇；弃用经典的析出沉淀剂-易制毒溶剂无水乙醚，改用乙酸乙酯，安全性高、对环境友好，利于工业化生产。但此方法的不足在于：全保护肽酸酰胺化反应时，C端精氨酸作为羧基组分，难以活化完全，同时生成的活化酯在氨水作用下少量发生水解。酰胺化反应完成后，有未转化完全的原料残余，而全保护肽酸和全保护酰胺分子量相差1，极性相近，在反向HPLC上为同一位置出峰，难以重结晶除去；虽然通过薄层层析色谱可经过正向柱层析分离除去，但因两者极性相近，Rf值相差不大，柱层析对洗脱剂比例要求严格，分离难度系数高，分离周期较长，考验工作者的TLC分析能力与柱层析分离能力。且全保护酰胺作为长肽片段，酯溶性不高、柱层析体系选用DCM/MeOH体系，DCM易挥发，容易影响洗脱剂比例而造成分离效果不佳，影响制备纯化。在工业化上柱层析需消耗大量的溶剂，洗脱液在浓缩过程中的溶剂回收率低于50％，增加了原料成本、工艺合成周期与人工成本。
发明内容
本发明的目的是提供一种方法简单、生产成本低，易纯化、生产效率高的规模化合成六胜肽的方法。
针对上述目的，本发明采用的技术方案是：以2-Chlorotrityl Chloride Resin为载体，固相合成全保护树脂肽Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-2-Chlorotrityl Chloride Resin，所述全保护树脂肽经切割液裂解后获得全保护肽酸Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH，所述全保护肽酸与氨水进行液相酰胺化反应，得到全保护酰胺Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品(具体方法与公开号为CN 110684077A、发明名称为“一种阿基瑞林的规模化合成方法”中公开的柱层析之前的步骤相同)，所述粗品经二次液相酰胺化反应，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物，所得混合物经脱除保护基、反相制备色谱纯化、冷冻干燥，得到六胜肽纯品。
上述二次液相酰胺化反应的方法为：将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基碳二亚胺，并在该温度下反应40～90分钟，然后加入2,4-二甲氧基苄胺，继续在该温度下反应5～7小时，再将反应液加入1.5～3倍体积的质量浓度为20％～40％的柠檬酸水溶液中，析出沉淀，过滤，沉淀用饱和食盐水洗涤后40～45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。
上述二次液相酰胺化反应的方法进一步优选：将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基碳二亚胺，并在该温度下反应60分钟，然后加入2,4-二甲氧基苄胺，继续在该温度下反应6小时，再将反应液加入2倍体积的质量浓度为30％的柠檬酸水溶液中，析出沉淀，过滤，沉淀用饱和食盐水洗涤后40～45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。
上述二次液相酰胺化反应中，优选Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品与1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基碳二亚胺、2,4-二甲氧基苄胺的摩尔比为1:1.5～2.0:1.5～2.0:2.0～3.0。
上述脱除保护基的方法为：向Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物中加入脱除侧链基团切割液，搅拌反应2～3小时，减压脱除溶剂，向浓缩液中加入乙酸乙酯，离心析出沉淀，石油醚洗涤，得到六胜肽粗品。
上述脱除侧链基团切割液优选三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯甲硫醚、水、二氯甲烷体积比为80:5:4:3:8的混合液。
本发明的有益效果如下：
1、由Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH与氨水进行液相酰胺化反应合成Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2时，反应转化率为85％～90％，剩余10％～15％为未完全转化的全保护肽酸，本发明通过引入2,4-二甲氧基苄胺作为氨的等价替代物通过二次酰胺化反应，可完全除去反应过程中全保护肽酸残留，完全规避了柱层析操作，同时完美解决了柱层析过程中二氯甲烷挥发造成的洗脱剂比例不均、分离难度系数高的问题。整个反应操作简单，减少了工艺周期，降低了原料溶剂成本及人工成本，达到了工业化减负的效果。
2、本发明有效降低了制备纯化的难度：全保护肽酸和全保护酰胺分子量相差1，极性相近，切割脱保护后，在HPLC上表现为目标峰相差0.4min，制备纯化有较大难度(如图1)，全保护肽酸和2,4-二甲氧基苄胺反应可完全除去，全保护肽酸在HPLC上18min出峰(如图2)，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb在HPLC上22min出峰(如图3)，二次酰胺化反应后全保护酰胺片段切割脱保护得到六胜肽粗品，六胜肽粗品在三氟乙酸作用下，Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb部分转化为六胜肽，不能转化的部分为Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-Dmb(结构式如下)。在HPLC上，六胜肽目标峰10.47min，未脱除Dmb的六胜肽20.73min，表现为与六胜肽目标峰相差10min(如图4)，非常利于纯化。故合成的六胜肽全保护酰胺，不需要柱层析，即可得到相对较纯的产物，为制备纯化提供了极大的帮助。
Figure BDA0002518459030000051
3、本发明通过引入二次酰胺化反应，将反应未转化的全保护肽酸完全转化成酰胺衍生物，脱除侧链保护，部分可转化为目标肽，提高了反应转化率及原料利用率，目标肽收率增加。
附图说明
图1是Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2与Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-OH的HPLC图。
图2是Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH的HPLC图。
图3是Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb的HPLC图。
图4是Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb经三氟乙酸脱保护后的HPLC图。
图5是实施例1制备的六胜肽的质谱图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。
下面对说明书中的简写进行说明：2-Chlorotrityl Chloride Resin，其名称为2-氯三苯甲基氯树脂，取代度为1.6mmol/g；OtBu：叔丁氧基；Trt：三苯甲基；Pbf：2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰基；Dmb：2,4-二甲氧基苄胺。
分析型高效液相色谱仪为日立全自动L2000；制备型高效液相色谱仪为创新恒通LC3000，C18分析色谱柱为大连物理化学研究所4.6mm×250mm，C18制备色谱柱为成都科普生物有限公司14cm×75cm；质谱仪为Waters UPLC-液质连用。
实施例1
根据公开号为CN 110684077A、发明名称为“一种阿基瑞林的规模化合成方法”中实施例2、3的方法，以2-Chlorotrityl Chloride Resin为载体，投料树脂量为100g，固相合成全保护树脂肽Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-2-Chlorotrityl Chloride Resin，所述全保护树脂肽经切割液裂解后获得全保护肽酸Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH 222.3g，再根据公开号CN110684077A中实施例4步骤(1)的方法与氨水进行液相酰胺化反应，即将222.3g(127.1mmol)Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH溶于1800mLN,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入29.2g(254.2mmol)N-羟基丁二酰亚胺、39.4mL(254.2mmol)N,N′-二异丙基碳二亚胺，保持0～5℃反应7小时，加入127mL氨水，自然升温反应2小时，得到全保护酰胺Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品212.2g。
将212.2g(121.5mmol)Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品溶于1500mL N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入24.6g(182.2mmol)1-羟基苯并三唑、28mL(182.2mmol)N,N′-二异丙基碳二亚胺，在0～5℃下反应1小时，然后加入37mL(243mmol)2,4-二甲氧基苄胺，继续在0～5℃下反应6小时，再将反应液加入3000mL质量浓度为30％的柠檬酸水溶液中，离心析出沉淀，过滤，沉淀用饱和食盐水洗涤3次后45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2和Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。
向Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2和Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物中加入400mL三氟乙酸与40mL二氯甲烷、25mL三异丙基硅烷、20mL苯甲硫醚、15mL水的混合液，搅拌反应2.5小时脱除侧链保护基团。然后减压蒸馏脱除溶剂，向浓缩液中加入1000mL冷的乙酸乙酯，离心两次析出沉淀，过滤，滤饼用石油醚离心洗涤，得到六胜肽粗品的三氟乙酸盐和含有六胜肽未脱除Dmb组分的三氟乙酸盐混合物。
将上述三氟乙酸盐混合物用0.01mol/L pH＝4的乙酸/乙酸钠溶液溶解后，过滤，定容，上阳离子交换柱纯化(填料：sp强阳离子交换树脂)，收集所含六胜肽的洗脱液，经离子交换后的洗脱液上反相色谱制备纯化(填料为：Gel反相聚合物)，色谱程序A相0.1％乙酸/水，B相0.1％乙酸/甲醇，A相平衡上样，收集洗脱液。冷冻干燥，得到纯品六胜肽醋酸盐101.2g，即Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，其纯度大于98.3％，收率为66.7％采用质谱仪对合成产物的结构进行表征，由图5可见，所合成的产物的分子量及分子离子峰与六胜肽的分子量及分子离子峰一致，说明合成产物为六胜肽。
实施例2
在本实施例中，2-Chlorotrityl Chloride Resin的投料量为100g，按照实施例1的方法通过固相合成和裂解树脂后得到220g Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH。将220g(125.8mmol)Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH溶于1800mL N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入28.9g(251.6mmol)N-羟基丁二酰亚胺、39mL(251.6mmol)N,N′-二异丙基碳二亚胺，保持0～5℃反应7小时，加入125mL氨水，自然升温反应2小时，得到213.5g Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品。
将213.5g(122.2mmol)Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品溶于1500mL N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入33g(244.4mmol)1-羟基苯并三唑、37.8mL(244.4mmol)N,N′-二异丙基碳二亚胺，在0～5℃下反应1小时，然后加入46mL(305.5mmol)2,4-二甲氧基苄胺，继续在0～5℃下反应7小时，再将反应液加入3000mL质量浓度为40％的柠檬酸水溶液中，离心析出沉淀，过滤，沉淀用饱和食盐水洗涤3次后45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2和Ac-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。
向全保护酰胺混合物中加入400mL三氟乙酸与40mL二氯甲烷、25mL三异丙基硅烷、20mL苯甲硫醚、15mL水的混合液，搅拌反应2.5小时脱除侧链保护基团，反相制备色谱纯化，冷冻干燥，得到六胜肽醋酸盐100g，即Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2，其纯度大于97％，收率65.9％。

Claims (5)

1.一种六胜肽的规模化合成方法，其特征在于：以2-Chlorotrityl Chloride Resin为载体，固相合成全保护树脂肽Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-2-Chlorotrityl Chloride Resin，所述全保护树脂肽经切割液裂解后获得全保护肽酸Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH，所述全保护肽酸与氨水进行液相酰胺化反应，得到全保护酰胺Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品，所述粗品经二次液相酰胺化反应，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物，所得混合物经脱除保护基、反相制备色谱纯化、冷冻干燥，得到六胜肽纯品；
上述二次液相酰胺化反应的方法为：将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基碳二亚胺，并在该温度下反应40～90分钟，然后加入2,4-二甲氧基苄胺，继续在该温度下反应5～7小时，再将反应液加入1.5～3倍体积的质量浓度为20％～40％的柠檬酸水溶液中，析出沉淀，过滤，沉淀用饱和食盐水洗涤后40～45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。
2.根据权利要求1所述的六胜肽的规模化合成方法，其特征在于所述二次液相酰胺化反应的方法为：将Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基碳二亚胺，并在该温度下反应60分钟，然后加入2,4-二甲氧基苄胺，继续在该温度下反应6小时，再将反应液加入2倍体积的质量浓度为30％的柠檬酸水溶液中，析出沉淀，过滤，沉淀用饱和食盐水洗涤后40～45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。
3.根据权利要求1或2所述的六胜肽的规模化合成方法，其特征在于：Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2粗品与1-羟基苯并三唑、N,N′-二异丙基碳二亚胺、2,4-二甲氧基苄胺的摩尔比为1:1.5～2.0:1.5～2.0:2.0～3.0。
4.根据权利要求1所述的六胜肽的规模化合成方法，其特征在于所述脱除保护基的方法为：向Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH2与Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物中加入脱除侧链基团切割液，搅拌反应2～3小时，减压脱除溶剂，向浓缩液中加入乙酸乙酯，离心析出沉淀，石油醚洗涤，得到六胜肽粗品。
5.根据权利要求4所述的六胜肽的规模化合成方法，其特征在于：所述脱除侧链基团切割液为三氟乙酸、三异丙基硅烷、苯甲硫醚、水、二氯甲烷体积比为80:5:4:3:8的混合液。
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