CN111616139A - 一种自体免疫细胞的储存液及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种自体免疫细胞的储存液及其制备方法与应用，涉及细胞保存技术领，该自体免疫细胞的储存液包括聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，本发明提供的自体免疫细胞的储存液在不含有有毒性的DMSO的情况下，还同样保持细胞复苏后的高活性，使病人输入复苏后的免疫细胞，进一步减少对病人的不良反应与潜在毒性风险。
Description
技术领域
本发明涉及细胞保存技术领，具体是一种自体免疫细胞的储存液及其制备方法与应用。
背景技术
免疫细胞疗法是一种自身免疫抗癌的新型治疗方法，它是运用生物技术和生物制剂对从病人体内采集的免疫细胞进行体外培养和扩增后回输到病人体内的方法，以激发、增强机体自身免疫功能，从而达到治疗肿瘤的目的。随着免疫细胞生物学及免疫分子生物学的高速发展，体细胞免疫治疗已成为肿瘤患者放疗、化疗后辅助治疗的重要手段之一，其对于促进患者免疫系统的重建、消除残留病灶及骨髓净化都具有良好效果。
但免疫细胞的体外培养效果很大程度上取决于病人体内的免疫细胞的多少以及质量，但肿瘤病人体内的免疫细胞很来就较正常人要少，再加上放疗、化疗后免疫细胞的数量就更为稀少了，因此采集肿瘤病人体内的免疫细胞往往需要在化料之前进行，于是就产生了病人放化疗的时间和免疫细胞回输时间的冲突。
如果能够提前将免疫细胞培养好并冻存起来，待到需要时立刻复苏并回输，则可解决时间冲突的问题，并且随时可以使用，对于医生选择治疗方案相当有利。
细胞冻存过程会显著改变细胞的热力学、化学和物理环境，有伴随造成生物性损伤的危险、为了将细胞冻存、复苏过程中细胞的损伤降至最低，必须进一步优化化学和温度操作过程，但需要在冻存前加入一种或一种以上的冻存保护剂，在溶解后又将其去除。目前最常用的冻存保护剂为二甲基亚砜(DMSO)，这种物质分子量小，溶解度大，易穿透细胞，可使冰点下降，减少胞内形成冰晶的机会，从而减少冰晶对细胞的损伤。由于高浓度DMSO对细胞由毒性，还必须添加其他的液体成分，如血清、细胞培养基，以降低DMSO的浓度，减少对细胞的伤害。
在授权公告号为CN105123671B的中国专利中公开了一种细胞冻存液、应用及免疫细胞冻存方法，包括细胞培养基0.7～0.9ml/ml；非必需氨基酸8～26mg/ml；海藻糖0.04～0.1ml/ml；维生素C0.5～10mg/ml；人血白蛋白10～50mg/ml；丙二醇0.04～0.12ml/ml；二甲基亚砜0.01～0.07ml/ml；香菇多糖0.5～3mg/ml，该发明提供的冻存液中可采用较低含量的二甲基亚砜(DMSO)，因此大大降低了二甲基亚砜(DMSO)的毒性对复苏后的细胞带来的影响，但是由于还是含有二甲基亚砜(DMSO)，因此其对复苏后的细胞带来的影响并不能进一步的减弱。
发明内容
本发明的目的在于提供一种自体免疫细胞的储存液及其制备方法与应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基0.85～1.1ml/ml；聚乙二醇0.2～0.5mg/ml；谷胱甘肽0.1～0.4mg/ml；右旋糖酐0.3～0.9mg/ml；肝素纳100～300U/ml；非必须氨基酸12～22mg/ml；甲基纤维素0.2～0.6mg/ml；人血白蛋白20～45mg/ml；丙酮酸钠0.04～0.08mg/ml；羟乙基淀粉0.5～0.9mg/ml；丙二醇0.08～0.16ml/ml；葡萄糖0.6～1.3mg/ml；维生素C0.6～0.9mg/ml；α～1,4葡聚糖0.4～0.9mg/ml。
作为本发明再进一步的方案：所述的自体免疫细胞的储存液包括细胞培养基0.9～1.0ml/ml；聚乙二醇0.3～0.4mg/ml；谷胱甘肽0.2～0.3mg/ml；右旋糖酐0.5～0.7mg/ml；肝素纳150～250U/ml；非必须氨基酸16～20mg/ml；甲基纤维素0.3～0.5mg/ml；人血白蛋白25～40mg/ml；丙酮酸钠0.05～0.07mg/ml；羟乙基淀粉0.6～0.8mg/ml；丙二醇0.12～0.14ml/ml；葡萄糖0.8～1.2mg/ml；维生素C0.7～0.8mg/ml；α～1,4葡聚糖0.5～0.8mg/ml。
作为本发明再进一步的方案：所述的自体免疫细胞的储存液包括细胞培养基0.95ml/ml；聚乙二醇0.35mg/ml；谷胱甘肽0.25mg/ml；右旋糖酐0.6mg/ml；肝素纳200U/ml；非必须氨基酸18mg/ml；甲基纤维素0.4mg/ml；人血白蛋白30mg/ml；丙酮酸钠0.06mg/ml；羟乙基淀粉0.7mg/ml；丙二醇0.13ml/ml；葡萄糖1.0mg/ml；维生素C0.75mg/ml；α～1,4葡聚糖0.6mg/ml。
作为本发明再进一步的方案：所述细胞培养基为DMEM/F12培养基。
作为本发明再进一步的方案：所述甲基纤维素为甲基纤维素1500cp。
一种根据上述的自体免疫细胞的储存液在冻存免疫细胞中的应用。
一种根据上述的自体免疫细胞的储存液的制备方法，包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，2-8℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
作为本发明再进一步的方案：所述细胞培养基为DMEM/F12培养基。
作为本发明再进一步的方案：所述甲基纤维素为甲基纤维素1500cp。
作为本发明再进一步的方案：所述S2中，对各组分混合之后、预冷之前进行过滤。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提供的自体免疫细胞的储存液在不含有有毒性的DMSO的情况下，还同样保持细胞复苏后的高活性，使病人输入复苏后的免疫细胞，进一步减少对病人的不良反应与潜在毒性风险。
具体实施方式
下面结合具体实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基0.85ml/ml；聚乙二醇0.2mg/ml；谷胱甘肽0.1mg/ml；右旋糖酐0.3mg/ml；肝素纳100U/ml；非必须氨基酸12mg/ml；甲基纤维素0.2mg/ml；人血白蛋白20mg/ml；丙酮酸钠0.04mg/ml；羟乙基淀粉0.5mg/ml；丙二醇0.08ml/ml；葡萄糖0.6mg/ml；维生素C0.6mg/ml；α～1,4葡聚糖0.4mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，2℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例2：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基1.1ml/ml；聚乙二醇0.5mg/ml；谷胱甘肽0.4mg/ml；右旋糖酐0.9mg/ml；肝素纳300U/ml；非必须氨基酸22mg/ml；甲基纤维素0.6mg/ml；人血白蛋白45mg/ml；丙酮酸钠0.08mg/ml；羟乙基淀粉0.9mg/ml；丙二醇0.16ml/ml；葡萄糖1.3mg/ml；维生素C0.9mg/ml；α～1,4葡聚糖0.9mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，8℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例3：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基0.9ml/ml；聚乙二醇0.3mg/ml；谷胱甘肽0.2mg/ml；右旋糖酐0.5mg/ml；肝素纳150U/ml；非必须氨基酸16mg/ml；甲基纤维素0.3mg/ml；人血白蛋白25mg/ml；丙酮酸钠0.05mg/ml；羟乙基淀粉0.6mg/ml；丙二醇0.12ml/ml；葡萄糖0.8mg/ml；维生素C0.7mg/ml；α～1,4葡聚糖0.5mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，3℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例4：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基1.0ml/ml；聚乙二醇0.4mg/ml；谷胱甘肽0.3mg/ml；右旋糖酐0.7mg/ml；肝素纳250U/ml；非必须氨基酸20mg/ml；甲基纤维素0.5mg/ml；人血白蛋白40mg/ml；丙酮酸钠0.07mg/ml；羟乙基淀粉0.8mg/ml；丙二醇0.14ml/ml；葡萄糖1.2mg/ml；维生素C0.8mg/ml；α～1,4葡聚糖0.8mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，7℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例5：
一种自体免疫细胞的储存液包括细胞培养基0.95ml/ml；聚乙二醇0.35mg/ml；谷胱甘肽0.25mg/ml；右旋糖酐0.6mg/ml；肝素纳200U/ml；非必须氨基酸18mg/ml；甲基纤维素0.4mg/ml；人血白蛋白30mg/ml；丙酮酸钠0.06mg/ml；羟乙基淀粉0.7mg/ml；丙二醇0.13ml/ml；葡萄糖1.0mg/ml；维生素C0.75mg/ml；α～1,4葡聚糖0.6mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，5℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例6：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基1.1ml/ml；聚乙二醇0.2mg/ml；谷胱甘肽0.1mg/ml；右旋糖酐0.3mg/ml；肝素纳100U/ml；非必须氨基酸12mg/ml；甲基纤维素0.2mg/ml；人血白蛋白20mg/ml；丙酮酸钠0.04mg/ml；羟乙基淀粉0.5mg/ml；丙二醇0.08ml/ml；葡萄糖0.6mg/ml；维生素C0.6mg/ml；α～1,4葡聚糖0.4mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，6℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例7：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基0.85ml/ml；聚乙二醇0.5mg/ml；谷胱甘肽0.4mg/ml；右旋糖酐0.9mg/ml；肝素纳300U/ml；非必须氨基酸22mg/ml；甲基纤维素0.6mg/ml；人血白蛋白45mg/ml；丙酮酸钠0.08mg/ml；羟乙基淀粉0.9mg/ml；丙二醇0.16ml/ml；葡萄糖1.3mg/ml；维生素C0.9mg/ml；α～1,4葡聚糖0.9mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，5℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例8：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基1.0ml/ml；聚乙二醇0.3mg/ml；谷胱甘肽0.2mg/ml；右旋糖酐0.5mg/ml；肝素纳150U/ml；非必须氨基酸16mg/ml；甲基纤维素0.3mg/ml；人血白蛋白25mg/ml；丙酮酸钠0.05mg/ml；羟乙基淀粉0.6mg/ml；丙二醇0.12ml/ml；葡萄糖0.8mg/ml；维生素C0.7mg/ml；α～1,4葡聚糖0.5mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，4℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例9：
一种自体免疫细胞的储存液，包括细胞培养基0.9ml/ml；聚乙二醇0.4mg/ml；谷胱甘肽0.3mg/ml；右旋糖酐0.7mg/ml；肝素纳250U/ml；非必须氨基酸20mg/ml；甲基纤维素0.5mg/ml；人血白蛋白40mg/ml；丙酮酸钠0.07mg/ml；羟乙基淀粉0.8mg/ml；丙二醇0.14ml/ml；葡萄糖1.2mg/ml；维生素C0.8mg/ml；α～1,4葡聚糖0.8mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，3℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例10：
一种自体免疫细胞的储存液包括细胞培养基1.1ml/ml；聚乙二醇0.35mg/ml；谷胱甘肽0.25mg/ml；右旋糖酐0.6mg/ml；肝素纳200U/ml；非必须氨基酸18mg/ml；甲基纤维素0.4mg/ml；人血白蛋白30mg/ml；丙酮酸钠0.06mg/ml；羟乙基淀粉0.7mg/ml；丙二醇0.13ml/ml；葡萄糖1.0mg/ml；维生素C0.75mg/ml；α～1,4葡聚糖0.6mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，3℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
实施例11：
一种自体免疫细胞的储存液包括细胞培养基0.85ml/ml；聚乙二醇0.35mg/ml；谷胱甘肽0.25mg/ml；右旋糖酐0.6mg/ml；肝素纳200U/ml；非必须氨基酸18mg/ml；甲基纤维素0.4mg/ml；人血白蛋白30mg/ml；丙酮酸钠0.06mg/ml；羟乙基淀粉0.7mg/ml；丙二醇0.13ml/ml；葡萄糖1.0mg/ml；维生素C0.75mg/ml；α～1,4葡聚糖0.6mg/ml。
其制备方法包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，进行过滤，5℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
为了更好的说明采用本发明提供的自体免疫细胞的储存液冻存的免疫细胞复苏后的活性，采用授权公告号为CN105123671B、发明名称为一种细胞冻存液、应用及免疫细胞冻存方法的中国专利中公开的免疫细胞冻存方法，使用本发明提供的实施例1-11的自体免疫细胞的储存液对免疫细胞进行冻存，细胞复苏后活性如下表所示：
通过上表可知，本发明提供的自体免疫细胞的储存液在不含有有毒性的DMSO的情况下，还同样保持细胞复苏后的高活性，使病人输入复苏后的免疫细胞，进一步减少对病人的不良反应与潜在毒性风险。
本发明提及的所有文献都在本申请中应用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
Claims (10)
1.一种自体免疫细胞的储存液，其特征在于，包括:
细胞培养基0.85～1.1ml/ml；聚乙二醇0.2～0.5mg/ml；谷胱甘肽0.1～0.4mg/ml；右旋糖酐0.3～0.9mg/ml；肝素纳100～300U/ml；非必须氨基酸12～22mg/ml；甲基纤维素0.2～0.6mg/ml；人血白蛋白20～45mg/ml；丙酮酸钠0.04～0.08mg/ml；羟乙基淀粉0.5～0.9mg/ml；丙二醇0.08～0.16ml/ml；葡萄糖0.6～1.3mg/ml；维生素C0.6～0.9mg/ml；α～1,4葡聚糖0.4～0.9mg/ml。
2.根据权利要求2所述的自体免疫细胞的储存液，其特征在于，包括细胞培养基0.9～1.0ml/ml；聚乙二醇0.3～0.4mg/ml；谷胱甘肽0.2～0.3mg/ml；右旋糖酐0.5～0.7mg/ml；肝素纳150～250U/ml；非必须氨基酸16～20mg/ml；甲基纤维素0.3～0.5mg/ml；人血白蛋白25～40mg/ml；丙酮酸钠0.05～0.07mg/ml；羟乙基淀粉0.6～0.8mg/ml；丙二醇0.12～0.14ml/ml；葡萄糖0.8～1.2mg/ml；维生素C0.7～0.8mg/ml；α～1,4葡聚糖0.5～0.8mg/ml。
3.根据权利要求3所述的自体免疫细胞的储存液，其特征在于，包括细胞培养基0.95ml/ml；聚乙二醇0.35mg/ml；谷胱甘肽0.25mg/ml；右旋糖酐0.6mg/ml；肝素纳200U/ml；非必须氨基酸18mg/ml；甲基纤维素0.4mg/ml；人血白蛋白30mg/ml；丙酮酸钠0.06mg/ml；羟乙基淀粉0.7mg/ml；丙二醇0.13ml/ml；葡萄糖1.0mg/ml；维生素C0.75mg/ml；α～1,4葡聚糖0.6mg/ml。
4.根据权利要求1或2或3所述的自体免疫细胞的储存液，其特征在于，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基。
5.根据权利要求1或2或3所述的自体免疫细胞的储存液，其特征在于，所述甲基纤维素为甲基纤维素1500cp。
6.一种根据权利要求1-5任一项所述的自体免疫细胞的储存液在冻存免疫细胞中的应用。
7.一种根据权利要求1-5任一项所述的自体免疫细胞的储存液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：选择细胞培养基；
S2：根据S1中选择的细胞培养基的体积，按照上述比例称取聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖，将称取的聚乙二醇、谷胱甘肽、右旋糖酐、肝素纳、非必须氨基酸、甲基纤维素、人血白蛋白、丙酮酸钠、羟乙基淀粉、丙二醇、葡萄糖、维生素C、α～1,4葡聚糖混合均匀后，立即投入到细胞培养基中，并进行再次的混合，2-8℃预冷，即得自体免疫细胞的储存液。
8.根据权利要求7所述的自体免疫细胞的储存液的制备方法，其特征在于，所述细胞培养基为DMEM/F12培养基。
9.根据权利要求7所述的自体免疫细胞的储存液的制备方法，其特征在于，所述甲基纤维素为甲基纤维素1500cp。
10.根据权利要求7所述的自体免疫细胞的储存液的制备方法，其特征在于，所述S2中，对各组分混合之后、预冷之前进行过滤。
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| CN (1) | CN111616139A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112056309A (zh) * | 2020-11-16 | 2020-12-11 | 广州杜德生物科技有限公司 | 一种细胞保存液及其在保存脐血nk细胞中的应用 |
| CN112369408A (zh) * | 2020-11-11 | 2021-02-19 | 青岛中德华大细胞科技有限责任公司 | 一种免疫细胞储存液及其制备与应用方法 |
| CN112806354A (zh) * | 2021-01-18 | 2021-05-18 | 圣至同合(北京)生物科技有限公司 | 一种免疫细胞冻存液及其制备方法和应用 |
| CN113615681A (zh) * | 2021-08-27 | 2021-11-09 | 郑州源创吉因实业有限公司 | 一种免疫细胞的冻存液及冻存方法 |
-
2020
- 2020-06-02 CN CN202010487628.4A patent/CN111616139A/zh active Pending
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