CN111593057A - 一种增加香石竹花朵直径的基因与应用 - Google Patents

一种增加香石竹花朵直径的基因与应用 Download PDF

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CN111593057A CN202010399151.4A CN202010399151A CN111593057A CN 111593057 A CN111593057 A CN 111593057A CN 202010399151 A CN202010399151 A CN 202010399151A CN 111593057 A CN111593057 A CN 111593057A
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Abstract

本发明涉及一种增加香石竹花朵直径的基因与应用，属于植物基因工程技术领域。本发明所述的增加香石竹花朵直径的基因的RNA序列如SEQ ID NO.1所示，该基因命名为OSDLa。采用该基因增加香石竹花朵直径的方法具体为：抑制所述OSDLa基因的基因表达量，得到花朵直径增大的转基因植物。本发明首次在香石竹中发现了一个控制香石竹花朵直径的基因，该基因控制花朵直径增大的功能为植物中首次发现，为其他物种利用同源基因克隆相关基因提供了候选基因。本发明基因也可以为石竹科以及其他双子叶植物的花朵直径增大的基因研究提供依据。

Description

一种增加香石竹花朵直径的基因与应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种增加香石竹花朵直径的基因与应用。
背景技术
花卉是具有观赏价值的植物，花卉主要供观赏的部位有花色、花形、花香、花的大小、数目及花瓣数目等。花朵大小是重要的观赏性状，培育花朵大的花卉新品种是观赏植物育种的重要目标。在拟南芥中发现了一些与花朵大小相关的候选基因，但是大多数基因是在模式植物中进行研究。目前发现拟南芥HWS和CUC1基因调节细胞数量和花瓣的大小，影响细胞增殖（Gonzalez-Carranza ZH, Zhang X, Peters JL, Boltz V, Szecsi J,Bendahmane M, Roberts JA. (2017) HAWAIIAN SKIRT controls size and floralorgan number by modulating CUC1 and CUC2 expression. PloS one, 12(9)：e0185106.）。在花荵科植物的研究中，BIG BROTHER基因的表达上调可使花器官增大，花朵大小的增加主要是细胞大小的增加而不是细胞数量的变化（Landis JB, Soltis DE,Soltis PS.（2017）Comparative transcriptomic analysis of the evolution anddevelopment of flower size inSaltugilia (Polemoniaceae). Bmc Genomics,18(1):475）。
香石竹主要分布于欧洲温带以及中国大陆的福建、湖北等地，原产于地中海地区。香石竹是肯尼亚也是美洲哥伦比亚主要的出口花卉品种，在亚洲的中国、日本、韩国、马来西亚等国都有大量栽培。在欧洲，德国、匈牙利、意大利、波兰、西班牙、土耳其、英国和荷兰等国栽培的规模都很大，是世界上应用最普遍的花卉之一。香石竹既可以作为盆栽植物来观赏，也可以当做切花的材料，同时在药用方面也有比较广泛的应用。香石竹花朵大小是重要的观赏性状，有关控制香石竹花朵大小的基因还未被发现。因此，有必要提供一种调控香石竹花朵大小的基因，进而通过转基因的方法培育一些花朵大的花卉新品种。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种增加香石竹花朵直径的基因与应用。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明第一方面提供一种增加香石竹花朵直径的基因，所述的增加香石竹花朵直径基因的RNA序列如SEQ ID NO.1所示。该基因命名为OSDLa。
本发明第二方面提供含有所述的增加香石竹花朵直径的基因的表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
本发明第三方面提供所述的增加香石竹花朵直径的基因在调控植物花朵大小表型中的应用。
进一步，优选的是，所述的植物为石竹属植物。
本发明第四方面提供所述的增加香石竹花朵直径的基因在植物育种中的应用。
进一步，优选的是，所述的植物为石竹属植物。
本发明第五方面提供一种增加香石竹花朵直径的方法，包括如下步骤：
抑制所述增加香石竹花朵直径的基因的基因表达量，得到花朵增大的转基因植物。
本发明所述的抑制方法包括RNAi干扰技术和基因编缉技术，但不限于以上基因敲除方法。
本发明与现有技术相比，其有益效果为：
本发明首次在香石竹中发现了一个控制香石竹花朵大小的基因，该基因控制花朵大小的功能为植物中首次发现，为其他物种利用同源基因克隆相关基因提供了候选基因。
本发明中的基因也可以为石竹科以及其他双子叶植物的花朵增大的基因研究提供证据。
附图说明
此外所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1转基因植株和野生型基因的表达量；香石竹品种‘Nogalte’为对照，非转基因植株，其余为转基因植株；
图2转基因植株和野生型花的对比图；对比表明，转基因植株花朵明显增大；
图3阳性转基因植株的PCR检测；注，+：阳性对照，含有pJL10-OSDLa-RNAI载体质粒的PCR扩增产物；－：阴性对照，非转基因植株PCR扩增产物；H2O：水对照，以水为模板的PCR扩增产物；1~22为检测的转基因植株。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。
本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用材料或设备未注明生产厂商者，均为可以通过购买获得的常规产品。
实施例1 香石竹OSDLa基因RNAi表达载体构建
1）人工合成OSDLa基因正向及反向互补插入片段
在OSDLa基因非保守区域设计插入片段，OSDLa正向插入片断为162 bp，序列如SEQ IDNO.2所示；OSDLa反向插入片断为162 bp，序列如SEQ ID NO.3所示，DNA片断由上海捷瑞生物有限公司人工合成。
2）正向插入片段的连接
30μL 150 ng/μL PJL10的载体，载体序列为SEQ ID NO.4，1μL KpnI和1μL XhoI酶，5μL共用Buffer，加水补齐至50μL体系，放入恒温培养培养箱2-3h后，回收所需的14 kb左右的目的条带备用。
30μL 50 ng/μL待切的正向插入片段，序列如SEQ ID NO.2所示，1μL KpnI和1μLXhoI酶，5μL共用Buffer，加水补齐至50μL体系，放入恒温培养培养箱2-3h后，回收所需的150bp左右的目的条带备用；将上述回收到的片段和载体进行连接。片段和载体进行连接的反应体系如下：
片段 50ng
载体 150ng
T4 DNA ligase 5U/µL 1μL
T4 DNA ligase buffer 1.5μL
补水到总体积15 μL。
22℃连接1小时。连接液直接去转化。挑取单克隆，提取质粒，质粒提好后测序鉴定，鉴定正确的载体命名为OSDLa-FOR。
3）反向互补插入片段的连接
30μL 150ng/μL待切的含正向插入片断的PJL10表达载体OSDLa-FOR，1μL ClaI和1μLXbaI酶，5μL共用Buffer，加水补齐至50μL体系，放入恒温培养培养箱2-3h后，回收所需的14kb左右的目的条带备用。
30μL 50ng/μL待切的反向插入片段，序列如SEQ ID NO.3所示，1μL ClaI和1μLXbaI酶，5μL共用Buffer，加水补齐至50μL体系，放入恒温培养培养箱2-3h后，回收所需的150bp左右的目的条带备用；将上述回收到的片段和已酶切好的含正向插入片断的载体OSDLa-FOR进行连接。片段和载体进行连接的反应体系如下：
片段 50 ng
载体 150 ng
T4 DNA ligase 5U/µL 1 μL
T4 DNA ligase buffer 1.5 μL
补水到总体积15 μL；
22℃连接1小时。连接液直接去转化，挑取单克隆，提取质粒测序鉴定。验证正确的RNAi载体命名为pJL10-OSDLa-RNAI。
实施例2 香石竹OSDLa基因遗传转化
1）植物表达载体转化农杆菌
采用冻融法将构建好的表达载体转入农杆菌，具体操作如下：向冰上刚融化的40微升农杆菌感受态细胞中加入2µg pJL10-OSDLa-RNAI载体质粒DNA，混匀后冰上放置40min，液氮速冻5min，37 ℃水浴3min至全融，冰上放置2min，加入到1ml YEB液体培养基中（酵母提取物1g，胰蛋白胨5g，牛肉膏5g，七水硫酸镁0.5g，加水定容到1L，pH 7.0），28 ℃、200 rpm/min恢复培养3小时，5000rpm/min离心3分钟，收集菌体，均匀涂于事先加有50mg/LRif和50mg/L Kan的YEB固体培养基平板上（酵母提取物1g，胰蛋白胨5g，牛肉膏5g，七水硫酸镁0.5g，10g琼脂粉，加水定容到1L，pH7.0），28℃倒置避光培养2d。
从转化平板上随机挑取10个单菌落，分别接种于50ml含50mg/LRif和50mg/LKan的YEB液体培养基中，28℃，200rpm/min恒温振荡培养2d，取少量菌液进行PCR扩增鉴定，通过pjL10-pdk-939F（5’-gttagaaattccaatctgcttgtaa-3’，SEQ ID NO.5）和OSD1-REV-88R（5’-acggtacttggctaggttgc-3’，SEQ ID NO.6）引物检测。PCR扩增的体系及程序为：质粒50 ng，pjL10-pdk-939F（10µmol/L）和OSD1-REV-88R（10µmol/L）引物各1µL，10×PCR Buffer（Mg2+ plus）2µL，2.5 mM dNTP Mixture 1.6µL，5U/µL Taq 0.15µL，双蒸水补充至20 µL。PCR反应条件：95℃ 5min；95℃ 30s，58℃ 30s，72℃ 1min，35个循环（从步骤2到步骤4）；72℃5min。将鉴定的含目的载体阳性农杆菌与相同体积50%（体积百分比）的甘油混合均匀，置于-80℃冰箱内保存。
2）香石竹遗传转化体系
将-80℃保存的农杆菌接种到加有50mg/L Rif和50mg/L Kan的YEB固体培养基平板上，将平板在28℃倒置培养2d，待菌落长出后，挑取单菌落接种到含50mg/L Rif和50mg/L Kan的YEB液体培养基中，在28℃，200rpm/min摇床上振荡培养过夜，得到预活化菌液；再取20µL预活化菌液接种于30mL YEB液体培养基，继续在28℃，200rpm/min摇床上振荡，当OD600为0.5时，用于农杆菌浸染。
在超净工作台上，取无菌的香石竹组培苗放入体视显微镜下，用镊子小心的剥去顶端的叶片，露出茎尖；将茎尖切去生长点，然后将茎尖横切成1毫米的薄层，薄层背面朝下接种于MS+TDZ 0.3mg/L +NAA 0.1mg/L的预培养基中，培养5d（光照强度1000-2000lux），得到外植体。再浸入之前已活化备好的农杆菌菌液中30min，此过程放在摇床上，低速（30-50rpm）不断振荡以使菌液与外植体充分接触。将外植体放在灭过菌的滤纸上吸干多余的菌液，转入共培养的培养基MS+TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L+AS 30 mg/L中在24 ℃条件下暗培养4d，再转入筛选培养基MS+TDZ 0.3 mg/L+NAA 0.1 mg/L+Cef 400 mg/L+kan 80 mg/L中进行筛选培养，光照强度1000-2000lux，40天转接一次，待分化出再生芽，将再生芽转入MS+BA 0.2 mg/L+NAA 0.1 mg/L+Kan 50 mg/L增殖培养基中进行增殖筛选培养，光照强度1000-2000lux。上述所有培养基中含蔗糖30g/L，琼脂10g/L，pH为5.8。
3）香石竹阳性转基因植株的验证
pJL10-OSDLa-RNAI载体阳性转基因植株采用PCR法验证，首先提取的转基因植株DNA，通过pjL10-pdk-939F和OSD1-REV-88引物检测，引物序列如上所述。引物均扩出含目的条带的片断为RNAi载体阳性转基因再生植株。图3PCR扩增的转基因植株为22株，其中1、2、7、9、12、17、18和22扩增出目的条带的为转基因阳性植株，共8株。
实施例3 香石竹转基因阳性植株OSDLa表达和表型
采用实时定量荧光PCR，对OSDLa基因的表达进行分析，发现OSDLa基因在转基因阳性植株中的表达量下降（图1），通过构建OSDLa基因RNAi载体获得转基因植株8株并进行组培及扦插扩繁。转基因植株5-3-B1花朵平均直径7.32cm、3-1-B1平均6.89cm、15-2-A3平均7.09cm、12-2-C4平均6.65cm、12-2-C2平均7.11cm、12-2-C1平均7.33cm、1-3-A4平均7.08cm、12-2-B1平均7.23cm，而对照非转基因植株‘Noglte’花朵平均直径5.9 cm。与野生型相比花直径增加，花朵明显变大（图2）。本发明公开的内容可为研究OSDLa基因在植株中调控花瓣数量打下基础。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
序列表
SEQ ID NO.1
augccgguau ccagggauag auugucgaga ccgguagaca uaucgagccu acuaccaaau 60
gcacagcgcc gaguuaaucu uguaguagau gaaccagggu ugcgacuuag gggacuaucg 120
ucgcuaaaug cguccaucag uaaaccuagu gguagcgcua gcaggcugcg cagacgcagc 180
agucaauaua gagcgcgauu gagacaacaa cgguacuugg cuagguugcc uccugaccaa 240
gaaaaucgga caccuguggg uuuacggaau guacaaggua gacggagugu cuuaccuucu 300
uggcacccgc gaacgccucu uagggauauu acugccauug cuagggcaau agagaggaga 360
agagccgaac uucaagaaca gagacgagaa acaucuguac cugaaucaag ugcugcaucg 420
aguucucaac cugagaacga aaccaacaua ccgacuccaa cacccacgau uccuguaaaa 480
auuuuagaca gcgauguaaa agacgagauu gcgggagacu cagaauccau gaccccagag 540
aagcgacuuc uaaacucaau cgauacagug agacagguuu ggguagagga gcaagaaaaa 600
guugagaaaa cuccagccgc uaaaaaggcu gaaagagacc gaaagguucg uacauugaug 660
ucgaugcgau ga 672
SEQ ID NO.2
ctcgagaaac ctagtggtag cgctagcagg ctgcgcagac gcagcagtca atatagagcg 60
cgattgagac aacaacggta cttggctagg ttgcctcctg accaagaaaa tcggacacct 120
gtgggtttac ggaatgtaca aggtagacgg agtgtcggta cc 162
SEQ ID NO.3
atcgatgaca ctccgtctac cttgtacatt ccgtaaaccc acaggtgtcc gattttcttg 60
gtcaggaggc aacctagcca agtaccgttg ttgtctcaat cgcgctctat attgactgct 120
gcgtctgcgc agcctgctag cgctaccact aggttttcta ga 162
SEQ ID NO.4
ggggtggaag gtggagaagg agtccagaga ctggttaatg gtcgaggcca cgaccgtcag 60
acgacagcgg tgactgctcg acgtggtgat ggtgatgacg gtcgagggaa caggggtcag 120
ggtaccccaa ttggtaagga aataattatt ttcttttttc cttttagtat aaaatagtta 180
agtgatgtta attagtatga ttataataat atagttgtta taattgtgaa aaaataattt 240
ataaatatat tgtttacata aacaacatag taatgtaaaa aaatatgaca agtgatgtgt 300
aagacgaaga agataaaagt tgagagtaag tatattattt ttaatgaatt tgatcgaaca 360
tgtaagatga tatactagca ttaatatttg ttttaatcat aatagtaatt ctagctggtt 420
tgatgaatta aatatcaatg ataaaatact atagtaaaaa taagaataaa taaattaaaa 480
taatattttt ttatgattaa tagtttatta tataattaaa tatctatacc attactaaat 540
attttagttt aaaagttaat aaatattttg ttagaaattc caatctgctt gtaatttatc 600
aataaacaaa atattaaata acaagctaaa gtaacaaata atatcaaact aatagaaaca 660
gtaatctaat gtaacaaaac ataatctaat gctaatataa caaagcgcaa gatctatcat 720
tttatatagt attattttca atcaacattc ttattaattt ctaaataata cttgtagttt 780
tattaacttc taaatggatt gactattaat taaatgaatt agtcgaacat gaataaacaa 840
ggtaacatga tagatcatgt cattgtgtta tcattgatct tacatttgga ttgattacag 900
ttgggaaatt gggttcgaaa tcgatctgac ccctgttccc tcgaccgtca tcaccatcac 960
cacgtcgagc agtcaccgct gtcgtctgac ggtcgtggcc tcgaccatta accagtctct 1020
ggactccttc tccaccttcc acccctctag agtcctgctt taatgagata tgcgagacgc 1080
ctatgatcgc atgatatttg ctttcaattc tgttgtgcac gttgtaaaaa acctgagcat 1140
gtgtagctca gatccttacc gccggtttcg gttcattcta atgaatatat cacccgttac 1200
tatcgtattt ttatgaataa tattctccgt tcaatttact gattgtaccc tactacttat 1260
atgtacaata ttaaaatgaa aacaatatat tgtgctgaat aggtttatag cgacatctat 1320
gatagagcgc cacaataaca aacaattgcg ttttattatt acaaatccaa ttttaaaaaa 1380
agcggcagaa ccggtcaaac ctaaaagact gattacataa atcttattca aatttcaaaa 1440
ggccccaggg gctagtatct acgacacacc gagcggcgaa ctaataacgt tcactgaagg 1500
gaactccggt tccccgccgg cgcgcatggg tgagattcct tgaagttgag tattggccgt 1560
ccgctctacc gaaagttacg ggcaccattc aacccggtcc agcacggcgg ccgggtaacc 1620
gacttgctgc cccgagaatt atgcagcatt tttttggtgt atgtgggccc caaatgaagt 1680
gcaggtcaaa ccttgacagt gacgacaaat cgttgggcgg gtccagggcg aattttgcga 1740
caacatgtcg aggctcagca ggacctgcag gcatgcaagc tagcttacta gtgatatccc 1800
gcggccatgg cggccgggag catgcgacgt cgggcccaat tcgccctata gtgagtcgta 1860
ttacaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca 1920
acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg 1980
caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggaaat tgtaaacgtt 2040
aatgggtttc tggagtttaa tgagctaagc acatacgtca gaaaccatta ttgcgcgttc 2100
aaaagtcgcc taaggtcact atcagctagc aaatatttct tgtcaaaaat gctccactga 2160
cgttccataa attcccctcg gtatccaatt agagtctcat attcactctc aatccaaata 2220
atctgcaatg gcaattacct tatccgcaac ttctttacct atttccgccc ggatccgggc 2280
aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat 2340
cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt 2400
caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg 2460
gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag 2520
ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc 2580
tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc 2640
tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga 2700
agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga 2760
actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg 2820
cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg 2880
tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc 2940
tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc 3000
cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg 3060
gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc 3120
gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc 3180
ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccgatccaac acttacgttt 3240
gcaacgtcca agagcaaata gaccacgaac gccggaaggt tgccgcagcg tgtggattgc 3300
gtctcaattc tctcttgcag gaatgcaatg atgaatatga tactgactat gaaactttga 3360
gggaatactg cctagcaccg tcacctcata acgtgcatca tgcatgccct gacaacatgg 3420
aacatcgcta tttttctgaa gaattatgct cgttggagga tgtcgcggca attgcagcta 3480
ttgccaacat cgaactaccc ctcacgcatg cattcatcaa tattattcat gcggggaaag 3540
gcaagattaa tccaactggc aaatcatcca gcgtgattgg taacttcagt tccagcgact 3600
tgattcgttt tggtgctacc cacgttttca ataaggacga gatggtggag taaagaagga 3660
gtgcgtcgaa gcagatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt 3720
tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat 3780
taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt 3840
atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg 3900
cgcggtgtca tctatgttac tagatcgaat taattccagg cggtgaaggg caatcagctg 3960
ttgcccgtct cactggtgaa aagaaaaacc accccagtac attaaaaacg tccgcaatgt 4020
gttattaagt tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa tatatcctgc caccagccag 4080
ccaacagctc cccgaccggc agctcggcac aaaatcacca ctcgatacag gcagcccatc 4140
agtccgggac ggcgtcagcg ggagagccgt tgtaaggcgg cagactttgc tcatgttacc 4200
gatgctattc ggaagaacgg caactaagct gccgggtttg aaacacggat gatctcgcgg 4260
agggtagcat gttgattgta acgatgacag agcgttgctg cctgtgatca aatatcatct 4320
ccctcgcaga gatccgaatt atcagccttc ttattcattt ctcgcttaac cgtgacaggc 4380
tgtcgatctt gagaactatg ccgacataat aggaaatcgc tggataaagc cgctgaggaa 4440
gctgagtggc gctatttctt tagaagtgaa cgttgacgat gtcgacggat cttttccgct 4500
gcataaccct gcttcggggt cattatagcg attttttcgg tatatccatc ctttttcgca 4560
cgatatacag gattttgcca aagggttcgt gtagactttc cttggtgtat ccaacggcgt 4620
cagccgggca ggataggtga agtaggccca cccgcgagcg ggtgttcctt cttcactgtc 4680
ccttattcgc acctggcggt gctcaacggg aatcctgctc tgcgaggctg gccggctacc 4740
gccggcgtaa cagatgaggg caagcggatg gctgatgaaa ccaagccaac caggggtgat 4800
gctgccaact tactgattta gtgtatgatg gtgtttttga ggtgctccag tggcttctgt 4860
ttctatcagc tgtccctcct gttcagctac tgacggggtg gtgcgtaacg gcaaaagcac 4920
cgccggacat cagcgctatc tctgctctca ctgccgtaaa acatggcaac tgcagttcac 4980
ttacaccgct tctcaacccg gtacgcacca gaaaatcatt gatatggcca tgaatggcgt 5040
tggatgccgg gcaacagccc gcattatggg cgttggcctc aacacgattt tacgtcactt 5100
aaaaaactca ggccgcagtc ggtaacctcg cgcatacagc cgggcagtga cgtcatcgtc 5160
tgcgcggaaa tggacgaaca gtggggctat gtcggggcta aatcgcgcca gcgctggctg 5220
ttttacgcgt atgacagtct ccggaagacg gttgttgcgc acgtattcgg tgaacgcact 5280
atggcgacgc tggggcgtct tatgagcctg ctgtcaccct ttgacgtggt gatatggatg 5340
acggatggct ggccgctgta tgaatcccgc ctgaagggaa agctgcacgt aatcagcaag 5400
cgatatacgc agcgaattga gcggcataac ctgaatctga ggcagcacct ggcacggctg 5460
ggacggaagt cgctgtcgtt ctcaaaatcg gtggagctgc atgacaaagt catcgggcat 5520
tatctgaaca taaaacacta tcaataagtt ggagtcatta cccaaccagg aagggcagcc 5580
cacctatcaa ggtgtactgc cttccagacg aacgaagagc gattgaggaa aaggcggcgg 5640
cggccggcat gagcctgtcg gcctacctgc tggccgtcgg ccagggctac aaaatcacgg 5700
gcgtcgtgga ctatgagcac gtccgcgagc tggcccgcat caatggcgac ctgggccgcc 5760
tgggcggcct gctgaaactc tggctcaccg acgacccgcg cacggcgcgg ttcggtgatg 5820
ccacgatcct cgccctgctg gcgaagatcg aagagaagca ggacgagctt ggcaaggtca 5880
tgatgggcgt ggtccgcccg agggcagagc catgactttt ttagccgcta aaacggccgg 5940
ggggtgcgcg tgattgccaa gcacgtcccc atgcgctcca tcaagaagag cgacttcgcg 6000
gagctggtat tcgtgcaggg caagattcgg aataccaagt acgagaagga cggccagacg 6060
gtctacggga ccgacttcat tgccgataag gtggattatc tggacaccaa ggcaccaggc 6120
gggtcaaatc aggaataagg gcacattgcc ccggcgtgag tcggggcaat cccgcaagga 6180
gggtgaatga atcggacgtt tgaccggaag gcatacaggc aagaactgat cgacgcgggg 6240
ttttccgccg aggatgccga aaccatcgca agccgcaccg tcatgcgtgc gccccgcgaa 6300
accttccagt ccgtcggctc gatggtccag caagctacgg ccaagatcga gcgcgacagc 6360
gtgcaactgg ctccccctgc cctgcccgcg ccatcggccg ccgtggagcg ttcgcgtcgt 6420
ctcgaacagg aggcggcagg tttggcgaag tcgatgacca tcgacacgcg aggaactatg 6480
acgaccaaga agcgaaaaac cgccggcgag gacctggcaa aacaggtcag cgaggccaag 6540
caggccgcgt tgctgaaaca cacgaagcag cagatcaagg aaatgcagct ttccttgttc 6600
gatattgcgc cgtggccgga cacgatgcga gcgatgccaa acgacacggc ccgctctgcc 6660
ctgttcacca cgcgcaacaa gaaaatcccg cgcgaggcgc tgcaaaacaa ggtcattttc 6720
cacgtcaaca aggacgtgaa gatcacctac accggcgtcg agctgcgggc cgacgatgac 6780
gaactggtgt ggcagcaggt gttggagtac gcgaagcgca cccctatcgg cgagccgatc 6840
accttcacgt tctacgagct ttgccaggac ctgggctggt cgatcaatgg ccggtattac 6900
acgaaggccg aggaatgcct gtcgcgccta caggcgacgg cgatgggctt cacgtccgac 6960
cgcgttgggc acctggaatc ggtgtcgctg ctgcaccgct tccgcgtcct ggaccgtggc 7020
aagaaaacgt cccgttgcca ggtcctgatc gacgaggaaa tcgtcgtgct gtttgctggc 7080
gaccactaca cgaaattcat atgggagaag taccgcaagc tgtcgccgac ggcccgacgg 7140
atgttcgact atttcagctc gcaccgggag ccgtacccgc tcaagctgga aaccttccgc 7200
ctcatgtgcg gatcggattc cacccgcgtg aagaagtggc gcgagcaggt cggcgaagcc 7260
tgcgaagagt tgcgaggcag cggcctggtg gaacacgcct gggtcaatga tgacctggtg 7320
cattgcaaac gctagggcct tgtggggtca gttccggctg ggggttcagc agccagcgct 7380
ttactggcat ttcaggaaca agcgggcact gctcgacgca cttgcttcgc tcagtatcgc 7440
tcgggacgca cggcgcgctc tacgaactgc cgataaacag aggattaaaa ttgacaattg 7500
tgattaaggc tcagattcga cggcttggag cggccgacgt gcaggatttc cgcgagatcc 7560
gattgtcggc cctgaagaaa gctccagaga tgttcgggtc cgtttacgag cacgaggaga 7620
aaaagcccat ggaggcgttc gctgaacggt tgcgagatgc cgtggcattc ggcgcctaca 7680
tcgacggcga gatcattggg ctgtcggtct tcaaacagga ggacggcccc aaggacgctc 7740
acaaggcgca tctgtccggc gttttcgtgg agcccgaaca gcgaggccga ggggtcgccg 7800
gtatgctgct gcgggcgttg ccggcgggtt tattgctcgt gatgatcgtc cgacagattc 7860
caacgggaat ctggtggatg cgcatcttca tcctcggcgc acttaatatt tcgctattct 7920
ggagcttgtt gtttatttcg gtctaccgcc tgccgggcgg ggtcgcggcg acggtaggcg 7980
ctgtgcagcc gctgatggtc gtgttcatct ctgccgctct gctaggtagc ccgatacgat 8040
tgatggcggt cctgggggct atttgcggaa ctgcgggcgt ggcgctgttg gtgttgacac 8100
caaacgcagc gctagatcct gtcggcgtcg cagcgggcct ggcgggggcg gtttccatgg 8160
cgttcggaac cgtgctgacc cgcaagtggc aacctcccgt gcctctgctc acctttaccg 8220
cctggcaact ggcggccgga ggacttctgc tcgttccagt agctttagtg tttgatccgc 8280
caatcccgat gcctacagga accaatgttc tcggcctggc gtggctcggc ctgatcggag 8340
cgggtttaac ctacttcctt tggttccggg ggatctcgcg actcgaacct acagttgttt 8400
ccttactggg ctttctcagc cgggatggcg ctaagaagct attgccgccg atcttcatat 8460
gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc 8520
ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca 8580
ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg 8640
agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca 8700
taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa 8760
cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc 8820
tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc 8880
gctttctcaa tgctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct 8940
gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg 9000
tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag 9060
gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta 9120
cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg 9180
aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt 9240
tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatat caagaagatc ctttgatctt 9300
ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag 9360
attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat 9420
ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc 9480
tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat 9540
aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc 9600
acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag 9660
aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aaacaagtgg cagcaacgga 9720
ttcgcaaacc tgtcacgcct tttgtgccaa aagccgcgcc aggtttgcga tccgctgtgc 9780
caggcgttag gcgtcatatg aagatttcgg tgatccctga gcaggtggcg gaaacattgg 9840
atgctgagaa ccatttcatt gttcgtgaag tgttcgatgt gcacctatcc gaccaaggct 9900
ttgaactatc taccagaagt gtgagcccct accggaagga ttacatctcg gatgatgact 9960
ctgatgaaga ctctgcttgc tatggcgcat tcatcgacca agagcttgtc gggaagattg 10020
aactcaactc aacatggaac gatctagcct ctatcgaaca cattgttgtg tcgcacacgc 10080
accgaggcaa aggagtcgcg cacagtctca tcgaatttgc gaaaaagtgg gcactaagca 10140
gacagctcct tggcatacga ttagagacac aaacgaacaa tgtacctgcc tgcaatttgt 10200
acgcaaaatg tggctttact ctcggcggca ttgacctgtt cacgtataaa actagacctc 10260
aagtctcgaa cgaaacagcg atgtactggt actggttctc gggagcacag gatgacgcct 10320
aacaattcat tcaagccgac accgcttcgc ggcgcggctt aattcaggag ttaaacatca 10380
tgagggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg 10440
agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca gtggatggcg 10500
gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa 10560
caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg 10620
agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt 10680
atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta 10740
tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac 10800
atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg 10860
atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg 10920
gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca 10980
aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc 11040
agcccgtcat acttgaagct aggcaggctt atcttggaca agaagatcgc ttggcctcgc 11100
gcgcagatca gttggaagaa tttgttcact acgtgaaagg cgagatcacc aaggtagtcg 11160
gcaaataatg tctaacaatt cgttcaagcc gacgccgctt cgcggcgcgg cttaactcaa 11220
gcgttagaga gctggggaag actatgcgcg atctgttgaa ggtggttcta agcctcgtac 11280
ttgcgatggc atcggggcag gcacttgctg acctgccaat tgttttagtg gatgaagctc 11340
gtcttcccta tgactactcc ccatccaact acgacatttc tccaagcaac tacgacaact 11400
ccataagcaa ttacgacaat agtccatcaa attacgacaa ctctgagagc aactacgata 11460
atagttcatc caattacgac aatagtcgca acggaaatcg taggcttata tatagcgcaa 11520
atgggtctcg cactttcgcc ggctactacg tcattgccaa caatgggaca acgaacttct 11580
tttccacatc tggcaaaagg atgttctaca ccccaaaagg ggggcgcggc gtctatggcg 11640
gcaaagatgg gagcttctgc ggggcattgg tcgtcataaa tggccaattt tcgcttgccc 11700
tgacagataa cggcctgaag atcatgtatc taagcaacta gcctgctctc taataaaatg 11760
ttaggagctt ggctgccatt tttggggtga ggccgttcgc ggccgagggg cgcagcccct 11820
ggggggatgg gaggcccgcg ttagcgggcc gggagggttc gagaaggggg ggcacccccc 11880
ttcggcgtgc gcggtcacgc gccagggcgc agccctggtt aaaaacaagg tttataaata 11940
ttggtttaaa agcaggttaa aagacaggtt agcggtggcc gaaaaacggg cggaaaccct 12000
tgcaaatgct ggattttctg cctgtggaca gcccctcaaa tgtcaatagg tgcgcccctc 12060
atctgtcagc actctgcccc tcaagtgtca aggatcgcgc ccctcatctg tcagtagtcg 12120
cgcccctcaa gtgtcaatac cgcagggcac ttatccccag gcttgtccac atcatctgtg 12180
ggaaactcgc gtaaaatcag gcgttttcgc cgatttgcga ggctggccag ctccacgtcg 12240
ccggccgaaa tcgagcctgc ccctcatctg tcaacgccgc gccgggtgag tcggcccctc 12300
aagtgtcaac gtccgcccct catctgtcag tgagggccaa gttttccgcg aggtatccac 12360
aacgccggcg gccggccgcg gtgtctcgca cacggcttcg acggcgtttc tggcgcgttt 12420
gcagggccat agacggccgc cagcccagcg gcgagggcaa ccagcccggt gagcgtcgga 12480
aagggtcgac atcttgctgc gttcggatat tttcgtggag ttcccgccac agacccggat 12540
tgaaggcgag atccagcaac tcgcgccaga tcatcctgtg acggaacttt ggcgcgtgat 12600
gactggccag gacgtcggcc gaaagagcga caagcagatc acgattttcg acagcgtcgg 12660
atttgcgatc gaggattttt cggcgctgcg ctacgtccgc gaccgcgttg agggatcaag 12720
ccacagcagc ccactcgacc ttctagccga cccagacgag ccaagggatc tttttggaat 12780
gctgctccgt cgtcaggctt tccgacgttt gggtggttga acagaagtca ttatcgtacg 12840
gaatgccagc actcccgagg ggaaccctgt ggttggcatg cacatacaaa tggacgaacg 12900
gataaacctt ttcacgccct tttaaatatc cgttattcta ataaacgctc ttttctctta 12960
ggtttacccg ccaatatatc ctgtcaaaca ctgatagttt aaactgaagg cgggaaacga 13020
caatctgatc atgagcggag aattaaggga gtcacgttat gacccccgcc gatgacgcgg 13080
gacaagccgt tttacgtttg gaactgacag aaccgcaacg attgaaggag ccactcagcc 13140
ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac 13200
aggtttcccg actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact 13260
cattaggcac cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg 13320
agcggataac aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctatttagg 13380
tgacactata gaatactcaa gctatgcatc caacgcgttg ggagctcgtc gagcggccgc 13440
tcgacgaatt aattccaatc ccacaaaaat ctgagcttaa cagcacagtt gctcctctca 13500
gagcagaatc gggtattcaa caccctcata tcaactacta cgttgtgtat aacggtccac 13560
atgccggtat atacgatgac tggggttgta caaaggcggc aacaaacggc gttcccggag 13620
ttgcacacaa gaaatttgcc actattacag aggcaagagc agcagctgac gcgtacacaa 13680
caagtcagca aacagacagg ttgaacttca tccccaaagg agaagctcaa ctcaagccca 13740
agagctttgc taaggcccta acaagcccac caaagcaaaa agcccactgg ctcacgctag 13800
gaaccaaaag gcccagcagt gatccagccc caaaagagat ctcctttgcc ccggagatta 13860
caatggacga tttcctctat ctttacgatc taggaaggaa gttcgaaggt gaaggtgacg 13920
acactatgtt caccactgat aatgagaagg ttagcctctt caatttcaga aagaatgctg 13980
acccacagat ggttagagag gcctacgcag caggtctcat caagacgatc tacccgagta 14040
acaatctcca ggagatcaaa taccttccca agaaggttaa agatgcagtc aaaagattca 14100
ggactaattg catcaagaac acagagaaag acatatttct caagatcaga agtactattc 14160
cagtatggac gattcaaggc ttgcttcata aaccaaggca agtaatagag attggagtct 14220
ctaaaaaggt agttcctact gaatctaagg ccatgcatgg agtctaagat tcaaatcgag 14280
gatctaacag aactcgccgt gaagactggc gaacagttca tacagagtct tttacgactc 14340
aatgacaaga agaaaatctt cgtcaacatg gtggagcacg acactctggt ctactccaaa 14400
aatgtcaaag atacagtctc agaagaccaa agggctattg agacttttca acaaaggata 14460
atttcgggaa acctcctcgg attccattgc ccagctatct gtcacttcat cgaaaggaca 14520
gtagaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggctatcatt 14580
caagatctct ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg 14640
gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga catctccact 14700
gacgtaaggg atgacgcaca atcccactat ccttcgcaag acccttcctc tatataagga 14760
agttcatttc atttggagag gacacgctcg ag 14792
SEQ ID NO.5
gttagaaatt ccaatctgct tgtaa 25
SEQ ID NO.6
acggtacttg gctaggttgc 20
序列表
<110> 云南中医药大学
云南省农业科学院花卉研究所
<120> 一种增加香石竹花朵直径的基因与应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 672
<212> RNA
<213> 人工序列()
<400> 1
augccgguau ccagggauag auugucgaga ccgguagaca uaucgagccu acuaccaaau 60
gcacagcgcc gaguuaaucu uguaguagau gaaccagggu ugcgacuuag gggacuaucg 120
ucgcuaaaug cguccaucag uaaaccuagu gguagcgcua gcaggcugcg cagacgcagc 180
agucaauaua gagcgcgauu gagacaacaa cgguacuugg cuagguugcc uccugaccaa 240
gaaaaucgga caccuguggg uuuacggaau guacaaggua gacggagugu cuuaccuucu 300
uggcacccgc gaacgccucu uagggauauu acugccauug cuagggcaau agagaggaga 360
agagccgaac uucaagaaca gagacgagaa acaucuguac cugaaucaag ugcugcaucg 420
aguucucaac cugagaacga aaccaacaua ccgacuccaa cacccacgau uccuguaaaa 480
auuuuagaca gcgauguaaa agacgagauu gcgggagacu cagaauccau gaccccagag 540
aagcgacuuc uaaacucaau cgauacagug agacagguuu ggguagagga gcaagaaaaa 600
guugagaaaa cuccagccgc uaaaaaggcu gaaagagacc gaaagguucg uacauugaug 660
ucgaugcgau ga 672
<210> 2
<211> 162
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 2
ctcgagaaac ctagtggtag cgctagcagg ctgcgcagac gcagcagtca atatagagcg 60
cgattgagac aacaacggta cttggctagg ttgcctcctg accaagaaaa tcggacacct 120
gtgggtttac ggaatgtaca aggtagacgg agtgtcggta cc 162
<210> 3
<211> 162
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 3
atcgatgaca ctccgtctac cttgtacatt ccgtaaaccc acaggtgtcc gattttcttg 60
gtcaggaggc aacctagcca agtaccgttg ttgtctcaat cgcgctctat attgactgct 120
gcgtctgcgc agcctgctag cgctaccact aggttttcta ga 162
<210> 4
<211> 14792
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 4
ggggtggaag gtggagaagg agtccagaga ctggttaatg gtcgaggcca cgaccgtcag 60
acgacagcgg tgactgctcg acgtggtgat ggtgatgacg gtcgagggaa caggggtcag 120
ggtaccccaa ttggtaagga aataattatt ttcttttttc cttttagtat aaaatagtta 180
agtgatgtta attagtatga ttataataat atagttgtta taattgtgaa aaaataattt 240
ataaatatat tgtttacata aacaacatag taatgtaaaa aaatatgaca agtgatgtgt 300
aagacgaaga agataaaagt tgagagtaag tatattattt ttaatgaatt tgatcgaaca 360
tgtaagatga tatactagca ttaatatttg ttttaatcat aatagtaatt ctagctggtt 420
tgatgaatta aatatcaatg ataaaatact atagtaaaaa taagaataaa taaattaaaa 480
taatattttt ttatgattaa tagtttatta tataattaaa tatctatacc attactaaat 540
attttagttt aaaagttaat aaatattttg ttagaaattc caatctgctt gtaatttatc 600
aataaacaaa atattaaata acaagctaaa gtaacaaata atatcaaact aatagaaaca 660
gtaatctaat gtaacaaaac ataatctaat gctaatataa caaagcgcaa gatctatcat 720
tttatatagt attattttca atcaacattc ttattaattt ctaaataata cttgtagttt 780
tattaacttc taaatggatt gactattaat taaatgaatt agtcgaacat gaataaacaa 840
ggtaacatga tagatcatgt cattgtgtta tcattgatct tacatttgga ttgattacag 900
ttgggaaatt gggttcgaaa tcgatctgac ccctgttccc tcgaccgtca tcaccatcac 960
cacgtcgagc agtcaccgct gtcgtctgac ggtcgtggcc tcgaccatta accagtctct 1020
ggactccttc tccaccttcc acccctctag agtcctgctt taatgagata tgcgagacgc 1080
ctatgatcgc atgatatttg ctttcaattc tgttgtgcac gttgtaaaaa acctgagcat 1140
gtgtagctca gatccttacc gccggtttcg gttcattcta atgaatatat cacccgttac 1200
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gatagagcgc cacaataaca aacaattgcg ttttattatt acaaatccaa ttttaaaaaa 1380
agcggcagaa ccggtcaaac ctaaaagact gattacataa atcttattca aatttcaaaa 1440
ggccccaggg gctagtatct acgacacacc gagcggcgaa ctaataacgt tcactgaagg 1500
gaactccggt tccccgccgg cgcgcatggg tgagattcct tgaagttgag tattggccgt 1560
ccgctctacc gaaagttacg ggcaccattc aacccggtcc agcacggcgg ccgggtaacc 1620
gacttgctgc cccgagaatt atgcagcatt tttttggtgt atgtgggccc caaatgaagt 1680
gcaggtcaaa ccttgacagt gacgacaaat cgttgggcgg gtccagggcg aattttgcga 1740
caacatgtcg aggctcagca ggacctgcag gcatgcaagc tagcttacta gtgatatccc 1800
gcggccatgg cggccgggag catgcgacgt cgggcccaat tcgccctata gtgagtcgta 1860
ttacaattca ctggccgtcg ttttacaacg tcgtgactgg gaaaaccctg gcgttaccca 1920
acttaatcgc cttgcagcac atcccccttt cgccagctgg cgtaatagcg aagaggcccg 1980
caccgatcgc ccttcccaac agttgcgcag cctgaatggc gaatggaaat tgtaaacgtt 2040
aatgggtttc tggagtttaa tgagctaagc acatacgtca gaaaccatta ttgcgcgttc 2100
aaaagtcgcc taaggtcact atcagctagc aaatatttct tgtcaaaaat gctccactga 2160
cgttccataa attcccctcg gtatccaatt agagtctcat attcactctc aatccaaata 2220
atctgcaatg gcaattacct tatccgcaac ttctttacct atttccgccc ggatccgggc 2280
aggttctccg gccgcttggg tggagaggct attcggctat gactgggcac aacagacaat 2340
cggctgctct gatgccgccg tgttccggct gtcagcgcag gggcgcccgg ttctttttgt 2400
caagaccgac ctgtccggtg ccctgaatga actgcaggac gaggcagcgc ggctatcgtg 2460
gctggccacg acgggcgttc cttgcgcagc tgtgctcgac gttgtcactg aagcgggaag 2520
ggactggctg ctattgggcg aagtgccggg gcaggatctc ctgtcatctc accttgctcc 2580
tgccgagaaa gtatccatca tggctgatgc aatgcggcgg ctgcatacgc ttgatccggc 2640
tacctgccca ttcgaccacc aagcgaaaca tcgcatcgag cgagcacgta ctcggatgga 2700
agccggtctt gtcgatcagg atgatctgga cgaagagcat caggggctcg cgccagccga 2760
actgttcgcc aggctcaagg cgcgcatgcc cgacggcgag gatctcgtcg tgacccatgg 2820
cgatgcctgc ttgccgaata tcatggtgga aaatggccgc ttttctggat tcatcgactg 2880
tggccggctg ggtgtggcgg accgctatca ggacatagcg ttggctaccc gtgatattgc 2940
tgaagagctt ggcggcgaat gggctgaccg cttcctcgtg ctttacggta tcgccgctcc 3000
cgattcgcag cgcatcgcct tctatcgcct tcttgacgag ttcttctgag cgggactctg 3060
gggttcgaaa tgaccgacca agcgacgccc aacctgccat cacgagattt cgattccacc 3120
gccgccttct atgaaaggtt gggcttcgga atcgttttcc gggacgccgg ctggatgatc 3180
ctccagcgcg gggatctcat gctggagttc ttcgcccacc ccgatccaac acttacgttt 3240
gcaacgtcca agagcaaata gaccacgaac gccggaaggt tgccgcagcg tgtggattgc 3300
gtctcaattc tctcttgcag gaatgcaatg atgaatatga tactgactat gaaactttga 3360
gggaatactg cctagcaccg tcacctcata acgtgcatca tgcatgccct gacaacatgg 3420
aacatcgcta tttttctgaa gaattatgct cgttggagga tgtcgcggca attgcagcta 3480
ttgccaacat cgaactaccc ctcacgcatg cattcatcaa tattattcat gcggggaaag 3540
gcaagattaa tccaactggc aaatcatcca gcgtgattgg taacttcagt tccagcgact 3600
tgattcgttt tggtgctacc cacgttttca ataaggacga gatggtggag taaagaagga 3660
gtgcgtcgaa gcagatcgtt caaacatttg gcaataaagt ttcttaagat tgaatcctgt 3720
tgccggtctt gcgatgatta tcatataatt tctgttgaat tacgttaagc atgtaataat 3780
taacatgtaa tgcatgacgt tatttatgag atgggttttt atgattagag tcccgcaatt 3840
atacatttaa tacgcgatag aaaacaaaat atagcgcgca aactaggata aattatcgcg 3900
cgcggtgtca tctatgttac tagatcgaat taattccagg cggtgaaggg caatcagctg 3960
ttgcccgtct cactggtgaa aagaaaaacc accccagtac attaaaaacg tccgcaatgt 4020
gttattaagt tgtctaagcg tcaatttgtt tacaccacaa tatatcctgc caccagccag 4080
ccaacagctc cccgaccggc agctcggcac aaaatcacca ctcgatacag gcagcccatc 4140
agtccgggac ggcgtcagcg ggagagccgt tgtaaggcgg cagactttgc tcatgttacc 4200
gatgctattc ggaagaacgg caactaagct gccgggtttg aaacacggat gatctcgcgg 4260
agggtagcat gttgattgta acgatgacag agcgttgctg cctgtgatca aatatcatct 4320
ccctcgcaga gatccgaatt atcagccttc ttattcattt ctcgcttaac cgtgacaggc 4380
tgtcgatctt gagaactatg ccgacataat aggaaatcgc tggataaagc cgctgaggaa 4440
gctgagtggc gctatttctt tagaagtgaa cgttgacgat gtcgacggat cttttccgct 4500
gcataaccct gcttcggggt cattatagcg attttttcgg tatatccatc ctttttcgca 4560
cgatatacag gattttgcca aagggttcgt gtagactttc cttggtgtat ccaacggcgt 4620
cagccgggca ggataggtga agtaggccca cccgcgagcg ggtgttcctt cttcactgtc 4680
ccttattcgc acctggcggt gctcaacggg aatcctgctc tgcgaggctg gccggctacc 4740
gccggcgtaa cagatgaggg caagcggatg gctgatgaaa ccaagccaac caggggtgat 4800
gctgccaact tactgattta gtgtatgatg gtgtttttga ggtgctccag tggcttctgt 4860
ttctatcagc tgtccctcct gttcagctac tgacggggtg gtgcgtaacg gcaaaagcac 4920
cgccggacat cagcgctatc tctgctctca ctgccgtaaa acatggcaac tgcagttcac 4980
ttacaccgct tctcaacccg gtacgcacca gaaaatcatt gatatggcca tgaatggcgt 5040
tggatgccgg gcaacagccc gcattatggg cgttggcctc aacacgattt tacgtcactt 5100
aaaaaactca ggccgcagtc ggtaacctcg cgcatacagc cgggcagtga cgtcatcgtc 5160
tgcgcggaaa tggacgaaca gtggggctat gtcggggcta aatcgcgcca gcgctggctg 5220
ttttacgcgt atgacagtct ccggaagacg gttgttgcgc acgtattcgg tgaacgcact 5280
atggcgacgc tggggcgtct tatgagcctg ctgtcaccct ttgacgtggt gatatggatg 5340
acggatggct ggccgctgta tgaatcccgc ctgaagggaa agctgcacgt aatcagcaag 5400
cgatatacgc agcgaattga gcggcataac ctgaatctga ggcagcacct ggcacggctg 5460
ggacggaagt cgctgtcgtt ctcaaaatcg gtggagctgc atgacaaagt catcgggcat 5520
tatctgaaca taaaacacta tcaataagtt ggagtcatta cccaaccagg aagggcagcc 5580
cacctatcaa ggtgtactgc cttccagacg aacgaagagc gattgaggaa aaggcggcgg 5640
cggccggcat gagcctgtcg gcctacctgc tggccgtcgg ccagggctac aaaatcacgg 5700
gcgtcgtgga ctatgagcac gtccgcgagc tggcccgcat caatggcgac ctgggccgcc 5760
tgggcggcct gctgaaactc tggctcaccg acgacccgcg cacggcgcgg ttcggtgatg 5820
ccacgatcct cgccctgctg gcgaagatcg aagagaagca ggacgagctt ggcaaggtca 5880
tgatgggcgt ggtccgcccg agggcagagc catgactttt ttagccgcta aaacggccgg 5940
ggggtgcgcg tgattgccaa gcacgtcccc atgcgctcca tcaagaagag cgacttcgcg 6000
gagctggtat tcgtgcaggg caagattcgg aataccaagt acgagaagga cggccagacg 6060
gtctacggga ccgacttcat tgccgataag gtggattatc tggacaccaa ggcaccaggc 6120
gggtcaaatc aggaataagg gcacattgcc ccggcgtgag tcggggcaat cccgcaagga 6180
gggtgaatga atcggacgtt tgaccggaag gcatacaggc aagaactgat cgacgcgggg 6240
ttttccgccg aggatgccga aaccatcgca agccgcaccg tcatgcgtgc gccccgcgaa 6300
accttccagt ccgtcggctc gatggtccag caagctacgg ccaagatcga gcgcgacagc 6360
gtgcaactgg ctccccctgc cctgcccgcg ccatcggccg ccgtggagcg ttcgcgtcgt 6420
ctcgaacagg aggcggcagg tttggcgaag tcgatgacca tcgacacgcg aggaactatg 6480
acgaccaaga agcgaaaaac cgccggcgag gacctggcaa aacaggtcag cgaggccaag 6540
caggccgcgt tgctgaaaca cacgaagcag cagatcaagg aaatgcagct ttccttgttc 6600
gatattgcgc cgtggccgga cacgatgcga gcgatgccaa acgacacggc ccgctctgcc 6660
ctgttcacca cgcgcaacaa gaaaatcccg cgcgaggcgc tgcaaaacaa ggtcattttc 6720
cacgtcaaca aggacgtgaa gatcacctac accggcgtcg agctgcgggc cgacgatgac 6780
gaactggtgt ggcagcaggt gttggagtac gcgaagcgca cccctatcgg cgagccgatc 6840
accttcacgt tctacgagct ttgccaggac ctgggctggt cgatcaatgg ccggtattac 6900
acgaaggccg aggaatgcct gtcgcgccta caggcgacgg cgatgggctt cacgtccgac 6960
cgcgttgggc acctggaatc ggtgtcgctg ctgcaccgct tccgcgtcct ggaccgtggc 7020
aagaaaacgt cccgttgcca ggtcctgatc gacgaggaaa tcgtcgtgct gtttgctggc 7080
gaccactaca cgaaattcat atgggagaag taccgcaagc tgtcgccgac ggcccgacgg 7140
atgttcgact atttcagctc gcaccgggag ccgtacccgc tcaagctgga aaccttccgc 7200
ctcatgtgcg gatcggattc cacccgcgtg aagaagtggc gcgagcaggt cggcgaagcc 7260
tgcgaagagt tgcgaggcag cggcctggtg gaacacgcct gggtcaatga tgacctggtg 7320
cattgcaaac gctagggcct tgtggggtca gttccggctg ggggttcagc agccagcgct 7380
ttactggcat ttcaggaaca agcgggcact gctcgacgca cttgcttcgc tcagtatcgc 7440
tcgggacgca cggcgcgctc tacgaactgc cgataaacag aggattaaaa ttgacaattg 7500
tgattaaggc tcagattcga cggcttggag cggccgacgt gcaggatttc cgcgagatcc 7560
gattgtcggc cctgaagaaa gctccagaga tgttcgggtc cgtttacgag cacgaggaga 7620
aaaagcccat ggaggcgttc gctgaacggt tgcgagatgc cgtggcattc ggcgcctaca 7680
tcgacggcga gatcattggg ctgtcggtct tcaaacagga ggacggcccc aaggacgctc 7740
acaaggcgca tctgtccggc gttttcgtgg agcccgaaca gcgaggccga ggggtcgccg 7800
gtatgctgct gcgggcgttg ccggcgggtt tattgctcgt gatgatcgtc cgacagattc 7860
caacgggaat ctggtggatg cgcatcttca tcctcggcgc acttaatatt tcgctattct 7920
ggagcttgtt gtttatttcg gtctaccgcc tgccgggcgg ggtcgcggcg acggtaggcg 7980
ctgtgcagcc gctgatggtc gtgttcatct ctgccgctct gctaggtagc ccgatacgat 8040
tgatggcggt cctgggggct atttgcggaa ctgcgggcgt ggcgctgttg gtgttgacac 8100
caaacgcagc gctagatcct gtcggcgtcg cagcgggcct ggcgggggcg gtttccatgg 8160
cgttcggaac cgtgctgacc cgcaagtggc aacctcccgt gcctctgctc acctttaccg 8220
cctggcaact ggcggccgga ggacttctgc tcgttccagt agctttagtg tttgatccgc 8280
caatcccgat gcctacagga accaatgttc tcggcctggc gtggctcggc ctgatcggag 8340
cgggtttaac ctacttcctt tggttccggg ggatctcgcg actcgaacct acagttgttt 8400
ccttactggg ctttctcagc cgggatggcg ctaagaagct attgccgccg atcttcatat 8460
gcggtgtgaa ataccgcaca gatgcgtaag gagaaaatac cgcatcaggc gctcttccgc 8520
ttcctcgctc actgactcgc tgcgctcggt cgttcggctg cggcgagcgg tatcagctca 8580
ctcaaaggcg gtaatacggt tatccacaga atcaggggat aacgcaggaa agaacatgtg 8640
agcaaaaggc cagcaaaagg ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca 8700
taggctccgc ccccctgacg agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa 8760
cccgacagga ctataaagat accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc 8820
tgttccgacc ctgccgctta ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc 8880
gctttctcaa tgctcacgct gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct 8940
gggctgtgtg cacgaacccc ccgttcagcc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg 9000
tcttgagtcc aacccggtaa gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag 9060
gattagcaga gcgaggtatg taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta 9120
cggctacact agaaggacag tatttggtat ctgcgctctg ctgaagccag ttaccttcgg 9180
aaaaagagtt ggtagctctt gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt 9240
tgtttgcaag cagcagatta cgcgcagaaa aaaaggatat caagaagatc ctttgatctt 9300
ttctacgggg tctgacgctc agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcatgag 9360
attatcaaaa aggatcttca cctagatcct tttaaattaa aaatgaagtt ttaaatcaat 9420
ctaaagtata tatgagtaaa cttggtctga cagttaccaa tgcttaatca gtgaggcacc 9480
tatctcagcg atctgtctat ttcgttcatc catagttgcc tgactccccg tcgtgtagat 9540
aactacgata cgggagggct taccatctgg ccccagtgct gcaatgatac cgcgagaccc 9600
acgctcaccg gctccagatt tatcagcaat aaaccagcca gccggaaggg ccgagcgcag 9660
aagtggtcct gcaactttat ccgcctccat ccagtctatt aaacaagtgg cagcaacgga 9720
ttcgcaaacc tgtcacgcct tttgtgccaa aagccgcgcc aggtttgcga tccgctgtgc 9780
caggcgttag gcgtcatatg aagatttcgg tgatccctga gcaggtggcg gaaacattgg 9840
atgctgagaa ccatttcatt gttcgtgaag tgttcgatgt gcacctatcc gaccaaggct 9900
ttgaactatc taccagaagt gtgagcccct accggaagga ttacatctcg gatgatgact 9960
ctgatgaaga ctctgcttgc tatggcgcat tcatcgacca agagcttgtc gggaagattg 10020
aactcaactc aacatggaac gatctagcct ctatcgaaca cattgttgtg tcgcacacgc 10080
accgaggcaa aggagtcgcg cacagtctca tcgaatttgc gaaaaagtgg gcactaagca 10140
gacagctcct tggcatacga ttagagacac aaacgaacaa tgtacctgcc tgcaatttgt 10200
acgcaaaatg tggctttact ctcggcggca ttgacctgtt cacgtataaa actagacctc 10260
aagtctcgaa cgaaacagcg atgtactggt actggttctc gggagcacag gatgacgcct 10320
aacaattcat tcaagccgac accgcttcgc ggcgcggctt aattcaggag ttaaacatca 10380
tgagggaagc ggtgatcgcc gaagtatcga ctcaactatc agaggtagtt ggcgtcatcg 10440
agcgccatct cgaaccgacg ttgctggccg tacatttgta cggctccgca gtggatggcg 10500
gcctgaagcc acacagtgat attgatttgc tggttacggt gaccgtaagg cttgatgaaa 10560
caacgcggcg agctttgatc aacgaccttt tggaaacttc ggcttcccct ggagagagcg 10620
agattctccg cgctgtagaa gtcaccattg ttgtgcacga cgacatcatt ccgtggcgtt 10680
atccagctaa gcgcgaactg caatttggag aatggcagcg caatgacatt cttgcaggta 10740
tcttcgagcc agccacgatc gacattgatc tggctatctt gctgacaaaa gcaagagaac 10800
atagcgttgc cttggtaggt ccagcggcgg aggaactctt tgatccggtt cctgaacagg 10860
atctatttga ggcgctaaat gaaaccttaa cgctatggaa ctcgccgccc gactgggctg 10920
gcgatgagcg aaatgtagtg cttacgttgt cccgcatttg gtacagcgca gtaaccggca 10980
aaatcgcgcc gaaggatgtc gctgccgact gggcaatgga gcgcctgccg gcccagtatc 11040
agcccgtcat acttgaagct aggcaggctt atcttggaca agaagatcgc ttggcctcgc 11100
gcgcagatca gttggaagaa tttgttcact acgtgaaagg cgagatcacc aaggtagtcg 11160
gcaaataatg tctaacaatt cgttcaagcc gacgccgctt cgcggcgcgg cttaactcaa 11220
gcgttagaga gctggggaag actatgcgcg atctgttgaa ggtggttcta agcctcgtac 11280
ttgcgatggc atcggggcag gcacttgctg acctgccaat tgttttagtg gatgaagctc 11340
gtcttcccta tgactactcc ccatccaact acgacatttc tccaagcaac tacgacaact 11400
ccataagcaa ttacgacaat agtccatcaa attacgacaa ctctgagagc aactacgata 11460
atagttcatc caattacgac aatagtcgca acggaaatcg taggcttata tatagcgcaa 11520
atgggtctcg cactttcgcc ggctactacg tcattgccaa caatgggaca acgaacttct 11580
tttccacatc tggcaaaagg atgttctaca ccccaaaagg ggggcgcggc gtctatggcg 11640
gcaaagatgg gagcttctgc ggggcattgg tcgtcataaa tggccaattt tcgcttgccc 11700
tgacagataa cggcctgaag atcatgtatc taagcaacta gcctgctctc taataaaatg 11760
ttaggagctt ggctgccatt tttggggtga ggccgttcgc ggccgagggg cgcagcccct 11820
ggggggatgg gaggcccgcg ttagcgggcc gggagggttc gagaaggggg ggcacccccc 11880
ttcggcgtgc gcggtcacgc gccagggcgc agccctggtt aaaaacaagg tttataaata 11940
ttggtttaaa agcaggttaa aagacaggtt agcggtggcc gaaaaacggg cggaaaccct 12000
tgcaaatgct ggattttctg cctgtggaca gcccctcaaa tgtcaatagg tgcgcccctc 12060
atctgtcagc actctgcccc tcaagtgtca aggatcgcgc ccctcatctg tcagtagtcg 12120
cgcccctcaa gtgtcaatac cgcagggcac ttatccccag gcttgtccac atcatctgtg 12180
ggaaactcgc gtaaaatcag gcgttttcgc cgatttgcga ggctggccag ctccacgtcg 12240
ccggccgaaa tcgagcctgc ccctcatctg tcaacgccgc gccgggtgag tcggcccctc 12300
aagtgtcaac gtccgcccct catctgtcag tgagggccaa gttttccgcg aggtatccac 12360
aacgccggcg gccggccgcg gtgtctcgca cacggcttcg acggcgtttc tggcgcgttt 12420
gcagggccat agacggccgc cagcccagcg gcgagggcaa ccagcccggt gagcgtcgga 12480
aagggtcgac atcttgctgc gttcggatat tttcgtggag ttcccgccac agacccggat 12540
tgaaggcgag atccagcaac tcgcgccaga tcatcctgtg acggaacttt ggcgcgtgat 12600
gactggccag gacgtcggcc gaaagagcga caagcagatc acgattttcg acagcgtcgg 12660
atttgcgatc gaggattttt cggcgctgcg ctacgtccgc gaccgcgttg agggatcaag 12720
ccacagcagc ccactcgacc ttctagccga cccagacgag ccaagggatc tttttggaat 12780
gctgctccgt cgtcaggctt tccgacgttt gggtggttga acagaagtca ttatcgtacg 12840
gaatgccagc actcccgagg ggaaccctgt ggttggcatg cacatacaaa tggacgaacg 12900
gataaacctt ttcacgccct tttaaatatc cgttattcta ataaacgctc ttttctctta 12960
ggtttacccg ccaatatatc ctgtcaaaca ctgatagttt aaactgaagg cgggaaacga 13020
caatctgatc atgagcggag aattaaggga gtcacgttat gacccccgcc gatgacgcgg 13080
gacaagccgt tttacgtttg gaactgacag aaccgcaacg attgaaggag ccactcagcc 13140
ccaatacgca aaccgcctct ccccgcgcgt tggccgattc attaatgcag ctggcacgac 13200
aggtttcccg actggaaagc gggcagtgag cgcaacgcaa ttaatgtgag ttagctcact 13260
cattaggcac cccaggcttt acactttatg cttccggctc gtatgttgtg tggaattgtg 13320
agcggataac aatttcacac aggaaacagc tatgaccatg attacgccaa gctatttagg 13380
tgacactata gaatactcaa gctatgcatc caacgcgttg ggagctcgtc gagcggccgc 13440
tcgacgaatt aattccaatc ccacaaaaat ctgagcttaa cagcacagtt gctcctctca 13500
gagcagaatc gggtattcaa caccctcata tcaactacta cgttgtgtat aacggtccac 13560
atgccggtat atacgatgac tggggttgta caaaggcggc aacaaacggc gttcccggag 13620
ttgcacacaa gaaatttgcc actattacag aggcaagagc agcagctgac gcgtacacaa 13680
caagtcagca aacagacagg ttgaacttca tccccaaagg agaagctcaa ctcaagccca 13740
agagctttgc taaggcccta acaagcccac caaagcaaaa agcccactgg ctcacgctag 13800
gaaccaaaag gcccagcagt gatccagccc caaaagagat ctcctttgcc ccggagatta 13860
caatggacga tttcctctat ctttacgatc taggaaggaa gttcgaaggt gaaggtgacg 13920
acactatgtt caccactgat aatgagaagg ttagcctctt caatttcaga aagaatgctg 13980
acccacagat ggttagagag gcctacgcag caggtctcat caagacgatc tacccgagta 14040
acaatctcca ggagatcaaa taccttccca agaaggttaa agatgcagtc aaaagattca 14100
ggactaattg catcaagaac acagagaaag acatatttct caagatcaga agtactattc 14160
cagtatggac gattcaaggc ttgcttcata aaccaaggca agtaatagag attggagtct 14220
ctaaaaaggt agttcctact gaatctaagg ccatgcatgg agtctaagat tcaaatcgag 14280
gatctaacag aactcgccgt gaagactggc gaacagttca tacagagtct tttacgactc 14340
aatgacaaga agaaaatctt cgtcaacatg gtggagcacg acactctggt ctactccaaa 14400
aatgtcaaag atacagtctc agaagaccaa agggctattg agacttttca acaaaggata 14460
atttcgggaa acctcctcgg attccattgc ccagctatct gtcacttcat cgaaaggaca 14520
gtagaaaagg aaggtggctc ctacaaatgc catcattgcg ataaaggaaa ggctatcatt 14580
caagatctct ctgccgacag tggtcccaaa gatggacccc cacccacgag gagcatcgtg 14640
gaaaaagaag acgttccaac cacgtcttca aagcaagtgg attgatgtga catctccact 14700
gacgtaaggg atgacgcaca atcccactat ccttcgcaag acccttcctc tatataagga 14760
agttcatttc atttggagag gacacgctcg ag 14792
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 5
gttagaaatt ccaatctgct tgtaa 25
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列()
<400> 6
acggtacttg gctaggttgc 20

Claims (7)

1.一种增加香石竹花朵直径的基因，其特征在于，所述的增加香石竹花朵直径的基因的RNA序列如SEQ ID NO.1所示。
2.含有权利要求1所述的增加香石竹花朵直径的基因的表达载体、表达盒、转基因细胞系或重组菌。
3.权利要求1所述的增加香石竹花朵直径的基因在调控植物花朵大小表型中的应用。
4.根据权利要求3所述的增加香石竹花朵直径的基因在调控植物花朵大小表型中的应用，其特征在于，所述的植物为石竹属植物。
5.权利要求1所述的增加香石竹花朵直径的基因在植物育种中的应用。
6.根据权利要求5所述的增加香石竹花朵直径的基因在植物育种中的应用，其特征在于，所述的植物为石竹属植物。
7.一种增加香石竹花朵直径的方法，其特征在于，包括如下步骤：
抑制权利要求1所述增加香石竹花朵直径的基因的基因表达量，得到花朵直径增大的转基因植物。
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