CN111568975A - 金花茶水提物在制备用于t淋巴细胞增殖活化和预防肿瘤的药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本公开涉及金花茶水提物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途。通过上述技术方案，本发明能够优化金花茶活性物质水提取及冻干粉制备技术，调节细胞免疫，增强机体对肿瘤细胞的识别和清除能力，达到预防肿瘤的目的。
Description
技术领域
本公开涉及生物医药领域，具体地，涉及金花茶水提物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途，金花茶水提物在制备用于预防肿瘤的药物中的用途。
背景技术
恶性肿瘤生长迅速，具有侵袭性生长特性，与周围组织粘连，边界不清，易发生转移，易复发；如不及时治疗，常导致死亡，是现今最常见的慢性病和死亡原因之一。
恶性肿瘤有很多种，其性质类型各异、累及的组织和器官不同、病期不同、对各种治疗的反应也不同，因此大部分患者需要进行综合治疗，也就是根据患者的身体状况、肿瘤的病理类型、侵犯范围等情况，综合采用手术、化疗、放疗、免疫治疗、中医中药治疗、介入治疗、微波治疗等手段，以期较大幅度地提高治愈率，并改善患者的生活质量。
恶性肿瘤防治的最佳手段是预防为主，综合防治。约有1/3恶性肿瘤可以通过预防避免发生。应用某些天然的或合成的化学物质可以起到一定的预防肿瘤发生的作用。但是，目前的预防恶性肿瘤发生的产品的预防效果仍然难以令人满意。
发明内容
为了提高预防恶性肿瘤发生的预防效果，本公开提供了金花茶水提物在用于T淋巴细胞增殖活化中的用途。
金花茶(Camellia nitidissima)是山茶属的植物。金花茶对人体无毒无害，可以用于保健食品的原料。本公开的发明人发现金花茶的水提物可以刺激T淋巴细胞的增殖活化，由此得到了本发明。
一方面，本公开提供了金花茶水提物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途；其中，所述金花茶水提物通过包括如下步骤的方法制备得到：
S1、将金花茶的干粉与15-25倍的水混合，得到混合液；
S2、将所述混合液在90-110℃下提取1-3次，每次30-120分钟，然后过滤得到滤液；
S3、将所述滤液进行冷冻干燥，得到所述金花茶水提物。
另一方面，本公开还提供了组合物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途；其中，所述组合物含有凝集素和金花茶水提物。
再一方面，本公开还提供了金花茶水提物在制备用于预防恶性肿瘤的药物中的用途。
再一方面，本公开还提供了金花茶水提物在制备用于预防恶性肿瘤的保健食品中的用途。
通过上述技术方案，本公开明确了金花茶提取物的抗肿瘤功效及其激活免疫系统中T淋巴细胞介导肿瘤免疫的作用机制，为增强免疫类的抗肿瘤保健食品开发，防止恶性肿瘤提供新的思路，提高了预防恶性肿瘤发生的预防效果。
本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：
图1是PHA联合不同浓度金花茶对CD3+T细胞活化增殖与集落形成能力的影响
图2是不同浓度金花茶对CD3+T细胞活化增殖的影响
图3是不同浓度金花茶对NK和NKT细胞活化增殖的影响
图4是不同浓度金花茶对T细胞活化增殖的影响
图5是不同浓度金花茶对Treg细胞活化增殖的影响
图6是不同浓度金花茶对CIK诱导方案中的NK、NKT细胞活化增殖的影响
图7是不同浓度金花茶对CIK诱导方案中的T细胞活化增殖的影响
图8是不同浓度金花茶对CIK诱导方案中的B细胞活化增殖的影响
具体实施方式
以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。
一方面，本发明提供了金花茶水提物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途。其中，金花茶水提物通过包括如下步骤的方法制备得到：将金花茶的干粉与去离子水混合，得到混合液；将混合液煮沸提取，过滤得到滤液；然后将滤液进行冷冻干燥处理，得到金花茶水提物。其中，固液比为1：(15-20)，优选为1:20；抽提次数为1-3次，优选为2次；提取时间为30min-120min，优选为60min；提取温度为90-110℃。其中，所述金花茶的干粉为金花茶的叶和/或花的干粉。其中，T淋巴细胞为CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞。
另一方面，本发明还提供了组合物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途。其中，组合物含有凝集素和金花茶水提物。
另一方面，本发明还提供了金花茶水提物在制备用于预防恶性肿瘤的药物中的用途。
另一方面，本发明还提供了金花茶水提物在制备用于预防恶性肿瘤的保健食品中的用途。
实施例1：本发明方法包括以下步骤：
称取20g金花茶叶干粉，加入去离子水混匀，100℃沸水煮沸1h，用滤纸过滤，收集第一次滤液，再加入去离子水再次煮沸1h，物料比为1:10、1:20和1:30。收集两次滤液后冻干，得到金花茶水提物，并且对总多酚、总黄酮和总皂苷进行测定；结果如表1所示。
表1
| 样本编号 | 总多酚 | 总黄酮 | 总皂苷 |
| 1:10-1h-2 | 4.68±0.01％ | 5.21±0.01％ | 18.66±1.38％ |
| 1:20-1h-2 | 4.86±0.36％ | 6.18±0.29％ | 26.92±1.11％ |
| 1:30-1h-2 | 4.71±0.28％ | 5.79±0.05％ | 29.15±1.64％ |
抽取健康人新鲜外周血，分离外周血PBMC细胞，然后激活和扩增CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞，监测不同浓度的金花茶水提物对T淋巴细胞的增殖能力和集落形成能力。倒置显微镜下观察结果显示：PHA组(phytohemagglutinin，2ug/ml)能明显刺激T淋巴细胞的活化增殖，而PHA联合不同浓度的金花茶提取物(JHC 0，50，150，250，500ug/ml)均能更显著地刺激T淋巴细胞的活化增殖。与单纯PHA刺激相比，PHA+JHC50联合组、PHA+JHC150联合组刺激细胞增殖的集落以大集落居多，PHA+JHC250联合组以小集落居多，PHA+JHC500联合组集落大小和数量较其他浓度组少。表明金花茶水提物可以促进T淋巴细胞的增殖能力和集落形成能力，如图1所示。流式细胞仪检测结果显示：50～250ug/ml浓度梯度的金花茶水提物均能明显增加CD3+T细胞的比例，如图2所示。
不同浓度金花茶对NK细胞(CD3-CD26+CD56+)和NKT(CD3+CD26+CD56+)细胞的活化增殖无显著作用，如图3所示；不同浓度金花茶对CD4辅助T淋巴细胞(CD3+CD4+T)的增殖无显著作用，但能明显促进CD8杀伤性T细胞的活化增殖(CD3+CD8+T)，如图4所示；不同浓度金花茶对CD4辅助T淋巴细胞(CD3+CD4+T)的增殖无显著作用，但能明显促进CD8杀伤性T细胞的活化增殖(CD3+CD8+T)，如图3-5所示。
将初始分离提取到的淋巴细胞，先按照常规CIK培养方案，去贴壁细胞，将悬浮的免疫细胞先扩增7天，在24孔板中，对PBMC进行铺板，细胞总数为2x106个/孔细胞。分为两组实验，一组单独加入不同浓度金茶花水提物(0，50，150，250，500ug/ml)进行刺激3天；另一组在相同浓度的金花茶水提物中加入浓度为2ug/ml的PHA刺激因子，流式检测对淋巴细胞亚群的影响。与对照组相比，对于CIK培养方案诱导的细胞，单纯金花茶水提物以及联合PMA均可以特异性抑制CD3+CD8+T细胞亚群和CD45+CD19+B细胞亚群的活化增殖，但对CD3+CD4+T细胞亚群、CD3-CD16+CD56+NK细胞亚群、CD3+CD16+CD56+NKT细胞亚群无明显作用，如图6-8所示。
实施例2
本实施例金花茶水提物的制备同实施例1，所不同的是，固定物料比为1:20、提取次数为2次，提取时间为30min、60min和120min，并且对总多酚、总黄酮和总皂苷进行测定，结果如表2所示。
表2
| 样本编号 | 总多酚 | 总黄酮 | 总皂苷 |
| 1:20-30min-2 | 4.34±0.69％ | 5.60±0.30％ | 23.91±1.54％ |
| 1:20-1h-2 | 5.12±0.01％ | 5.35±0.71％ | 24.35±3.68％ |
| 1：20-2h-2 | 4.24±0.17％ | 6.27±0.48％ | 24.63±3.66％ |
实施例3
本实施例的金花茶水提物的制备同实施例1，所不同的是，本实施例中固定物料比为1:20和提取时间为60min，提取次数为1、2和3次，结果如表3所示。
表3
| 样本编号 | 总多酚 | 总黄酮 | 总皂苷 |
| 1:20-1h-1 | 3.95±0.17％ | 5.83±0.17％ | 21.20±1.07％ |
| 1:20-1h-2 | 5.20±0.42％ | 5.35±0.77％ | 22.45±4.63％ |
| 1:20-1h-3 | 4.35±0.04％ | 5.29±0.14％ | 22.81±2.21％ |
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。
Claims (10)
1.金花茶水提物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途；其中，所述金花茶水提物通过包括如下步骤的方法制备得到：
S1、将金花茶的干粉与15-25倍的水混合，得到混合液；
S2、将所述混合液在90-110℃下提取1-3次，每次30-120分钟，然后过滤得到滤液；
S3、将所述滤液进行冷冻干燥，得到所述金花茶水提物。
2.根据权利要求1所述的用途，其中，所述金花茶的干粉为金花茶的叶和/或花的干粉。
3.根据权利要求1所述的用途，其中，所述T淋巴细胞为CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞。
4.组合物在制备用于T淋巴细胞增殖活化的药物中的用途；其中，所述组合物含有凝集素和金花茶水提物；所述金花茶水提物通过包括如下步骤的方法制备得到：
S1、将金花茶的干粉与15-25倍的水混合，得到混合液；
S2、将所述混合液在90-110℃下提取1-3次，每次30-120分钟，然后过滤得到滤液；
S3、将所述滤液进行冷冻干燥，得到所述金花茶水提物。
5.根据权利要求4所述的用途，其中，所述金花茶的干粉为金花茶的叶和/或花的干粉。
6.根据权利要求4所述的用途，其中，所述T淋巴细胞为CD3+T细胞、CD3+CD8+T细胞。
7.根据权利要求4所述的用途，其中，所述凝集素和金花茶水提物的重量比为1：25-250。
8.金花茶水提物在制备用于预防恶性肿瘤的药物中的用途；其中，所述金花茶水提物通过包括如下步骤的方法制备得到：
S1、将金花茶的干粉与15-25倍的水混合，得到混合液；
S2、将所述混合液在90-110℃下提取1-3次，每次30-120分钟，然后过滤得到滤液；
S3、将所述滤液进行冷冻干燥，得到所述金花茶水提物。
9.根据权利要求8所述的用途，其中，所述金花茶的干粉为金花茶的叶和/或花的干粉。
10.金花茶水提物在制备用于预防恶性肿瘤的保健食品中的用途；其中，所述金花茶水提物通过包括如下步骤的方法制备得到：
S1、将金花茶的干粉与15-25倍的水混合，得到混合液；
S2、将所述混合液在90-110℃下提取1-3次，每次30-120分钟，然后过滤得到滤液；
S3、将所述滤液进行冷冻干燥，得到所述金花茶水提物。
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| Title |
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