CN111551751A - 诊断抑郁症的血清蛋白标记物及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种血清蛋白标志物，所述标志物为BDNF、皮质醇和/或IFN‑gamma蛋白中的一种或几种。本发明还公开了所述的血清蛋白标志物的试剂在制备精神疾病诊断产品中的应用。本发明还公开了一种酶联免疫吸附测定试剂盒。本发明联合使用上述三种蛋白区分MDD和HC时ROC曲线下的AUC为0.884，敏感性和特异性分别为86.7%和83.3%，具有很好的MDD诊断价值；而当仅联合使用BDNF和皮质醇区分MDD和HC时AUC为0.841，特异性为66.7%，但敏感性高达90%，因而具有很好的MDD筛查价值。

Description

诊断抑郁症的血清蛋白标记物及其应用
技术领域
本发明涉及生物科学领域，具体涉及诊断抑郁症的血清蛋白标记物及其应用。
背景技术
抑郁症(MDD)，亦称忧郁症，是一类以抑郁心境为主要特点的情感障碍。WHO报告2020年MDD将成为世界第二大疾病，到2030年将成为导致死亡和残疾的最主要原因。当前临床上对MDD等精神疾病的诊断主要参考《中国精神障碍分类与诊断标准(第三版)》(CCMD-3)、美国的《国际疾病分类第十版》(ICD-10)、《精神疾病诊断与统计手册(第四版)》(DSM-IV)和《精神疾病诊断与统计手册(第五版)》(DSM-5)的标准，但该方法本身存在严重的缺点：主观性强，诊断一致性差且误诊率较高。在DSM-5的临床评定试验中MDD诊断的评定者一致性仅为28％(Freedman R，Lewis DA，Michels R，et al.The initial field trials ofDSM-5：new blooms and old thorns.Am J Psychiatry.2013.170(1)：1-5.)，也正因此MDD的诊断长期以来一直饱受诟病。可见，开发有效的客观诊断方法或工具是目前临床精神医学领域亟待解决的关键性问题，是早期发现、正确诊断和干预MDD的基础，对广大患者意义十分重大。
不可否认，脑组织是研究中枢神经系统疾病生物标记物的理想资源，但在临床实践中，无法做到活体检测MDD患者脑内生物标记物；因此，近年来外周血因其易于获取，且能在一定程度上反映中枢系统的功能而越来越受众多研究者的青睐。外周血蛋白指标因其在MDD患者与健康对照(HC)中存在显著性差异而具有成为客观诊断工具的潜能(MolendijkML，Spinhoven P，Polak M，et al.Serum BDNF concentrations as peripheralmanifestations of depression：evidence from a systematic review and meta-analyses on 179associations(N＝9484).Mol Psychiatry，2014，19(7)：791-800.)。然而，作为多因素复杂疾病(complex disease)，单一的生物标记物其实很难满足MDD临床精准诊疗的需要。因此，在开发MDD客观诊断方法/工具时，检测由多个生物因素组成的生物标记物平台显然将会获得比单一生物标记物更优越的结果。
自从单胺递质假说被质疑之后，神经营养假说、下丘脑-垂体-肾上腺轴功能障碍假说及炎症假说越来越受关注。作为上述MDD发病假说的关键蛋白，大量研究发现MDD患者外周血脑源性神经营养因子(BDNF)、皮质醇和包括干扰素gamma(IFN-gamma)在内的多种炎症因子出现特异性变化，可能有助于诊断MDD，但目前尚未见联合上述三种来自MDD不同发病机制假说关键蛋白客观诊断MDD的潜能的相关报道。
发明内容
发明目的：为克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种客观诊断抑郁症的外周血清生物标记物平台。通过检测受试者血清中血清脑源性神经营养因(BDNF)、皮质醇和干扰素gamma(IFN-gamma)蛋白的含量判断受试者是否患有抑郁症。
本发明基于申请人发现的BDNF、皮质醇和IFN-gamma在MDD和HC血清中的差异性表达(BDNF在MDD患者中显著下降，而皮质醇和IFN-gamma在MDD患者中则显著升高)。联合使用上述三种蛋白区分MDD和HC时受试者工作特征(ROC)曲线下的面积(AUC)值为0.884，敏感性和特异性分别为86.7％和83.3％，具有很好的MDD诊断价值；而当仅联合使用BDNF和皮质醇区分MDD和HC时AUC为0.841，特异性为66.7％，但敏感性高达90％，因而具有很好的MDD筛查价值。因此，联合BDNF、皮质醇和IFN-gamma三种血清蛋白作为外周血液生物标记物平台用于筛查和诊断MDD，可显著提高MDD诊断的准确性。以上述三种蛋白作为一个外周生物标志物平台，对其血清水平的定量检测，可以用作MDD的特异性诊断指标。
本发明所要解决的技术问题是提供了一种血清蛋白标志物。
本发明还要解决的技术问题是提供了所述的血清蛋白标志物的试剂在制备精神疾病诊断产品中的应用。
本发明最后要解决的技术问题是提供了一种酶联免疫吸附测定试剂盒。
技术方案：为了解决上述技术问题，本发明提供了一种血清蛋白标志物，所述标志物为BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白中的一种或几种。
本发明内容还包括检测所述的血清蛋白标志物的试剂在制备精神疾病诊断产品中的应用。
其中，所述试剂包括利用免疫方法检测BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白含量的试剂。
其中，所述试剂包括BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白的特异性抗体。
例如，将纯化的人BDNF、皮质醇和IFN-gamma蛋白或它的抗原片段注射入动物体内以产生多克隆抗体。同样，表达人BDNF、皮质醇和IFN-gamma蛋白或它的抗原片段的细胞也可以用来对动物免疫而产生抗体。
其中，所述特异性抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。
其中，所述精神疾病为抑郁症。
其中，所述诊断产品包括检测试剂盒。
其中，所述检测试剂盒包括酶联免疫吸附测定试剂盒或免疫印迹试剂盒。
本发明还公开了一种酶联免疫吸附测定试剂盒，所述试剂盒包括所述的血清蛋白标志物。
其中，所述试剂盒还包括BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白的特异性抗体。
其中，所述BDNF、皮质醇和IFN-gamma蛋白的特异性抗体来源于BDNF试剂盒、皮质醇试剂盒和IFN-gamma试剂盒中的抗体。
本发明的BDNF和IFN-gamma试剂盒中还包括96孔酶标板、2瓶人BDNF/IFN-gamma蛋白标准品、1瓶25ml 20倍浓缩洗液、2瓶生物素标记的抗人BDNF/IFN-gamma抗体、1瓶200ul的200倍(BDNF)/400倍(IFN-gamma)浓缩HRP-链霉亲和素、1瓶12mlTMB显色液、1瓶8ml的终止液、1瓶30ml稀释液A和1瓶15ml的5倍浓缩的稀释液B。
皮质醇试剂盒中还包括96孔酶标板、1瓶皮质醇标准品、1瓶6ml的抗小鼠皮质醇单克隆抗体、1瓶6ml与辣根过氧化物酶结合的皮质醇(皮质醇共轭物)、2瓶21ml的稀释液RD5-43、1瓶11ml的预处理液E、1瓶6ml的预处理液F、1瓶21ml的25倍浓缩洗液、1瓶6ml的终止液、1瓶12ml的显色液A和1瓶12ml的显色液B。
其中，本发明所述检测试剂盒的组分可以以水介质的形式或以冻干的形式来包装。试剂盒中适当的容器通常至少包括一种小瓶、试管等，其中可放置一种组分，并且可进行适当地等分。在试剂盒中存在多于一种的组分时，试剂盒中通常也将包含第二、第三或其它附加的容器，其中分离地放置附加的组分。然而，不同组合的组分可被包含在一个小瓶中。本发明的试剂盒通常也将包括一种用于容纳反应物的容器，密封以用于商业销售。这种容器可包括注模或吹模的塑料容器，其中可保留所需的小瓶。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优点在于：首次发现联合BDNF、皮质醇和IFN-gamma蛋白作为特异性诊断MDD的生物标志物平台的用途，为诊断MDD提供了一条全新的途径；采用含BDNF、皮质醇和IFN-gamma在内的生物标记物平台作为指标诊断MDD，ROC曲线下的面积值AUC为0.884，敏感性和特异性分别为86.7％和83.3％，具有很好的MDD诊断价值；而当使用仅含BDNF和皮质醇在内的生物标记物平台区分MDD和HC时AUC为0.841，特异性为66.7％，但敏感性高达90％，因而具有很好的MDD筛查价值。
附图说明
图1为抑郁症和非精神疾病对照者外周血清BDNF、皮质醇、IFN-gamma蛋白、C反应蛋白(CRP)和白介素10(IL-10)的定量结果图；
图2为单独使用BDNF、皮质醇、IFN-gamma、CRP和IL-10区分抑郁症患者与非精神疾病对照者的受试者工作特征曲线图；
图3为联合使用BDNF、皮质醇和IFN-gamma中任意两者区分抑郁症患者与非精神疾病对照者的受试者工作特征曲线图；
图4为联合使用BDNF、皮质醇和IFN-gamma三种蛋白区分抑郁症患者与非精神疾病对照者的受试者工作特征曲线图；
图5为联合使用BDNF、皮质醇、IFN-gamma、CRP和IL-10五种蛋白区分抑郁症患者与非精神疾病对照者的受试者工作特征曲线图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂家建议的条件。
收集30名抑郁症患者和30名非精神疾病对照者的血清样品。具体而言，抑郁症的诊断由有丰富临床经验的三级精神专科医师(主任/副主任医师、主治医师和高年资住院医师)分别根据《精神疾病诊断与统计手册(第四版)》(DSM-IV)中的诊断标准进行诊断和确认，上述精神疾病患者招募自东南大学附属中大医院，健康对照者的样品来自招募的社会人员。
所做的检验和评估包括：血清BDNF、皮质醇、IFN-gamma蛋白、C反应蛋白(CRP)和白介素10(IL-10)浓度测定；分别评估各组受试者病情严重程度的量表，包括汉密尔顿抑郁量表(17-item Hamilton Depression Rating Scale，HAMD-17)和汉密尔顿焦虑量表(HamiltonAnxiety Rating Scale，HAMA)。
血清BDNF、皮质醇IFN-gamma、CRP和IL-10蛋白浓度使用ELISA试剂盒检测，所用试剂盒详细信息如下：BDNF、INF-gamma、CRP和IL-10试剂盒：RayBiotech，Norcross，GA，USA，皮质醇试剂盒：R&D Systems，Mutlukent Mah，Arda Sk，USA。
上述5个试剂盒的检测范围分别为BDNF：80pg/mL-16ng/mL、IFN-gamma：15-15000pg/mL、CRP：34-25000pg/mL、IL-10：1-150pg/mL和皮质醇：0.2-10ng/mL。
上述试剂盒分别提供了检测BDNF、皮质醇、IFN-gamma、CRP和IL-10蛋白浓度所需的必要但非全部试剂：
BDNF、IFN-gamma和IL-10试剂盒中还包括96孔酶标板(已经分别涂覆好抗人BDNF、抗人IFN-gamma和抗人IL-10的酶标板)、2瓶人BDNF/IFN-gamma/IL-10蛋白标准品、1瓶25ml20倍浓缩洗液、2瓶生物素标记的抗人BDNF/IFN-gamma/IL-10抗体、1瓶200μl的200倍(BDNF和IL-10)/400倍(IFN-gamma)浓缩HRP-链霉亲和素、1瓶12mlTMB显色液、1瓶8ml的终止液、1瓶30ml稀释液A和1瓶15ml的5倍浓缩的稀释液B。
皮质醇试剂盒中还包括96孔酶标板(已经涂覆好山羊抗小鼠多克隆抗体的酶标板)、1瓶皮质醇标准品、1瓶6ml的抗小鼠皮质醇单克隆抗体、1瓶6ml与辣根过氧化物酶结合的皮质醇(皮质醇共轭物)、2瓶21ml的稀释液RD5-43、1瓶11ml的预处理液E、1瓶6ml的预处理液F、1瓶21ml的25倍浓缩洗液、1瓶6ml的终止液、1瓶12ml的显色液A和1瓶12ml的显色液B。
CRP试剂盒中还包括96孔酶标板(已经涂覆好抗人CRP的酶标板)、2瓶人CRP蛋白标准品、1瓶25ml20倍浓缩洗液、2瓶生物素标记的抗人CRP抗体、1瓶200μl的300倍浓缩HRP-链霉亲和素、1瓶12mlTMB显色液、1瓶8ml的终止液、2瓶15ml的5倍浓缩的稀释液D和1瓶15ml的5倍浓缩的稀释液B。
此外，还需要的额外试剂与材料如下：酶标检测仪、移液器、移液管、量筒、吸水纸、蒸馏水或去离子水、数据分析与绘图软件等。
实施例1
1.血清皮质醇浓度的检测
准备试剂与样本：
(1)将皮质醇试剂盒中所有试剂以及样品置于室温下；
(2)将血清样本用稀释液RD5-43稀释20倍，25倍的浓缩洗液用蒸馏水稀释25倍备用；
(3)使用稀释液RD5-43倍比稀释皮质醇蛋白标准品至10ng/mL、5ng/mL、2.5ng/mL、1.25ng/mL、0.625ng/mL、0.313ng/mL、0.156ng/mL。将上述浓度的标准品各100μl依次加入一排预先已经涂覆好山羊抗小鼠多克隆抗体的酶标板孔中，并设置1孔空白比较(空白比较孔中只添加稀释液RD5-43，不添加标准品，即标准品浓度为0)。10ng/mL的标准品作为最高标准，稀释液RD5-43作为0标准品的空白对照(B0)。
实验步骤：
(1)按前所述要求准备所有的试剂、标准品和样本；
(2)取出需要使用的酶标板，在酶标板孔中添加100μl上述配置好的不同浓度的标准品或样品(30名抑郁症患者和30名非精神疾病对照者的血清样品)，并在B0孔中加入100μl稀释液RD5-43；
(3)向所有酶标板孔中分别加入50μl皮质醇共轭物，此时所有酶标板孔呈红色；
(4)向所有酶标板孔均加入50μl抗小鼠皮质醇单克隆抗体，此时加入抗体的酶标板孔呈现紫色；
(5)放在设置为500+50rpm摇速的摇床上轻轻混匀，室温孵育2小时；
(6)清洗：倒掉酶标板孔中的液体，甩干，然后每孔加满洗液，静置30秒后弃去，重复洗涤4遍；
(7)在所有酶标板孔中均添加200μl的底物溶液(显色液A和B等体积混合而成，需在配置后15分钟内使用)。室温避光孵育30分钟；
(8)在所有酶标板孔中均添加50μl终止液，停止反应(颜色应由蓝色变为黄色)；
(9)添加终止液后30分钟内用Biotek Elx800酶标检测仪在450nm处测定吸光度(O.D.值)。以已知浓度的皮质醇标准蛋白的浓度为横坐标，测得的相应O.D.值为纵坐标，使用sigmal plot12.0软件通过四参数逻辑回归模型绘制出标准曲线，并获得相应回归方程式X＝1.4773*10^(1/(-0.9285)*log((0.8069-Y)/(Y-0.0207)))，将样品测得的O.D.值代入方程式，计算出相应样品浓度，再乘以稀释倍数20，得到所测样品中实际皮质醇的含量。
2.血清BDNF、IFN-gamma和IL-10浓度的检测
(1)分别将BDNF、IFN-gamma和IL-10试剂盒以及样品平衡至室温(18～25℃)：
(2)检测IFN-gamma和IL-10时样本不稀释，检测BDNF时样本用稀释液A稀释100倍；
(3)添加样品：
使用稀释液A梯度稀释BDNF蛋白标准品后将400ng/ml、16ng/ml、6.4ng/ml、2.56ng/ml、1.02ng/ml、0.41ng/ml、0.16ng/ml、0.066ng/ml的标准品各100μl；
使用稀释液A梯度稀释IFN-gamma蛋白标准品后将15000pg/ml、5000pg/ml、1666.7pg/ml、555.6pg/ml、185.2pg/ml、61.7pg/ml、20.6pg/ml的标准品各100μl；
使用稀释液A梯度稀释IL-10蛋白标准品后将22ng/ml、150pg/ml、75pg/ml、37.5pg/ml、18.75pg/ml、9.38pg/ml、4.69pg/ml、2.34pg/ml的标准品各100μl；
依次加入一排预先涂覆特异性人BDNF或IFN-gamma或IL-10抗体的酶标板孔中，并设置1孔空白比较(空白比较孔中只有稀释液A，不添加标准品，即标准品浓度为0)。剩余酶标板孔中添加100μl样品(30名抑郁症患者和30名非精神疾病对照者的血清样品)，轻轻混匀。室温下孵育2.5小时；
(4)配液：将20倍的浓缩洗液用蒸馏水稀释20倍得到洗液备用；将200倍浓缩的HRP-链霉亲和素(BDNF或IL-10)用稀释液B分别稀释200倍(BDNF或IL-10)得到配置好的HRP-链霉亲和素(BDNF或IL-10)，将400倍浓缩的HRP-链霉亲和素(IFN-gamma)用稀释液B分别稀释400倍(IFN-gamma)得到配置好的HRP-链霉亲和素(IFN-gamma)备用；
(5)清洗：倒掉酶标板孔中的液体，甩干，然后每孔加满洗液，静置30秒后弃去，重复洗涤4遍；
(6)添加生物素标记的抗人BDNF或生物素标记的抗人IFN-gamma或生物素标记的抗人IL-10：在所有酶标板孔中添加100μl生物素标记的抗人BDNF或100μl生物素标记的抗人IFN-gamma或生物素标记的抗人IL-10，室温下摇匀，孵育1小时；
(7)清洗：重复操作5；
(8)添加亲和素：在所有的酶标板孔中均添加100μl配制好的HRP-链霉亲和素(BDNF)或HRP-链霉亲和素(IFN-gamma)，轻轻混匀。室温孵育45分钟；
(9)清洗：重复操作5；
(10)显色：在所有酶标板孔中均添加TMB显色液100μl，室温避光孵育30分钟；
(11)终止反应：在所有酶标板孔中均添加50μl终止液，停止反应(颜色立即由蓝色变为黄色)；
(12)分析：以空白孔为零，添加50μl终止液后立即用Biotek Elx800酶标检测仪在450nm处测定光密度(O.D.值)。分别以已知浓度的BDNF或IFN-gamma或IL-10标准蛋白的浓度为横坐标，测得的相应O.D.值为纵坐标，使用sigmal plot12.0软件通过四参数逻辑回归模型绘制出标准曲线，并获得相应回归方程式，BDNF的方程式为Y＝0.1365+(5.6899-0.1365)/(1+(x/27.1656)^(-1.0056))，IFN-gamma的方程式为Y＝0.076+(3.5367-0.076)/(1+(x/4059.7031)^(-0.9545))，IL-10的方程式为Y＝0.1313+(7.7194-0.1313)/(1+(x/385.0384)^(-1.0033))，分别将样品测得的O.D.值代入上述BDNF或IFN-gamma或IL-10方程式，计算出相应样品BDNF或IFN-gamma或IL-10浓度，得出的IFN-gamma或IL-10浓度即为所测样品中实际IFN-gamma的含量，而BDNF浓度乘以稀释倍数100得到所测样品中实际BDNF的含量。
3、血清CRP浓度检测
(1)将CRP试剂盒以及样品平衡至室温(18～25℃)；
(2)将血清样本用稀释液A稀释5000倍，5倍浓缩的稀释液D用蒸馏水稀释5倍备用；
(3)添加样品：使用稀释液D梯度稀释CRP蛋白标准品后将25000pg/ml、8333pg/ml、2778pg/ml、925.9pg/ml、308.6pg/ml、102.9pg/ml、34.29pg/ml的标准品各100μl；依次加入一排预先涂覆特异性人CRP抗体的酶标板孔中，并设置1孔空白比较(空白比较孔中只有稀释液D，不添加标准品，即标准品浓度为0)。剩余酶标板孔中添加100μl样品(30名抑郁症患者和30名非精神疾病对照者的血清样品)，轻轻混匀。室温下孵育2.5小时；
(4)配液：将20倍的浓缩洗液用蒸馏水稀释20倍得到洗液备用；将300倍浓缩的HRP-链霉亲和素用稀释液B分别稀释300倍备用；将生物素标记的抗人CRP抗体用稀释液B稀释80倍后备用；
(5)清洗：倒掉酶标板孔中的液体，甩干，然后每孔加满洗液，静置30秒后弃去，重复洗涤4遍；
(6)添加生物素标记的抗人CRP：在所有酶标板孔中添加100μl生物素标记的抗人CRP，室温下摇匀，孵育1小时；
(7)清洗：重复操作5；
(8)添加亲和素：在所有的酶标板孔中均添加100μl配制好的HRP-链霉亲和素，轻轻混匀。室温孵育45分钟；
(9)清洗：重复操作5；
(10)显色：在所有酶标板孔中均添加TMB显色液100μl，室温避光孵育30分钟；
(11)终止反应：在所有酶标板孔中均添加50μl终止液，停止反应(颜色立即由蓝色变为黄色)；
(12)分析：以空白孔为零，添加50μl终止液后立即用Biotek Elx800酶标检测仪在450nm处测定光密度(O.D.值)。分别以已知浓度的CRP标准蛋白的浓度为横坐标，测得的相应O.D.值为纵坐标，使用sigmal plot 12.0软件通过四参数逻辑回归模型绘制出标准曲线，并获得相应回归方程式，Y＝0.0864+(2.6981-0.0864)/(1+(x/2372.8509)^(-0.9312))，将样品测得的O.D.值代入上述CRP方程式，计算出相应样品CRP浓度，乘以稀释倍数5000得到所测样品中实际CRP的含量。
受试者的人口学和临床特征见表1，抑郁症患者和非精神疾病对照者的血清中BDNF、皮质醇和IFN-gamma蛋白浓度结果见图1，单独使用血清BDNF、皮质醇、IFN-gamma或三者的任意组合对MDD的诊断效能分析见图2-4，联合五种蛋白(BDNF、皮质醇、IFN-gamma、C反应蛋白和白介素10对MDD的诊断效能分析见图5。
图1可见，血清BDNF、皮质醇、IFN-gamma的血清水平在抑郁症患者中显示出特异性改变，其中血清BDNF在MDD患者中显著降低，血清皮质醇和IFN-gamma在MDD患者中显著增高。图2-5分别表明血清BDNF、皮质醇、IFN-gamma、CRP和IL-10蛋白单独诊断、BDNF、皮质醇和IFN-gamma三种蛋白中任意两种蛋白联合的生物标记物平台及这三种蛋白联合的生物标记物平台、以及上述全部五种蛋白(BDNF、皮质醇、IFN-gamma、CRP和IL-10)联合的生物标记物平台在诊断MDD时的ROC曲线图，每种情况对应的ROC曲线下面积(AUC)、敏感性及特异性见表2。ROC曲线下的面积值在1.0和0.5之间，在AUC＞0.5的情况下，AUC越接近于1，说明诊断效果越好。AUC在0.5～0.7时有较低准确性，AUC在0.7～0.9时有一定准确性，AUC在0.9以上时有较高准确性。AUC＝0.5时，说明诊断方法完全不起作用，无诊断价值。AUC＜0.5不符合真实情况，在实际中极少出现。此外，敏感性和特异性也是评价诊断生物标记物的重要指标。研究指出临床有用的正确诊断和分类疾病的生物标志物或测试敏感性和特异性均至少达到80％(Schneider B，Prvulovic D.Novel biomarkers in major depression.CurrOpin Psychiatry.2013.26(1)：47-53.)。
图1可见，与HC相比，MDD患者的血清BDNF显著降低，皮质醇和IFN-gamma显著升高，差异均具有统计学意义。
图2A-C表明单独使用IFN-gamma、BDNF和皮质醇蛋白在诊断MDD时AUC分别为0.716、0.759和0.766，表明三者诊断MDD时均有一定的准确性；图2D-E表明单独使用CRP和IL-10在诊断MDD时AUC分别为0.564和0.559，表明两者诊断MDD时准确性较低；图3表明联合血清IFN-gamma、BDNF和皮质醇蛋白中的任意两者在诊断MDD时AUC可分别达0.818、0.834和0.841，表明由2种蛋白组成的生物标记物平台诊断MDD的准确性高于单个蛋白；图4表明联合三种蛋白诊断MDD的AUC为0.884、敏感性为86.7％、特异性为83.3％，可见由这三种蛋白组成的生物标记物平台可成为临床上有用的客观诊断测试。图5表明联合五种蛋白(BDNF、皮质醇、IFN-gamma、CRP和IL-10)诊断MDD的AUC为0.898、敏感性和特异性分别为86.7％和83.3％，诊断效能进一步增加；然而，与联合BDNF、皮质醇和IFN-gamma三种蛋白相比，AUC仅稍微增加，敏感性和特异性无进一步增加，表明并不是联合诊断的标志物越多，其敏感性和特异性就会越高。综上，与其他蛋白单独使用或联合使用相比，本发明的血清IFN-gamma、BDNF和皮质醇这三种蛋白组合的生物标记物为临床上诊断MDD的最有效的组合物。
表1受试者的人口学和临床特征
Figure BDA0002467456940000111
表2不同血清蛋白组合形式诊断抑郁症的ROC曲线分析的结果
Figure BDA0002467456940000112
Figure BDA0002467456940000121

Claims (10)

1.一种血清蛋白标志物，其特征在于，所述标志物为BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白中的一种或几种。
2.检测权利要求1所述的血清蛋白标志物的试剂在制备精神疾病诊断产品中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括利用免疫方法检测BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白含量的试剂。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述试剂包括BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白的特异性抗体。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述特异性抗体包括单克隆抗体或多克隆抗体。
6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述精神疾病为抑郁症。
7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述诊断产品包括检测试剂盒。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述检测试剂盒包括酶联免疫吸附测定试剂盒或免疫印迹试剂盒。
9.一种酶联免疫吸附测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的血清蛋白标志物。
10.根据权利要求9所述的酶联免疫吸附测定试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括BDNF、皮质醇和/或IFN-gamma蛋白的特异性抗体。
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