CN111521818A - 特异性IgA在评价COVID-19患病风险、患病严重程度以及预后评估中的应用 - Google Patents
特异性IgA在评价COVID-19患病风险、患病严重程度以及预后评估中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本申请提供了将特异性IgA作为检测靶标在评价COVID‑19患病风险、患病严重程度、预后情况中的应用;通过评价COVID‑19患病风险,增强个体预警和防控,有利于对COVID‑19的传播进行控制;通过评价个体COVID‑19的患病严重程度,可以针对不同程度的患者给药用药;同时,还可以对患者的预后情况进行评估,进行及时监控,提高患者的治愈率。
Description
技术领域
本申请涉及生物医学领域,特别涉及特异性IgA在评价COVID-19患病风险、患病严重程度以及预后评估中的应用。
背景技术
新型冠状病毒肺炎(Corona Virus Disease 2019,COVID-19)在全球范围内快速传播,对人民健康造成了重大影响。世界卫生组织已经宣布该疾病为全球大流行病,但临床上对该种感染并没有检测金标准。
目前使用较多的核酸检测方法假阴性的问题比较严重,疑似病例的病毒核酸检测假阴性率较高,对于确诊COVID-19的病人,阳性率也只有30%~50%。核酸检测过程的采样环节、核酸提取环节和qPCR检测环节均易产生假阴性的问题。
此外,目前针对COVID-19的血清学检测方法仅在国家卫健委发布的新型冠状病毒肺炎诊疗方案试行第七版中有所提及,即“血清新型冠状病毒特异性 IgM抗体和IgG抗体阳性;血清新型冠状病毒特异性IgG抗体由阴性转为阳性或恢复期较急性期4倍及以上升高”为确诊病例的血清学依据。
可见,针对检测COVID-19和评价患病风险及严重程度建立新的标准显得十分迫切且意义重大。
发明内容
有鉴于此,本申请提供了将特异性IgA作为检测靶标在评价COVID-19患病风险、患病严重程度、预后情况中的应用;通过评价COVID-19患病风险,增强个体预警和防控,有利于对COVID-19的传播进行控制;通过评价个体COVID-19的患病严重程度,可以针对不同程度的患者给药用药;同时,还可以对患者的预后情况进行评估,进行及时监控,提高患者的治愈率。
第一方面,本申请提供了特异性IgA为检测靶标在评价个体患有COVID-19 风险中的应用。
第二方面,本申请提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在评价个体患有 COVID-19风险中的应用。
可选的,所述评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM 的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的风险。
进一步的,所述特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度,当所述特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价所述个体有患 COVID-19的风险。
第三方面,本申请提供了一种以特异性IgA为检测靶标评价个体患有 COVID-19风险的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA,依据所述特异性IgA的检测结果评价所述个体患COVID-19的风险。
第四方面,本申请提供了一种以特异性IgA和IgM为检测靶标评价个体患有COVID-19风险的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的风险。
第五方面,本申请提供了一种评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,以特异性IgA为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA的试剂。
第六方面,本申请提供了一种评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,以特异性IgA和IgM为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM的试剂。
第七方面,本申请提供了用于检测特异性IgA的试剂在制备评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用。
第八方面,本申请提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用。
第九方面,本申请提供了特异性IgA为检测靶标在评价个体患COVID-19 严重程度中的应用。
第十方面,本申请提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在评价个体患 COVID-19严重程度中的应用。
可选的,所述评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM 的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的严重程度。
进一步的,所述特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度;当所述特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于5时,则评价所述个体患 COVID-19的程度为严重;当所述特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比小于5 时,则评价所述个体患COVID-19的程度为非严重。
第十一方面,本申请提供了一种以特异性IgA为检测靶标评价个体患 COVID-19严重程度的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA,依据所述特异性IgA的检测结果评价所述个体患COVID-19的严重程度。
第十二方面,本申请提供了一种以特异性IgA和IgM为检测靶标评价个体患COVID-19严重程度的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM 的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的严重程度。
第十三方面,本申请提供了一种评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒,以特异性IgA为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA的试剂。
第十四方面,本申请提供了一种评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒,以特异性IgA和IgM为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM的试剂。
第十五方面,本申请提供了用于检测特异性IgA的试剂在制备评价个体患 COVID-19严重程度的试剂盒中的应用。
第十六方面,本申请提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒中的应用。
第十七方面,本申请提供了特异性IgA为检测靶标在评价COVID-19预后情况中的应用。
第十八方面,本申请提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在评价COVID-19 预后情况中的应用。
第十九方面,本申请提供了一种以特异性IgA为检测靶评价COVID-19预后情况的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA,依据所述特异性IgA的检测结果评价 COVID-19预后情况。
第二十方面,本申请提供了一种以特异性IgA和IgM为检测靶评价 COVID-19预后情况的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果的关联性评价COVID-19预后情况。
第二十一方面,本申请提供了用于检测特异性IgA的试剂在制备评价 COVID-19预后情况的试剂盒中的应用。
第二十二方面,本申请提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价COVID-19预后情况的试剂盒中的应用。
本申请提供了将特异性IgA作为检测靶标在评价COVID-19患病风险、患病严重程度、预后情况中的应用;通过评价COVID-19患病风险,增强个体预警和防控,有利于对COVID-19的传播进行控制;通过评价个体COVID-19的患病严重程度,可以针对不同程度的患者给药用药;同时,还可以对患者的预后情况进行评估,进行及时监控,提高患者的治愈率。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本申请实施例中COVID-19患者发病后血清中特异性IgA、IgM和IgG 的检测结果,其中图1中(a)为特异性IgA的检测结果,图1中(b)为特异性IgM的检测结果,图1中(c)为特异性IgG的检测结果。
具体实施方式
下面将结合本申请实施例中的附图,对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本申请保护的范围。
本申请实施方式中提供了将特异性IgA作为检测靶标在评价COVID-19患病风险、患病严重程度、预后情况中的应用,包括:提供了检测试剂盒和检测方法;通过分析特异性IgA和IgM的相关性,进而对个体患有COVID-19风险以及个体患COVID-19严重程度进行评价;通过评价COVID-19患病风险,增强个体预警和防控,有利于对COVID-19的传播进行控制;通过评价个体患 COVID-19的严重程度,可以针对不同严重程度的患者给药用药,进行针对性的预防措施和治疗方案;IgA水平的变化对患者的预后情况有指导意义,进一步提高患者的治愈率。
第一方面,本申请实施方式提供了特异性IgA为检测靶标在评价个体患有 COVID-19风险中的应用。
在本申请实施方式中,评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA,依据特异性IgA的检测结果评价个体患COVID-19的风险。在一实施例中,依据特异性IgA的OD值或浓度检测结果评价个体患COVID-19的风险。
在本申请实施方式中,特异性IgA的检测结果为定量或半定量结果。半定量结果可以通过使用便携式检测仪器方便读取。便携式检测仪器可连接手机等终端设备通过配套软件进行数据读取。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。进一步的,血浆和全血中加入抗凝剂,避免凝固。更进一步的,抗凝剂包括乙二胺四乙酸、肝素和枸橼酸钠中的至少一种。
在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。根据国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方法(试行第七版)》中的规定疑似病例的诊断标准来判断个体是否为COVID-19疑似病例,例如,通过结合流行病学史和临床表现综合分析。通过检测疑似病例的特异性IgA,对疑似病例的确诊或排除具有重要的参考价值。
本申请通过将特异性IgA作为检测靶标用于评价个体患有COVID-19风险,进而提高对个体患病的预警和防控,有利于对COVID-19传播的控制。
第二方面,本申请实施方式提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在评价个体患有COVID-19风险中的应用。
在本申请实施方式中,评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM,依据特异性IgA和IgM 的检测结果相关性评价个体患COVID-19的风险。
本申请实施方式中发明人发现特异性IgA水平以及特异性IgA和IgM的相关性是与COVID-19密切相关的生物指标,因而对COVID-19患病风险评价有着重要意义。
在本申请实施方式中,特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度,当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价个体有患 COVID-19的风险。也就是说,特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2,个体有COVID-19患病风险,进而可以对个体进行隔离,避免传播,同时还可以进行肺部CT检测、核酸检测等,进一步判断个体是否患有COVID-19,对个体的检测起到重要的参考价值。
在本申请一实施例中,通过化学发光方法检测特异性IgA和IgM的OD值或浓度;当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价个体有患COVID-19的风险。可选的,可以通过两步间接免疫的化学发光方法进行检测。在一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,与磁珠孵育;洗涤之后与化学发光标记物孵育;再加入底物溶液进行显色,在特定波长下读取OD值。若样本中存在SARS-CoV-2的IgA抗体或IgM抗体,则可形成磁珠包被物-SARS-CoV-2IgA抗体-化学发光标记物复合物或磁珠包被物-SARS-CoV-2IgM抗体-化学发光标记物复合物,化学发光标记物的发光强度与特异性IgA抗体或IgM抗体的含量成正相关的关系。可选的,化学发光标记物可以但不限于为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌或吖啶酯。可选的,化学发光底物溶液包括预激发液和激发液。例如预激发液可以为H2O2溶液,激发液为 NaOH溶液。进一步的,磁珠和化学发光标记物分别标记有特异性IgA和IgA 抗体。可选的,可以在450nm读取OD值。进一步的,根据标准曲线,将读取的OD值换算为浓度。可选的,预处理包括但不限于灭活、稀释等。
在本申请一实施例中,通过蛋白芯片方法检测特异性IgA和IgM的OD值或浓度;当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价个体有患COVID-19的风险。在一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,置于蛋白芯片中进行孵育,再经洗涤后加入示踪剂和显色剂,在特定波长下读取OD值。进一步的,根据标准曲线,将读取的OD值换算为浓度。可选的,蛋白芯片中设置有SARS-CoV-2的IgA抗体或IgM抗体的点样点。进一步的,蛋白芯片还设置有质控蛋白点,质控蛋白点在检测过程中均能够显色。进一步的,蛋白芯片还设置有空白对照检测点。进一步的,根据显色剂选择检测波长。
在本申请一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的OD值或浓度;当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价个体有患COVID-19的风险。在一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,置于包被有抗原的酶标板中,经过孵育和洗涤后,加入酶标记物体,经过孵育和洗涤后,加入显色剂孵育,最后加入终止剂终止反应,在特定波长下读取OD值。进一步,通常以标准品浓度对OD值建立回归关系,进而计算浓度。在另一实施例中,将个体的血清、血浆和全血中的至少一种进行预处理后,置于包被有抗原的酶标板中,经过孵育和洗涤后,加入生物素二抗,经过孵育和洗涤后,加入亲和素-HRP溶液孵育后洗涤,再加入显色剂,避光反应至多20分钟;加终止剂终止反应;用酶标仪在波长450nm处测定OD值。进一步,通常以标准品浓度对OD值建立回归关系,进而计算浓度。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。
第三方面,本申请实施方式提供了一种以特异性IgA为检测靶标评价个体患有COVID-19风险的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA,依据特异性IgA的检测结果评价个体患 COVID-19的风险。
在本申请实施方式中,依据特异性IgA的OD值或浓度检测结果评价个体患COVID-19的风险。特异性IgA的检测结果为定量或半定量结果。半定量结果可以通过使用便携式检测仪器方便读取。便携式检测仪器可连接手机等终端设备通过配套软件进行数据读取。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。
第四方面,本申请实施方式提供了一种以特异性IgA和IgM为检测靶标评价个体患有COVID-19风险的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM,依据特异性IgA和IgM的检测结果相关性评价个体患COVID-19的风险。
在本申请实施方式中,特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度,当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价个体有患 COVID-19的风险。也就是说,特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2,个体有COVID-19患病风险,进而可以对个体进行隔离,避免传播,同时还可以进行肺部CT检测、核酸检测等,进一步判断个体是否患有COVID-19,对个体的检测起到重要的参考价值。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。
第五方面,本申请实施方式提供了一种评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,以特异性IgA为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA的试剂。
在一实施例中,通过化学发光方法检测特异性IgA的试剂包括磁珠、化学发光标记物、底物溶液等。在一实施例中,通过蛋白芯片方法检测特异性IgA 的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在另一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA的试剂包括包被有抗原的酶标板、生物素二抗、亲和素-HRP溶液和显色剂等。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。
第六方面,本申请实施方式提供了一种评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,以特异性IgA和IgM为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM的试剂。
在一实施例中,通过化学发光方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括磁珠、化学发光标记物底物溶液等。在一实施例中,通过蛋白芯片方法检测特异性IgA 和IgM的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在另一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、生物素二抗、亲和素-HRP溶液和显色剂等。
在本申请实施方式中,当特异性IgA和IgM的检测结果OD值比或浓度比值大于或等于2时,则评价个体有患COVID-19的风险。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例。
第七方面,本申请实施方式提供了用于检测特异性IgA的试剂在制备评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用。
在本申请实施方式中,用于检测特异性IgA的试剂包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA的试剂。
在本申请实施方式中,通过化学发光方法检测特异性IgA的试剂包括磁珠、化学发光标记物、化学发光底物溶液等。在一实施例中,试剂包括包被有 SARS-CoV-2抗原的磁珠、化学发光标记物标记的抗人IgA抗体、化学发光底物溶液。可选的,磁珠的粒径为0.05μm-3μm。可选的,化学发光标记物可以但不限于为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌、吖啶酯。可选的,化学发光底物溶液包括预激发液和激发液。具体的,预激发液可以但不限于为H2O2溶液,激发液可以但不限于为NaOH溶液。
在本申请实施方式中,通过蛋白芯片方法检测特异性IgA的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂,蛋白芯片包被有SARS-CoV-2抗原,辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体、四甲基联苯胺显色液。
在本申请实施方式中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在一实施例中,试剂包括包被有 SARS-CoV-2抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体、四甲基联苯胺显色液。进一步,还包括样品稀释液、洗涤液、阴性对照品、阳性对照品和终止液。更进一步的,洗涤液为含吐温-20的磷酸盐缓冲液,终止液为 1mol/L-5mol/L H2SO4溶液。
第八方面,本申请实施方式提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用。
在本申请实施方式中,用于检测特异性IgA和IgM的试剂包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM 的试剂。
在本申请实施方式中,通过化学发光方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括磁珠、化学发光标记物、化学发光底物溶液等。在一实施例中,试剂包括包被有SARS-CoV-2抗原的磁珠、化学发光标记物标记的抗人IgA抗体、化学发光标记物标记的抗人IgM抗体、化学发光底物溶液。可选的,磁珠的粒径为 0.05μm-3μm。可选的,化学发光标记物可以但不限于为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌、吖啶酯。可选的,化学发光底物溶液包括预激发液和激发液。具体的,预激发液可以但不限于为H2O2溶液,激发液可以但不限于为NaOH溶液。
在本申请实施方式中,通过蛋白芯片方法检测特异性Ig和IgM的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂,蛋白芯片包被有SARS-CoV-2抗原,辣根过氧化物酶标记的抗人IgA 抗体、辣根过氧化物酶标记的抗人IgM抗体、四甲基联苯胺显色液。
在本申请实施方式中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在一实施例中,试剂包括包被有SARS-CoV-2抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体、辣根过氧化物酶标记的抗人IgM抗体、四甲基联苯胺显色液。进一步,还包括样品稀释液、洗涤液、阴性对照品、阳性对照品和终止液。更进一步的,洗涤液为含吐温-20的磷酸盐缓冲液,终止液为1mol/L-5mol/L H2SO4溶液。
第九方面,本申请实施方式提供了特异性IgA为检测靶标在评价个体患 COVID-19严重程度中的应用。
第十方面,本申请实施方式提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在评价个体患COVID-19严重程度中的应用。
在本申请实施方式中,评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM,依据特异性IgA和IgM 的检测结果相关性评价个体患COVID-19的严重程度。在一实施例中,特异性 IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度;当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于5时,则评价个体患COVID-19的程度为严重;当特异性IgA 和IgM的OD值比或浓度比小于5时,则评价个体患COVID-19的程度为非严重。通过特异性IgA和IgM的检测结果比值,判断个体COVID-19患病严重程度,进而可以根据该划分,对不同程度的个体进行针对性的防控和治疗,同时,还可以通过特异性IgA和IgM的检测结果比值的变化,判断个体患COVID-19 的严重程度的变化,进而可以对严重程度增加的个体给予重点关注,避免病情突然恶化。
在本申请实施方式中,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM的过程如上所述,在此不再赘述。
国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒肺炎诊疗方法(试行第七版)》中规定COVID-19的临床分型和判断标准,包括轻型、普通型、重型和危重型。在本申请中,将个体患COVID-19的程度分为了严重和非严重,其中,个体患 COVID-19的程度为非严重时包括了轻型和普通型的临床分型,个体患 COVID-19的程度为严重时包括了重型和危重型的临床分型。本申请提供的更加简便的评价方法,通过比较特异性IgA和IgM,将个体进行划分,进而可以对患病严重的个体进行重点关注,具有重要的临床预警价值;同时还可以对非严重患病个体转为严重患病个体时,进行预警,提高对严重患病个体的防控和治疗。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。
在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例或确诊病例。进一步的,通过对COVID-19确诊病例患病程度的评估,进而可以对不同程度的病例进行针对性的防控和治疗,同时可以对严重的确诊病例给予重点关注和治疗,提高确诊病例的治愈率。
第十一方面,本申请实施方式提供了一种以特异性IgA为检测靶标评价个体患COVID-19严重程度的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA,依据特异性IgA的检测结果评价个体患COVID-19的严重程度。
第十二方面,本申请实施方式提供了一种以特异性IgA和IgM为检测靶标评价个体患COVID-19严重程度的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM,依据特异性IgA和IgM 的检测结果相关性评价个体患COVID-19的严重程度。
在本申请实施方式中,特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度;当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于5时,则评价个体患COVID-19 的程度为严重;当特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比小于5时,则评价个体患COVID-19的程度为非严重。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例或确诊病例。
本申请提供了特异性IgA和IgM作为检测靶标评价个体患COVID-19严重程度,有利于对COVID-19严重程度不同的个体提供针对性的预防措施和治疗方案,提高治愈率。
第十三方面,本申请实施方式提供了一种评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒,以特异性IgA为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA的试剂。
第十四方面,本申请实施方式提供了一种评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒,以特异性IgA和IgM为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM的试剂。
在本申请实施方式中,检测靶标来自于个体的血清、血浆和全血中的至少一种。在本申请实施方式中,个体为COVID-19疑似病例或确诊病例。
在本申请实施方式中,通过化学发光方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括磁珠、化学发光标记物、化学发光底物溶液等。在一实施例中,试剂包括包被有SARS-CoV-2抗原的磁珠、化学发光标记物标记的抗人IgA抗体、化学发光标记物标记的抗人IgM抗体、化学发光底物溶液。可选的,磁珠的粒径为 0.05μm-3μm。可选的,化学发光标记物可以但不限于为鲁米诺、异鲁米诺、三联吡啶钌、吖啶酯。可选的,化学发光底物溶液包括预激发液和激发液。具体的,预激发液可以但不限于为H2O2溶液,激发液可以但不限于为NaOH溶液。
在本申请实施方式中,通过蛋白芯片方法检测特异性Ig和IgM的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂,蛋白芯片包被有SARS-CoV-2抗原,辣根过氧化物酶标记的抗人IgA 抗体、辣根过氧化物酶标记的抗人IgM抗体、四甲基联苯胺显色液。
在本申请实施方式中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在一实施例中,试剂包括包被有SARS-CoV-2抗原的酶标板、辣根过氧化物酶标记的抗人IgA抗体、辣根过氧化物酶标记的抗人IgM抗体、四甲基联苯胺显色液。进一步,还包括样品稀释液、洗涤液、阴性对照品、阳性对照品和终止液。更进一步的,洗涤液为含吐温-20的磷酸盐缓冲液,终止液为1mol/L-5mol/L H2SO4溶液。
第十五方面,本申请实施方式提供了用于检测特异性IgA的试剂在制备评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒中的应用。
第十六方面,本本申请实施方式提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒中的应用。
在本申请实施方式中,用于检测特异性IgA和IgM的试剂包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM 的试剂。
在一实施例中,通过化学发光方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括磁珠、化学发光标记物底物溶液等。在一实施例中,通过蛋白芯片方法检测特异性IgA 和IgM的试剂包括蛋白芯片、示踪剂和显色剂等。在一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、酶标记物体和显色剂等。在另一实施例中,通过酶联免疫方法检测特异性IgA和IgM的试剂包括包被有抗原的酶标板、生物素二抗、亲和素-HRP溶液和显色剂等。
第十七方面,本申请实施方式提供了特异性IgA为检测靶标在评价 COVID-19预后情况中的应用。
本申请发明人发现在患者治疗过程中,尤其是患病程度为严重的患者的治疗过程中,特异性IgA的检测结果与治疗效果密切相关,与患者的临床症状评分具有密切相关,对患者的预后情况的评估中具有重要的参考价值。
第十八方面,本申请实施方式提供了特异性IgA和IgM为检测靶标在评价COVID-19预后情况中的应用。
本申请发明人发现在患者治疗过程中,尤其是患病程度为严重的患者的治疗过程中,特异性IgA和IgM的检测结果相关性与治疗效果密切相关,与患者的临床症状评分具有密切相关,对患者的预后情况的评估中具有重要的参考价值。
第十九方面,本申请实施方式提供了一种以特异性IgA为检测靶评价 COVID-19预后情况的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA,依据特异性IgA的检测结果评价COVID-19预后情况。
第二十方面,本申请实施方式提供了一种以特异性IgA和IgM为检测靶评价COVID-19预后情况的方法,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测特异性IgA和IgM,依据特异性IgA和IgM的检测结果的关联性评价COVID-19预后情况。
第二十一方面,本申请实施方式提供了用于检测特异性IgA的试剂在制备评价COVID-19预后情况的试剂盒中的应用。
第二十二方面,本申请实施方式提供了用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价COVID-19预后情况的试剂盒中的应用。
本申请第二十方面至第二十二方面所述的试剂的选择如上所述,在此不再赘述。
本申请提供了将特异性IgA作为检测靶标在评价COVID-19患病风险、患病严重程度、预后情况中的应用,有利于控制COVID-19的传播,增强个体预警和防;对患者进行针对性的给药用药,并能够及时监控,提高患者的治愈率。
实施例
本申请对37位COVID-19患者(实验组)和61位非COVID-19患者(对照组)进行检测比对分析,该研究得到广州医科大学附属第一医院伦理委员会的批准。
将上述实验组和对照组的血清样本在56℃灭活30min,用化学发光免疫分析试剂盒和KAESER 6600全自动化学发光免疫分析仪(重庆科斯迈生物科技有限公司)检测实验组和对照组的血清样本中针对SARS-CoV-2的刺突蛋白(S蛋白)特异性IgA、IgM和IgG抗体水平。其中,化学发光免疫分析试剂盒采用两步间接免疫分析,血清样品与磁珠孵育,未结合的材料通过磁分离进行洗涤,收集磁珠并与吖啶酯标记物一起孵育;添加底物溶液以显色,在450nm处检测光密度(OD)值。
37位COVID-19患者血清中IgA、IgM和IgG的检测结果如图1所示,可以看出,自发病后约2周以来(其中发病是在具有发热、呼吸道症状或肺部阴影),特异性IgA和IgG的表达水平均显着升高,并在接下来的2周中持续升高, IgM基本保持不变,IgA的相对OD值均高于IgM。本申请发明人经过研究发现, COVID-19患者血清中IgA含量升高,但IgM含量变化较小,而其他疾病中均是IgM含量升高,IgA含量几乎不变,因此,通过将特异性IgA和IgM作为检测靶标评价个体的COVID-19患病风险,具有重要的指导意义。
同时,将37位COVID-19患者的患病严重程度进行划分,包括严重组和非严重组,37位患者包括了25位男性(67.6%)和12位女性(32.4%)。非严重组患者有17位和严重组患者有20位,严重组患者的平均年龄(57.55±12.09岁) 比非严重组患者的平均年龄(46.06±18.18岁)大。本申请发明人发现,严重组患者中IgA的相对OD值显着高于非严重组患者,IgM的量没有明显差异,同时严重组COVID-19患者的特异性IgA和IgM的OD值比大于或等于5,而非严重组COVID-19患者的特异性IgA和IgM的OD值比小于5,进而对COVID-19 患者的患病严重程度的划分具有重要的参考价值。
通过具有logit连接函数的广义估计方程(GEE)模型估计疾病的关联性和严重性。所有统计分析均通过SPSS 23.0进行。调整年龄和性别作为协变量后,将IgA、IgG或IgM视为自变量,将疾病严重程度视为因变量。GEE模型单独用于分析抗体效价与疾病严重性之间的关系,如表1所示。P值<0.05表明危重患者和非危重患者之间存在显着差异。严重组患者和非严重组患者之间的IgA (P=0.001)或IgG(P<0.001)浓度存在显著差异;严重组患者和非严重组患者发病后,IgM水平无显着差异。
表1 GEE模型分析抗体效价与COVID-19严重程度之间的关系
抗体水平 | 回归系数 | 标准误差 | 95%CI | P值 |
IgG(相对滴度) | 0.985 | 0.216 | 0.562-1.408 | P<0.001 |
IgM(相对滴度) | -0.241 | 0.340 | -0.907-0.424 | p=0.943 |
IgA(相对滴度) | 0.608 | 0.186 | 0.244-0.973 | P=0.001 |
由此可以看出,特异性IgA、特异性IgA和IgM的相关性与COVID-19患病风险、严重程度以及预后评估都密切相关;根据特异性IgA和/或特异性IgA 和IgM的相关性以评估COVID-19患病风险、严重程度以及预后评估,对于疾病的防控以及个体的治疗都有着至关重要的意义;同时,IgG和IgM同种型的抗体已在临床和临床中被普遍用作检测抗体,而IgA的诊断价值已被大大忽略,本申请提高了IgA在COVID-19相关检测中的应用价值。
以上所揭露的仅为本申请较佳实施例而已,当然不能以此来限定本申请之权利范围,本领域普通技术人员可以理解实现上述实施例的全部或部分流程,并依本申请权利要求所作的等同变化,仍属于发明所涵盖的范围。
Claims (26)
1.特异性IgA为检测靶标在评价个体患有COVID-19风险中的应用。
2.特异性IgA和IgM为检测靶标在评价个体患有COVID-19风险中的应用。
3.如权利要求2所述的应用,其特征在于,所述评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的风险。
4.如权利要求3所述的应用,其特征在于,所述特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度,当所述特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于2时,则评价所述个体有患COVID-19的风险。
5.一种以特异性IgA为检测靶标评价个体患有COVID-19风险的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA,依据所述特异性IgA的检测结果评价所述个体患COVID-19的风险。
6.一种以特异性IgA和IgM为检测靶标评价个体患有COVID-19风险的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的风险。
7.一种评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,其特征在于,以特异性IgA为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA的试剂。
8.一种评价个体患有COVID-19风险的试剂盒,其特征在于,以特异性IgA和IgM为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM的试剂。
9.用于检测特异性IgA的试剂在制备评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用。
10.用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价个体患有COVID-19风险的试剂盒中的应用。
11.特异性IgA为检测靶标在评价个体患COVID-19严重程度中的应用。
12.特异性IgA和IgM为检测靶标在评价个体患COVID-19严重程度中的应用。
13.如权利要求12所述的应用,其特征在于,所述评价包括:通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的严重程度。
14.如权利要求13所述的应用,其特征在于,所述特异性IgA和IgM的检测结果为OD值或浓度;
当所述特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比大于或等于5时,则评价所述个体患COVID-19的程度为严重;
当所述特异性IgA和IgM的OD值比或浓度比小于5时,则评价所述个体患COVID-19的程度为非严重。
15.一种以特异性IgA为检测靶标评价个体患COVID-19严重程度的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA,依据所述特异性IgA的检测结果评价所述个体患COVID-19的严重程度。
16.一种以特异性IgA和IgM为检测靶标评价个体患COVID-19严重程度的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果相关性评价所述个体患COVID-19的严重程度。
17.一种评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒,其特征在于,以特异性IgA为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA的试剂。
18.一种评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒,其特征在于,以特异性IgA和IgM为检测靶标,包括通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM的试剂。
19.用于检测特异性IgA的试剂在制备评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒中的应用。
20.用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价个体患COVID-19严重程度的试剂盒中的应用。
21.特异性IgA为检测靶标在评价COVID-19预后情况中的应用。
22.特异性IgA和IgM为检测靶标在评价COVID-19预后情况中的应用。
23.一种以特异性IgA为检测靶评价COVID-19预后情况的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA,依据所述特异性IgA的检测结果评价COVID-19预后情况。
24.一种以特异性IgA和IgM为检测靶评价COVID-19预后情况的方法,其特征在于,通过化学发光方法、蛋白芯片方法和酶联免疫方法中的至少一种方法检测所述特异性IgA和IgM,依据所述特异性IgA和IgM的检测结果的关联性评价COVID-19预后情况。
25.用于检测特异性IgA的试剂在制备评价COVID-19预后情况的试剂盒中的应用。
26.用于检测特异性IgA和IgM的试剂在制备评价COVID-19预后情况的试剂盒中的应用。
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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