CN111543637A - 基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法 - Google Patents
基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111543637A CN111543637A CN202010512024.0A CN202010512024A CN111543637A CN 111543637 A CN111543637 A CN 111543637A CN 202010512024 A CN202010512024 A CN 202010512024A CN 111543637 A CN111543637 A CN 111543637A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- exosome
- solution
- brown algae
- centrifuging
- filtrate
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 title claims abstract description 161
- 241000199919 Phaeophyceae Species 0.000 title claims abstract description 82
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 title claims abstract description 25
- 230000008685 targeting Effects 0.000 title claims abstract description 17
- 238000010276 construction Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 85
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 claims description 62
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 61
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 40
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 38
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 24
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 20
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 20
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 20
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 20
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 claims description 19
- MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 18beta-glycyrrhetic acid Chemical compound C([C@H]1C2=CC(=O)[C@H]34)[C@@](C)(C(O)=O)CC[C@]1(C)CC[C@@]2(C)[C@]4(C)CC[C@@H]1[C@]3(C)CC[C@H](O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-YKLVYJNSSA-N 0.000 claims description 16
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims description 16
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 14
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 13
- 239000003446 ligand Substances 0.000 claims description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 13
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 13
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N (3alpha,5alpha,7alpha,12alpha)-3,7,12-trihydroxy-cholan-24-oic acid Natural products OC1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 BHQCQFFYRZLCQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000004380 Cholic acid Substances 0.000 claims description 10
- BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N cholic acid Chemical compound C([C@H]1C[C@H]2O)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 BHQCQFFYRZLCQQ-OELDTZBJSA-N 0.000 claims description 10
- 235000019416 cholic acid Nutrition 0.000 claims description 10
- 229960002471 cholic acid Drugs 0.000 claims description 10
- KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N deoxycholic acid Natural products C1CC2CC(O)CCC2(C)C2C1C1CCC(C(CCC(O)=O)C)C1(C)C(O)C2 KXGVEGMKQFWNSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 10
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 10
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 10
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims description 9
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims description 9
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims description 9
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 8
- MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N Glycyrrhetinsaeure Natural products C12C(=O)C=C3C4CC(C)(C(O)=O)CCC4(C)CCC3(C)C1(C)CCC1C2(C)CCC(O)C1(C)C MPDGHEJMBKOTSU-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N Licoricesaponin B2 Natural products C1C(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)CC1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O VTAJIXDZFCRWBR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 claims description 8
- 229960003720 enoxolone Drugs 0.000 claims description 8
- LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N glycyrrhetinic acid glycoside Natural products C1CC(C2C(C3(CCC4(C)CCC(C)(CC4C3=CC2=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)C2C(C)(C)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1OC1OC(C(O)=O)C(O)C(O)C1O LPLVUJXQOOQHMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 229960004949 glycyrrhizic acid Drugs 0.000 claims description 8
- UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N glycyrrhizic acid Natural products CC1(C)C(CCC2(C)C1CCC3(C)C2C(=O)C=C4C5CC(C)(CCC5(C)CCC34C)C(=O)O)OC6OC(C(O)C(O)C6OC7OC(O)C(O)C(O)C7C(=O)O)C(=O)O UYRUBYNTXSDKQT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000001685 glycyrrhizic acid Substances 0.000 claims description 8
- 235000019410 glycyrrhizin Nutrition 0.000 claims description 8
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 claims description 8
- 229940041290 mannose Drugs 0.000 claims description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 4
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 4
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 4
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N Lycopene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1C(=C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=C)CCCC2(C)C UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001746 carotenes Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000005473 carotenes Nutrition 0.000 claims description 3
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 3
- 229930013032 isoflavonoid Natural products 0.000 claims description 3
- 150000003817 isoflavonoid derivatives Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000012891 isoflavonoids Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 3
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 3
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 3
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 3
- NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N vitamin A aldehyde Natural products O=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 4
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 abstract description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 20
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 16
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 10
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 7
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 5
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- -1 flavonoid compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 3
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 3
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 3
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 108010049120 parasin I Proteins 0.000 description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 2
- 240000002234 Allium sativum Species 0.000 description 1
- 208000017667 Chronic Disease Diseases 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 208000004930 Fatty Liver Diseases 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 206010019708 Hepatic steatosis Diseases 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010019160 Pancreatin Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 1
- 241000219094 Vitaceae Species 0.000 description 1
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 1
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 208000010706 fatty liver disease Diseases 0.000 description 1
- 235000004611 garlic Nutrition 0.000 description 1
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 1
- 235000021021 grapes Nutrition 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000003094 microcapsule Substances 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 229940055695 pancreatin Drugs 0.000 description 1
- NFEQUGKCQWAGLY-UAAVROCESA-N parasin i Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN NFEQUGKCQWAGLY-UAAVROCESA-N 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;trioxotungsten Chemical compound O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.O=[W](=O)=O.OP(O)(O)=O IYDGMDWEHDFVQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000003910 polypeptide antibiotic agent Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 231100000240 steatosis hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法，属于保健食品领域，该方法通过提取褐藻外泌体，并对其进行表面修饰，最终包覆功能因子，能够获得负载疏水性活性成分的外泌体、负载亲水性活性成分的外泌体以及负载两亲性活性成分的外泌体。该负载功能因子外泌体能够靶向肝脏，具有靶向性强、毒性低、稳定性高的特点。
Description
技术领域
本发明属于保健食品领域，具体地涉及一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法。
背景技术
食品中的活性成分例如黄酮类化合物、酚酸、萜类化合物、类胡萝卜素等有着较强的抗癌、抗氧化、免疫调节、抗微生物等生理功能，能够参与人体生理及病理的调节和慢性病的防治，对人体的健康发挥着重要的作用。活性成分对肝脏的各种疾病例如慢性乙型肝炎、脂肪肝、肝衰竭、肝硬化等有着较好的防治作用，但是这些活性成分都易快速降解和失活，且有着较差的靶向性和生物利用度，需要包封在一些载体中，研究广泛的载体有乳液、脂质体、纳米粒、微胶囊等，但是这些材料虽然较好地解决了活性成分不稳定的缺点，但是依然没有解决靶向性差的缺陷，而且均存在一定的安全性问题。
外泌体作为活性物质的载体具有很多优势，比如外泌体更易储存且安全性较高，能提高活性物质的稳定性，具有较强的穿透各种生物屏障的能力，且可以避免免疫系统的吞噬。对于外泌体的提取，如今使用比较广泛的原材料有姜、蒜、葡萄、牛奶等，还没有发现研究褐藻中外泌体的提取与应用的相关报道，且无外泌体负载活性成分靶向肝脏的相关研究。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明目的是提供一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法，构建可靶向肝脏的包埋食品活性成分的外泌体载体，具有靶向性强、毒性低、生物利用率高等特点。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子疏水性外泌体的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2-3遍，切碎，在0-4℃下匀浆1-2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，使得褐藻外泌体溶液的浓度为1-3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1-3mg的配体和1-2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1-0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45-55℃保持10-20min，随后冷却至20-25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2-4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。所述配体为胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖。
(3)将0.5-1.5mg/mL疏水性活性成分溶液与步骤2获得的外泌体分散体混合，并保持溶质浓度≥10wt％，在室温下放置12-18min，然后以10000g的速度离心10min，再通过在4℃下以135000g的速度离心90min，收集沉淀即为负载疏水性活性成分的外泌体。所述疏水性活性成分溶液的溶剂由乙腈与乙醇按体积比1：1组成。所述疏水性活性成分溶液中的溶质为多酚、类黄酮、异类黄酮、胡萝卜素及其衍生物、疏水性维生素、蛋白或多糖等。
本发明还提供了一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子亲水性外泌体的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2-3遍，切碎，在0-4℃下匀浆1-2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，使得褐藻外泌体溶液的浓度为1-3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1-3mg的配体和1-2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1-0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45-55℃保持10-20min，随后冷却至20-25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2-4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。所述配体为胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖。
(3)将30-60μL浓度为0.5-1.5mg/mL的亲水性活性化合物溶液与100-200μL浓度为0.5-1.5mg/mL的外泌体分散液电穿孔试管中混合，在350V和150ms的条件下，用电穿孔仪对电穿孔试管进行电穿孔。然后在37℃的条件下孵育使外泌体的膜融合，得到亲水性外泌体。所述亲水性活性成分溶液中的溶质为溶解于水中的质量分数至少为0.001％的亲水性多糖、蛋白等。
本发明还提供了一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子两性外泌体的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2-3遍，切碎，在0-4℃下匀浆1-2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，使得褐藻外泌体溶液的浓度为1-3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1-3mg的配体和1-2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1-0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45-55℃保持10-20min，随后冷却至20-25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2-4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。所述配体为胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖。
(3)用PBS溶液将外泌体稀释至总蛋白浓度为0.1-0.3mg/mL的溶液，然后加入与溶液等体积、浓度为0.3-0.6mg/mL的两亲性活性成分PBS溶液，得到两亲性活性成分和外泌体的混合物。所述两亲性活性成分为蛋白质、多糖或磷脂类物质。
(4)将两亲性活性成分和外泌体的混合物进行超声处理，设置超声电压为500V、频率为2kHz、20％功率，通过4s脉冲和2s暂停的超声模式超声1-3min，随后在冰上冷却2-4min，重复超声处理5-7次，得到负载两亲性活性成分的外泌体。
进一步地，步骤4还可以为：将两亲性活性成分和外泌体的混合物通过孔径为200nm的脂质体挤出机挤出，并进行凝胶过滤层析纯化，获得负载两亲性活性成分的外泌体。
进一步地，步骤2中所述采用蔗糖梯度溶液进行纯化的方法为：将获得缀合物加入超速离心管中，然后依次加入浓度为30wt％、45wt％、60wt％的蔗糖溶液，在4℃100000g下离心1.5h后，在浓度为30wt％和45wt％的蔗糖溶液之间以及浓度为45wt％和60wt％的蔗糖溶液之间均有一条明亮带，收集，即为纯化后的外泌体。
进一步地，所述磷酸盐缓冲溶液的pH均为7.4。
与现有技术相比，本发明具有的有益效果是：本发明首次用褐藻进行外泌体的提取，相比使用较多的牛奶、细胞等提取材料，褐藻的来源较广泛，成本较低。本发明首次用体液外泌体提取试剂盒来进行植物外泌体的提取，相比植物传统的梯度离心方法，此方法方便快捷。本发明用胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖B12作为配体来修饰负载活性成分的外泌体，相比无修饰的外泌体，此外泌体对肝脏细胞的靶向性强，加强了生物活性成分在肝脏的局部作用，本发明所制备的外泌体可负载亲水、疏水、两亲性的功能活性成分，拓展了外泌体在保健食品领域的应用，且相比乳液、微球、纳米粒子等载体，此外泌体来自植物，安全性高，可广泛负载多种不同的功能活性成分，且有着穿透力强、稳定性高的天然优势。达到了对肝脏相关疾病的预防、调节作用。
附图说明
图1为外泌体的透射电镜图。
具体实施方式
本发明中所采用的磷酸盐缓冲溶液的pH均为7.4。
实施例1
本发明公开了一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子疏水性外泌体的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2遍，切碎，在0℃下匀浆1min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液。
对上述方法获得的褐藻外泌体溶液进行透射电镜观察，具体方法为：取10μL外泌体，滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去表面液体，将10μL磷钨酸滴加于铜网上沉淀1min，滤纸吸去表面液体，常温干燥5-10分钟，100kV进行电镜检测成像，获得透射电镜成像结果。结果如图1，该褐藻外泌体形态均匀，呈膜性小囊泡状，有完整的包膜结构，外形呈圆盘状，且粒径大小约40nm。
将上述褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，测得褐藻外泌体溶液的浓度为2.8mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1mg的胆酸和1mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45℃保持10min，随后冷却至20℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2mL，反应2h后，得到缀合物，将获得的缀合物加入超速离心管中，然后依次加入浓度为30wt％、45wt％、60wt％的蔗糖溶液，在4℃100000g下离心1.5h后，在浓度为30wt％和45wt％的蔗糖溶液之间以及浓度为45wt％和60wt％的蔗糖溶液之间均有一条明亮带，收集，即为纯化后的外泌体，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。
(3)将0.5mg/mL山奈酚溶液与步骤2获得的外泌体分散体混合，并保持溶剂浓度为10wt％，所述山奈酚溶液的溶剂由乙腈与乙醇按体积比1：1组成。在室温下放置12min，然后以10000g的速度离心10min，再通过在4℃下以135000g的速度离心90min，收集沉淀即为负载疏水性活性成分的外泌体。
分别将0.5mg未包埋的山奈酚的外泌体和0.5mg包埋的山奈酚的外泌体分溶解在0.5mL的PBS中，再在10kDa的透析盒中透析，将透析盒放入含有1.5mLPBS的透析介质的加盖培养皿中，然后在37℃的振荡器(15r/min)中震荡，每隔1h，从培养皿中取出0.1mL的介质，然后加入新鲜的PBS溶液，用分光光度计测定取出的介质的山奈酚的浓度。最终测出胆酸的缀合率为62.4％，证明胆酸能与褐藻外泌体成功缀合，达到靶向肝脏的目的，得到的包埋率为20.5％，说明外泌体对山奈酚有着较好的包埋、保护作用。
将上述方法获得负载疏水性活性成分的外泌体进行体外消化实验，方法具体为：将负载疏水性活性成分的外泌体配制成浓度为2mg/mL，负载疏水性活性成分的外泌体-PBS溶液，取1mL负载疏水性活性成分的外泌体-PBS溶液加入1.34μL质量浓度浓度为18.5％w/v、pH为2.0的HCl和2.024μL浓度为80mg/mL的胃蛋白酶-HCl溶液，在37℃下缓慢旋转孵育30min，然后将80μ0含有浓度为24mg/mL的胆汁提取物和浓度为4mg/mL的胰酶溶解在质量浓度0.1N的NaHCO3中，用质量浓度0.1N的NaHCO3调节pH至6.5，再在相同的条件下孵育30min，通过测定粒径和表面电荷来评价负载疏水性活性成分的外泌体的稳定性。
由表1可知，消化前，负载疏水性活性成分的外泌体的平均粒径为100.29±9.45，且粒径大小均匀一致，说明提取所得的外泌体形态完好，无明显破坏；其Zeta电势为-135.09±191.05mV，说明外泌体在体外有着较好的稳定性，且外泌体表面所带电荷为负，符合外泌体的检测标准。经体外模拟胃肠道消化之后，负载疏水性活性成分的外泌体的粒径和电势都有微小的变化，但是都无显著性的差异，说明负载疏水性活性成分的外泌体在经过体内胃肠道消化后依然能较好的维持粒径与电势特性，因此能较好的保护好包埋的功能因子，达到靶向肝脏递送功能因子的目的。
表1体外消化前及体外消化后外泌体的粒径及电势分析
| 外泌体 | 平均粒径/nm | Zeta电势/mV |
| 消化前 | 100.29±9.45<sup>a</sup> | -135.09±191.05<sup>a</sup> |
| 消化后 | 74.55±15.92<sup>a</sup> | -157.15±68.73<sup>a</sup> |
此外，本发明的技术方案中所采用的疏水性活性成分可以为多酚、类黄酮、异类黄酮、胡萝卜素及其衍生物、疏水性维生素、蛋白或多糖等，山奈酚仅为其中一种实施例。
实施例2
本发明还公开了一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子亲水性外泌体的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗3遍，切碎，在4℃下匀浆2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，经透射电镜观察证实，该褐藻外泌体形态均匀，呈膜性小囊泡状，有完整的包膜结构，外形呈圆盘状，且粒径大小约40nm。将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，测得褐藻外泌体溶液的浓度为1mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将3mg的甘草酸和2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在55℃保持20min，随后冷却至25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。
(3)将60μL浓度为1.5mg/mL的抗菌肽parasin I溶液与200μL浓度为1.5mg/mL的外泌体分散液电穿孔试管中混合，在350V和150ms的条件下，用电穿孔仪对电穿孔试管进行电穿孔。然后在37℃的条件下孵育使外泌体的膜融合，得到亲水性外泌体。
将上述方法获得负载亲水性活性成分的外泌体进行体外消化实验，并通过测定粒径和表面电荷来评价负载亲水性活性成分的外泌体的稳定性。实验数据显示，体外消化前后，该负载亲水性活性成分的外泌体的粒径无明显改变，Zeta电势无明显改变，说明该负载亲水性活性成分的外泌体在经过体内胃肠道消化后依然能保持较好的粒径和电势，能较好的保护好包埋的功能因子，达到靶向肝脏递送功能因子的目的。
此外，本发明的技术方案中所采用的亲水性活性成分可以为溶解于水中的质量分数至少为0.001％的亲水性多糖、蛋白等，抗菌肽parasin I仅为其中一种实施例。
实施例3
本发明还公开了一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子两性外泌体的构建方法，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗3遍，切碎，在4℃下匀浆2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，经透射电镜观察证实，该褐藻外泌体形态均匀，呈膜性小囊泡状，有完整的包膜结构，外形呈圆盘状，且粒径大小约40nm。将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，测得褐藻外泌体溶液的浓度为3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将3mg的甘草次酸和2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45℃保持10min，随后冷却至25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。
(3)用PBS溶液将外泌体稀释至总蛋白浓度为0.1mg/mL的溶液，然后加入与溶液等体积、浓度为0.3mg/mL的卵磷脂PBS溶液，得到两亲性活性成分和外泌体的混合物。
(4)将两亲性活性成分和外泌体的混合物进行超声处理，设置超声电压为500V、频率为2kHz、20％功率，通过4s脉冲和2s暂停的超声模式超声10min，随后在冰上冷却2min，重复超声处理5次，得到负载两亲性活性成分的外泌体。
将上述方法获得负载两亲性活性成分的外泌体进行体外消化实验，并通过测定粒径和表面电荷来评价负载两亲性活性成分的外泌体的稳定性。实验数据显示，体外消化前后，该负载两亲性活性成分的外泌体的粒径无明显变化，Zeta电势无明显变化，说明该负载两亲性活性成分的外泌体在经过体内胃肠道消化后依然能保持较好的粒径和电势，能较好的保护好包埋的功能因子，达到靶向肝脏递送功能因子的目的。
实施例4
(1)将新鲜的褐藻水洗3遍，切碎，在4℃下匀浆2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，经透射电镜观察证实，该褐藻外泌体形态均匀，呈膜性小囊泡状，有完整的包膜结构，外形呈圆盘状，且粒径大小约40nm。将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，测得褐藻外泌体溶液的浓度为3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将3mg的甘露糖和2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45℃保持10min，随后冷却至25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。
(3)用PBS溶液将外泌体稀释至总蛋白浓度为0.3mg/mL的溶液，然后加入与溶液等体积、浓度为0.6mg/mL的卵磷脂的PBS溶液，得到两亲性活性成分和外泌体的混合物。
(4)将两亲性活性成分和外泌体的混合物通过孔径为200nm的脂质体挤出机挤出，并进行凝胶过滤层析纯化，获得负载两亲性活性成分的外泌体。
将上述方法获得负载两亲性活性成分的外泌体进行体外消化实验，并通过测定粒径和表面电荷来评价负载两亲性活性成分的外泌体的稳定性。实验数据显示，体外消化前后，该负载两亲性活性成分的外泌体的粒径无明显变化，Zeta电势无明显变化，说明该负载两亲性活性成分的外泌体在经过体内胃肠道消化后依然能保持较好的粒径和电势，能较好的保护好包埋的功能因子，达到靶向肝脏递送功能因子的目的。
此外，本发明的技术方案中所采用的两亲性活性成分可以为蛋白质、多糖或磷脂类物质，卵磷脂仅为其中一种实施例。
Claims (6)
1.一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子疏水性外泌体的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2-3遍，切碎，在0-4℃下匀浆1-2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，使得褐藻外泌体溶液的浓度为1-3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1-3mg的配体和1-2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1-0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45-55℃保持10-20min，随后冷却至20-25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2-4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。所述配体为胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖。
(3)将0.5-1.5mg/mL疏水性活性成分溶液与步骤2获得的外泌体分散体混合，并保持溶质浓度≥10wt％，在室温下放置12-18min，然后以10000g的速度离心10min，再通过在4℃下以135000g的速度离心90min，收集沉淀即为负载疏水性活性成分的外泌体。所述疏水性活性成分溶液的溶剂由乙腈与乙醇按体积比1：1组成。所述疏水性活性成分溶液中的溶质为多酚、类黄酮、异类黄酮、胡萝卜素及其衍生物、疏水性维生素、蛋白或多糖等。
2.一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子亲水性外泌体的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2-3遍，切碎，在0-4℃下匀浆1-2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，使得褐藻外泌体溶液的浓度为1-3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1-3mg的配体和1-2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1-0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45-55℃保持10-20min，随后冷却至20-25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2-4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。所述配体为胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖。
(3)将30-60μL浓度为0.5-1.5mg/mL的亲水性活性化合物溶液与100-200μL浓度为0.5-1.5mg/mL的外泌体分散液电穿孔试管中混合，在350V和150ms的条件下，用电穿孔仪对电穿孔试管进行电穿孔。然后在37℃的条件下孵育使外泌体的膜融合，得到亲水性外泌体。所述亲水性活性成分溶液中的溶质为溶解于水中的质量分数至少为0.001％的亲水性多糖、蛋白等。
3.一种基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子两性外泌体的构建方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
(1)将新鲜的褐藻水洗2-3遍，切碎，在0-4℃下匀浆1-2min，得到褐藻汁，将褐藻汁过滤，收集滤液，将滤液分别在1000g下离心10min、2000g下离心20min、4000g离心30min、10000g离心1h，收集上清液，将上清液用体液外泌体提取试剂盒进行提取纯化，得到褐藻外泌体溶液，将褐藻外泌体溶液溶解于磷酸盐缓冲溶液(PBS)中，使得褐藻外泌体溶液的浓度为1-3mg/mL，得到外泌体-磷酸盐缓冲溶液。
(2)将1-3mg的配体和1-2mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)溶解于0.1-0.15mL的二甲基亚砜(DMSO)中，并在45-55℃保持10-20min，随后冷却至20-25℃，加入步骤1得到的外泌体-磷酸盐缓冲溶液2-4mL，反应2h后，得到缀合物，采用蔗糖梯度溶液进行纯化，并将纯化后的外泌体溶解在PBS中，得到外泌体分散液。所述配体为胆酸、甘草酸、甘草次酸或甘露糖。
(3)用PBS溶液将外泌体稀释至总蛋白浓度为0.1-0.3mg/mL的溶液，然后加入与溶液等体积、浓度为0.3-0.6mg/mL的两亲性活性成分PBS溶液，得到两亲性活性成分和外泌体的混合物。所述两亲性活性成分为蛋白质、多糖或磷脂类物质。
(4)将两亲性活性成分和外泌体的混合物进行超声处理，设置超声电压为500V、频率为2kHz、20％功率，通过4s脉冲和2s暂停的超声模式超声1-3min，随后在冰上冷却2-4min，重复超声处理5-7次，得到负载两亲性活性成分的外泌体。
4.根据权利要求3所述两性活性成分负载的外泌体的构建方法，其特征在于，步骤4还可以为：将两亲性活性成分和外泌体的混合物通过孔径为200nm的脂质体挤出机挤出，并进行凝胶过滤层析纯化，获得负载两亲性活性成分的外泌体。
5.根据权利要求1-3中任一项所述构建方法，其特征在于，步骤2中所述采用蔗糖梯度溶液进行纯化的方法为：将获得缀合物加入超速离心管中，然后依次加入浓度为30wt％、45wt％、60wt％的蔗糖溶液，在4℃100000g下离心1.5h后，在浓度为30wt％和45wt％的蔗糖溶液之间以及浓度为45wt％和60wt％的蔗糖溶液之间均有一条明亮带，收集，即为纯化后的外泌体。
6.根据权利要求1-3中任一项所述构建方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液的pH均为7.4。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010512024.0A CN111543637B (zh) | 2020-06-08 | 2020-06-08 | 基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010512024.0A CN111543637B (zh) | 2020-06-08 | 2020-06-08 | 基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111543637A true CN111543637A (zh) | 2020-08-18 |
| CN111543637B CN111543637B (zh) | 2022-07-22 |
Family
ID=71997054
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010512024.0A Active CN111543637B (zh) | 2020-06-08 | 2020-06-08 | 基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111543637B (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113209140A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-08-06 | 上海圣特佳健康科技发展有限公司 | 植物来源的细胞外囊泡、其用途及包含其的产品 |
| CN113462645A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-10-01 | 上海圣特佳健康科技发展有限公司 | 包含nk细胞和植物来源的外泌体的组合物、其用途及包含其的产品 |
| CN113462632A (zh) * | 2021-08-13 | 2021-10-01 | 徐州医科大学 | 一种苦瓜外泌体、提取方法及在制备治疗烧烫伤皮肤药物中的应用 |
| WO2023242605A1 (en) | 2022-06-14 | 2023-12-21 | Támogatott Kutatócsoportok Irodája | Extracellular vesicles for use in therapy |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1743008A (zh) * | 2005-09-23 | 2006-03-08 | 南开大学 | 纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法 |
| US20160045448A1 (en) * | 2014-08-13 | 2016-02-18 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Edible plant-derived microvesicle compositions including conjugated therapeutic agents and methods for using the same |
| CN110448696A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-11-15 | 河南科技大学 | 基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法与应用 |
-
2020
- 2020-06-08 CN CN202010512024.0A patent/CN111543637B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1743008A (zh) * | 2005-09-23 | 2006-03-08 | 南开大学 | 纳米肝靶向生物降解药物载体材料的制备方法 |
| US20160045448A1 (en) * | 2014-08-13 | 2016-02-18 | University Of Louisville Research Foundation, Inc. | Edible plant-derived microvesicle compositions including conjugated therapeutic agents and methods for using the same |
| CN110448696A (zh) * | 2019-08-30 | 2019-11-15 | 河南科技大学 | 基于盐藻外泌体靶向药物递送载体的制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| MILLER, DONALD等: "Interspecies communication between plant and mouse gut host cells through edible plant derived exosome-like nanoparticles", 《MOLECULAR NUTRITION AND FOOD RESEARCH》 * |
| 王子妤等: "外泌体作为药物载体应用及其靶向给药策略", 《中国细胞生物学学报》 * |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113209140A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-08-06 | 上海圣特佳健康科技发展有限公司 | 植物来源的细胞外囊泡、其用途及包含其的产品 |
| CN113462645A (zh) * | 2021-03-26 | 2021-10-01 | 上海圣特佳健康科技发展有限公司 | 包含nk细胞和植物来源的外泌体的组合物、其用途及包含其的产品 |
| CN113462645B (zh) * | 2021-03-26 | 2023-11-28 | 上海瑞开投资管理有限公司 | 包含nk细胞和植物来源的外泌体的组合物、其用途及包含其的产品 |
| CN113462632A (zh) * | 2021-08-13 | 2021-10-01 | 徐州医科大学 | 一种苦瓜外泌体、提取方法及在制备治疗烧烫伤皮肤药物中的应用 |
| CN113462632B (zh) * | 2021-08-13 | 2023-08-29 | 徐州医科大学 | 一种苦瓜外泌体、提取方法及在制备治疗烧烫伤皮肤药物中的应用 |
| WO2023242605A1 (en) | 2022-06-14 | 2023-12-21 | Támogatott Kutatócsoportok Irodája | Extracellular vesicles for use in therapy |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN111543637B (zh) | 2022-07-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111543637B (zh) | 基于褐藻的可靶向肝脏缓释功能因子外泌体的构建方法 | |
| Reynolds et al. | Aloe vera leaf gel: a review update | |
| Saravanakumar et al. | Fungal enzyme-mediated synthesis of chitosan nanoparticles and its biocompatibility, antioxidant and bactericidal properties | |
| Je et al. | Chitosan as potential marine nutraceutical | |
| JP5154964B2 (ja) | ローヤルゼリー分解酵素含有物 | |
| EP3234167B1 (en) | Chitin and chitosan producing methods | |
| US20220008349A1 (en) | Plant tissue-derived nanoparticles and food powders | |
| CN107648205A (zh) | 一种促进伤口愈合的胶原肽敷料及其制备方法 | |
| CN111567798B (zh) | 基于褐藻的可靶向肠道缓释功能因子外泌体的构建方法 | |
| JP2002065206A (ja) | 免疫賦活食品 | |
| Xu et al. | β-Glucans obtained from fungus for wound healing: A review | |
| KR20220143266A (ko) | 사이클로덱스트린-커큐민 캡슐화된 키토산/알지네이트 경구용 나노입자 및 이의 대장염 치료 용도 | |
| Hansen et al. | Applications of crustacean wastes in biotechnology | |
| JP6842014B2 (ja) | トロンボスポンジン１遺伝子発現亢進用組成物 | |
| KR101206228B1 (ko) | 키토산을 이용한 Ｓｐｉｒｕｌｉｎａ ｍａｘｉｍａ의 면역활성 증진을 위한 식용소재 나노입자화 방법과 그 나노입자 및 그를 함유한 건강 기능성 식품 | |
| JP3649787B2 (ja) | 魚類の腸球菌感染症用予防剤およびその用途 | |
| Jahangeer et al. | Applications and perspectives of chitosan as functional biopolymer; an extended review | |
| US20220018038A1 (en) | Plant tissue-derived nanofibres | |
| CN110522762B (zh) | 一种具有预防和治疗炎症的生物多糖及其应用 | |
| KR100517354B1 (ko) | 해조류 유래 올리고당, 상기 올리고당의 제조방법 및사용방법 | |
| Mathew et al. | Fucoidans: a marine antioxidant | |
| CN116602959B (zh) | 一种具有抗炎镇痛功效的含茶活性成分的组合物脂质体及其应用 | |
| CN117343135B (zh) | 蛹虫草肽、复合物及其制备方法和用于治疗酒精性肝损伤疾病的应用 | |
| CN112694622B (zh) | 一种温敏型木立芦荟-壳聚糖-聚（n-异丙基丙烯酰胺）凝胶 | |
| KR19990026532A (ko) | 키토올리고당에 의한 간기능 장해 예방 및 개선제 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |