CN111543388A - 一种去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法，该方法选择12周龄小鼠，转至饲养笼中正常喂食2日；第3日行去势手术；术后7天起，行维甲酸灌胃；继续正常食量饲养至第28天，造模结束。本发明的方法可以缩短造模周期、提高造模成功率稳定性，进而提高实验效率，减少科研成本。
Description
技术领域
本发明涉及骨质疏松疾病研究技术领域，具体涉及一种去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法。
背景技术
骨质疏松症是以骨量减少及骨组织微观结构为特征的一种全身性骨骼疾病，伴有骨的脆性增加、易于发生骨折的风险。据估计，全球目前约有2亿人患有骨质疏松症，骨质疏松症已经成为一个全球性的公共卫生疾病。其中，女性由于峰骨量较低及绝经后雌激素水平下降，发病率较男性为高。
建立理想的骨质疏松症的动物模型是对治疗和预防骨质疏松症新药的药物代谢动力学、药效学、药物作用影响因素等进行研究的基础。在涉及骨质疏松疾病的研究中通常需要建造骨质疏松动物模型以进行相关实验。研究人员利用各种动物模型，模拟妇女绝经后的生理状态，探讨在雌激素分泌不足的情况下，骨形态发生的变化，以及各种反映骨代谢生化指标的变化，试图更透彻了解绝经后骨质疏松发生机制，建立一套有效、快速的判断骨质疏松标准，为临床治疗确定方向。现在主流的骨质疏松动物模型的建造方式主要包括去势法(切除双侧卵巢)、药物灌胃法、激素注射法等。
如中国发明专利“一种OVX大鼠骨质疏松模型构建方法”(公开号：CN 103393477A，公开日：2013年11月20日)公开了一种利用去势法建造骨质疏松动物模型的方法，方法如下：Wistar大鼠6周龄进入屏障环境后使其适应2周，于大鼠8周龄时开始实验处理；16只大鼠随机分配入假手术组，双侧卵巢切除组，卵巢切除手术完成后给予实验大鼠3个月时间形成骨质疏松状态，并在药物干预前行活体显微CT扫描以验证模型动物的骨质疏松状态。
上述去势法存在建造模型周期过长的缺点(如使用雌性大鼠，造模周期一般为3个月，如使用雌性小鼠，造模周期一般为4个月)，而药物灌胃法及激素注射法则存在建模成功率不稳定的缺点。
发明内容
(一)解决的技术问题
针对现有技术的不足，本发明提供了一种复合法建造小鼠骨质疏松模型的方法，以缩短建造模型的周期，同时提升建模的效果。
(二)技术方案
为实现上述缩短造模周期、提高造模成功率稳定性的目的，本发明提供如下技术方案：
一种去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法，所述方法具体包括以下步骤：
(1)选择12周龄小鼠，转至饲养笼中正常喂食2日，以平稳其各项生理指标；
(2)第3日对小鼠进行去势手术；
(3)手术后第7天起，对小鼠进行维甲酸灌胃操作；
(4)继续正常食量饲养至第28天，造模结束；
(5)对小鼠股骨进行微计算机断层扫描，评价造模效果。
优选的，所述步骤(2)中，去势手术的具体操作方法如下：
a.将3％戊巴比妥钠水溶液按10ml/kg予以腹腔注射，待麻醉完善后将小鼠俯卧位于超净操作台，固定四肢，在中央起自髂骨上方剃去1.5*2cm的横向长方形的毛发，并用0.5％活力碘消毒；
b.待活力碘风干后,使用手术刀沿中线切开1cm左右切口，止血钳钝性分离皮下筋膜使切口与肌群可以相对移动；然后用齿镊将切口拉至一侧，暴露左侧腹外斜肌后部，钝性分离肌层上面脂肪层后，用组织剪离断腹外斜肌及深肌层，暴露并打开腹膜，用齿镊探寻位于肾脏底部下方的卵巢；
c.暴露卵巢后将其用齿镊提起，使用4-0或5-0号丝线围绕卵巢输卵管连接部进行结扎；
d.结扎完毕后用组织剪切出卵巢，并局部涂抹止血粉；
e.关闭腹腔，缝合筋膜并局部使用抗生素生理盐水冲洗；
f.操作完毕后将切口用齿镊拉至另外一侧，重复上述步骤；
g缝合切口，并局部涂抹抗生素粉剂；
h.向小鼠腹腔注射0.5ml5％葡萄糖，将小鼠放置保温毯复苏。
优选的，所述步骤(3)中，维甲酸灌胃的具体操作方法如下：将维甲酸溶于超纯水配置成6.5％浓度的溶液，按照150mg/kg的剂量，使用12号灌胃针对小鼠连续灌胃2周。
(三)有益效果
与现有技术相比，本发明提出了一种复合法建造小鼠骨质疏松模型的方法，具备以下有益效果：
1)采用本发明的造模方法，雌性小鼠的骨小梁密度明显下降、骨小梁分离数上升、骨小梁数变小，说明小鼠的骨质疏松程度较高，更贴合模拟了骨质疏松的生理病理环境，具有较高的可信度；
2)本发明造模周期为1个月左右，造模周期较传统的去势法短，减小了相关研究的科研经费，可以缩短科研周期，促进相关领域研究发展。
附图说明
图1为本发明具体实施方式中小鼠的股骨Micro-CT检测结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。
图2为本发明具体实施方式中小鼠的股骨骨小梁密度检测结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。
图3本发明具体实施方式中小鼠的股骨骨小梁分离数检测结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。
图4本发明具体实施方式中小鼠的股骨骨小梁数检测结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
如表1所示，选择45只12周龄小鼠，转至饲养笼中正常喂食2日，以平稳其各项生理指标；第3日，45只小鼠随机进入假手术组、去势组、手术组。
表1：
| 数量(只) | 体重(g) | 鼠龄(W) | 检测时间(W) | |
| 假手术组 | 15 | 24±1.51 | 12 | 16 |
| 去势组 | 15 | 25±1.34 | 12 | 16 |
| 手术组 | 15 | 25±0.98 | 12 | 16 |
其中，假手术组仅在手术中单纯夹持卵巢，不予摘除，术后不对小鼠进行维甲酸灌胃操作，造模于第28天结束；造模完毕后对小鼠股骨进行微计算机断层扫描，对小鼠的股骨骨小梁密度、骨小梁分离数、骨小梁数进行分析。
去势组在手术中摘除卵巢，术后不对小鼠进行维甲酸灌胃操作，造模于第28天结束；造模完毕后对小鼠股骨进行微计算机断层扫描，对小鼠的股骨骨小梁密度、骨小梁分离数、骨小梁数进行分析。
手术组在手术中摘除卵巢，并在术后对小鼠进行维甲酸灌胃操作，造模于第28天结束；造模完毕后对小鼠股骨进行微计算机断层扫描，对小鼠的股骨骨小梁密度、骨小梁分离数、骨小梁数进行分析。
检测结果：
图1为小鼠的股骨Micro-CT检测结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。从图1可以看出，a组小梁密度较高，无明显骨质疏松；b组骨小梁密度下降，骨质疏松程度较轻；c组骨小梁密度明显下降，骨质疏松程度较高。
图2为通过Micro-CT检测得到的小鼠的股骨骨小梁密度结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。结果表明，c组较a组，b组相比，骨小梁密度降低，且具有统计学意义(P＜0.0001)，表明骨松程度较高。
图3为通过Micro-CT检测得到的小鼠的股骨骨小梁分离数结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。结果表明，c组较a组，b组相比，骨小梁分离数较大，且具有统计学意义(P＜0.001)，表明骨松程度较高。
图4为通过Micro-CT检测得到的小鼠的股骨骨小梁数结果，其中a为假手术组、b为去势组、c为手术组。结果表明，c组较a组，b组相比，骨小梁数较小，且具有统计学意义(P＜0.0001)，表明骨松程度较高。
需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (3)
1.一种去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法，其特征在于：所述方法具体包括以下步骤：
(1)选择12周龄小鼠，转至饲养笼中正常喂食2日，以平稳其各项生理指标；
(2)第3日对小鼠进行去势手术；
(3)手术后第7天起，对小鼠进行维甲酸灌胃操作；
(4)继续正常食量饲养至第28天，造模结束；
(5)对小鼠股骨进行微计算机断层扫描，评价造模效果。
2.一种如权利要求1所述的去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法，其特征在于：所述步骤(2)中，去势手术的具体操作方法如下：
a.将3％戊巴比妥钠水溶液按10ml/kg予以腹腔注射，待麻醉完善后将小鼠俯卧位于超净操作台，固定四肢，在中央起自髂骨上方剃去1.5*2cm的横向长方形的毛发，并用0.5％活力碘消毒；
b.待活力碘风干后,使用手术刀沿中线切开1cm切口，使用止血钳钝性分离皮下筋膜使切口与肌群可以相对移动；然后用齿镊将切口拉至一侧，暴露左侧腹外斜肌后部，钝性分离肌层上面脂肪层后，用组织剪离断腹外斜肌及深肌层，暴露并打开腹膜，用齿镊探寻位于肾脏底部下方的卵巢；
c.暴露卵巢后将其用齿镊提起，使用4-0或5-0号丝线围绕卵巢输卵管连接部进行结扎；
d.结扎完毕后用组织剪切出卵巢，并局部涂抹止血粉；
e.关闭腹腔，缝合筋膜并局部使用抗生素生理盐水冲洗；
f.操作完毕后将切口用齿镊拉至另外一侧，重复上述步骤；
g.缝合切口，并局部涂抹抗生素粉剂；
h.向小鼠腹腔注射0.5ml5％葡萄糖，将小鼠放置保温毯复苏。
3.一种如权利要求1所述的去势联合药物建造小鼠骨质疏松模型的方法，其特征在于：所述步骤(3)中，维甲酸灌胃的具体操作方法如下：将维甲酸溶于超纯水配置成6.5％浓度的溶液，按照150mg/kg的剂量，使用12号灌胃针对小鼠连续灌胃2周。
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