CN111670859A - 一种肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肌少‑骨质疏松症大鼠模型的构建方法,选取雌性未孕6月龄SD大鼠,切除双侧卵巢后饲养1周,对大鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液0.8‑1.2mg/kg/d,连续注射2周;继续饲养大鼠8‑9周后,即得到肌少‑骨质疏松症大鼠模型;同时还确立了简单、可靠的肌少‑骨质疏松症判断指标。本发明的复合造模法具有造模周期短、模型稳定、大鼠成活率高、可操作性强、成本低等优点,能有效区分SP和OP,可以较为真实的模拟人类的肌少‑骨质疏松症,重复性高,经济实用,为研究OS的病因病机及防治策略提供理论基础。
Description
技术领域
本发明涉及生物模型构建领域,尤其涉及一种肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法。
背景技术
骨质疏松症(OP)是以骨量降低、骨微结构损害及骨脆性增加为特征的骨骼系统疾病,肌少症(SP)或肌肉衰减综合征是以肌力、肌量或肌肉功能下降为特征的肌肉系统疾病。当OP和SP共存时,我们称之为肌少-骨质疏松症(OS),即OS同时具有OP和SP的临床特征,其发病机制远比单一的肌少症或骨质疏松症更复杂,患者的跌倒风险、脆性骨折风险及致死风险高,更易有其他合并症。而且,OP引起的脆性骨折(如髋关节骨折、腰椎骨折和桡骨远端骨折等)和SP引起的运动功能障碍、跌倒等相互作用,导致OS患者致残致死率显著高于仅患OP或SP的患者。因此,研究OS的发病机制及防治策略已迫在眉睫。
目前构建OP模型有多种方法,如手术诱导法、药物诱导法、失用诱导法、饮食诱导法、基因敲除法和自然退变法等。但这些方法种类繁多,造模效果差别较大,某些方法造模成本较高,不利于进一步推广应用。有研究证实,雌性SD大鼠经手术切除双侧卵巢后可导致OP,该模型也已成为国内外研究绝经后OP的“金标准”。目前构建SP模型的方法则相对较少。有研究通过对大鼠腹腔注射DXM、或对小鼠皮下注射DXM来构建SP动物模型。其中的DXM是糖皮质激素中效价最高且作用持续时间最长的一种激素类药物,利用其建立SP动物模型具有周期较短且效果明显等优点,但DXM属于糖皮质激素,具有抗炎、抗过敏和抗休克的功效,长期注射会导致体重增加、肌肉萎缩、脂肪向心性堆积等副作用。除了注射DXM,高脂饲料喂养大小鼠也可构建SP动物模型;但这种方法普遍存在造模周期长(最长14周)、喂养成本大、高脂饲料配方不统一等问题,难以广泛应用。
然而,相比于OP或SP,目前针对OS的研究仅仅停留在起步阶段,局限于临床观察,尚未有OS的动物模型构建方法的报道。有学者尝试利用10月龄SD雌性大鼠去卵巢构建OS模型,但这种方法存在动物饲养周期长,老龄大鼠易死亡,评价指标片面等问题,并不能有效区分SP和OP。而且,目前国内外对OS的诊断标准也存在争议,全球尚无统一的临床诊断标准,确诊该病必须同时满足OP和SP的诊断标准,这对于OS动物模型的建立,以及OS的临床诊断、基础研究等带来巨大困难。
发明内容
为了克服现有技术的不足,本发明的目的在于提供一种肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,通过复合造模法,利用6月龄雌性未孕去势大鼠联合腹腔注射DXM,并确立了简单、可靠的肌少-骨质疏松症大鼠判断指标,构建出了肌少-骨质疏松症大鼠模型。本发明的造模方法具有造模周期短,模型稳定,可操作性强,成本低等优点,可以较为真实的模拟肌少-骨质疏松症。
本发明的目的采用如下技术方案实现:
一种肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,包括以下步骤:
(1)选取雌性未孕6月龄SD大鼠,切除双侧卵巢;
(2)完成步骤(1)后,饲养大鼠1周,然后对大鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液0.8-1.2mg/kg/d,连续注射2周;继续饲养大鼠8-9周后,即得到所述肌少-骨质疏松症大鼠模型。
优选地,所述地塞米松磷酸钠注射液的注射量为1mg/kg/d。
进一步地,步骤(1)还包括:切除双侧卵巢后,对大鼠肌肉注射青霉素钠5-10万单位/只,每天注射1次,连续3d,预防感染。
优选地,所述青霉素钠的注射量为8万单位/只。
进一步地,所述双侧卵巢是通过背侧入路法切除的,包括以下步骤:大鼠麻醉后取俯卧位,分别于大鼠的左侧、右侧肋骨下缘和脊柱旁的1-1.5cm处纵行切开背部皮肤、剪开肌肉,分别暴露出左侧卵巢、右侧卵巢,然后分别结扎左侧和右侧输卵管,切除左侧卵巢和右侧卵巢,再逐层缝合肌肉和皮肤。
进一步地,所述述肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法还包括肌少-骨质疏松症大鼠模型指标检测步骤;所述指标包括模型大鼠的前肢抓力、骨骼肌质量指数、相对骨骼肌质量指数、全身骨密度、股骨骨密度、股骨远端微结构。
进一步地,所述前肢抓力是通过大小鼠抓力测定仪检测的。
所述全身骨密度、股骨骨密度是通过双能X线骨密度仪检测的。
所述骨骼肌质量指数=全身肌肉重量/体重;所述相对骨骼肌质量指数=四肢肌肉重量/体重;所述全身肌肉重量和四肢肌肉重量是通过双能X线骨密度仪检测得到的。
所述股骨远端微结构是通过以下步骤检测的:麻醉处死模型大鼠后,完整分离大鼠的股骨,经多聚甲醛固定、生理盐水浸泡后,进行显微CT扫描,选择股骨远端生长板上方1mm的松质骨进行分析。
相比现有技术,本发明的有益效果在于:
1、本发明对雌性未孕6月龄SD大鼠进行去势联合腹腔注射地塞米松磷酸钠(DXM)法可以建立肌少-骨质疏松症大鼠模型,这种复合造模法具有造模周期短,模型稳定,可操作性强,成本低等优点。本发明模型可以较为真实的模拟人类的肌少-骨质疏松症,重复性高,经济实用,为研究OS的病因病机及防治策略提供理论基础。
2、本发明优选腹腔注射DXM 1mg/kg/d,注射周期为2周,注射剂量小、注射周期短,副作用少,大鼠存活率高,且在引起大鼠发生肌少症的同时,不会引起大鼠发生骨质疏松症;结合雌性大鼠切除双侧卵巢后导致的骨质疏松症模型,以及简单、可靠的肌少-骨质疏松症大鼠判断指标,能有效区分SP和OP,更为准确的模拟肌少-骨质疏松症。
3、OS目前全球尚无统一的诊断标准,但确诊该病必须同时满足SP和OP的诊断标准。本发明综合研究了SP和OP的诊断标准在OS上的应用,创造性的采用大鼠的前肢抓力、SMI和RSMI、全身骨密度和股骨骨密度、股骨远端微结构作为指标来评价OS,这些指标具有测量简单、方便操作、分辨率高等优点,能简单、准确的反映SP和OP的症状,对于OS的诊断和研究具有较高的价值。
附图说明
图1为本发明肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建流程示意图;
图3为实施例2显微CT检测中模型大鼠离体股骨远端的三维图形。
具体实施方式
下面,结合附图以及具体实施方式,对本发明做进一步描述,显然,所描述的实施例是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。需要说明的是,在不相冲突的前提下,以下描述的各实施例之间或各技术特征之间可以任意组合形成新的实施例。
如图1所示,一种肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,包括以下步骤:
(1)选取雌性未孕6月龄SD大鼠,适应性饲养1周后,切除双侧卵巢;术后大鼠给予青霉素钠5-10万单位/只肌肉注射,每天1次,连续3天;
(2)完成步骤(1)后,饲养大鼠1周进行恢复,然后对大鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液0.8-1.2mg/kg/d,连续注射2周;
(3)继续饲养大鼠8-9周后,对模型大鼠进行指标检测;其中的指标包括模型大鼠的前肢抓力、骨骼肌质量指数、相对骨骼肌质量指数、全身骨密度、股骨骨密度、股骨远端微结构,指标检测合格后即得肌少-骨质疏松症大鼠模型。
本发明的大鼠均为SPF级,研究实验在SPF级实验室(温度20-26℃,湿度40%-70%,每天交替光照12小时)中进行,实验过程中喂食大鼠专用普通饲料及无菌用水。
作为进一步地优选方案,地塞米松磷酸钠注射液的注射量为1mg/kg/d;青霉素钠的注射量为8万单位/只。
本发明的双侧卵巢是通过背侧入路法切除的,包括以下步骤:大鼠麻醉后取俯卧位,分别于大鼠的左侧、右侧肋骨下缘和脊柱旁的1-1.5cm处纵行切开背部皮肤、剪开肌肉,分别暴露出左侧卵巢、右侧卵巢,然后分别结扎左侧和右侧输卵管,切除左侧卵巢和右侧卵巢,再逐层缝合肌肉和皮肤。
雌性SD大鼠经手术切除双侧卵巢后,体内雌激素水平骤然下降,使促黄体素和促卵泡素分泌量增加,从而影响骨代谢,骨吸收远远高于骨形成,骨量丢失严重,从而可导致OP。
DXM是糖皮质激素中效价最高且作用持续时间最长的一种激素类药物,在建立SP动物模型上具有周期较短且效果明显等优点,并且这种动物模型能较为真实的模拟人类短期应用激素后引起的肌肉萎缩。虽然皮下或腹腔注射DXM可构建肌少症动物模型,但本发明的前期研究发现,肌肉注射DXM也可构建大鼠骨质疏松模型,即DXM对骨骼和肌肉系统均有影响,在构建OS模型时会影响OP和SP的区分难度。本发明优选腹腔注射DXM 1mg/kg/d,注射周期为2周,注射剂量小、注射周期短,副作用少,大鼠存活率高,且在引起大鼠发生肌少症的同时,不会引起大鼠发生骨质疏松症,能有效区分OP和SP。
本发明的模型指标检测方法包括:
1)前肢抓力是通过大小鼠抓力测定仪检测的。
2)全身骨密度、股骨骨密度是通过双能X线骨密度仪检测的。
3)骨骼肌质量指数=全身肌肉重量/体重;相对骨骼肌质量指数=四肢肌肉重量/体重;其中,全身肌肉重量和四肢肌肉重量是通过双能X线骨密度仪检测得到的。
4)股骨远端微结构的检测包括:麻醉处死模型大鼠后,完整分离大鼠的股骨,经多聚甲醛固定、生理盐水浸泡后,进行显微CT扫描,选择股骨远端生长板上方1mm的松质骨进行分析。
OS目前全球尚无统一的诊断标准,但确诊该病必须同时满足SP和OP的诊断标准。目前OP主要以腰椎、股骨和全髋BMD等为诊断依据。SP主要以肌量、肌力和肌肉功能为诊断依据,通常包括:采用双能X线吸收(DEXA)和生物电阻抗(BIA)等方法测量全身骨骼肌质量和四肢骨骼肌质量,进而计算骨骼肌质量指数(SMI,全身骨骼肌质量与其身高平方的比值)和四肢骨骼肌质量指数(ASMI,四肢骨骼肌质量与其身高平方的比值)来评价肌量;通过测量优势手的握力来评价肌力,通过测量正常步速来评价肌肉功能。基于此,为确定OS大鼠模型的诊断标准,本发明创造性地以大鼠前肢抓力作为评价大鼠肌力的指标,以大鼠SMI和RSMI来评价大鼠肌量,以大鼠全身BMD和股骨BMD来评价大鼠骨量,并进一步用Micro CT定量评价大鼠股骨远端骨微结构,同时构建三维图形,为OS大鼠模型的诊断提供诊断学依据。
实施例1
(1)动物分组:准备40只SPF级健康雌性未孕6月龄SD大鼠,在实验开始之前自由摄取标准动物饮食,适应环境1周,然后利用Excel表格的Rand函数按体重随机分层分组,共分五组,即正常组(Control)、假手术组(Sham)、假手术+地米组(Sham+DXM)、去势组(OVX)、去势+地米组(OVX+DXM),每组8只。
其中,“去势”是指双侧卵巢切除,“地米”是指注射地塞米松磷酸钠注射液。
(2)模型构建:
1)正常组(Control)大鼠模型构建:正常饲养大鼠3个月。
2)假手术组(Sham)大鼠模型构建:
①假手术:大鼠麻醉后取俯卧位,分别于大鼠的左侧、右侧肋骨下缘和脊柱旁的1-1.5cm处纵行切开背部皮肤、剪开肌肉,切除卵巢附近与卵巢等体积大小的脂肪组织后,逐层缝合肌肉和皮肤;
②对大鼠肌肉注射青霉素钠8万单位/只,每天1次,连续3天;
③继续饲养大鼠,假手术3个月后,检测相关指标,即得Sham大鼠模型。
3)假手术+地米组(Sham+DXM)大鼠模型构建:
①假手术:大鼠麻醉后取俯卧位,分别于大鼠的左侧、右侧肋骨下缘和脊柱旁的1-1.5cm处纵行切开背部皮肤、剪开肌肉,切除卵巢附近与卵巢等体积大小的脂肪组织后,逐层缝合肌肉和皮肤;
②对大鼠肌肉注射青霉素钠8万单位/只,每天1次,连续3天;
③饲养大鼠1周进行恢复,然后对大鼠腹腔注射DXM 1mg/kg/d,连续注射2周;
④继续饲养大鼠,假手术3个月后,检测相关指标,即得Sham+DXM大鼠模型。
Sham+DXM大鼠模型构建过程中,大鼠因麻醉引起肠梗阻死亡1只。
4)去势组(OVX)大鼠模型构建:
①去势手术:采用背侧入路双侧卵巢切除法切除大鼠双侧卵巢,逐层缝合肌肉和皮肤;
②对大鼠肌肉注射青霉素钠8万单位/只,每天1次,连续3天;
③继续饲养大鼠,去势手术3个月后,检测相关指标,即得OVX大鼠模型。
5)去势+地米组(OVX+DXM)大鼠模型构建:
①去势手术:采用背侧入路双侧卵巢切除法切除大鼠双侧卵巢,逐层缝合肌肉和皮肤;
②对大鼠肌肉注射青霉素钠8万单位/只,每天1次,连续3天;
③饲养大鼠1周进行恢复,然后对大鼠腹腔注射DXM 1mg/kg/d,连续注射2周;
④继续饲养大鼠,去势手术3个月后,检测相关指标,即得OVX+DXM大鼠模型。
OVX+DXM大鼠模型构建过程中,大鼠因腹腔注射时注射器针尖刺穿肠道死亡一只。
实施例2
模型指标检测与分析
本实施例采用SPSS 20.0统计分析软件进行数据分析,计量资料采用均数±标准差表示。组间比较采用单因素方差分析,所有数据先进行正态性与方差齐性检验。若方差齐,组间两两比较采用LSD法。若方差不齐,先行Welch(W)校正检验,然后用Dunnett’s T3(3)法,以P<0.05判断差异有统计学意义。
(1)前肢抓力检测
使用YLS-13A大小鼠抓力仪测定实施例1中各组模型大鼠的前肢抓力。测试前让大鼠在抓力仪上适应10分,然后抓住大鼠尾巴,确定大鼠抓牢后,平稳的向后拉,记录仪器上的最大抓力读数。测定三次并记录,用三次抓力的平均值作为反映前肢肌肉力量的指标。测量结果如表1和图1所示。
组别 | n | 前肢抓力(g) |
Control组 | 8 | 1052.83±118.25<sup>cd</sup> |
Sham组 | 8 | 1011.58±81.18<sup>cd</sup> |
Sham+DXM组 | 7 | 867.41±55.17<sup>abd</sup> |
OVX组 | 8 | 958.79±63.96<sup>ac</sup> |
OVX+DXM组 | 7 | 767.83±72.92<sup>abcd</sup> |
注:与Control组相比,aP<0.05;与Sham组相比,bP<0.05;与Sham+DXM组相比,cP<0.05;与OVX组相比,dP<0.05。
由表1和图1可知,与Control组相比,Sham组大鼠前肢抓力无明显变化(P>0.05)。与Sham组相比,Sham+DXM组和OVX+DXM组大鼠前肢抓力明显下降(P<0.05),其中OVX+DXM组大鼠前肢抓力下降最明显,而OVX组大鼠前肢抓力无明显变化。与Sham+DXM组相比,OVX组大鼠前肢抓力增加,OVX+DXM组大鼠前肢抓力下降。与OVX组相比,OVX+DXM组大鼠前肢抓力下降,差异有统计学意义(P<0.05)。
(2)双能X线骨密度仪(DXA)检测
将实施例1各组模型大鼠通过腹腔注射水合氯醛进行麻醉,用DXA测量大鼠全身骨密度(BMD)、股骨BMD、全身肌肉重量和四肢肌肉重量等。根据相关OP指南,将全身、股骨等BMD作为确定OP的诊断方法。根据欧洲肌少症工作组(EWGSOP)、亚洲肌少症工作组(AWGS)和国际肌少症工作组(IWGS)的标准,测量大鼠四肢肌肉量及全身肌肉量,将相对骨骼肌质量指数(RSMI)定义为四肢肌肉重量(appendicular lean mass,ALM)/体重(body weight,BW),将骨骼肌质量指数(Skeletal Muscle Index,SMI)定义为全身肌肉重量(lean mass,LM)/体重(body weight,BW),以大鼠前肢抓力、相对骨骼肌质量指数(RSMI)和骨骼肌质量指数(SMI)作为确定SP的诊断方法。
实施例1各组模型大鼠的全身密度、股骨全段骨密度检测结果如表2所示,各组模型大鼠的骨骼肌质量指数和相对骨骼肌质量指数如表3所示。
表2各组模型大鼠的全身骨密度、股骨全段骨密度表
组别 | n | 全身骨密度(g/cm<sup>2</sup>) | 股骨全段骨密度(g/cm<sup>2</sup>) |
Control组 | 8 | 0.1784±0.0069<sup>d</sup> | 0.3113±0.0106<sup>d</sup> |
Sham组 | 8 | 0.1745±0.0063<sup>d</sup> | 0.2965±0.0119<sup>d</sup> |
Sham+DXM组 | 7 | 0.1713±0.0168 | 0.2994±0.0307 |
OVX组 | 8 | 0.1560±0.0073<sup>ab</sup> | 0.2633±0.0113<sup>ab</sup> |
OVX+DXM组 | 7 | 0.1509±0.0076<sup>ab</sup> | 0.2491±0.0222<sup>abc</sup> |
注:与Control组相比,aP<0.05;与Sham组相比,bP<0.05;与Sham+DXM组相比,cP<0.05;与OVX组相比,dP<0.05。
由表2可知,与Control组相比,Sham组大鼠全身BMD、股骨全段BMD无明显变化(P>0.05)。与Sham组相比,Sham+DXM组大鼠全身BMD、股骨全段BMD无明显变化(P>0.05),说明DXM腹腔注射(1mg/kg/d)不会引起大鼠发生骨质疏松。与Sham组相比,OVX组和OVX+DXM组大鼠全身BMD、股骨全段BMD均下降(P<0.05),且OVX+DXM组大鼠下降更明显,说明OVX组和OVX+DXM组大鼠均发生骨质疏松,其中OVX+DXM组大鼠骨质疏松似乎更严重,但两组差异无统计学意义(P>0.05)
表3各组模型大鼠的骨骼肌质量指数和相对骨骼肌质量指数
组别 | n | 骨骼肌质量指数 | 相对骨骼肌质量指数 |
Control组 | 8 | 0.8092±0.0522<sup>cd</sup> | 0.1974±0.0075<sup>cd</sup> |
Sham组 | 8 | 0.8128±0.0509<sup>cd</sup> | 0.1841±0.0065<sup>cd</sup> |
Sham+DXM组 | 7 | 0.7270±0.0507<sup>abd</sup> | 0.1678±0.0181<sup>abd</sup> |
OVX组 | 8 | 0.6408±0.0727<sup>abc</sup> | 0.1505±0.0171<sup>abc</sup> |
OVX+DXM组 | 7 | 0.5601±0.0580<sup>abcd</sup> | 0.1170±0.0128<sup>abcd</sup> |
注:与Control组相比,aP<0.05;与Sham组相比,bP<0.05;与Sham+DXM组相比,cP<0.05;与OVX组相比,dP<0.05。
表3中,与Control组相比,Sham组大鼠的SMI、RSMI无明显变化(P>0.05)。与Sham组相比,Sham+DXM组大鼠的SMI、RSMI明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),说明DXM腹腔注射可以引起大鼠骨骼肌下降。与Sham+DXM组相比,OVX组、OVX+DXM组大鼠的SMI、RSMI明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与OVX组相比,OVX+DXM组大鼠的SMI、RSMI明显下降,差异有统计学意义(P<0.05),说明大鼠SMI、RSMI可以区分两组大鼠,证明造模成功。
(3)显微CT检测
麻醉处死实施例1各组模型大鼠后,完整分离大鼠左侧股骨,剔除股骨周围附着的肌肉等软组织,多聚甲醛固定,生理盐水浸泡。测量离体左侧股骨BMD后进行显微CT扫描。通过仪器自带分析软件(CTAn)框取松质骨,选择股骨远端生长板上方1mm的松质骨作为感兴趣区,分析骨体积分数(Percent bone volume,BV/TV,%),骨表面密度(Bone surfacedensity,BS/TV,mm-1),骨小梁厚度(Trabecular Thickness,Tb.Th,mm),骨小梁数(Trabecular Number,Tb.N,mm-1)和骨小梁分离度(Trabecular Separation,Tb.Sp,mm),并通过仪器自带分析软件(CTvol)重构股骨远端三维图像。结果如表4和图3所示。
表4各组大鼠离体股骨远端骨微结构
组别 | BV/TV(%) | BS/TV(1/mm) | Tb.Th(mm) | Tb.N(1/mm) | Tb.Sp(mm) |
Control组 | 24.04±3.59<sup>d</sup> | 19.15±1.95<sup>bd</sup> | 0.06±0.00 | 3.99±0.58<sup>d</sup> | 0.19±0.04<sup>d</sup> |
Sham组 | 21.79±1.16<sup>d</sup> | 16.18±1.21<sup>acd</sup> | 0.06±0.00 | 3.58±0.20<sup>d</sup> | 0.22±0.02<sup>d</sup> |
Sham+DXM组 | 24.40±1.54<sup>d</sup> | 20.50±1.57<sup>bd</sup> | 0.06±0.00 | 4.07±0.27<sup>d</sup> | 0.15±0.03<sup>d</sup> |
OVX组 | 4.85±1.17<sup>abc</sup> | 4.19±1.02<sup>abc</sup> | 0.06±0.00 | 0.81±0.20<sup>abc</sup> | 0.71±0.08<sup>abc</sup> |
OVX+DXM组 | 2.78±1.54<sup>abc</sup> | 2.31±1.10<sup>abc</sup> | 0.06±0.00 | 0.46±0.25<sup>abc</sup> | 0.86±0.06<sup>abcd</sup> |
注:与Control组相比,aP<0.05;与Sham组相比,bP<0.05;与Sham+DXM组相比,cP<0.05;与OVX组相比,dP<0.05。
表4中,与Control组相比,Sham组大鼠股骨远端BV/TV、Tb.Th、Tb.N和Tb.Sp无明显变化(P>0.05),BS/TV下降(P<0.05)。与Sham组相比,Sham+DXM组大鼠股骨远端BV/TV、Tb.Th、Tb.N和Tb.Sp无明显变化(P>0.05),仅BS/TV提高(P<0.05),说明DXM腹腔注射对股骨远端骨微结构影响不大。与Sham+DXM组相比,OVX组、OVX+DXM组大鼠股骨远端BV/TV、BS/TV、Tb.N明显下降,Tb.Sp明显提高(P<0.05),Tb.Th差异无统计学意义(P>0.05)。
由图3可以看出,Comtrol组、Sham组和Sham+DXM组股骨远端骨微结构无明显差别;而OVX组、OVX+DXM组的股骨远端骨量则明显下降,骨小梁稀疏,骨小梁数目和厚度明显下降,骨小梁分离度明显增加,这与上述骨微结构检测指标相一致。
上述实施方式仅为本发明专利的优选实施方式,不能以此来限定本发明专利保护的范围,本领域的技术人员在本发明专利的基础上所做的任何非实质性的变化及替换均属于本发明专利所要求保护的范围。
Claims (10)
1.一种肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)选取雌性未孕6月龄SD大鼠,切除双侧卵巢;
(2)完成步骤(1)后,饲养大鼠1周,然后对大鼠腹腔注射地塞米松磷酸钠注射液0.8-1.2mg/kg/d,连续注射2周;继续饲养大鼠8-9周后,即得到所述肌少-骨质疏松症大鼠模型。
2.如权利要求1所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述地塞米松磷酸钠注射液的注射量为1mg/kg/d。
3.如权利要求1所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,步骤(1)还包括:切除双侧卵巢后,对大鼠肌肉注射青霉素钠5-10万单位/只,每天注射1次,连续3d,预防感染。
4.如权利要求3所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述青霉素钠的注射量为8万单位/只。
5.如权利要求1所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述双侧卵巢是通过背侧入路法切除的,包括以下步骤:大鼠麻醉后取俯卧位,分别于大鼠的左侧、右侧肋骨下缘和脊柱旁的1-1.5cm处纵行切开背部皮肤、剪开肌肉,分别暴露出左侧卵巢、右侧卵巢,然后分别结扎左侧和右侧输卵管,切除左侧卵巢和右侧卵巢,再逐层缝合肌肉和皮肤。
6.如权利要求1所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,还包括肌少-骨质疏松症大鼠模型指标检测步骤;所述指标包括模型大鼠的前肢抓力、骨骼肌质量指数、相对骨骼肌质量指数、全身骨密度、股骨骨密度、股骨远端微结构。
7.如权利要求6所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述前肢抓力是通过大小鼠抓力测定仪检测的。
8.如权利要求6所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述全身骨密度、股骨骨密度是通过双能X线骨密度仪检测的。
9.如权利要求6所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述骨骼肌质量指数=全身肌肉重量/体重;所述相对骨骼肌质量指数=四肢肌肉重量/体重;所述全身肌肉重量和四肢肌肉重量是通过双能X线骨密度仪检测得到的。
10.如权利要求6所述的肌少-骨质疏松症大鼠模型的构建方法,其特征在于,所述股骨远端微结构是通过以下步骤检测的:麻醉处死模型大鼠后,完整分离大鼠的股骨,经多聚甲醛固定、生理盐水浸泡后,进行显微CT扫描,选择股骨远端生长板上方1mm的松质骨进行分析。
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