CN111528146A - 全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于水产养殖的技术领域，涉及全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法。本发明的步骤采用亲鱼培育池建设、亲鱼选择、亲鱼强化培育、人工催产、人工授精和孵化，全年分批次对半滑舌鳎亲鱼进行快速促熟，实现全年每个季节都有性腺成熟的亲鱼用来进行人工催产。采用本发明的方法，亲鱼的相对产卵量、受精率和孵化率大大提高，半滑舌鳎的繁殖不再受季节限制，可以实现全年各个季节均能获得高雌受精卵，满足全年进行半滑舌鳎育苗生产的需要，有利于半滑舌鳎产业的可持续发展。

Description

全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法

技术领域

本发明属于水产养殖的技术领域，涉及全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法。

背景技术

半滑舌鳎(Cynoglossus semiliaevis)是中国特有的一种名贵经济海水鱼类，属于近海温水性底层鱼类，中国沿海均有分布，以黄海、渤海为多。半滑舌鳎由于其味道鲜美、肉质细嫩、营养丰富，深受广大消费者欢迎，其市场价值极高，养殖前景非常广阔。目前半滑舌鳎市场价格160～180元/公斤，是中国国内最贵的养殖鱼类之一，随着育苗技术和养殖技术的不断成熟，近10年来半滑舌鳎养殖业发展迅速，半滑舌鳎供不应求。鉴于半滑舌鳎的养殖潜力和潜在的经济社会效益，近年来大量的养殖公司和养殖户纷纷投资半滑舌鳎养殖，全中国大部分沿海地区(北至辽宁南至福建)均可以进行养殖。目前半滑舌鳎年均受精卵需求量350kg以上，每kg受精卵市场价1.5～2万元，苗种年均需求量近亿尾，7～8cm鱼苗每尾售价1.5～2元。

半滑舌鳎雄鱼生长速度极慢，仅为雌鱼的1/7～1/5，并且普通养殖群体中的雄鱼比较高达70％～90％，因此，为了提高苗种中雌鱼的比例，增加养殖产量和经济效益，需要进行高雌受精卵生产。为保证受精卵的高雌效果，在进行受精卵生产前，需要利用半滑舌鳎性别特异分子标记对雄性亲鱼进行遗传性别鉴定(参考文献：刘洋，等.半滑舌鳎性别特异微卫星标记的SCAR转化及其应用.农业生物技术学报,2014,22(6):787-792；董忠典，等.一种快速鉴定半滑舌鳎遗传性别的方法.农业生物技术学报，2016，5:764-769.)，将雄性亲鱼中的伪雄鱼淘汰掉，并用真正的雄鱼与雌鱼交配，即可获得高雌受精卵。半滑舌鳎在人工养殖条件下可以实现性腺发育成熟，但是不能自然排卵，只能进行人工催产，人工催产后，只有少量雌鱼能够自然产卵产精，需要进行人工挤卵挤精。目前，半滑舌鳎人工繁殖主要依靠从人工养殖群体中自然发育性成熟的亲鱼直接用于人工催产，用这些未强化培育的亲鱼进行人工催产后，获得的卵子质量很差，一般受精率只有20％左右，再加上只能在春季(5～6月)和秋季(9～10月)进行受精卵生产，远远不能满足全国的半滑舌鳎受精卵的需求量。因此，探索全年根据生产需要和市场需求进行半滑舌鳎高雌受精卵生产的技术和方法，对提高半滑舌鳎养殖产量、加快育种进程、促进产业发展和提高经济社会效益具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于克服现有半滑舌鳎养殖存在的上述缺陷，提供全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，通过营养强化和控光、控温措施，全年分批次对半滑舌鳎亲鱼进行快速促熟，实现全年每个季节都有性腺成熟的亲鱼用来进行人工催产。

本发明是采用以下的技术方案实现的：

本发明提供了一种全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，包括以下步骤：

步骤1、亲鱼培育池建设

底面积范围在20～30m²，深度范围0.7～1.0m，配备水位控制、充气、控光和控温相关设备；

步骤2、亲鱼选择

从人工养殖群体中挑选适龄、健康且无畸形个体，雌鱼平均体重1kg以上，雄鱼体重100～200g，放养密度为雌鱼3～5尾/m²，雌雄鱼比例1:4～1:3；

步骤3、亲鱼强化培育

将选择的亲鱼放入培育池中培养，配合饲料和鲜活饵料隔天投喂，每天定时投喂两次，日投喂率为亲鱼体重的1％～2％；

步骤4、人工催产

挑选性腺成熟度好的亲鱼用促黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺素进行人工催产；

步骤5、人工授精和孵化

人工催产34h后，用干法或湿法授精，每100mL卵子需要精子量为0.2～0.4mL，受精5～10分钟后，将受精卵放置在孵化网箱中进行孵化，每方水体放卵量应控制在1000～1500mL。

具体的，所述步骤2中将挑选出的雄鱼用半滑舌鳎性别特异分子标记进行伪雄鱼检测，并将伪雄鱼淘汰掉。

具体的，所述步骤3中池水温控制在22～24℃，溶氧6～8mg/mL，盐度28～30‰，pH7.4～8.0，将水面光照强度控制在300～500lx，每天照明时间控制在12～16h，日换水率为400％以上。

其中，所述步骤4中对亲鱼进行人工催产的方法具体为针对雌鱼剂量为促黄体素释放激素类似物0.2～0.4ug/mL和绒毛膜促性腺激素4～8U/mL，雄鱼剂量为雌鱼的五分之一，注射一次。

具体的，所述步骤5中孵化池水温22～24℃，溶氧6～8mg/mL，盐度28～30‰，pH7.4～8.0，孵化池日换水率应在100％以上。

具体的，每1～2个月进行步骤2～步骤3的亲鱼选择和强化培育操作，保证每个月份有一定数量的性腺成熟的亲鱼备用。

具体的，所述鲜活饵料包括活沙蚕和贝肉，孵化网箱中用散气石微充气。

本发明的有益效果是：本发明突破了半滑舌鳎繁殖的季节限制，通过对亲鱼进行阶段性强化培育、人工催产和授精的技术方法，可以根据生产需要在每年任何月份进行半滑舌鳎高雌受精卵生产，实现全年订单式生产，并为海水鱼类鱼苗繁殖和人工选育奠定基础。

采用本发明的繁殖方法，亲鱼的相对产卵量、受精率和孵化率大幅提高。

附图说明

附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。

在附图中：

图1为实施例1中2019年中各月份高雌受精卵生产量。

具体实施方式

为了使本发明目的、技术方案更加清楚明白，下面结合附图，对本发明作进一步详细说明。下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

实施例1

本实施例中，具体操作方法为2018～2019年在唐山市维卓水产养殖有限公司进行的。

步骤1.亲鱼培育池

亲鱼培育池为方形水泥池，水泥池底面积应在20m²以上，长宽深分别为6m、5m和0.7m，排水口位于池底部中央，排水口末端设置有阀门及控制水位的装置，每个培育池配有纳米充气管、日光灯，用地下热水井的热水通过热交换器调节海水水温。

步骤2.亲鱼选择

所选半滑舌鳎亲鱼为从人工养殖群体中挑选出来的适龄、健康无畸形个体。2018年9月份至2019年9月份先后挑选8批亲鱼进行强化培育，即每隔1.5个月挑选一批，每批雌鱼250～500尾，每批雄鱼600～1500尾，雌鱼18月龄以上，雄鱼8月龄以上，雌鱼平均体重1kg以上，雄鱼平均体重100～200g，雄鱼用半滑舌鳎性别特异分子标记进行伪雄鱼检测(参考文献：刘洋，等.半滑舌鳎性别特异微卫星标记的SCAR转化及其应用.农业生物技术学报,2014,22(6):787-792；董忠典，等.)，将雄鱼群体中的伪雄鱼淘汰掉。每批亲鱼分别放养在多个水泥培育池中，放养密度为雌鱼3～5尾/m²，雌雄鱼比例1:4。

步骤3.亲鱼强化培育

培育池水温应控制在22～24℃，溶氧6～8mg/mL，盐度28～30‰，pH7.4～8.0。用日光灯调节光照强度，水面光照强度300～500lx，每天光照时间为12h，日换水率为500％～600％。亲鱼培育期间投喂配合饲料、活沙蚕和新鲜贝肉，配合饲料和鲜活饵料(活沙蚕和贝肉)隔天投喂(今天只投喂配合饲料，明天只投喂鲜活饵料)，一天中定时投喂两次(上午6:00和下午18:00)，日投喂率为亲鱼体重的1％～2％。每次投喂1h后排水将残饵和污物排出，每1～2刷池一次，保持培育池清洁。配合饲料为潍坊三通生物工程有限公司生产的海童牌配合饲料。

步骤4.人工催产

每批亲鱼经过70～90天的强化培育，亲鱼陆续达到性成熟。根据需要每次挑选性腺成熟度好的亲鱼(雌鱼20～30尾，雄鱼80～120尾)进行人工催产，一般雌鱼腹部明显隆起并且较柔软，雄鱼轻压腹部有精液流出便可用于人工催产。采用促黄体素释放激素类似物(LHRH-A3)加绒毛膜促性腺素(HCG)，用生理盐水将上述两种药物配成每mL含有LHRH-A30.2～0.4ug和HCG 4～8U的溶液，雌鱼每尾注射1mL，雄鱼每尾注射0.2mL，注射方法为背部肌肉注射，注射一次。为评估相对产卵量、受精率和孵化率，2019年9月底，进行挤卵的时候，从达到性成熟的培育池中，随机称量10尾的雌鱼的体重并记录产卵量，并计算平均相对产卵量(见表1)。绒毛膜促性腺素和促黄体素释放激素类似物购买自宁波激素二厂。

步骤5.人工授精和孵化

人工催产34h后排卵，每隔半小时抚摸挤压雌鱼腹部，性腺柔软并且能明显感觉到卵子流动后，应立即进行人工挤卵，将雌鱼捞出放置于有海绵的操作台上，用毛巾将鱼体擦干，轻轻挤压雌鱼腹部，用2L广口塑料量杯收集卵子；立即捞出雄鱼，用毛巾擦干鱼体和生殖孔区，轻轻挤压腹部，每100mL卵子与0.2mL精子授精，干法授精。授精5～10分钟后，用干净海水将粘液和多余的精子清洗干净，将上浮卵放入孵化池中的80目孵化网箱(75×75×100cm³)中进行孵化，每个孵化网箱放卵量1000～1500mL。孵化池水温23～24℃，日换水率为100％，盐度28～30‰，pH7.4～8.0，孵化网箱中用散气石微充气，溶氧6～8mg/L。每次人工催产获得的受精卵孵化出膜前6～8h，将受精卵收集并称量湿重，各个月份受精卵产量如图1所示，2019年全年共生产高雌受精卵205kg。

步骤5中的10尾雌鱼的卵子受精后1h左右分别取100～200粒受精卵在显微镜下观察受精率，并放在3L的塑料量杯中，微充气，统计孵化率，计算10尾鱼的平均受精率和平均孵化率，结果如表1所示。

对比例1

2019年9月底，从唐山市维卓水产养殖公司附近某养殖户购买在普通养殖条件下性腺发育成熟的同等规格的性腺发育成熟的雌鱼10尾作为实施例1的对照组，采用步骤4和步骤5中相同的人工催产、授精和孵化方法和条件，进行授精卵生产，每条雌鱼挤卵前称量体重，分别记录每条雌鱼的产卵量和计算相对产卵量，并统计每尾亲鱼卵子的受精率和孵化率，计算10尾鱼的平均相对产卵量、平均受精率和平均孵化率。

实施例1和对比例1的平均相对产卵量、平均受精率和平均孵化率见表1。由表1可见，实施例1的平均相对产卵量为158.5×10³粒每kg体重，显著高于对比例1的135.9×10³粒每kg体重；实施例1的平均受精率为43.5％，显著高于对比例1的32.6％；实施例1的平均孵化率为84.2％，显著高于对比例1的70.8％。

表1.实施例1和对照组的相对产卵量、受精率和孵化率对比表

注：表1中数据为平均值±标准误差。*代表实施例1显著高于对比例1，P<0.05。

当然，以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、亲鱼培育池建设

底面积范围在20～30m²，深度范围0.7～1.0m，配备水位控制、充气、控光和控温相关设备；

步骤2、亲鱼选择

从人工养殖群体中挑选适龄、健康且无畸形个体，雌鱼平均体重1kg以上，雄鱼体重80～150g，放养密度为雌鱼3～5尾/m²，雌雄鱼比例1:4～1:3；

步骤3、亲鱼强化培育

将选择的亲鱼放入培育池中培养，配合饲料和鲜活饵料隔天投喂，每天定时投喂两次，日投喂率为亲鱼体重的1％～2％；

步骤4、人工催产

挑选性腺成熟度好的亲鱼用促黄体素释放激素类似物和绒毛膜促性腺素进行人工催产；

步骤5、人工授精和孵化

用干法或湿法授精，每100mL卵子需要精子量为0.2～0.4mL，受精5～10分钟后，将受精卵放置在孵化网箱中进行孵化，每方水体放卵量应控制在1000～1500mL。

2.根据权利要求1所述的全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，所述步骤2中将挑选出的雄鱼用半滑舌鳎性别特异分子标记进行伪雄鱼检测，并将伪雄鱼淘汰掉。

3.根据权利要求1所述的全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，所述步骤3中池水温控制在22～24℃，溶氧6～8mg/mL，盐度28～30‰，pH7.4～8.0，将水面光照强度控制在300～500lx，每天照明时间控制在12～16h，日换水率为400％以上。

4.根据权利要求1所述的全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，所述步骤4中对亲鱼进行人工催产的方法具体为针对雌鱼剂量为促黄体素释放激素类似物0.2～0.4ug/mL和绒毛膜促性腺素4～8U/mL，雄鱼剂量为雌鱼的五分之一，注射一次。

5.根据权利要求1所述的全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，所述步骤5中孵化池水温22～24℃，溶氧6～8mg/mL，盐度28～30‰，pH7.4～8.0，孵化池日换水率应在100％以上。

6.根据权利要求1-5任一项所述的全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，每1～2个月进行步骤2～步骤3的亲鱼选择和亲鱼强化培育，保证每个月份都有性腺成熟的亲鱼，可以根据需要随时进行人工催产和人工授精孵化操作。

7.根据权利要求6所述的全年获得半滑舌鳎高雌受精卵的方法，其特征在于，所述鲜活饵料包括活沙蚕和贝肉，孵化网箱中用散气石微充气。

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