CN111518723B - 大猩猩芽孢杆菌yc9l及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一株大猩猩芽孢杆菌(B.massiliogorillae)YC9L及其用途；该菌株保藏编号为GDMCC No:60979，保藏于广东省微生物菌种保藏中心；YC9L菌株具有产IAA，溶磷钾和重金属镉、锌、铜胁迫的修复功能，具有溶血阴性的安全性，能有效促进种子发芽、促进生菜和玉米植株生长；该菌种繁殖速度快，生产工艺简单，抗逆能力强，易保存，在促进植物生长、改善土壤养分、重金属修复等方面应用前景广阔，为微生物肥料提供了一株新型的根际促生菌株资源；属于微生物资源领域。

Description

大猩猩芽孢杆菌YC9L及其应用

技术领域

本发明涉及一株大猩猩芽孢杆菌(B.massiliogorillae)YC9L，以及大猩猩芽孢杆菌(B.massiliogorillae)YC9L的用途，属于微生物资源领域。

背景技术

植物根际促生菌(plant growth promoting rhizobacteria，PGPR)是指生活在土壤或附生于根系的一类可促进植物生长及其对矿质营养的吸收和利用，并能抑制有害生物的有益菌类。PGPR分泌吲哚乙酸(indole-3-acetic acid，IAA)，具有提高种子发芽率和根系生长、促进植物生长和发育的效果。有研究表明，甘蓝型油菜(Brassica napus)根部接种了能产IAA的PGPR后，其茎部分枝数明显增加(Asghar,2004)。Hoffman等(2013)从植株内生真菌中分离出一株具有高产IAA的真菌，用菌株发酵滤液浸泡种子后，显著促进西红柿幼苗生长。

国内外已发现的PGPR包括假单胞菌属、芽孢杆菌属、农杆菌属、黄杆菌属、沙雷氏菌等20多个种属，其中芽孢杆菌产生多种生物活性物质，具有防病促生、溶磷钾和土壤胁迫修复等功能，且具有产业化生产工艺简单，货架期长，易于在土壤环境中存活定殖等优势，在微生物肥料产业和化肥农药双减中显示了巨大的应用前景。许多芽孢杆菌种类，譬如枯草、巨大、胶质、解淀粉和侧孢等芽孢杆菌已被注册并广泛应用于生产微生物肥料。

大猩猩芽孢杆菌(Bacillus massiliogorillae)于2013年Mamadou等首次报道从野生大猩猩粪便样本中分离筛选的新种。2019年郑梅霞等首次从云南苍山自然土壤中也分离出菌株B.massiliogorillae。B.massiliogorillae具有兼性厌氧、革兰氏可变、菌体形态为杆状等特点。然而，作为一株新型的菌株资源，其活性物质及其功能基因尚未被挖掘与研究。

发明内容

本发明的第一目的在于根据现有技术中上述问题，提供一株新型的高产生长素IAA，并且兼具解磷、解钾、耐重金属的能力，有效促进种子发芽，促进植物生长的大猩猩芽孢杆菌(B.massiliogorillae)YC9L。

本发明的第二个目的是提供含上述大猩猩芽孢杆菌YC9L发酵液的生物菌剂。

本发明的第三个目的是在于提供上述大猩猩芽孢杆菌YC9L的应用。

为此，本发明的第一个目的通过以下技术方案实现：

一株大猩猩芽孢杆菌YC9L，保藏编号GDMCC No:60979，于2020年03月26日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省微生物研究所。

该YC9L菌是在广州天河绿化带植被根际土壤中分离纯化所得，属革兰氏阳性菌，有芽孢，杆状，好氧，在LB固体培养基上培养24h后形成的菌落为白色圆形或不规则状，表面湿润。采用16S rDNA基因序列进行比对，用Mega软件构建进化系统树，YC9L初步鉴定为大猩猩芽孢杆菌(B.massiliogorillae)，菌株的16S rDNA基因序列测定结果如SEQ ID NO:1所示。

采用Salkowski比色法测定，该菌株具有产生长素IAA的效果。在加色氨酸100mg/L的LB摇床培养24h，该菌株分泌IAA达46.72mg/L。采用难溶性钾长石为钾源的液体培养基摇床培养3天，发酵液中水溶性钾含量达7.27mg/L，说明YC9L具有解钾功能。采用难溶性磷酸钙为磷源的液体培养基摇床培养3天，发酵液中水溶性磷含量为20.61mg/L，说明YC9L具有解磷功能。采用平板斑点草坪法(spot-on-lawn assay)测定，与枯草芽孢杆菌模式菌株3610相比较，YC9L对Cd(II)、Zn(II)、Cu(II)重金属毒性有显著的修复功能。

本发明的第二个目的通过以下技术方案实现：

含上述的大猩猩芽孢杆菌YC9L发酵液的生物菌剂，所述的大猩猩芽孢杆菌YC9L数量为3.6×10⁸cfu/mL。

该菌剂制备方法为：挑取-80℃甘油冻干管YC9L菌株划线在LB培养基上，37℃过夜培养。挑取单菌落至LB液体培养基，180rpm，37℃摇床培养8h，得到种子液；按1％接种量，将获得的种子液接入发酵培养基中，37℃摇床培养10-14h，转速180r/min，得到菌株YC9L的发酵液。

本发明的第三个目的通过下述技术方案实现：

YC9L菌剂在促进玉米种子发芽上的应用：采用华金甜1号玉米种子，分两个处理组，CK组(不加YC9L)和加YC9L组，每组处理100颗种子。YC9L组将10mLYC9L菌悬液(10⁶cfu/mL)加入到放有玉米种子的滤纸片上，CK组加入等量的无菌水，于25℃生化培养箱中培养7d。7天后测定种子发芽率、株高和根长。结果表明，玉米种子发芽率提高了15.38％，株高增长了25.45％，根长增加了202.96％。

YC9L菌剂在促进生菜植株生长的应用：盆栽试验设置两个处理组，CK组(不加YC9L)和加YC9L菌液组，每个处理16株生菜苗，每盆4株，共4盆。加YC9L菌液组在生菜移栽时加入YC9L菌悬液(10⁶cfu/g土壤)至生菜的根部，CK组施加等量无菌生理盐水做对照。10d，20d，30d后进行第二、三、四次施菌，施加同量的菌液和无菌生理盐水于生菜盆栽土壤中。放置于人造气候室中，温度保持在18-22℃，相对湿度为65％至80％。40天后测定每个处理所有植株的株高、叶长、茎粗、叶宽、鲜重。结果表明，YC9L处理组生菜的株高、叶长、茎粗、叶宽、鲜重与CK相比分别提高了17.76％、22.16％、27.44％、18.25％、51.31％。

YC9L菌剂在促进玉米植株生长的应用：盆栽试验设置两个处理组，CK组(不加YC9L)和加YC9L菌液组，每个处理15株玉米苗，每盆3株，共5盆。加YC9L菌液组在玉米移栽时加入YC9L菌悬液(10⁶cfu/g土壤)至玉米的根部，CK组施加等量无菌生理盐水做对照。7d后进行第二次施菌，施加同量的菌液和无菌生理盐水于玉米盆栽土壤中。14天后测定每个处理所有植株的株高、叶长、根长、茎粗、叶宽、根干重、叶干重。结果表明，YC9L处理组的玉米的株高、叶长、茎粗、叶宽、根干重、叶干重与CK相比分别提高了6.35％、7.46％、19.13％、10.23％、41.67％、24.32％。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明筛选出一株大猩猩芽孢杆菌B.massiliogorillae YC9L。此菌株高产生长素IAA，并且兼具解磷、解钾，耐重金属的能力，有效促进种子发芽，促进植物生长。本发明是首次挖掘大猩猩芽孢杆菌的在根际促生、土壤养分活化和重金属修复方面的功能，为微生物肥料提供了一株新的菌株资源。

具体表现如下：

(1)本发明提供的大猩猩芽孢杆菌YC9L，具有高产IAA的能力，达46.72mg/L。于解钾培养基中培养3d，培养液中水溶性钾含量达7.27mg/L。于无机磷培养基中培养3d，培养液中水溶性钾含量达20.61mg/L。对重金属Cd(II)、Zn(II)、Cu(II)重金属毒性有显著的修复功能

(2)本发明提供的大猩猩芽孢杆菌YC9L能够促进玉米种子发芽，发芽率提高了15.38％、株高增长了25.45％，根长增加了202.96％。

(3)本发明提供的大猩猩芽孢杆菌YC9L能够显著促进生菜植株的生长，施加YC9L菌的生菜植株的株高、叶长、茎粗、叶宽、鲜重与对照组相比分别提高了17.76％、22.16％、27.44％、18.25％、51.31％。

(4)本发明提供的大猩猩芽孢杆菌YC9L能够显著促进玉米植株的生长，施加YC9L的玉米植株的株高、叶长、茎粗、叶宽、根干重、叶干重与CK相比分别提高了6.35％、7.46％、19.13％、10.23％、41.67％、24.32％。。

附图说明

图1是B.massiliogorillaeYC9L菌株产IAA定性、定量结果(1A为定性结果，1B为定量结果)；

图2是B.massiliogorillaeYC9L菌株革兰氏染色和产芽孢染色照片，(2A为革兰氏染色照片，2B为芽孢染色照片)；

图3是B.massiliogorillaeYC9L菌株系统发育树；

图4是B.massiliogorillaeYC9L菌株溶血试验的结果图；

图5是B.massiliogorillaeYC9L菌株解钾、解磷能力(5A解钾能力，5B解磷能力)；

图6是B.massiliogorillaeYC9L对重金属胁迫的抗性效果；

图7是B.massiliogorillae YC9L促进玉米种子发芽(7A玉米种子发芽效果图，7B玉米种子发芽数据统计柱状图)；

图8是B.massiliogorillaeYC9L促进生菜植株生长(8A盆栽植株照片，8B生菜盆栽试验结果数据统计图)；

图9是B.massiliogorillaeYC9L促进玉米植株生长(9A盆栽植株照片，9B玉米盆栽试验结果数据统计图)

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权力要求范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

以下实施例中除特别说明外，均为本领域内的常规实验方法和操作步骤。

实施例1 YC9L菌株的筛选

(1)分离

以广州天河绿化带植被根际土壤为筛选土样，称取10g土样加入装有90mL无菌水的250mL三角瓶中(加玻璃珠)，摇床震荡30min。使细菌充分分散，静置20～30s。然后于90℃水浴10min，取上清液进行10倍递增梯度稀释，采用10^-3-10^-4稀释度，吸取各梯度100μL涂布于LB固体平板上，37℃下倒置培养24小时。观察并按照菌落形态、大小、颜色等生长特征，分别挑取菌落于LB固体培养基上纯化后，对分离到的菌进行保存备用。

(2)筛选

采用Salkowski比色法测定所分离菌株产IAA的能力。将分离到的菌接种至含有L-色氨酸(100mg/L)的4mL LB液体培养基中，30℃、180r/mim培养摇床培养24h，进行定性与定量。取200μL菌悬液滴于白色陶瓷板上，同时加入200μL Salkowski比色液(500mL 35％HClO₄+10mL 0.5mol/L FeCl₃)。200μL IAA标准液(50mg/L)作为阳性对照，200μL未接菌的含有L-色氨酸的LB液体培养基做空白对照。室温、避光条件下放置30min后观察，记录颜色变红的菌株(图1A)。对上述菌株的菌悬液进行IAA定量，分光光度法测定菌液的OD₆₀₀值，然后将菌液10000rpm/min离心10min，取上清液加入等体积Salkowski比色液，避光静置30min，测定其OD₅₃₀值。根据IAA梯度稀释测定方法绘制标准曲线，计算单位体积发酵液中IAA的含量。筛选出产IAA量高的菌株，YC9L产IAA能力较高，分泌IAA达46.72mg/L(图1B)。

实施例2 YC9L菌属革兰氏阳性菌

挑取YC9L单菌落于液体LB培养基中培养24h，吸取4μL无菌水于载玻片上，吸取1μL菌液于加好的无菌水中，混匀，然后自然干燥。过火焰2-3次进行固定；结晶紫初染1min，水洗，自然晾干；碘液媒染1min，水洗，晾干；95％的乙醇脱色20s，水洗，晾干；番红复染1min，水洗，晾干，在100倍油镜下镜检观察，菌体呈蓝紫色(图2A)，YC9L为革兰氏阳性菌。

实施例3 YC9L菌可产芽孢

挑取YC9L单菌落于液体LB培养基中培养24h，吸取4μL无菌水于载玻片上，吸取1μL菌液于加好的无菌水中，混匀，然后自然干燥。过火焰2-3次进行固定。滴加孔雀绿染液已固定的涂片上，用镊子夹住载玻片在酒精灯火焰上加热，使染液在30s内冒蒸汽3-4次；水洗，晾干；用番红水溶液复染1min，水洗，晾干。用100倍油镜进行镜检，芽孢呈绿色，菌体呈红色(图2B)，YC9L菌可产芽孢。

实施例4 YC9L菌鉴定为B.massiliogorillae

YC9L菌属革兰氏阳性菌，有芽孢，杆状，好氧；在LB固体培养基上培养24h后形成的菌落为白色圆形或不规则形，表面湿润。采用试剂盒法提取YC9L菌的总DNA，PCR扩增YC9L菌的16S rDNA，进行序列测定，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，通用引物27F：5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3'(核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示)；通用引物1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'(核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示)。NCBI比对16S rDNA基因序列，采用neighbor-joining方法构建YC9L菌的系统发育树(图3)。本发明所述的菌株YC9L和Genbank中模式菌株B.massiliogorillae G2有较高的同源性。结合平板菌落特征和16SrDNA序列建系统发育树的结果，初步鉴定该菌株为大猩猩芽孢杆菌(B.massiliogorillae)，命名为B.massiliogorillae YC9L。

实施例5 YC9L菌具有溶血安全性

将YC9L菌株挑取单菌落于液体LB中于37℃，180rpm过夜培养，转接于新鲜液体培养基，摇至OD₆₀₀＝0.4，取3μL点至血琼脂平板上，于37℃培养24h，观察有无溶血现象。结果表明B.massiliogorillae YC9L菌株无溶血现象，为溶血阴性(图4)，具有溶血安全性。

实施例6含大猩猩芽孢杆菌YC9L发酵液的生物菌剂

该菌剂制备方法为：挑取-80℃甘油冻干管YC9L菌株划线在LB培养基上，37℃过夜培养。挑取单菌落至LB液体培养基，180rpm，37℃摇床培养8h，得到种子液；按1％接种量，将获得的种子液接入发酵培养基中，37℃摇床培养10-14h，转速180r/min，得到菌株YC9L的发酵液，大猩猩芽孢杆菌YC9L数量为3.6×10⁸cfu/mL。

实施例7 YC9L菌具有解钾能力

采用火焰分光光度计测定接有YC9L菌的解钾培养基中水溶性钾含量来确定YC9L的解钾能力。挑取YC9L单菌落于LB液体培养基，37℃，180r/min，过夜培养。将培养液转接至新鲜的LB液体培养基中，在37℃，180r/min的摇床中摇至OD₆₀₀＝0.4。吸取菌液(接种量1％)接种至含有50mL液体解钾培养基的250mL三角瓶中，30℃，180r/min，摇床培养3天。将培养液在8000rpm离心5min，取上清液，采用火焰光度计测定水溶性钾含量，设不接菌为对照，每次处理重复3次。结果表明YC9L菌株培养液中水溶性钾含量达7.27mg/L(图5A)，说明YC9L具有解钾能力。注：图中数值为平均值±标准误差(n＝3)

实例8 YC9L菌具有解磷能力

采用钼锑抗比色法测定接有YC9L菌的无机磷培养基中水溶性磷含量来确定YC9L的解磷能力。挑取YC9L单菌落于LB液体培养基，37℃，180r/min，过夜培养。将培养液转接至新鲜的LB液体培养基中，在37℃，180r/min的摇床中摇至OD₆₀₀＝0.4。吸取菌液(接种量1％)接种至含有50mL液体无机磷培养基的250mL三角瓶中，30℃，180r/min，摇床培养3天。将培养液在8000rpm离心5min，取上清液2mL采用钼锑抗比色法测定培养液中可溶性磷的含量，结果表明YC9L菌株培养液中水溶性磷含量达到20.61mg/L(图5B)，说明YC9L具有解磷能力。注：图中数值为平均值±标准误差(n＝3)

实施例9 YC9L菌对重金属毒性有显著的修复功能

采用平板斑点草坪法(spot-on-lawn assay)测定YC9L对重金属镉、锌、铜胁迫的耐受能力。挑取YC9L单菌落接入含有LB液体培养基的试管中，37℃，180r/min，过夜培养。将培养液转接至新鲜的LB液体培养基中，在37℃，180r/min的摇床中摇至OD₆₀₀＝0.4。取200μL菌液加入至50-60℃的4mL含0.7％琼脂的LB固体培养基中，颠倒混匀倒在含1.5％琼脂的LB固体培养基平板上，超净工作台吹风30min。将无菌滤纸片放于平板中央，分别在滤纸片上滴加10μL的50mM Cd(II)，100mM Zn(II)，400mM Cu(II)。吹干后放于37℃生化培养箱中培养24h。用枯草芽孢杆菌模式菌株NCIB3610作为对照，记录透明圈直径大小。结果表明，YC9L在重金属镉、锌、铜的胁迫下，产生的透明圈直径比枯草芽孢杆菌NCIB3610小(图6A)，说明YC9L对这3种重金属均表现出明显抗性；且比NCIB3610的抗性强，对重金属镉、锌、铜有显著的修复功能。注：图中数值为平均值±标准误差(n＝3)。

实施例10 YC9L菌促进玉米种子发芽

采用玉米种子发芽试验来评估YC9L对玉米种子发芽的促进作用。设置2个处理组，CK组(不加菌液)和加YC9L组。将无菌滤纸放入培养皿中，取100颗玉米种子进行表面灭菌，放置于铺有滤纸的培养皿上，加YC9L组将10mL YC9L菌悬液(10⁶cfu/mL)加入到滤纸上，CK组加入等量的无菌水。于25℃生化培养箱中培养7d，每天浇水适量，每皿的水量相同。7天后测定种子发芽率、株高和根长。结果表明加YC9L组玉米种子发芽率为45％，CK组发芽率为39％，与CK组相比，种子发芽率提高了15.38％、株高增长了25.45％，根长增加了202.96％(图7A、7B)，YC9L对玉米种子的发芽有显著的促进作用。注：图中数值为平均值±标准误差(n＝37)，具有相同字母者表示无显著差异(Duncan法，p<0.05)。

实例11 YC9L菌显著促进生菜植株生长

采用生菜盆栽试验评估YC9L菌对生菜植株生长的促进作用。盆栽土壤为由华南农业大学树木园土与跃进北试验基地菜园土按1:1混合，盆栽试验共设置CK组(不加YC9L)和加YC9L菌液组两个处理组，每个处理16株生菜苗，每盆4株，共4盆。各处理组采用高7.9cm，长为22.9cm，宽为17cm的花盆，每盆装土1.3kg。生菜苗生长到3片叶子时挑选生长状态一致的进行移栽。加YC9L菌液组在生菜移栽时加入YC9L菌悬液(10⁶cfu/g土壤)至生菜的根部，CK组施加等量无菌生理盐水做对照。10d，20d，30d后进行第二、三、四次施菌，施加同量的菌液和无菌生理盐水于的生菜盆栽土壤中。放置于人造气候室中，温度保持在18-22℃，相对湿度为65％至80％。40天后测定每个处理所有植株的株高、根长、叶长、茎粗、叶宽、鲜重。结果表明施加YC9L菌的生菜植株的株高、叶长、茎粗、叶宽、鲜重与CK组相比分别提高了17.76％、22.16％、27.44％、18.25％、51.31％(图8A、8B)，表明YC9L菌能够显著促进生菜植株的生长。注：图中数值为平均值±标准误差(n＝16)，具有相同字母者表示无显著差异(Duncan法，p<0.05)。

实例12 YC9L菌显著促进玉米植株生长

采用玉米盆栽试验评估YC9L菌对玉米植株生长的促进作用。盆栽土壤为由华南农业大学树木园土与跃进北试验基地菜园土按1:1混合，盆栽试验共设置CK组(不加YC9L)和加YC9L菌液组两个处理组，每个处理15株玉米苗，每盆3株，共5盆。各处理组采用内径为12.5cm，高为11.5cm的花盆，每盆装土0.9kg。待玉米苗生长到3片叶子时，挑选长势一致的进行移栽。加YC9L菌液组在玉米移栽时加入YC9L菌悬液(10⁶cfu/g土壤)至玉米的根部，CK组施加等量无菌生理盐水做对照。7d后进行第二次施菌，施加同量的菌液和无菌生理盐水于玉米盆栽土壤中。移栽14d后，进行收样和测量，测定每个处理所有植株的株高、叶长、根长、茎粗、叶宽、根干重、叶干重，结果表明施加YC9L的玉米植株的株高、叶长、茎粗、叶宽、根干重、叶干重与CK相比分别提高了6.35％、7.46％、19.13％、10.23％、41.67％、24.32％(图9A、9B)，表明YC9L能够显著促进玉米植株的生长。注：图中数值为平均值±标准误差(n＝15)，具有相同字母者表示无显著差异(Duncan法，p<0.05)。

序列表

<110> 华南农业大学

<120> 大猩猩芽孢杆菌YC9L及其用途

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1361

<212> DNA

<213> 大猩猩芽孢杆菌(Bacillus massiliogorillae)

<400> 1

agcggcggac gggtgagtaa cacgtgggca acctgcctat aagactggga taactccggg 60

aaaccggggc taataccgga tagttctttc ctcctcatgg aggaaagggg aaagatggtt 120

tcggctatca cttatagatg ggcccgcggc gcattagcta gttggtaagg taacggctta 180

ccaaggcgac gatgcgtagc cgacctgaga gggtgatcgg ccacactggg actgagacac 240

ggcccagact cctacgggag gcagcagtag ggaatcttcc gcaatggacg aaagtctgac 300

ggagcaacgc cgcgtgaacg aagaaggcct tcgggtcgta aagttctgtt gttagggaag 360

aacaagtatg agagtaactg ctcgtacctt gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa 420

ctacgtgcca gcagccgcgg taatacgtag gtggcaagcg ttgtccggat ttattgggcg 480

taaagcgcgc gcaggtggtt tcttaagtct gatgtgaaag cccacggctc aaccgtggaa 540

ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca gaagaggaaa gtggaattcc aagtgtagcg 600

gtgaaatgcg tagatatttg gaggaacacc agtggcgaag gcgactttct ggtctgtaac 660

tgacactgag gcgcgaaagc gtggggagca aacaggatta gataccctgg tagtccacgc 720

cgtaaacgat gagtgctaag tgttagaggg tttccgccct ttagtgctgc agctaacgca 780

ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg 840

cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt 900

cttgacatcc tctgacactc ctagagatag gacgttcccc ttcgggggac agagtgacag 960

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gcaacccttg atcttagttg ccagcattca gttgggcact ctaaggtgac tgccggtgac 1080

aaaccggagg aaggtgggga tgacgtcaaa tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac 1140

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agccattctc agttcggatt gtaggctgca actcgcctac atgaagccgg aatcgctagt 1260

aatcgcggat cagcatgccg cggtgaatac gttcccgggc cttgtacaca ccgcccgtca 1320

caccacgaga gtttgtaaca cccgaagtcg gtggggtaac c 1361

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 大猩猩芽孢杆菌(Bacillus massiliogorillae)

<400> 2

agagtttgat cctggctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 大猩猩芽孢杆菌(Bacillus massiliogorillae)

<400> 3

ggttaccttg ttacgactt 19

Claims (8)

1.一株大猩猩芽孢杆菌（B. massiliogorillae）YC9L，保藏编号为 GDMCC

No:60979，保藏于广东省微生物菌种保藏中心。

2.根据权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L，其特征在于，其 16S rDNA

核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 所示。

3.一种含权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L 的生物菌剂，所述的大

猩猩芽孢杆菌 YC9L 数量为 3.6×10⁸ cfu/mL。

4.权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L 作为解钾解磷剂的应用。

5.权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L 作为土壤修复剂的应用。

6.权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L 作为土壤养分活化剂的应用。

7.权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L 作为植物生长促进剂的应用。

8.权利要求 1 所述的大猩猩芽孢杆菌 YC9L 作为根系生长促进剂的应用。

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