CN111518274B - 共轭聚合物量子点及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种共轭聚合物量子点及其制备方法和应用，该共轭聚合物量子点及其制备方法和应用，该制备方法包括：1)在催化剂的存在下，将苯二胺类化合物和苯二醌类化合物于水中进行接触反应；2)将反应体系的pH调至中性或碱性，接着进行纯化以制得共轭聚合物量子点。该制备方法具有快速、低成本、易实现的特点，该共轭聚合物量子点具有优异的荧光成像特性，进而使得能够在生物成像中得以应用。

Description

共轭聚合物量子点及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及共轭聚合物量子点，具体地，涉及一种共轭聚合物量子点及 其制备方法和应用。
背景技术
近年来，由于荧光显微镜行业的快速发展，荧光成像技术已成为化学、 生物和医学领域不可缺少的工具。荧光试剂作为成像技术的重要部分，很大 程度上决定着成像的性能，如分辨率、穿透深度等。传统的荧光探针，包括 有机小分子、无机量子点(Qdots)和绿色荧光蛋白(GFP)等，在荧光成像 发展的过程中发挥了重要作用，但是也存在诸多局限性，例如亮度低，光稳 定性不足或毒性问题。因此，寻求新的高性能的荧光成像试剂对于提高成像性能，拓展荧光成像技术的应用领域和范围具有较为重要的现实意义。
共轭聚合物量子点(Conjugated Polymer Dots,CPdots)，是一种以共轭 聚合物为主要组分的、具有较小尺寸的新型水溶性纳米粒子；因具有优良的 光学性能，如超高的荧光亮度、光吸收能力强、生物相容性好等，在荧光成 像、光动力治疗等领域表现出了巨大的应用潜力。此外，CPdots同样具有独 特的电学特性，在电子器件的制备等材料科学领域也表现出了光明的应用前 景。不难预见，随着CPdots应用领域的拓展和使用推广的深入，其市场需 求量必然逐年增长。
迄今为止，共轭聚合物量子点的制备主要为两步法：先合成共轭聚合物 作为原材料，然后利用一些经典的纳米材料制备法，如纳米沉淀法、微乳液 法以及自组装技术来制备聚合物纳米颗粒。因此，目前共轭聚合物量子点的 制备很大程度上受限于苛刻的共轭聚合物的合成条件，包括高温、溶剂消耗 大、需要贵金属催化剂以及纯化操作繁琐且费时。同时，目前能够获取的聚 合物单体品种也非常有限且价格普遍较高。此外，上述方法在制备聚合物纳米材料时也普遍存在需要助剂(有机溶剂或表面活性剂)，单次制备量少， 所得胶体溶液浓度稀等不足。总的来说，现有制备共轭聚合物量子点的方法 存在以下问题：制备过程复杂、废液排放、无法大量制备、品种少、成本高 等。
发明内容
本发明的目的是提供一种共轭聚合物量子点及其制备方法和应用，该制 备方法具有快速、低成本、易实现批量生产的特点，该共轭聚合物量子点具 有优异的荧光成像特性，进而使得能够在生物成像中得以应用。
为了实现上述目的，本发明提供了一种共轭聚合物量子点的制备方法， 包括：
1)在催化剂的存在下，将苯二胺类化合物和苯二醌类化合物于水中进 行接触反应；
2)将反应体系的pH调至中性或碱性，接着进行纯化以制得共轭聚合物 量子点。
本发明还提供了一种共轭聚合物量子点，该共轭聚合物量子点通过上述 的制备方法制备而得。
本发明进一步提供了一种如上述的共轭聚合物量子点在生物成像中的 应用。
在上述技术方案中，本发明首先将苯二胺类化合物和苯二醌类化合物进 行接触反应，即席夫碱缩合反应得到共轭聚合物，由于聚合物的疏水性和水 环境的强烈反差，形成的席夫碱聚合物卷曲缠绕，形成了共轭聚合物量子点； 接着将体系调节至碱性环境，以加速聚合和沉淀，使反应停止；具体可参见 图12，图12中采用的将邻苯二酚氧化成邻苯二醌后与邻苯二胺进行反应得到共轭聚合物量子点，量子点的平均粒径为10nm以内。
席夫碱是氮原子与碳原子用双键连结形成的一类化合物，通常由胺和活 性羰基的缩合反应形成。由于与乙烯基具有相似的电子结构，席夫碱反应被 认为是常规偶联方案的理想替代品；更重要的是，席夫碱缩合反应可以在温 和的条件下快速地进行，具有高效和批量制备材料的巨大潜力。
此外，相对于现有的CPdots制备方法(使用高分子聚合物为原料)来 说，基于席夫碱缩合的制备策略是一种“小分子直接制备材料”的方法，是 通过一锅法进行的，简化了反应步骤，同时也能够提高反应产率，更容易制 备得到尺寸小且结构均匀的CPdots。因此，探索通过席夫碱化学方法简便合成具有良好光学和电学特性的CPdots具有重要意义。
并且，本发明提供的方法中的反应条件十分温和，如在15-40℃下便可 完成反应，无需额外加热等，从而达到了节能减排的效果；同时，整个反应 体系十分环保，使用水作为反应介质，对环境无污染，也进一步降低了制备 成本。
同时，本发明使用的单体，即苯二胺类化合物和苯二醌类化合物十分易 得，且价格较为低廉。由此可知，本发明的制备方法开发使用了新单体种类， 能够快速、一步实现共轭聚合物量子点的大量、低成本及绿色的制备，对 CPdots的应用开发和推广具有明显科学和现实意义。
最后，本发明制得的共轭聚合物量子点具有如下特点：吸收光谱在530～ 720nm；具有高达0.35的荧光量子产率；具有较小的颗粒尺寸和较窄的粒度 分布，适合用于高性能的荧光成像应用；具有小的细胞毒性；共轭聚合物量 子点进入活细胞内后，具有良好的溶酶体靶向定位功能；具有较好的生物组 织穿透能力，如对斑马鱼血管具有良好的成像效果。
本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
附图是用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与 下面的具体实施方式一起用于解释本发明，但并不构成对本发明的限制。在 附图中：
图1A是检测例7中的实施例1-3的产物的荧光强度统计图；
图1B是检测例7中的实施例1、实施例4-5的产物的荧光强度统计图；
图2是检测例7中的实施例1、实施例6-8的产物的荧光强度统计图；
图3是检测例1的共轭聚合物量子点的透射电镜图；
图4是检测例2的动态光散射谱图；
图5是检测例3的XPS光谱图；
图6是检测例4的红外光谱图；
图7是检测例5的分子量测量图；
图8是检测例6的耐光稳定性测试图；
图9是应用例1的MTT细胞毒性图；
图10是应用例2的共定位成像图；
图11是应用例3的斑马鱼成像图；
图12是本发明的一种优选实施方式的原理图。
具体实施方式
以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描 述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这 些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各 个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点 值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视 为在本文中具体公开。
本发明提供了一种共轭聚合物量子点的制备方法，包括：
1)在催化剂的存在下，将苯二胺类化合物和苯二醌类化合物于水中进 行接触反应；
2)将反应体系的pH调至中性或碱性，接着进行纯化以制得共轭聚合物 量子点。
在上述制备方法中，为了进一步提高共轭聚合物量子点的荧光性能，优 选地，在步骤1)中，苯二胺类化合物和苯二醌类化合物的用量摩尔比为 0.4mmol：0.1-0.4mmol，更优选为0.4mmol：0.2-0.3mmol。控制苯二胺类化 合物的用量大于苯二醌类化合物的用量，能够使得共轭聚合物量子点的表面 修饰有更多的氨基。
在上述制备方法中，为了进一步提高共轭聚合物量子点的荧光性能，优 选地，苯二胺类化合物和催化剂的用量摩尔比为0.4mmol：1-3mmol。
在上述制备方法中，为了进一步提高共轭聚合物量子点的荧光性能，优 选地，苯二胺类化合物和水的用量比为0.4mmol：3-20mL，优选为0.4mmol： 4-8mL。
在上述制备方法中，从产率上考虑，优选地，在步骤1)中，苯二醌类 化合物选自对苯二醌、2-羟基对苯二醌和邻苯二醌中的至少一种，优选为邻 苯二醌。在本发明中，苯二醌类化合物可以是常规的市售品，也可以是通过 自行制备的方式进行，其中，2-羟基对苯二醌则可以参考公开号 US005616734A的专利文献制备而得，即将对苯二酚通过过氧化氢氧化制得。 对苯二醌、邻苯二醌也可以参照现有文献进行，即将对苯二酚、邻苯二酚通过氧化剂的氧化而得，具体参考文献可以如：文献1(Rolling“Wool-Balls”: Rapid Live-CellMapping of Membrane Sialic Acids via Poly p-Benzoquinone/EthylenediamineNanoclusters，Bin-Bin Chen,Xiao-Yuan Wang and Ruo-Can Qian*，ChemComm)、文献2(Synthesis and Characterization of Novel Quinone-Amine Polymer/CarbonNanotubes Composite for SensitiveElectrocatalytic Detection of NADH，XinmanTu,Qingji Xie,*Zhao Huang,Qin Yang,Shouzhuo Yao，Electroanalysis 19,2007,No.17,1815– 1821)、文献3(Arene and Phenol oxidation with hydrogen peroxideusing ‘sandwich’type substituted polyoxometalates as catalysts，
Figure SMS_1
G.Egusquiza a, Gustavo P.Romanelli a,Carmen I.Cabello a,1,Irma L.Botto b,Horacio J.Thomas a,*，Catalysis Communications 9(2008)45–50)。
在上述制备方法中，从产率上考虑，优选地，苯二胺类化合物选自对苯 二胺、间苯二胺和邻苯二胺中的至少一种，优选为邻苯二胺。
在上述制备方法中，从产率上考虑，优选地，催化剂为盐酸、硝酸、磷 酸和硫酸中的至少一种，更优选为盐酸。
在本发明中，为了进一步提高反应速率以及共轭聚合物量子点的产率， 优选地，在步骤1)中，室温接触反应至少满足以下条件：反应温度为15-40℃， 反应时间为3-10h。
在本发明中，为了进一步加速聚合和沉淀的速率，优选地，在步骤2) 中，pH的调节通过将碱性物质添加至反应体系中的方式进行；更优选地， 碱性物质选自碱和/或强碱弱酸盐，更优选为氢氧化钠、氢氧化钾和碳酸氢钠 中的至少一种；进一步优选地，通过控制pH调节的条件，使得pH调节后 的反应体系的pH为7-11。
在本发明中，为了进一步提高共轭聚合物量子点的纯度，优选地，在步 骤2)中，纯化包括：将反应体系进行离心分离得到下层沉淀，将下层沉淀 通过水洗涤2-4次。
在本发明中，苯二醌类化合物可以是市售品，也可以通过自行制备得到， 本发明对此并无特殊的限制。但是为了进一步保证苯二醌类化合物的纯度， 优选地，在步骤1)之前，该制备方法还包括：将苯二酚类化合物和氧化剂 进行氧化反应以制得苯二醌类化合物；更优选地，苯二酚类化合物、氧化剂的用量摩尔比为0.8：0.5-1；进一步优选地，氧化剂选自过氧化氢和铁盐(铁 盐可以为氯化铁、硫酸铁和硝酸铁中的至少一种)中的至少一种，苯二酚类 化合物选自邻苯二酚、间苯二酚和对苯二酚中的至少一种，优选为邻苯二酚； 更进一步优选地，氧化反应至少满足以下条件：反应温度为15-40℃，反应 时间为1-5min。
本发明还提供了一种共轭聚合物量子点，该共轭聚合物量子点通过上述 的制备方法制备而得。
本发明进一步提供了一种如上述的共轭聚合物量子点在生物成像中的 应用。
以下将通过实例对本发明进行详细描述。以下实例中，邻苯二酚记为 oBD，间苯二酚记为mBD，对苯二酚记为pBD，对苯二胺记为pPD、间苯 二胺mPD和邻苯二胺oPD。
对苯二胺、间苯二胺、邻苯二胺购自Sigma-Aldrich公司，邻苯二酚、 间苯二酚和对苯二酚购自东京化学工业发展有限公司。
实施例1
共轭聚合物量子点的制备：
1)将邻苯二酚和邻苯二胺溶于超纯水中，分别配制成浓度为0.4mol/L 的溶液，供后续使用。
2)在10ml的离心管中，加入0.8mL的20重量％的H2O2(含有5.33mmol H2O2)、2ml的邻苯二酚溶液(含有0.8mmol邻苯二酚)，于25℃下反应3min (反应结束后，经高效液相法检测得知，体系中含邻苯二醌0.3mmol)。
3)在上述溶液中加入1mL邻苯二胺溶液(含有0.4mmol邻苯二胺)，再 向其中加入1mL的2mol/L的盐酸(含有2mmol氯化氢)，25℃下避光反应4h。
4)向反应体系中，加入pH为11的NaOH溶液以加速聚合和沉淀，NaOH 溶液添加结束后反应体系的pH为8，使反应停止。将反应体系进行离心 (10000rpm/min，15min)后，将上清液倒出，用超纯水洗涤三次，得到沉淀 16mg。最后将沉淀再溶解于8mL的DMSO中在4℃条件下保存备用。
实施例2
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将邻苯二胺换为间苯二胺。
实施例3
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将邻苯二胺换为对苯二胺。
实施例4
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将邻苯二酚换为间苯二酚。
实施例5
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将邻苯二酚换为对苯二酚。
实施例6
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将2mol/L的盐酸换为2mol/L的 硝酸。
实施例7
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将2mol/L的盐酸换为2mol/L的 磷酸。
实施例8
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将2mol/L的盐酸换为2mol/L的 硫酸。
实施例9
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将步骤2)中的邻苯二酚溶液换 为0.5mL(含有0.2mmol邻苯二酚)，反应结束后，经高效液相法检测得知， 体系中含邻苯二醌0.1mmol。
实施例10
按照实施例1的方法进行，所不同的是，将步骤2)中的邻苯二酚溶液换 为4mL(含有1.6mmol邻苯二酚)，反应结束后，经高效液相法检测得知，体 系中含邻苯二醌0.4mmol
实施例11
按照实施例1的方法进行，所不同的是，步骤3)中，避光反应3h。
实施例12
按照实施例1的方法进行，所不同的是，步骤3)中，避光反应10h。
实施例13
按照实施例1的方法进行，所不同的是，NaOH溶液添加结束后反应体系 的pH为7。
实施例14
按照实施例1的方法进行，所不同的是，NaOH溶液添加结束后反应体系 的pH为11。
检测例1
通过牌号为Hitachi HT-7700的透射电子显微镜对实施例1制得的共轭 聚合物量子点进行形貌表征，检测结果如图3。由图3可知，所制得的共轭 聚合物量子点为均匀分散的球形小微粒。
实施例2-14的制得的共轭聚合物量子点通过相同方法进行检测，检 测显示所制得的共轭聚合物量子点也为均匀分散的球形小微粒。
检测例2
利用牌号为Malvern ZS90的纳米粒度电位仪对实施例1制得的共轭聚 合物量子点进行粒径表征，检测结果如图4。由图4可知，所制得的共轭聚 合物量子点的粒径约为6nm左右的小颗粒。
实施例2-14的制得的共轭聚合物量子点通过相同方法进行检测，检 测显示所制得的共轭聚合物量子点也约为6nm左右的小颗粒。
检测例3
利用牌号为ESCALAB-250的X射线光电子能谱仪对实施例1制得的共 轭聚合物量子点进行元素分析，结果如图5。由图5可知，共轭聚合物量子 点由H、C、N、O几种元素组成。
实施例2-14的制得的共轭聚合物量子点通过相同方法进行检测，检 测显示所制得的共轭聚合物量子点也由H、C、N、O几种元素组成。
检测例4
利用牌号为Shimadzu FTIR-8400S的红外光谱仪对实施例1制得的共轭 聚合物量子点进行官能团分析，结果如图6。由图6可知，共轭聚合物量子 点的确存在席夫碱结构。
实施例2-14的制得的共轭聚合物量子点通过相同方法进行检测，检测 显示所制得的共轭聚合物量子点也存在席夫碱结构。
检测例5
利用牌号为Entech 1900多通道罐式采样器对实施例1制得的共轭聚合物 量子点进行分子量测试，结果如图7所示。由图7可知，共轭聚合物量子点确 实是一种聚合物，从而说明共轭聚合物量子点被成功制备。
实施例2-14的制得的共轭聚合物量子点通过相同方法进行检测，检测 结果说明共轭聚合物量子点被成功制备。
检测例6
使用365nm的紫外灯对实施例1制得的共轭聚合物量子点进行了照射，并 间隔性地检测了其荧光强度(每隔10min做一次检测)，紫外灯照射120min 后，观察探针的荧光强度有无明显变化。
利用牌号为PerkinElmer LS-55的荧光仪对实施例1制得的共轭聚合物量 子点的荧光强度进行了测试，结果如图8所示。由图8可知，所制备的共轭聚 合物量子点具有良好的耐光稳定性。
实施例2-14的制得的共轭聚合物量子点通过相同方法进行检测，检测 结果说明共轭聚合物量子点也具有良好的耐光稳定性。
检测例7
利用牌号为PerkinElmer LS-55的荧光仪对实施例1-8的产物进行荧光光 谱检测，检测结果如图1A、图1B和图2。
由图1A和图1B可知，通过使用邻苯二酚和邻苯二胺作为原料可以观 察到630nm处较亮较纯的红色荧光，这可能是由于反应速率和电子密度较高 所致。
由图2所知，盐酸作为催化剂，催化效果最好。
应用例1
将HepG2细胞接种在96孔板中(每孔有5000个细胞)，并在RPMI-1640 培养基中放于细胞培养箱中(细胞培养箱的气氛由95体积％的空气和5体 积％CO2组成)，在37℃条件下培养24h。然后将细胞用不同浓度的实施例1 制得的共轭聚合物量子点溶液(0.1-25μg/mL)处理后，再培养24h。接下来， 将10μL的MTT溶液(MTT为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐， 5mg/mL)缓慢滴加进每个孔中后继续培养4h后，加入甲瓒溶液并在摇床上 振荡10min以充分溶解紫色晶体。
利用牌号为Thermo Scientific Multiskan Sky的酶标仪测量570nm处的吸 光度，并根据数据计算细胞活性。结果见图9，由图9可知共轭聚合物量子点 对活细胞的细胞毒性较低，为生物系统的成像应用提供了良好的基础。
应用例2
溶酶体共定位检测：
用实施例1制得的共轭聚合物量子点溶液(2μg/mL)染色HepG2细胞 30min，再用LysoTracker Green KGMP006-2(购自江苏凯基生物技术股份有 限公司)孵育1小时，然后用pH＝7.4的PBS缓冲洗涤细胞3次，利用牌号为TCS SP8的徕卡扫描激光共聚焦显微镜进行成像；使用488nm激光激发， 在510-530nm的绿色通道和610-670nm的红色通道收集荧光。
结果见图10，其中，图中可以清楚地观察到共轭聚合物量子点(红色通 道，图B)和商业化溶酶体定位染料LysoTracker Green(绿色通道，图C) 都显示出强烈的荧光，皮尔森共域系数为0.943，皮尔森共域系数越大表示 共轭聚合物量子点的靶向溶酶体的能力越强。由图10可知共轭聚合物量子 点具有固有的靶向溶酶体的能力，非常有利于进一步监测溶酶体微环境的变 化。
应用例3
将购买的斑马鱼胚胎放在90毫米培养皿中，并添加营养液以维持斑马鱼 胚胎的生长。将培养皿放在28℃恒温培养箱中培养5天，并且每天更换营养液。
将5天大的斑马鱼转移到35mm共聚焦皿中，并与实施例1制得的共轭聚 合物量子点溶液(2μg/mL)共同孵育2h，然后用超纯水洗涤3次以去除残留 的探针(共轭聚合物量子点)。利用牌号为TCS SP8的徕卡扫描激光共聚焦显 微镜通过10倍物镜进行成像，使用532nm激光激发，收集610-670nm的红色 通道荧光。结果见图11，其中，图中可以清楚地观察到共轭聚合物量子点(红 色通道，图中右边部分)显示出强烈的荧光，荧光强度越大表示共轭聚合物 量子点在斑马鱼内的组织穿透能力越强。由图11可知共轭聚合物量子点可以应用于斑马鱼体内的荧光成像。
通过上述实例可知，与现有技术相比，本发明具有以下优点：
1)与现有的先合成共轭聚合物的二步法不同，本发明使用常见市售化 工原料作为单体，室温条件下水相中一步法反应制备得到共轭聚合物量子 点，大大简化了制备过程，降低了成本，更易实现批量化生产，为共轭聚合 物量子点的应用推广提供了良好基础。
2)与由高分子聚合物制备共轭聚合物量子点的方法相比，本发明的方 法直接由小分子单体制备而来，尺寸分布更加均匀。此外，本发明方法制备 的共轭聚合物量子点具有较小的尺寸，在成像和临床方面更具实用意义。
3)所制备的共轭聚合物量子点具有较高的荧光量子产率，良好的光稳 定性和较低的生物毒性，适宜用于生物成像。
4)所制备的共轭聚合物量子点具有良好的溶酶体靶向功能。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实 施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方 案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特 征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必 要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。
此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其 不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

Claims (14)

1.一种共轭聚合物量子点的制备方法，其特征在于，包括：
1）在催化剂的存在下，将苯二胺类化合物和苯二醌类化合物于水中进行接触反应；
2）将反应体系的pH调至中性或碱性，接着进行纯化以制得共轭聚合物量子点；
其中，在步骤1）中，所述苯二胺类化合物和苯二醌类化合物的用量摩尔比为0.4mmol：0.1-0.4mmol；
在步骤1）中，所述苯二胺类化合物和催化剂的用量摩尔比为0.4mmol：1-3mmol；
在步骤1）中，所述苯二胺类化合物和水的用量比为0.4mmol：3-20mL；
在步骤1）中，所述苯二醌类化合物为邻苯二醌；
在步骤1）中，所述苯二胺类化合物选自对苯二胺、间苯二胺和邻苯二胺中的至少一种；
在步骤1）中，所述催化剂为盐酸、硝酸、磷酸和硫酸中的至少一种；
在步骤1）中，所述接触反应至少满足以下条件：反应温度为15-40℃，反应时间为3-10h；
在步骤2）中，pH的调节通过控制pH调节的条件，使得pH调节后的反应体系的pH为7-11。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤1）中，所述苯二胺类化合物和苯二醌类化合物的用量摩尔比为0.4mmol：0.2-0.3mmol。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤1）中，所述苯二胺类化合物和水的用量比为0.4mmol：4-8mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤1）中，所述苯二胺类化合物为邻苯二胺。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤2）中，pH的调节通过将碱性物质添加至所述反应体系中的方式进行。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述碱性物质选自碱。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述碱性物质为氢氧化钠、氢氧化钾和碳酸氢钠中的至少一种。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤2）中，所述纯化包括：将反应体系进行离心分离得到下层沉淀，将所述下层沉淀通过水洗涤2-4次。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其中，在步骤1）之前，所述制备方法还包括：将苯二酚类化合物和氧化剂进行氧化反应以制得所述苯二醌类化合物。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其中，所述苯二酚类化合物、氧化剂的用量摩尔比为0.8：0.5-1。
11.根据权利要求9所述的制备方法，其中，所述苯二酚类化合物为邻苯二酚。
12.根据权利要求9所述的制备方法，其中，所述氧化反应至少满足以下条件：反应温度为15-35℃，反应时间为1-5min。
13.一种共轭聚合物量子点，其特征在于，所述共轭聚合物量子点通过权利要求1-12中任意一项所述的制备方法制备而得。
14.一种如权利要求13所述的共轭聚合物量子点在生物成像中的应用。
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