CN111514376A

CN111514376A - 一种聚乳酸-人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法

Info

Publication number: CN111514376A
Application number: CN202010371119.5A
Authority: CN
Inventors: 王玲
Original assignee: Shanghai Jiajia Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shanghai Jiajia Biotechnology Co ltd
Priority date: 2020-04-30
Filing date: 2020-04-30
Publication date: 2020-08-11

Abstract

本发明公开了一种聚乳酸‑人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，该颗粒包含聚乳酸和人脂肪干细胞胶。本发明利用抽取的人腹部脂肪组织，提纯乳化后破碎成纳米大小的颗粒，将得到的脂肪微球颗粒与预处理好的聚乳酸微球按比例混合，制备成聚乳酸‑人脂肪干细胞胶微球颗粒复合物。本复合物制备便捷，30分钟内即可制备完成。并且该复合物可以显著提高填充性脂肪存活率，降低脂肪纤维化和钙化。根据本发明所述的聚乳酸‑人脂肪干细胞胶微球颗粒具有多种生物学活性，在脂肪填充，等组织工程修复领域具有很好的应用前景。

Description

一种聚乳酸-人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法

技术领域

本发明涉及医学脂肪移植技术领域，涉及一种新型的聚乳酸-脂肪微球混合颗粒制备方法。

背景技术

人体脂肪含有丰富的干细胞和表皮生长因子，神经保护因子等活性物质，目前已经在临床组织再生与修复领域被广泛的应用。在2016年鲁峰教授团队首次研发了脂肪干细胞胶(SVF-gel)[1]，它主要是通过离心的方法去除脂肪组织的油滴，得到富含脂肪干细胞和细胞外基质(如胶原蛋白，弹性蛋白和粘多糖等)产物，研究发现SVF-gel具有强大的组织再生和修复能力。研究还发现SVF-gel中含有大量的细胞因子，如VEGF，GDNF，HGF，FGF等[2]。SVF-gel的提取方法首先需要提前将油滴分离出来，粗提的SVF-gel需要两次离心，第一次离心去除沉淀脂肪中含有的肿胀液，第二次离心去除成熟脂肪细胞裂解释放的油滴，还需要注射器反复推注乳化，将样品破碎后，最终呈现出的外观是胶冻样。在临床的操作中发现SVF-gel的提取过于繁琐，一套操作下来大概需要几个小时，对于自体填充手术来说时间太久，加大了污染的风险。另外还发现反复推注并不能完全破碎脂肪块颗，在使用时填充的脂肪块不容易获得血供，容易钙化导致手术失败。因此有效快速的制备小颗粒的SVF-gel，目前是临床迫在眉睫需要解决的问题。本发明制备成的聚乳酸-脂肪微球颗粒复合物，30分钟内即可制备，并可以显著提高填充性脂肪存活率，降低脂肪纤维化和钙化。在脂肪填充，等组织工程修复领域具有很好的应用前景。

发明内容

本发明的首要目的是提供一种快速制备聚乳酸-脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，本发明的次要目的是提供一种40um左右的聚乳酸颗粒。

为实现上述法发明目的，本发明的技术方案如下：

人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，包括以下步骤：

(1)将存在50mL注射器内的新鲜脂肪组织，进行800rpm/min离心5分钟，离心后的取中间脂肪细胞层。

(2)取出的脂肪细胞层利用2个螺旋注射器及乳化器进行乳化操作。将两个螺旋注射器通过乳化器连接，拉直最大量程，然后恢复脂肪刻度，反复推拉20次。该步骤使用的螺旋注射器型号为10ml。

(3)将乳化后的样品进行800rpm/min离心5分钟，离心后的取下层的脂肪组织即脂肪干细胞胶。

(4)制备脂肪干细胞胶微球颗粒：利用超声破碎仪进行破碎，条件为40％强度，10秒间隔，每次10秒，处理3分钟。处理完的样品为脂肪干细胞胶微球颗粒。该步骤使用的超声破碎仪型号为SONICS Uibrace II^TM。

聚乳酸微球颗粒的制备方法，包括以为步骤：

(1)利用聚乳酸为原料，用纳米粉碎机进行粉碎，粉碎时间大约20分钟。

(2)将破碎的聚乳酸颗粒放入鼓风干燥机内烘干，烘干温度55℃大约30分钟。

(3)聚乳酸颗粒利用400目筛选，收集筛选后的聚乳酸颗粒，收集后用无菌水溶解。

(4)将制备的聚乳酸颗粒利用超声破碎仪进行破碎，条件为60％强度，10秒间隔，每次30秒，处理5分钟。处理完的样品为聚乳酸微球颗粒。该步骤使用的超声破碎仪型号为SONICS UibraceII^TM。

聚乳酸-脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，包括以下步骤：

将配置好的脂肪干细胞胶微球颗粒和聚乳酸微球颗粒按照体积1∶3混匀，室温孵育15分钟即可。

本发明的有益效果与优点

(1)传统方法制备的脂肪干细胞胶呈橘色外观，颗粒明显，与水分界清晰，而我们制备的脂肪干细胞胶微球颗粒整体颜色偏白，呈现均匀的乳糜状外观，相比与传统脂肪干细胞胶更容易成型和稳定。

(2)利用光学显微镜发现，传统方法制备的脂肪干细胞胶在光镜下大小不均一，而我们制备的脂肪干细胞胶微球颗粒整体大小均一，并且较传统方法制备的脂肪干细胞胶体积小很多，通过统计学分析脂肪干细胞胶微球颗粒的平均体积是传统脂肪干细胞胶体积的0.1倍。这样微小颗粒的脂肪胶更容易获得机体血供，防止钙化。

(3)聚乳酸是一种可降解，具有柔软定性安全的材料。我们制备的聚乳酸微球颗粒可以达到微米级别，机体更容易吸收。

(4)我们制备的聚乳酸-脂肪干细胞微球颗粒复合物较传统脂肪干细胞胶更容易定型，可以调高塑形效果。

(5)传统方法制备的脂肪干细胞胶制备时间大概需要3小时，而我们制备的聚乳酸-脂肪干细胞胶微球颗粒全程仅需要30分钟即可，用时仅为之前的0.2倍，大幅降低了手术过程感染的风险。

附图说明

图1是抽指针获取脂肪组织第一次离心示意图。(中间层即含脂肪干细胞胶)

图2是脂肪干细胞胶制备示意图。2个10ml螺旋注射器及乳化器。

图3是脂肪干细胞胶与脂肪干细胞胶微球颗粒对比图。

图4是脂肪干细胞胶与脂肪干细胞胶微球颗粒光镜图。

图5是脂肪干细胞胶与脂肪干细胞胶微球颗粒体积统计图。

具体实施方式

为使本申请的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请具体实施例对本申请技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。

实施例1：

人脂肪组织来自上海伯思立医疗美容医院抽脂手术废弃脂肪组织。

(1)50mL抽指针含有的新鲜脂肪组织进行800rpm/min离心5分钟，离心后分三层(见图1)，推动抽指针，首先将最下层弃掉，将收集的中间层置于10ml注射器内。

(2)利用1只新的10ml注射器和乳化器相连，拉直最大量程，然后恢复脂肪刻度，反复推拉20次(见图2)。

(3)将样品在10ml注射器内进行800rpm/min离心5分钟，离心后取下层脂肪组织，放入10ml离心管内。

(4)利用超声破碎仪制备微球颗粒，条件为40％强度，10秒间隔，每次10秒，处理3分钟。处理完的样品为脂肪干细胞胶微球颗粒。

(5)聚乳酸微球颗粒已经提前大批量制备完成，制备好的样品分装，冻-20℃备用(见图3，4，5)。具体制作方法如下：

(6)利用聚乳酸为原料，用纳米粉碎机进行粉碎，粉碎时间大约20分钟。聚乳酸颗粒放入鼓风干燥机内烘干，烘干温度55℃大约30分钟。

(7)将聚乳酸颗粒利用400目筛选，收集筛选后的聚乳酸颗粒，将其收集。用无菌水溶解后，超声处理后形成混悬，液冻-20℃备用。制备的聚乳酸颗粒粒径在40um左右。

(8)将制备的脂肪干细胞胶微球颗粒与聚乳酸颗粒按照1∶3的体积混合，室温混匀后孵育15分钟后使用。

以上所述仅为本申请的实施例而已，并不用于限制本申请。对于本领域技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的权利要求范围之内。

Claims

1.人脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

1)、将存在50mL注射器内的新鲜脂肪组织，进行800rpm/min离心5分钟，离心后的取中间脂肪细胞层；

2)、将1.1)取出的脂肪细胞层进行乳化操作；

3)、将1.2)的样品进行800rpm/min离心5分钟，离心后的取下层脂肪组织；

4)、将1.3)的样品进行纳米破碎，利用超声破碎仪制备微球颗粒，条件为40％强度，10秒间隔，每次10秒，处理3分钟。处理完的样品为脂肪干细胞胶微球颗粒。

2.聚乳酸微球颗粒的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

1)、利用聚乳酸为原料，用纳米粉碎机进行粉碎，粉碎时间大约20分钟；

2)、将2.1)聚乳酸颗粒放入鼓风干燥机内烘干，烘干温度55℃大约30分钟；

将2.2)聚乳酸颗粒利用400目筛选，收集筛选后的聚乳酸颗粒，将其收集；

将2.3)收集的聚乳酸颗粒用无菌水溶解后，超声处理后形成混悬液备用；制备的聚乳酸颗粒粒径在40um左右。

3.聚乳酸-脂肪干细胞胶微球颗粒的制备方法，其特征在于，具体制备步骤如下：

将权利1和权利2处理好的样品按照体积1：3(脂肪干细胞胶微球颗粒：聚乳酸颗粒)混合，混匀后室温孵育15分钟即可。

4.根据权利1所述的方法，其特征在于制备脂肪干细胞胶微球颗粒。

5.根据权利2所述的方法，其特征在于制备40um左右的聚乳酸颗粒。

6.根据权利3所述的方法，其特征在于制备聚乳酸-脂肪干细胞胶微球颗粒＝1∶3(脂肪干细胞胶微球颗粒∶聚乳酸颗粒)。