CN111514297A - TGFβ通路抑制剂在制备提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物中的用途 - Google Patents
TGFβ通路抑制剂在制备提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物中的用途 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了TGFβ通路抑制剂在制备提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物中的用途；属于抗肿瘤药物领域。本发明还公开了治疗放射性碘难治性甲状腺癌的联合用药物和药物组合物，以TGFβ通路抑制剂和放射性碘为药效活性成分。本发明的TGFβ通路抑制剂可以增强甲状腺癌的肿瘤细胞对放射性碘的摄入能力，进而有效提升放射性碘的治疗效果，将其应用于甲状腺药物的制备，将具有良好的市场价值。
Description
技术领域
本发明属于抗肿瘤药物领域。
背景技术
甲状腺癌(thyroid carcinoma)是最常见的甲状腺恶性肿瘤，约占全身恶性肿瘤的1％，包括乳头状癌、滤泡状癌、未分化癌和髓样癌四种病理类型，前两种合称分化型甲状腺癌。以恶性度较低、预后较好的乳头状癌最常见，除髓样癌外，绝大部分甲状腺癌起源于滤泡上皮细胞。发病率与地区、种族、性别有一定关系。女性发病较多，男女发病比例为1∶(2～4)。任何年龄均可发病，但以青壮年多见。
放射性碘(radioactive iodine，RAI)，通常指碘131(131I)，是治疗分化型甲状腺癌的常见药物。RAI能被甲状腺滤泡细胞摄取富集，进而衰变发出β射线破坏甲状腺腺泡上皮而不影响邻近组织，达到清除手术残余癌细胞、抑制复发或转移灶生长的目的。这一原理同样应用于甲亢的治疗。
小部分分化型甲状腺癌患者在接受RAI治疗中会出现治疗抵抗，发展成为放射性碘难治性甲状腺癌(Radio-iodine refractory differentiated thyroid cancer，RAIR-DTC)，最常发生在甲状腺分化特征丧失的情况下。一个最明显的分化特征丧失的标志就是钠/碘同向转运体(Na/I symporter，NIS)功能受损，NIS介导碘向甲状腺滤泡细胞内的转运，NIS功能受损则意味着甲状腺摄入RAI不足，难以起效。通过去除导致NIS表达水平下调或者功能丧失的相关机制，有望克服RAI治疗抵抗。
TGFβ(即“TGF-β”)是一个25kDa的二硫化二聚体蛋白，具有3个亚型，TGFβ1、2和3，每个亚型在体内的功能各不相同。TGFβ与TGFβ受体I和II(TGF-βRI/II)形成复合体后通过磷酸化Smad2和Smad3启动信号通路，磷酸化的Smad2和3与Smad4结合形成复合体，转移到细胞核中与多种转录因子相互作用，构成通常意义的TGFβ信号通路。TGFβ信号通路(简称“TGFβ通路”)在多种疾病参与调控，包括癌症。在健康细胞和早期癌细胞中，TGFβ通路起到抑癌作用，但是在癌症晚期，TGFβ通路能促进肿瘤发生和转移。因此，TGFβ通路抑制剂可用于制备抗癌药物，比如，TGFβ通路抑制剂LY2157299就对胶质母细胞瘤、肝癌、乳癌、前列腺癌、胰腺癌均有明显的治疗作用。
目前尚未见将TGFβ通路抑制剂施用于甲状腺癌的报道，更未见TGFβ用于放射性碘难治性甲状腺癌的治疗的报道。
发明内容
本发明要解决的问题是：提供TGFβ通路抑制剂在制备提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物中的用途。
本发明的技术方案如下：
TGFβ通路抑制剂在制备提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物中的用途。
如前述的用途，所述药物是增强甲状腺癌的肿瘤细胞对放射性碘的摄入能力的药物。
如前述的用途，所述甲状腺癌为放射性碘难治性甲状腺癌。
如前述的用途，所述甲状腺癌中钠/碘同向转运体表达量低于正常人甲状腺组织。
如前述的用途，所述甲状腺癌中MED16基因或MED12基因表达量低于正常人甲状腺组织。
如前述的用途，所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
SB431542、LDN-193189、LY2157299、LY2109761、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、RepSox、LDN-1931892HCl、K02288、BIBF-0775、LDN-214117、SD-208、Vactosertib、ML347、LDN-212854、DMH1、Pirfenidone、ITD-1、LY 3200882、Alantolactone、SIS3 HCl和Hesperetin；
优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
一种提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物，所述药物以TGFβ通路抑制剂为活性成分。
如前述的药物，所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
SB431542、LDN-193189、LY2157299、LY2109761、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、RepSox、LDN-1931892HCl、K02288、BIBF-0775、LDN-214117、SD-208、Vactosertib、ML347、LDN-212854、DMH1、Pirfenidone、ITD-1、LY 3200882、Alantolactone、SIS3 HCl和Hesperetin；
优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
一种治疗放射性碘难治性甲状腺癌的联合用药物，它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的TGFβ通路抑制剂和放射性碘，以及药学上可接受的载体。
如前述的联合用药物，其特征在于：所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上：
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优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
一种治疗放射性碘难治性甲状腺癌的药物组合物，所述组合物以TGFβ通路抑制剂和放射性碘作为活性成分。
如前述的药物组合物，所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
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优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性，是指提高放射性碘对甲状腺癌治疗的效果。
本发明的TGFβ通路抑制剂可以增强甲状腺癌的肿瘤细胞对放射性碘的摄入能力，能有效提升放射性碘对甲状腺癌的治疗效果。将其应用于甲状腺癌药物的制备，将具有良好的市场价值。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
附图说明
图1：LY2157299有效性验证。
图2：LY2157299处理下的B-CPAP和TPC-1细胞对131I的敏感性；pLKO.1，未进行敲降的对照组；sh1MED16，对MED16敲降的1种细胞样本；sh2MED16，对MED16敲降的第2种细胞样本；sh1MED12，对MED12敲降的1种细胞样本；sh2MED12，对MED12敲降的第2种细胞样本；*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
图3：LY2157299处理下的B-CPAP和TPC-1细胞摄碘能力；*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
图4：MED16表达量与NIS表达量的关系；(A，C)对照组(pLKO.1)和MED16KD肿瘤图片及大小分析，二者无明显差异；(B，D)Western blot验证pLKO.1和MED16KD肿瘤内NIS、TGFβR2及Smad2磷酸化水平变化，并进行灰度分析；*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
图5：LY2157299逆转MED16KD荷瘤小鼠的放射性碘治疗抵抗的体内实验结果。(A)荷瘤小鼠放射性碘治疗示意图；(B)给药18天后剥离的131I治疗的对照组肿瘤(pLKO.1)及131I、LY2157299和131I+LY2157299治疗的MED16KD肿瘤；(C)不同组肿瘤体积变化；(D)不同组肿瘤重量及差异分析；*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
图6：Cleaved-caspase3免疫组织化学染色131I治疗的对照组肿瘤(pLKO.1)及131I、LY2157299和131I+LY2157299治疗的MED16KD肿瘤的显微观察图(40×放大倍数)。
具体实施方式
本部分通过实施例的形式对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
发明人通过研究发现，MED16或MED12低表达甲状腺癌对放射性碘治疗不敏感的重要原因；于是在实施例中，使用shRNA对甲状腺癌细胞株的MED16或MED12进行敲降，作为放射性碘抵抗的甲状腺癌细胞模型，将对应的细胞移植到小鼠皮下构建放射性碘抵抗的甲状腺癌动物模型；在这两种模型上进行实验，验证TGFβ通路抑制剂在提高放射性碘治疗敏感性的作用。
实施例中涉及的实验材料、动物实验方法以及数据分析方法如下：
1实验材料
1.1实验动物
实验使用的皮下成瘤模型4-5周龄的裸鼠购买于江苏集萃药康生物科技有限公司，饲养于四川大学华西医院SPF级啮齿类动物实验中心，饲养条件：温度20℃，湿度为40％-50％，光照条件为12h/d。喂养等操作均按照“国际实验动物管理条例”和“四川省医学类实验动物饲养和管理条例”进行。
1.2主要仪器设备
1)RM2125型石蜡切片机(LEICA，德国)
2)-20℃低温冰箱(SANYO公司，日本)
3)微量加样枪：2.0μl/10μl/20μl/200μl/1000μl(Eppedorf公司，德国)
4)SlideMateTMAS玻片打印机(Thermo Fisher Scientific，美国)
5)烤箱(Thermo Fisher Scientific,，美国)
6)SHH.W21-600型电子恒温水箱(北京中兴伟业仪器有限公司)
7)超纯净水产生系统(milli-Q，美国Millipore公司)
8)Nikon ECLIPSE E200型显微镜
9)图像采集系统(Olympus DP Controller 70，日本)
10)其他：多用脱色摇床、防脱玻片(表面涂有多聚赖氨酸)、涡旋振荡器、湿盒等。
2动物实验
2.1皮下成瘤
1)对已适应生存环境的4-6周龄裸鼠进行随机分组，每组至少5只，确保每组裸鼠生长状态良好，体重在20g左右，尽量排除个体差异对实验结果的影响。
2)肿瘤接种：各组对数生长期TPC-1细胞按照1×107个/100μl悬浮于PBS缓冲液中，保持低温。在消化下后半小时内用胰岛素注射器吸取100μl细胞悬液，接种于裸鼠右前腋下。
3)成瘤观察：每周监测小鼠和肿瘤生长情况，记录肿瘤体积，公式：V＝1/2×L×W2，其中L代表肿瘤长径，W代表短径，单位为mm。
4)实验终点，对肿瘤及肺等器官进行取材。一半组织常规石蜡包埋，HE染色确认。一半储存于液氮中用于后续分子研究。
2.2裸鼠体内乳头状甲状腺癌放射性碘毒性分析
2.2.1实验分组：
pLKO.1 TPC-1荷瘤裸鼠作为对照组(n＝5)，接受131I瘤内注射(2mCi in 100μl)治疗；MED16KD TPC-1荷瘤裸鼠作为实验组一(n＝5)，接受131I瘤内注射(2mCi in 100μl)治疗；MED16KD TPC-1荷瘤裸鼠作为实验组二(n＝5)，接受LY2157299腹腔注射(75mg/kg)；MED16KD TPC-1荷瘤裸鼠作为实验组三(n＝5)，接受131I瘤内注射(2mCi in 100μl)和LY2157299腹腔注射(75mg/kg)复合治疗。
2.2.2实验步骤：
荷瘤小鼠的肿瘤约到120mm3时随机分组，尽量减少每组之间的个体差异。接受药物治疗，其中131I瘤内注射每三天一次(5mCi/周)；LY2157299腹腔注射每天一次(75mg/kg)，溶剂为2％DMSO+水溶液。每天测量肿瘤体积大小，记录肿瘤生长曲线，公式：V＝1/2×L×W2，其中L代表肿瘤长径，W代表短径，单位为mm。18天后脱颈处死小鼠，剥离肿瘤组织，清洗处理后用数码相机拍照保存结果，并称重。保存一半瘤块福尔马林固定后进行后续的免疫组化染色，另外一半冻存于液氮中用于后续分子生物学检测。
2.3免疫共沉淀实验
2.3.1细胞总蛋白免疫共沉淀
1)制备细胞裂解物：胰酶收集细胞，用预冷的PBS清洗细胞一次，加入500ul预冷的Lysis buffer冰上孵育5分钟，进行3次超声破碎。4℃在14000g条件下离心10分钟，转移上清至新的EP管中。
2)免疫沉淀：分别向裂解物中加入目标蛋白抗体和阴性对照抗体(1-5ug)，4℃混合过夜。抗体孵育过夜后加入5ul Protein A和5μl Protein G，4℃温和混匀3h。12000g离心1分钟，保留沉淀。
3)使用500ul Wash buffer清洗沉淀，12000g离心1分钟重复洗涤3次。
4)用20ul SDS缓冲液重悬沉淀，95℃加热变性蛋白，14000g瞬时离心1分钟收集上清，将样本用蛋白质印迹法分析。
2.3.2胞浆蛋白免疫共沉淀
2.3.2.1胞浆蛋白提取
1)取培养细胞5×106～1×107个/mL，4℃离心，800×g，3min收集细胞，弃去培养液，用预冷的PBS洗涤两遍；
2)用移液枪尽可能取去上清，勿留残液；
3)将450μL Buffer A和50μL Buffer B(使用前每1mL Buffer A加入17μL 100mMPMSF，1μL蛋白酶抑制剂)混匀制成预混液，在收集的细胞中加入预冷的预混液400μL混匀，放置冰上30min；
4)4℃，3000rpm离心10min。收集上清至新的离心管中，即为胞浆蛋白。
2.3.2.2免疫共沉淀
A.免疫沉淀法
a)细胞裂解物预清除
1)向500μl(含总蛋白200-1000ug)细胞裂解物中添加5μl Protein A和5μlProtein G。
2)在4℃下，旋转孵育30-60分钟。
3)4℃条件下12000g离心1分钟，保留上清，待用。
b)抗原抗体结合
1)新的离心管中加入500ul步骤a中的细胞裂解液。
2)加入MED16抗体(1–5μg)。
3)同时采用非特异免疫的IgG抗体作为阴性对照。
4)在4℃冰箱轻柔翻转混合过夜。
c)免疫复合物沉淀
1)抗体孵育过夜后，再次加入Protein A和Protein G分别5ul。
2)在4℃翻转混匀1-3小时或过夜。
3)12,000g离心1分钟，保留沉淀。
4)加入500ul 1×Wash buffer清洗EP管底部沉淀，12,000g离心1分钟后吸去上清，保留沉淀待用。
5)重复第4步，共计清洗3次。
B.用蛋白免疫印迹法进行样本分析
1)用20-40μl 1×SDS样品缓冲液重悬底部沉淀物，涡旋混匀后再次离心，收集沉淀和液体至EP管底部。
2)将样品置于95-100℃条件下并持续2-5分钟，变性蛋白，然后在14,000g下离心1分钟，吸取取上清液待用。
3)将15–30μl的上清上样到SDS-PAGE凝胶上。
4)用蛋白质印迹法分析样品。
2.3.3免疫组织化学染色(IHC染色)单染及判读
1)将切好的切片准备完整的组织芯片切片10套放入金属切片架，然后放入65℃烤箱进行烘烤3-5小时。
2)脱蜡：将切片依次置于二甲苯脱蜡缸1、二甲苯脱蜡缸-2溶液中各10分钟，梯度脱蜡。
3)蒸馏水漂洗切片5分钟，重复三次；PBS清洗2分钟，重复三次。
4)无水乙醇-1、无水乙醇-2溶液各5min、95％酒精、80％酒精、70％酒精溶液各5min。
5)用蒸馏水冲洗切片5min，重复两次，随后用PBS清洗2min，重复三次。
6)抗原修复：切片置于PH9.0 EDTA抗原修复液)，95℃水浴修复40min，随后拿出切片自然冷却至室温。并用PBS漂洗10分钟。
7)蒸馏水漂洗切片5分钟，重复三次；PBS清洗2分钟，重复三次。
8)过氧化物酶封闭：切片上滴加内源性过氧化物酶封闭剂(REALTM SubstrateBuffer)(3％H202甲醇溶液)阻断内源性过氧化物酶，避光室温条件下孵育二十分钟。
9)蒸馏水漂洗五分钟，重复三次；PBS清洗两分钟，重复三次，据组织的位置，用免疫组化阻水笔将组织圈在适宜的范围内，然后滴加Wash Buffer清洗，每次两分钟，重复两次。
10)配制抗体：按照每次实验不同要求和一抗效价将其稀释至适当所需浓度。
11)抗体-抗原反应：每套切片分别滴加一抗Cleaved-caspase3，150μl/张，空白对照滴加150ul的PBS溶液，随后放入湿盒，在4℃条件下孵育过夜。
12)PBS清洗残余一抗2分钟，重复三次，Wash Buffer清洗两分钟，重复两次。
13)滴加二抗：滴加150ul抗兔二抗(REALTM EnVisionTM/HRP,Rabbit)，放入湿盒后37℃孵育30分钟。
14)PBS清洗残余一抗2分钟，重复三次，Wash Buffer清洗两分钟，重复两次。
15)DAB显色：滴加DAB溶液，适时在显微镜下观察显色情况，效果最有时终止反应；并蒸馏水漂洗。
16)苏木素复染：依次用苏木素染色3分钟，蒸馏水漂洗10秒钟，1％盐酸酒精溶液分化1-2秒钟，最后蒸馏水冲洗切片至细胞核呈蓝色。
17)脱水透明：将复染后切片依次浸入梯度酒精，顺序为：75％酒精、85％酒精、95％酒精-1、95％酒精-2、无水乙醇-1、无水乙醇-2各10秒钟进行脱水。然后放入二甲苯脱蜡缸1、二甲苯脱蜡缸-2溶液各2两分钟透明。
18)中性封片树胶封片。
19)光学显微镜下观察切片判断染色情况，并进行图片采集。
3数据整理及统计学分析
实验使用GRAPHPAD PRISM 7软件进行统计学数据分析和作图，计量资料采用均数(mean)±标准差(SD)表示。TCGA和GTEx数据库表达数据经标化和去除批件差后进行比较；MED16高低按其中位数进行分组；数据结果分析时，方差齐性采用双侧Student t检验，方差不齐，采用近似t检验；患者无病生存率(DFS)采用Log-rank(Mantel-Cox)分析。P＜0.05被认为具有统计学差异。
实施例1TGFβ抑制剂逆转MED16或NED12敲降所造成的放射性碘抵抗
本实施例以TGFβ通路抑制剂LY2157299为例，验证TGFβ抑制剂对MED16或MED12敲降所造成的放射性碘抵抗的功能。
LY2157299的结构式如下：
1.验证抑制剂对TGFβ通路抑制的有效性
发明人首先设置不同浓度梯度验证了化合物的有效性，以DMSO作为溶剂对照，在培养的细胞中分别加入5uM、10uM和20uM的LY2157299后培养48h,然后收集细胞并提蛋白后进行Western blot检测。
结果如图1所示，随着药物浓度的提高，Smad2磷酸化水平降低，且结果具有统计学意义(P＜0.01)(图1)。Smad2磷酸化水平低代表TGFβ通路受到抑制，表明LY2157299能够抑制TGFβ通路。
后续体外实验中发明人选择5uM为LY2157299工作浓度。
2.体外验证TGFβ抑制剂逆转MED16敲降(MED16KD)和MED12敲降(MED12KD)所造成的放射性碘抵抗
用LY2167299对MED16KD或MED12KD的B-CPAP及TPC-1细胞进行了处理，发现在两种乳头状甲状腺癌细胞中该抑制剂可以明显提高放射性碘对MED16KD或MED12KD细胞的细胞毒性作用，恢复由MED16或MED12下调所造成的放射性碘耐受表型，结果具有统计学意义(图2)。
该结果说明，TGFβ通路抑制剂可明显提高MED16KD或MED12KD甲状腺癌细胞对RAI治疗的敏感性。
实施例2TGFβ通路抑制剂提高PTC细胞摄碘能力的验证
本实施例的目的是探究LY2157299对MED16KD及MED12KD细胞活力的影响是否由细胞摄碘能力变化引起。
发明人进行了细胞摄碘能力分析，发现MED16KD B-CPAP细胞摄碘能力分别是pLKO.1细胞的71.6％和82.9％，但是在LY2157299(5uM)处理后细胞摄碘恢复至110.6％和97.3％，说明TGFβ通路抑制剂可以极大提高MED16KD细胞的摄碘能力，结果具有统计学差异(P＜0.05)；MED12KD B-CPAP细胞摄碘能力分别是pLKO.1细胞的51.2％和61.5％，LY2157299(5uM)处理后细胞摄碘恢复至81.8％和91.6％，结果具有统计学差异(P＜0.05)；MED16KD B-CPAP摄碘能力是pLKO.1细胞的74.5％和76.6％，LY2157299(5uM)处理后恢复至105.1％和97.8％，结果具有统计学差异(P＜0.05)；MED12KD B-CPAP摄碘能力是pLKO.1细胞的63.9％和81.5％，LY2157299(5uM)处理后恢复至89.3％和100.7％，结果具有统计学差异(P＜0.01)(图3)。
综上可知，LY2157299可提高MED16KD及MED12KD细胞的摄碘能力。
实施例3 MED16KD移植瘤TGFβ通路激活并且MS低表达
本实施例用pLKO.1或MED16KD细胞进行了小鼠皮下成瘤实验，从TGFβ通路激活以及NIS表达情况上，探究MED16KD形成RAI抵抗，以及TGFβ通路抑制剂提高MED16KD细胞摄碘能力、提高RAI治疗敏感性的原因。
小鼠接种pLKO.1(未敲降对照组)或MED16KD细胞4周后剥离肿瘤，称重，并提取蛋白进行Western blot检测，分析了NIS、TGFBR2、Smad2及p-Smad2(磷酸化Smad2)四个指标。
结果发现，pLKO.1肿瘤和MED16KD肿瘤的瘤组织重量没有显著区别，但相对于pLKO.1肿瘤，NIS在MED16KD肿瘤中表达明显下调，TGFBR2明显上调，Smad2磷酸化水平明显提高(图4)。
碘摄入依赖NIS，可以推知：在体内MED16敲降可以造成TGFβ通路激活进而导致NIS表达下调，进一步引起肿瘤对放射性碘治疗的抵抗。而实施例1和2中的TGFβ通路抑制剂，正是通过抑制TGFβ通路，进而导致NIS表达上调，逆转MED16敲降所造成的放射性碘抵抗表型，提升肿瘤对放射性碘治疗的敏感性。
实施例4体内实验验证LY2157299逆转MED16敲降所造成的放射性碘抵抗表型
发明人利用皮下成瘤裸鼠进行了如下实验：
如图5A所示，将MED16KD荷瘤小鼠随机分为三组：1)第一组给予131I瘤内注射治疗(5mCi/周)；2)第二组给予LY2157299腹腔给药治疗；3)第三组同时给予131I瘤内注射和LY2157299腹腔给药。并将pLKO.1荷瘤小鼠作为对照组给予131I瘤内注射(5mCi/周)治疗。给药18天后，剥离移植瘤，检测其体积、重量，并用免疫组化方法检测细胞凋亡标志物Cleaved-caspase3在瘤内的变换。
结果：
1.LY2157299联合放射性碘协同抑制PTC移植瘤增长。
131I治疗的MED16KD荷瘤小鼠与pLKO.1荷瘤小鼠比较，治疗18天后两组肿瘤大小差异明显，pLKO.1肿瘤对131I更为敏感，二者呈现明显差异；131I治疗的MED16KD荷瘤小鼠，LY2157299治疗的MED16KD荷瘤小鼠及131I治疗+LY2157299复合治疗的MED16KD荷瘤小鼠三者进行比较，发现LY2157299对MED16KD肿瘤没有效果，其肿瘤体积还明显大于131I治疗的MED16KD肿瘤，但是131I治疗+LY2157299复合治疗的肿瘤体积明显小于131I治疗的MED16KD肿瘤(图5B,D)。不同组之间瘤重也呈现出相同的趋势(131I治疗MED16KD肿瘤≈LY2157299治疗MED16KD肿瘤＞131I治疗MED16KD肿瘤＞131I+LY2157299复合治疗MED16KD肿瘤)(图5C)。
该结果说明LY2157299联合131I可以协同抑制MED16KD移植瘤增长。
2.LY2157299联合放射性碘协同促进PTC移植瘤细胞凋亡
因为放射性碘抑制PTC细胞的主要机制是释放β射线造成细胞DNA双链断裂或损伤，进而引起细胞凋亡并抑制肿瘤增长。因此，分析移植瘤细胞的凋亡水平更有助于理解放射性碘对移植瘤的抑制程度。因此，发明人用免疫组化方法来分析细胞凋亡标志物Cleaved-caspase3在移植瘤内的变化。如图6可见，分别接受131I治疗的pLKO.1肿瘤和MED16KD肿瘤比较，pLKO.1肿瘤细胞凋亡程度明显高于MED16KD肿瘤，与以上的结果一致，MED16敲降会导致PTC放射性碘耐受；同时比较分别接受单纯131I治疗、LY2157299治疗以及131I+LY2157299复合治疗的MED16KD肿瘤，131I+LY2157299复合治疗组肿瘤凋亡水平明显高于两个单纯治疗组。
免疫组化结果表明，LY2157299联合131I可以促进MED16KD移植瘤凋亡。
结论：LY2157299能增强放射性碘治疗的敏感性，促进MED16KD移植瘤凋亡，抑制MED16KD移植瘤增长。
综上，LY2157299能增强肿瘤对放射性碘的摄入，增强放射性碘治疗的敏感性；这也预示着将LY2157299与放射性碘用于制备治疗甲状腺癌的联合用药物或药物组合物，具有良好的应用前景。
Claims (12)
1.TGFβ通路抑制剂在制备提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物中的用途。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述药物是增强甲状腺癌的肿瘤细胞对放射性碘的摄入能力的药物。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于：所述甲状腺癌为放射性碘难治性甲状腺癌。
4.如权利要求3所述的用途，其特征在于：所述甲状腺癌中钠/碘同向转运体表达量低于正常人甲状腺组织。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述甲状腺癌中MED16或MED12基因表达量低于正常人甲状腺组织。
6.如权利要求1～5任一所述的用途，其特征在于：所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
SB431542、LDN-193189、LY2157299、LY2109761、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、RepSox、LDN-1931892HCl、K02288、BIBF-0775、LDN-214117、SD-208、Vactosertib、ML347、LDN-212854、DMH1、Pirfenidone、ITD-1、LY 3200882、Alantolactone、SIS3 HCl和Hesperetin；
优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
7.一种提高甲状腺癌放射性碘治疗敏感性的药物，其特征在于：所述药物以TGFβ通路抑制剂为活性成分。
8.如权利要求7所述的药物，其特征在于：
所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
SB431542、LDN-193189、LY2157299、LY2109761、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、RepSox、LDN-1931892HCl、K02288、BIBF-0775、LDN-214117、SD-208、Vactosertib、ML347、LDN-212854、DMH1、Pirfenidone、ITD-1、LY 3200882、Alantolactone、SIS3 HCl和Hesperetin；
优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
9.一种治疗放射性碘难治性甲状腺癌的联合用药物，其特征在于：它含有相同或不同规格单位制剂的用于同时或者分别给药的TGFβ通路抑制剂和放射性碘，以及药学上可接受的载体。
10.如权利要求9所述的联合用药物，其特征在于：所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
SB431542、LDN-193189、LY2157299、LY2109761、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、RepSox、LDN-1931892HCl、K02288、BIBF-0775、LDN-214117、SD-208、Vactosertib、ML347、LDN-212854、DMH1、Pirfenidone、ITD-1、LY 3200882、Alantolactone、SIS3 HCl和Hesperetin；
优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
11.一种治疗放射性碘难治性甲状腺癌的药物组合物，其特征在于：所述组合物以TGFβ通路抑制剂和放射性碘作为活性成分。
12.如权利要求11所述的药物组合物，其特征在于：所述TGFβ通路抑制剂选自如下TGFβ通路抑制剂的一种或一种以上的组合：
SB431542、LDN-193189、LY2157299、LY2109761、SB525334、SB505124、GW788388、LY364947、RepSox、LDN-1931892HCl、K02288、BIBF-0775、LDN-214117、SD-208、Vactosertib、ML347、LDN-212854、DMH1、Pirfenidone、ITD-1、LY 3200882、Alantolactone、SIS3 HCl和Hesperetin；
优选的，所述TGFβ通路抑制剂为LY2157299。
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Legal Events
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| GR01 | Patent grant | ||
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