CN111514115A - 一种自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒的合成方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公布一种自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒的合成方法。主要步骤包括:1)PEG水溶液的制备；2)PLGA有机溶液的制备；3)薄膜水化法合成环孢菌素@HIV‑Vpu蛋白纳米颗粒。其中辅助蛋白U(Vpu)可抑制一种叫做NF‑kB的转录因子的激活，减少了在免疫反应中起关键作用的细胞因子的产生，抑制机体免疫功能。环孢菌素是一种微生物代谢产物，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。PLGA‑PEG无毒，生物相容性好，具有良好的成囊和成膜的性能。

Description

一种自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒的合成方法
技术领域
本发明涉及纳米颗粒的合成技术领域,具体涉及一种通过PLGA-PEG包裹HIV-Vpu蛋白和环孢菌素的策略,合成HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米制剂的方法。
背景技术
自身免疫性肝炎涉及复杂的病理机制，自身免疫性疾病是指对自身抗原的免疫耐受性丧失、组织自身抗原抗体的产生和自身免疫现象的发生。非特异性免疫抑制剂或抗炎药，例如糖皮质激素(GCs)，环磷酰胺和甲氨蝶呤，是自身免疫性疾病中常用的药物。然而，这种疗法的疗效有时不能令人满意，持续使用会引起严重的副作用，这突出表明有必要探索一种高效，安全的更好的治疗方法。而HIV病毒产生的多种蛋白质在抑制免疫反应方面可发挥作用。其中辅助蛋白U(Vpu)可抑制一种叫做NF-kB的转录因子的激活，减少了在免疫反应中起关键作用的细胞因子的产生。
环孢菌素是一种微生物代谢产物，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。避免肝脏中免疫因子过量产生，阻止免疫系统对肝脏造成损伤。
PLGA-PEG是一种两嵌段聚合物。其中PLGA由两种单体——乳酸和羟基乙酸随机聚合而成，是一种可降解的功能高分子有机化合物，其降解产物是乳酸和羟基乙酸，同时也是人代谢途径的副产物，所当它应用在医药和生物材料中时不会有毒副作用，具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。PEG具有良好的水溶性，赋予了聚合物生物相容性。
发明内容
本发明为克服现有技术的不足，提供一种通过PLGA-PEG包裹HIV-Vpu蛋白和环孢菌素的策略,合成自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒制剂的方法。利用HIV-Vpu蛋白和环孢菌素抑制免疫过激反应，防止免疫系统攻击自身，以达到治疗自身免疫性肝炎的目的。
本发明的技术方案是一种自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒的合成方法，通过PLGA-PEG包裹HIV-Vpu蛋白和环孢菌素的策略,具体步骤如下：
1)称取PLGA材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有机溶液；
2)称取PEG材料，加入水后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PEG水溶液；
3)称取环孢菌素材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5-2mg/ml的环孢菌素有机溶液；
4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；
(2)边超声边逐滴加入100uL的环孢菌素溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；
(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。
(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
本发明的优势在于：
1)HIV-Vpu蛋白可抑制一种叫做NF-kB的转录因子的激活，减少了在免疫反应中起关键作用的细胞因子的产生。
2)环孢菌素是一种微生物代谢产物，调节细胞的生长与分化，参与炎性反应和免疫反应，是目前公认的炎症与免疫抑制因子。
3)PLGA-PEG具有良好的生物相容性、无毒、良好的成囊和成膜的性能。
附图说明
图1：纳米颗粒SEM图像。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例来对本发明作进一步的说明。
实施例1：
1)称取10mg PLGA材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5mg/ml的PLGA有机溶液；
2)称取10mg PEG材料，加入20ml水后超声溶解，得到浓度为0.5mg/ml的PEG水溶液；
3)称取20mg环孢菌素材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为1mg/ml的环孢菌素有机溶液；
4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；
(2)边超声边逐滴加入100uL的环孢菌素溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；
(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。
(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
实施例2：
1)称取5mg PLGA材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25mg/ml的PLGA有机溶液；
2)称取5mg PEG材料，加入20ml水后超声溶解，得到浓度为0.25mg/ml的PEG水溶液；
3)称取10mg环孢菌素材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5mg/ml的环孢菌素有机溶液；
4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；
(2)边超声边逐滴加入100uL的环孢菌素溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；
(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。
(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
实施例3：
1)称取20mg PLGA材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为1mg/ml的PLGA有机溶液；
2)称取20mg PEG材料，加入20ml水后超声溶解，得到浓度为1mg/ml的PEG水溶液；
3)称取30mg环孢菌素材料，加入20ml二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为1.5mg/ml的环孢菌素有机溶液；
4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；
(2)边超声边逐滴加入100uL的环孢菌素溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；
(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜。
(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。

Claims (2)

1.一种自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒的合成方法，其特征是，通过PEG-PLGA包裹HIV-Vpu蛋白和环孢菌素的策略,具体步骤如下：
1)称取PLGA材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PLGA有机溶液；
2)称取PEG材料，加入水后超声溶解，得到浓度为0.25-1mg/ml的PEG水溶液；
3)称取环孢菌素材料，加入二氯甲烷后超声溶解，得到浓度为0.5-2mg/ml的环孢菌素有机溶液；
4)利用薄膜水化法合成HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
2.根据权利要求1所述的自身免疫性肝炎治疗纳米颗粒的合成方法，其特征是，抑制免疫过激的HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒制备，通过PEG-PLGA包裹HIV-Vpu蛋白和环孢菌素的策略，所述步骤4)具体如下：
(1)将盛有2ml PLGA溶液的单口瓶置于超声破碎仪上，开始超声，时间设定为12min，温度为0℃，超声频率为4s，2s；
(2)边超声边逐滴加入环孢菌素溶液和2ml PEG水溶液，继续超声直至完全混匀；
(3)超声好的产物立即添加到圆底瓶中，在旋转蒸发器上进行旋蒸，直至直至二氯甲烷和水全部蒸干，瓶底形成一层薄膜；
(4)在装有脂质体的圆底瓶中加入1mL稀释后的HIV-Vpu蛋白，吹悬搅拌至均匀混合，最终得到HIV-Vpu蛋白@环孢菌素@PEG-PLGA纳米颗粒。
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