CN111511385A

CN111511385A - 具有选定的释放持续时间的药物组合物

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Publication number: CN111511385A
Application number: CN201780097703.2A
Authority: CN
Inventors: 李雨华; A·瓜里诺
Original assignee: Yida Biotechnology Co ltd
Current assignee: Yida Biotechnology Co ltd
Priority date: 2017-12-18
Filing date: 2017-12-18
Publication date: 2020-08-07
Also published as: EP3727421A4; BR112020011774A2; EP3727421A1; AU2017443632A1; CA3084339A1; NZ766167A; KR20210005542A; US11717555B2; IL275448A; SG11202004525TA; JP2021516253A; US20230346877A1; WO2019125358A1; KR102567885B1; RU2756514C1; JP7223021B2; KR20230054755A; KR102522654B1; US20200390849A1; MX2020006188A

Abstract

本发明提供了稳定化的可生物降解的聚合物组合物，其用作肽剂的控释递送系统。本发明的组合物包含：a)LHRH激动剂或拮抗剂的强酸盐；b)可生物降解的聚(丙交酯‑共‑乙交酯)的聚合物，其中共聚物的丙交酯∶乙交酯的比例为50∶50至约100∶0；以及c)N‑甲基‑2‑吡咯烷酮(NMP)，其中除了用于形成LHRH激动剂或拮抗剂的盐的强酸之外，所述组合物不包含过量的强酸。当注射时，所述组合物可以提供亮丙瑞林长达6个月时间的受控释放。

Description

具有选定的释放持续时间的药物组合物

发明领域

本发明涉及用于以定制的递送持续时间持续和受控释放肽的递送系统，以及制备这种组合物的方法。

背景技术

许多肽剂不稳定，因为它们很容易在体内被酶水解或降解，导致循环半衰期非常短。因此，大多数肽药物通过注射给药，通常每天多次。然而，注射给药是痛苦的，非常昂贵的并且不方便的。通常，患者的依从性非常具有挑战性。对于许多肽剂，特别是激素，它要求药物在很长一段时间内以受控的速率连续地递送，因此需要一种控释的递送系统。可通过将肽掺入可生物降解和生物相容的聚合物基质中来提供此类系统。生物相容性和可生物降解的聚合物已经用作药物递送载体，以提供生物活性物质的持续释放或延迟释放。输送系统有各种注射剂形式，包括液体形式、混悬剂、固体植入物、微球、微胶囊和微粒。

在一种方法中，将聚合物溶解在有机溶剂中，然后与通过去除有机溶剂而制成微囊、微粒或可植入棒形式的肽剂混合。肽剂被截留在聚合物基质中。通过使用可生物降解的聚合物以微粒和固体棒状植入物的形式已经成功开发了几种产品，例如Lupron、Zoladex、Triptorelin等。尽管这些产品似乎是有效的，但它们具有缺点和局限性，例如用于微粒的大量悬浮液或外科手术插入的固体植入物。这些产品不是非常患者友好。另外，用于生产无菌和可再现产品的制造过程很复杂，导致高昂的制造成本。非常希望组合物可以容易地制造和使用。

在另一种方法中，将可生物降解的聚合物和肽剂溶解在生物相容性有机溶剂中以提供液体组合物。当将液体组合物注射到体内时，溶剂消散到周围的水性环境中，并且聚合物形成固体或凝胶贮库(depot)，生物活性剂在很长时间内从中释放出来。据信以下参考美国专利6,565,874、6,528,080、RE37,950、6,461,631、6,395,293、6,355,657、6,261,583、6,143,314、5,990,194、5,945,115、5,792,469、5,780,044、5,759,563、5,744,153、5,739,176、5,736,152、5,733,950、5,702,716、5,681,873、5,599,552、5,487,897、5,340,849、5,324,519、5,278,202、5,278,201、以及4,938,763是该领域的代表并且通过引用并入本文。尽管取得了一些成功，但是这些方法对于可能通过这种方法有效递送的大量肽剂并不完全令人满意。

迄今为止，聚酯是在可生物降解的持续药物输送系统中使用的最受欢迎的聚合物之一。例如，聚(丙交酯-共-乙交酯)或聚丙交酯是用于治疗晚期前列腺癌的Lupron Depot和

产品中的聚合材料。这些聚酯具有生物相容性，并通过典型的生化途径(例如水解和酶解)降解，从而产生天然的代谢产物。为了维持产品的稳定性，Eligard要求将生物活性物质和载体分开包装，并在注射前立即混合。Eligard的重新配制和给药途径错误已有报告，这可能会损害该产品的临床功效[Canada Health Product InfoWatch-2017年1月]。

在本领域中众所周知，含有碱性官能团的生物活性剂与可生物降解的聚合物相互作用，以催化(或加速)聚合物的降解并与聚合物和/或其降解产物形成缀合物。碱性生物活性剂与聚合物载体之间的相互作用/反应可能会发生：1)在配制过程中，将碱性生物活性剂掺入聚合物载体中时，例如微囊化、注射成型、挤出成型、与有机溶剂中的聚合物溶液混合等；2)在储存期间和3)在体内生物降解和生物活性剂释放过程中。

美国专利8,343,513公开了在制备微球的过程中消除或减少含有亲核官能团的生物活性剂与可生物降解的聚合物之间的产生杂质的反应的几种方法。其描述说：“在消除或减少微球中的杂质的任何努力中，应牢记以下一般考虑：(i)PLGA微球中丙交酯的含量越高，相关物质的量越低，并且由100％PLA制备的微球将具有最少的相关物质的量；(ii)PLGA分子量越高，相关物质就越高；PLGA中的目标负荷越高，相关物质的水平越高；(iii)PLGA中可提出低聚物的含量越低，相关物质的含量越高；与亲水性PLGA(游离酸端基)相比，疏水性PLGA(端基封闭的PLGA)可以产生更多的相关物质”[参见美国专利8,343,513，第11栏，第二段]。总体教导是使用具有酸端基的低分子量聚酯，并添加大量额外的低pKa酸添加剂或低聚物。酸添加剂的实例包括乳酸和乙醇酸，它们是PLGA的单体结构单元。过量的酸添加剂在减少在非药学上可接受的溶剂(例如二氯甲烷和甲醇)中的短时间段(24小时)内产生杂质方面取得了有限的成功。另外，酸性添加剂在分散相中引起低pH。众所周知，低pH值会引起组织刺激。因此，这样的分散相可用于制造微球，但不适合通过直接注射施用于患者。

因此，需要开发一种药物组合物，其将最小化或防止肽剂与有机溶液中的聚合物之间的相互作用/反应。还需要开发一种药物组合物，该药物组合物在即用型产品结构中稳定且具有令人满意的储存期，并且可以在期望的时间内提供药物的受控释放。

发明内容

先前已经发现，包含与强酸(例如，盐酸或甲磺酸)形成的盐形式的肽剂的可注射生物降解的聚合物组合物，与由弱酸(例如，乙酸)形成的盐形式或游离碱形式的肽剂相比，具有更高的稳定性。肽剂的这种有益盐可以通过用强酸中和肽剂的任何碱性基团而形成。当将与强酸形成的肽剂的这种有益盐配制成可注射的可生物降解的聚合物组合物时，肽剂与聚合物之间的相互作用/反应被最小化或被阻止。使用由强酸形成的肽剂的这种有益盐，可以制备稳定的可注射组合物，该组合物具有令人满意的储存稳定性并以即用配置的方式预先填充在单个注射器中。

出乎意料地发现，与使用弱酸形成的盐的组合物相比，这种组合物的聚合物一旦在水性环境中注入，其降解速度更快。这是令人惊讶的，因为包含由强酸形成的盐形式的肽剂的组合物在肽纯度和聚合物分子量稳定性方面均具有比使用弱酸形成的盐形成的组合物高得多的储存稳定性和保存期限。该发现可用于配制具有定制的释放持续时间的制剂组合物。

根据产品包装说明书，可商购的产品

是用于皮下注射的乙酸亮丙瑞林的无菌聚合物基质制剂。它旨在在一个月、三个月、四个月或六个月的治疗期内以可控的速率递送乙酸亮丙瑞林。

已预先填充，并提供在两个单独的无菌注射器中。一个注射器装有

输送系统，另一个注射器含有乙酸亮丙瑞林。

是一种聚合的(不含明胶的)输送系统，由溶解在生物相容性溶剂N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中的可生物降解的聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)(PLGH或PLGA)聚合物配方组成。

在给药前立即将两个分开的注射器的内容物混合。连接两个注射器，将单剂量产品混合直至均匀。混合物不稳定，因此必须立即使用，如果30分钟内未使用，则必须将其丢弃。

通过皮下给药，在此处形成固体药物递送库。

PLGAH聚合物用于一个月的产品，而PLGA聚合物用于三个月、四个月或六个月的产品。PLGH共聚物(DL-丙交酯与乙交酯的摩尔比＝50∶50)包含羧基端基，可加速聚合物的降解。用于三个月和四个月产品的PLGA共聚物的DL-丙交酯与乙交酯的摩尔比＝75∶25，而用于六个月产品的PLGA共聚物的DL-丙交酯与乙交酯的摩尔比＝85∶15。PLGA共聚物是用己二醇作为引发剂制造的，得到的PLGA共聚物的两端均带有羟基端基。

本发明人发现，通过使用由强酸形成的亮丙瑞林盐代替乙酸亮丙瑞林，可以显著提高所得制剂的稳定性。可以将稳定的最终制剂预装在具有合适储存期限的单个注射器中。

然而，尽管含有甲磺酸亮丙瑞林或其他强酸盐的制剂在储存期间比含有乙酸亮丙瑞林或其他弱酸盐的制剂更稳定，但是令人惊讶地发现，含有甲磺酸亮丙瑞林的制剂中的PLGA聚合物比包含乙酸亮丙瑞林的制剂中的PLGA聚合物在体外和体内释放过程中降解得更快。此性质是非常直观和意外的。该性质可有利地用于定制和微调制剂以制备更好和改进的产品。

因此，本发明提供了稳定的可注射的可生物降解的聚合物组合物，用于形成用于LHRH激动剂或拮抗剂的经济、实用和有效的控释递送系统。本发明还提供一种制造方法及其使用方法。根据本发明，药物递送系统易于生产并且方便地递送至诸如哺乳动物或人类受试者。基于在具有由强酸形成的肽盐的组合物中使用的可生物降解的聚合物的特定组成，组合物在期望的、延长的时间段内递送治疗量的肽。该组合物是生物相容的和可生物降解的，并且在递送一定剂量的肽剂后无害地消失。

根据本发明的组合物包含：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐，其最小化或阻止使有机溶液中的肽和聚合物之间的相互作用/反应；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂，当配制在一起时可以在1、3、4或6个月的时间内递送LHRH激动剂或拮抗剂。根据本发明，药物组合物可任选地包含赋形剂以实现肽剂的最佳递送。药物组合物可以是粘性的或非粘性的液体、凝胶或半固体，其作为流体运动，从而可以使用注射器注射。可以将药物组合物预先填充到一个注射器中以形成即用型的产品。

根据本发明的组合物包含：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐和与弱酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐的混合物，其中强酸与LHRH激动剂或拮抗剂的摩尔比为1∶1至2∶1，其中该组合物除了用于形成针对LHRH激动剂或拮抗剂的强酸的酸之外不包含过量的酸；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂，当配制在一起时，可以在1、3、4或6个月内递送LHRH激动剂或拮抗剂。根据本发明，药物组合物可任选地包含赋形剂以实现肽剂的最佳递送。药物组合物可以是粘性的或非粘性的液体、凝胶或半固体，其作为流体运动，从而可以使用注射器注射。可以将药物组合物预先填充到一个注射器中以形成即用型的产品。

LHRH，例如亮丙瑞林、曲普瑞林和戈舍瑞林，含有两个碱性官能团，即组氨酸和精氨酸，它们可以与合适的反离子形成离子对。与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐可以获得的强酸与LHRH激动剂或拮抗剂的化学计量标准比为2∶1。LHRH激动剂或拮抗剂的盐也可以制备为包含强酸和弱酸的混合物，但(强酸+弱酸)与LHRH激动剂或拮抗剂的比例小于或等于2∶1。在盐混合物的情况下，强酸与LHRH激动剂或拮抗剂的摩尔比为1∶1至2∶1。通过改变盐混合物的组成或比例，可以调整LHRH在水性环境或人体中的释放曲线，以实现所需的储存稳定性和药物递送持续时间。如本文公开的LHRH激动剂或拮抗剂的盐具有通过USP<791>方法测定的大于3、优选大于4的pH(在水中50mg/mL)。

根据本发明的一个实施方案，LHRH激动剂或拮抗剂具有被亲水性和/或亲脂性部分共价修饰的N端伯胺或侧链伯胺基团，所述亲水性和/或亲脂性部分可通过聚乙二醇化、酰化等产生。此外，肽剂的N-末端伯胺基团和侧链伯胺基团也可以通过聚乙二醇化、酰化等与亲水和/或亲脂性部分同时被共价修饰。

强酸可以是在水中的pKa小于3、优选小于0的任何酸。例如，强酸可以选自但不限于盐酸、氢溴酸、硫酸、有机硫酸、具有1-40个碳的烷基硫酸、硝酸、铬酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、有机磺酸、三氯乙酸、二氯乙酸、溴乙酸、氯乙酸、氰基乙酸、2-氯丙酸、2-氧代丁酸、2-氯丁酸、4-氰基丁酸、高氯酸、磷酸、碘化氢等。优选的强酸是盐酸或甲磺酸。

可生物降解的聚合物可以是任何生物相容的和药学上可接受的聚合物。可生物降解的聚合物可以是热塑性的，其在加热时熔融并在冷却时固化。本发明的可生物降解的聚合物基本上不溶于水或体液中，但是能够基本上溶解或分散在与水混溶的有机溶剂中以形成溶液或悬浮液。与水性流体接触后，可与水混溶的有机溶剂从本发明的组合物中扩散/消散，这导致聚合物凝结以形成凝胶或包封肽剂的固体基质。根据本发明，可生物降解的聚合物可以是线性聚合物，或支链聚合物，或两者的混合物。优选地，该聚合物是基于丙交酯的聚合物。基于丙交酯的聚合物包括乳酸或丙交酯单体(聚乳酸或聚丙交酯，PLA)的均聚物，以及乳酸(或丙交酯)与其他单体(例如乙醇酸、乙交酯(聚(丙交酯-共-乙交酯)、PLG或PLGA)等)。适用于本发明组合物的聚合物的实例包括但不限于聚丙交酯、聚乙交酯、聚己内酯、聚酸酐、聚氨酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚二恶烷、聚缩醛、聚缩酮、聚碳酸酯、聚原碳酸酯、聚磷腈、聚羟基丁酸酯、聚羟基戊酸酯、聚亚烷基草酸酯、聚亚烷基琥珀酸酯、聚(苹果酸)、聚(马来酐)及其中的共聚物、三元共聚物或组合物或混合物。在本发明中优选使用基于乳酸的聚合物以及乳酸和乙醇酸(PLGA)的共聚物，包括聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)和聚(L-丙交酯-共-乙交酯)。在一些实施方案中，PLGA聚合物的重均分子量为约2,000至约100,000，且乳酸与乙醇酸的单体比率为约50∶50至约100∶0。本发明的优选聚合物是分子量为11,000至约18,000的PLA，可控制递送6个月，以及分子量为10,000至25,000道尔顿的PLGA，其中丙交酯含量为80-90％，可递送3或4个月。

药学上可接受的有机溶剂可以选自：N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、甲氧基聚乙二醇、烷氧基聚乙二醇、聚乙二醇酯、甘醇、甘油缩甲醛、乙酸甲酯、乙酸乙酯、甲乙酮、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、四氢呋喃、己内酰胺、癸基甲基亚砜、苯甲酸苄酯、苯甲酸乙酯、三醋精、双醋精、三丁酸甘油酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、乙酰基柠檬酸三丁酯、甘油三乙酯、磷酸三乙酯、邻苯二甲酸二乙酯、酒石酸二乙酯碳酸酯、碳酸亚乙酯、丁内酯和1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮及其组合。

根据本发明，可以将一种或多种赋形剂掺入本发明的组合物中以实现肽剂的最佳递送。合适的赋形剂可包括释放速率调节剂、降低突释效应的材料、缓冲材料、抗氧化剂等。

根据本发明，合适的释放速率调节剂包括但不限于两亲化合物或共聚物，例如链烷羧酸、油酸、烷基醇、极性脂质、表面活性剂、聚乙二醇与聚丙交酯的共聚物或聚(丙交酯-共-乙交酯)、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯等；一元、二元和三元羧酸的酯，例如乙酸2-乙氧基乙酯、苯甲酸苄酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰基三丁酯、柠檬酸乙酰基三乙酯、三乙酸甘油酯、癸二酸二(正丁酯)等；多羟基醇，例如聚乙二醇、山梨糖醇等；脂肪酸；甘油的三酯，例如甘油三酸酯、中链甘油三酸酯，如MIGLYOL 810、812、818、829、840等。速率调节剂的混合物也可用于本发明的聚合物体系中。

根据本发明，合适的缓冲剂包括但不限于无机盐和有机盐，包括碳酸钙、氢氧化钙、肉豆蔻酸钙；油酸钙、棕榈酸钙、硬脂酸钙、磷酸钙、碳酸镁、氢氧化镁、磷酸镁、肉豆蔻酸镁、油酸镁、棕榈酸镁、硬脂酸镁、碳酸锌、氢氧化锌、肉豆蔻酸锌、油酸锌、棕榈酸锌、硬脂酸锌、磷酸锌及其组合。

根据本发明，合适的抗氧化剂包括但不限于：d-α生育酚乙酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基茴香醚、丁基化羟基醌、羟基香豆素、丁基化羟基甲苯、没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸月桂酯、羟基苯甲酸丙酯、三羟基丁基苯甲酮、维生素E、聚乙二醇化的维生素E或维生素E-TPGS等。

本发明进一步提供了制备和使用这种组合物的方法。例如，一种制备该组合物的方法，该方法包括中和肽剂的碱性胺基以形成有益盐，以最小化或阻止碱性胺基与聚合物的相互作用/反应；以及有益盐与其他组分结合以及任选地一种或多种赋形剂组合。优选地，首先形成肽剂的有益盐，然后与溶解在有机溶剂中的聚合物混合。这样的组合物在诸如微粒形成或其他可植入基质形成的受控递送系统的制造过程之前和期间是物理化学稳定的。优选地，这样的可注射组合物在制备、储存和随后施用于受试者期间是理化稳定的，并且在施用于组织部位时形成一致且控释的植入物。本发明的组合物包含可生物降解的聚合物，使得肽的释放持续时间控制在长达6个月的时期。

本发明进一步提供了一种用于注射组合物的给药的试剂盒，以形成一致且控释的储库系统，该试剂盒包括：溶解在药学上可接受的溶剂中的可生物降解的聚合物；LHRH激动剂或拮抗剂与溶解或分散在聚合物载体中的强酸形成的有益盐；以及一种或多种赋形剂。将所有组分的均匀混合物包装到一个容器中。优选地，容器是注射器。因此，本发明还提供了一种方法，该方法包括以下步骤：用组合物填充注射器以形成即用型结构的稳定产品。

本发明进一步提供了一种原位形成植入物的方法，该方法能够在1个月、3个月、4个月或6个月的时间内作为受试者的LHRH激动剂或拮抗剂的控释递送系统。优选将LHRH激动剂或拮抗剂掺入到原位形成的植入物中，然后随着聚合物降解而释放到周围的组织液中以及相关的身体组织或器官中。该方法包括：通过任何合适的液体施用方法，例如通过注射器、针头、套管、导管、压力施加器等，将本发明的可注射组合物施用至植入部位。

附图说明

图1：与

45mg释放相比的甲磺酸亮丙瑞林从不同聚合物中的体外释放

图2：单次皮下给药后雄性大鼠中亮丙瑞林的平均血清浓度-时间曲线

图3：从PLA/NMP溶液中LAMS和LAAc的体外释放

图4：与

45mg释放相比的从

45mg聚合物溶液中的LAMS释放

图5：与从PLA聚合物中释放相比，甲磺酸亮丙瑞林从不同PLGA聚合物中的释放

图6：LAMS从8515PLGA聚合物中的体外释放

图7：注射在PLGA/NMP制剂中的LAMS后雄性SD大鼠的血清睾丸激素浓度

图8：在37℃下从在pH 7.4的PBS中的各种PLA制剂中体外释放亮丙瑞林

图9：在37℃下从在pH 7.4的PBS中的PLGA5050制剂中具有摩尔比为1.6∶1和2∶1的甲磺酸亮丙瑞林的体外释放。

具体实施方式

本发明提供了稳定的可注射的可生物降解的聚合物组合物，用于形成经济、实用和有效的释放递送系统，以控制亮丙瑞林的释放持续1、3、4或6个月。本发明还提供一种其制造方法及使用方法。

本发明的组合物包含：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐，其最小化/阻止在有机溶液中的肽剂和聚合物之间的相互作用/反应；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂。根据本发明，药物组合物可任选地包含一种或多种赋形剂以实现肽剂的最佳递送。本发明的可注射聚合物组合物可以是粘性的或非粘性的液体、凝胶或半固体，其作为流体运动，从而可以使用注射器注射。可以将可注射聚合物组合物预填充到一个注射器中以形成即用型构造的产品试剂盒。

根据本发明的组合物包含：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐和与弱酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐的混合物，其中强酸与LHRH激动剂或拮抗剂的摩尔比为1∶1至2∶1，其中该组合物除了用于形成针对LHRH激动剂或拮抗剂的强酸的酸之外不包含过量的酸；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂，当配制在一起时，可以在1、3、4或6个月的时间内递送LHRH激动剂或拮抗剂。根据本发明，药物组合物可任选地包含赋形剂以实现肽剂的最佳递送。药物组合物可以是粘性的或非粘性的液体、凝胶或半固体，其作为流体运动，从而可以使用注射器注射。可以将药物组合物预先填充到一个注射器中以形成即用型的产品。

本发明的控释递送系统可以在体外形成为可植入的聚合物基质，或者可以以原位形成为凝胶或固体植入物的形式。当施用于受试者时，取决于植入物的组成，肽的控释可以维持期望的时间段。通过选择可生物降解的聚合物和其他组分，可以在1个月至6个月的时间内控制肽剂的持续释放的持续时间。

如本文所用，术语“一”、“一个”和“一者”旨在被解释为“一个或多个”和“至少一个”。

如本文所用，术语“稳定的”是指可注射聚合物组合物中组分的稳定性的显著改善，这对于实现开发可行产品所需的稳定状态是必需的。如本文所用，术语“稳定的可注射聚合物组合物”是指组合物的组分(例如聚合物和肽剂)在适当条件下的生产过程中以及延长的时间段(例如，数月至数年，优选超过12个月)后保留其原始分子量、结构和/或生物活性的至少80％，优选至少90％。

如本文所定义，术语“控释递送”是指给药后在期望的、延长的时间段内，优选从一个月至六个月，在体内递送肽剂。

如本文所用，术语“肽”或“肽剂”在一般意义上包括通常称为“肽”、“寡肽”和“多肽”或“蛋白质”的聚氨基酸，本文可互换使用。该术语还包括肽剂类似物、衍生物、酰化衍生物、糖基化衍生物、聚乙二醇化衍生物、融合蛋白等。“碱性肽剂”是性质上是碱性的肽，其是由于存在碱性氨基酸例如精氨酸或赖氨酸，或由该肽剂的N-末端产生的，或仅是包含至少一个碱性基团，任选地存在一个或多个酸性氨基酸基团。该术语还包括肽的合成类似物、具有基本功能的非天然氨基酸或任何其他形式的引入的碱性。

术语“肽剂”是指包括具有诊断和/或治疗特性的任何肽剂，包括但不限于抗代谢、抗真菌、抗炎、抗肿瘤、抗感染、抗生素、营养剂、激动剂和拮抗剂特性。

具体而言，本发明的肽剂可以是能够与强酸形成有益盐的任何肽，特别是包含电子给体碱基团例如碱性氮原子(例如胺、亚胺或环氮)的肽剂。肽剂优选包含一种或多种暴露的质子化胺官能团。可用于制备本发明组合物的肽剂包括但不限于催产素、加压素、促肾上腺皮质激素(ACTH)、表皮生长因子(EGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)、催乳素、黄体生成激素、促黄体生成激素释放激素(LHRH)、LHRH激动剂、LHRH拮抗剂、生长激素(包括人、猪和牛)、生长激素释放因子、胰岛素、促红细胞生成素(包括所有具有促红细胞生成活性的蛋白质)、生长抑素、胰高血糖素、白介素(包括IL-2、IL-11、IL-12等)、α-干扰素、β-干扰素、γ-干扰素、胃泌素、四胃泌素、五肽胃泌素、泌尿激素、促胰液素、降钙素、脑啡肽、内啡肽、血管紧张素、促甲状腺激素释放激素(TRFI)、肿瘤坏死因子(TNF)、甲状旁腺激素(PTH)、神经生长因子(NGF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、肝素酶、血管内皮生长因子(VEG-F)、骨形态发生蛋白(BMP)、hANP、胰高血糖素样肽(GLP-1)、艾塞那肽、YY肽(PYY)、肾素、缓激肽、杆菌肽、多粘菌素、大肠菌素、酪氨酸、短杆菌肽、环孢菌素(包括合成类似物及其药理活性片段)、酶、细胞因子、抗体、疫苗、抗生素、抗体、糖蛋白、促卵泡激素、京都啡肽、taftsin、胸腺素、胸腺嘧啶脱氨酶、胸腺体液因子、血清胸腺因子、集落刺激因子、胃动素、蛙皮素、双降啡肽、神经降压素、铜蓝蛋白、尿激酶、激肽释放酶、P物质的类似物和拮抗剂、血管紧张素II、凝血因子VII和Ix、黑素细胞刺激激素、甲状腺激素释放激素、甲状腺刺激激素、胰酶、胆囊收缩素、人胎盘乳原、人绒毛膜促性腺激素、蛋白质合成刺激肽、胃抑制肽、血管活性肠肽、血小板衍生的生长因子及其合成类似物、修饰和药理活性片段。

在此使用的优选的肽剂包括其中N-末端不是伯胺的肽剂。例如，肽剂的N端可以是焦谷氨酸，例如LHRH和LHRH激动剂，如亮丙瑞林、布舍瑞林、戈那瑞林、地洛瑞林、夫替瑞林、组氨瑞林、黄体瑞林、戈舍瑞林、那法瑞林、曲普瑞林等。可选择地，N-末端胺基可以被封端或酰化，例如西曲瑞克、恩夫韦肽、胸腺素α1、阿巴瑞克等。

本文使用的优选的肽剂还包括其中N-末端伯胺被亲水和/或亲脂部分例如通过聚乙二醇化、酰化等共价修饰的肽剂。本文所用的肽剂还包括其中侧链伯胺被亲水和/或亲脂部分例如通过聚乙二醇化、酰化等共价修饰的肽剂。本文使用的优选的肽剂还包括其中N末端伯胺基团和侧链伯胺基团都与亲水性和/或亲脂性部分同时例如通过聚乙二醇化、酰化等共价修饰的肽剂。

术语“亲水部分”是指任何水溶性的直链或支链低聚物或聚合物，包括但不限于聚乙二醇和聚丙二醇以及类似的直链和支链聚合物。优选地，聚合物的分子量为约500道尔顿至约50,000道尔顿。用于本发明的亲水聚合物可以具有反应性基团，该反应性基团被引入以通过胺、羧基、羟基或硫醇基团与目标肽剂连接。

本文所用的术语“聚乙二醇化”是指可溶性聚乙二醇与肽剂的共价缀合。聚乙二醇可以根据标准方案制备，其一端被甲氧基封端，另一端被活化以易于与肽剂上的活性基团偶联。例如，本领域描述了多种制备聚乙二醇的方法及其在聚乙二醇化中的用途：[例如，RobertsMJ，Bentley MD，Harris JM，Chemistry for peptide and protein PEGylation.Adv DrugDeliv Rev.2002年6月17日；54(4)：459-76.Veronese FM.Peptide and proteinPEGylation：a review of problems and solutions.Biomaterials.2001年3月；22(5)：405-17以及美国专利6,113,906；5,446,090；5,880,255]，其全部通过引用并入本文。

术语“亲脂性部分”是指在20℃下在水中的溶解度小于5mg/ml，优选小于0.5mg/ml，更优选小于0.1mg/ml的任何分子。这种亲脂性部分优选选自C_2-39-烷基、C_2-39-链烯基、C_2-39-链二烯基和甾族残基。术语“C_2-39-烷基、C_2-39-链烯基、C_2-39-链二烯基”旨在涵盖2-39个碳原子的直链和支链，优选直链的饱和、单不饱和和二不饱和烃。

将亲脂性部分共价引入其肽剂中导致亲脂性修饰的肽，其与天然分子相比可以具有改善的治疗效果。这通常可以通过使肽剂中的胺基与亲脂性分子中的酸或其他反应性基团反应来完成。可选地，肽剂与亲脂性分子之间的缀合通过可降解或不可降解的另外的部分例如桥、间隔基或连接部分来完成。现有技术中公开了一些例子，[例如，Hashimoto，M.等，Pharmaceutical Research，6：171-176(1989)，以及Lindsay，D.G.等，Biochemical J.121：737-745(1971)，美国专利5,693,609，WO95/07931，美国专利5,750,497，和WO96/29342。WO98/08871，WO98/08872，和WO99/43708]，这些公开内容通过引用明确地并入本文，以描述亲脂性修饰的肽并使其能够制备。

如本文所定义，术语“强酸”是指包括pKa小于3、优选小于0的任何酸。适用于本发明的强酸可以选自但不限于盐酸、氢溴酸、硝酸、铬酸、硫酸、甲磺酸、三氟甲磺酸、甲苯磺酸(p)、三氯乙酸、二氯乙酸、溴乙酸、氯乙酸、氰基乙酸、2-氯丙酸、2-氧代丁酸、2-氯丁酸、4-氰基丁酸、棕榈酸、高氯酸、磷酸、碘化氢等。

本发明的“强酸”还包括任何有机硫酸，例如具有1-40个碳、优选小于18个碳、更优选小于6个碳的烷基、芳基或烷基芳基硫酸，以及有机磺酸，例如1-40个碳、优选小于18个碳、更优选小于6个碳的烷烃、芳基烷烃、芳烃或烯烃磺酸。

如本文所定义，“弱酸”是指包括pKa大于3的任何酸。适用于本发明的弱酸可以选自但不限于1-羟基-2-萘甲酸、2-氧戊二酸、4-乙酰氨基苯甲酸、4-氨基水杨酸、乙酸、己二酸、抗坏血酸(L)、天冬氨酸(L)、苯甲酸、樟脑酸(+)、癸酸(十烷酸)、己酸(羊油酸)、辛酸(羊脂酸)、碳酸、肉桂酸、柠檬酸、甲酸、富马酸、半乳糖酸、龙胆酸、葡庚糖酸(D)、葡糖酸(D)、葡糖醛酸(D)、谷氨酸、戊二酸、乙醇酸、马尿酸、异丁酸、乳酸(DL)、乳糖酸、月桂酸、马来酸、苹果酸(-L)、丙二酸、扁桃酸(DL)、油酸、草酸、棕榈酸、丙酸、焦谷氨酸(-L)、水杨酸、例如癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、酒石酸(+L)、硫氰酸、十一碳烯酸等。

如本文所定义，术语“肽剂的有益盐”是指包括与强酸形成的肽剂的任何盐。肽剂的有益盐可以通过简单的酸和碱滴定或中和来制备。肽剂的有益盐可以在其合成和纯化过程中制备。或者，它们可以从肽剂以游离碱的形式制备。将游离碱溶解在合适的液体介质中。通过适当的手段，例如沉淀、过滤或冻干，通过除去溶剂，将该肽剂溶液与强酸溶液混合以形成有益盐。如果肽剂是与弱酸(例如，pKa＞3)例如乙酸形成的盐的常见市售形式，则可以通过常见的离子交换(例如冻干)、沉淀或本领域已知的其他方法用强酸代替弱酸。例如，乙酸亮丙瑞林被溶解在合适的液体介质例如水中。将该肽剂溶液与强酸例如甲磺酸的水溶液混合。当乙酸肽和强酸如甲磺酸溶解在水中时，由于甲磺酸越强，羧酸乙酸越弱，该肽往往与甲磺酸根离子缔合。可以在真空或冻干条件下除去溶剂和游离的乙酸(或其他弱但易挥发的羧酸)。因此，将混合物溶液冷冻干燥以除去水和弱酸以形成有益盐。如果所述肽剂在低pH下不稳定，则可以通过针对非常低浓度的强酸进行广泛的透析来制备所述肽剂的有益盐。

本发明的可注射聚合物组合物可包含0.01至40重量％范围内的肽剂。通常，最佳药物载量取决于所需的释放时间和肽剂的效力。显然，对于低效力和较长释放时间的肽剂，可能需要更高水平的掺入。

术语“可生物降解的”是指逐渐在原位分解、溶解、水解和/或侵蚀的材料。通常，本文的“可生物降解的聚合物”是主要通过水解和/或酶解可水解和/或就地生物侵蚀的聚合物。

本文所用的术语“可生物降解的聚合物”是指包括可以在体内使用的任何生物相容性和/或可生物降解的合成和天然聚合物，条件是该聚合物至少基本上不溶于水性介质或体液。如本文所用，术语“基本上不溶”是指聚合物的不溶性必须足以导致聚合物在水性介质或体液中沉淀。优选地，聚合物的溶解度小于1重量％、更优选小于0.1％。当将聚合物在水混溶性或分散性有机溶剂中的溶液与水溶液混合时，随着有机溶剂的消散，聚合物将沉淀形成固体或凝胶状基质。合适的可生物降解的聚合物公开于例如美国专利4,938,763、5,278,201、5,278,2012、5,324,519、5,702,716、5,744,153、5,990,194、和6,773,714。聚合物的一些非限制性实例是聚丙交酯、聚乙交酯、聚己内酯、聚二恶烷、聚碳酸酯、聚羟基丁酸酯、聚亚烷基草酸酯、聚酸酐、聚酯酰胺、聚氨酯、聚缩醛、聚原碳酸酯、聚磷腈、聚羟基戊酸酯、聚亚烷基琥珀酸酯、聚(苹果酸)以及共聚物、嵌段共聚物、支链共聚物、三元共聚物及其组合物和混合物。

嵌段共聚物包括A-B-A嵌段共聚物、B-A-B嵌段共聚物和/或A-B嵌段共聚物和/或支链共聚物。优选的嵌段共聚物是其中A嵌段包含疏水性聚合物并且B嵌段包含亲水性聚合物的类型。特别地，当使用上述嵌段共聚物中的一种时，定义最优选的聚合物基质，其中A嵌段是选自聚丙交酯、聚乙交酯、聚(丙交酯-共-乙交酯)、聚酸酐、聚(原酸酯)、聚醚酯、聚己内酯、聚酯酰胺、聚(ε-己内酯)、聚(羟基丁酸0及其共混物和共聚物，并且B嵌段是聚乙二醇或单官能衍生的聚乙二醇，例如甲氧基聚乙二醇。这些组合中的许多可以形成可接受的热可逆凝胶。

聚合物的合适分子量可以由本领域普通技术人员确定。确定分子量时可以考虑的因素包括所需的聚合物降解速率、机械强度和聚合物在有机溶剂中的溶解速率。通常，聚合物的重均分子量的合适范围为约2,000道尔顿至约100,000道尔顿，多分散度为1.1至2.5，优选1.1至2.0，更优选1.1至1.8，这取决于选择使用何种聚合物等因素。

本发明的可注射聚合物组合物可包含按重量计10％至70％范围内的可生物降解的聚合物。本发明的可注射组合物的粘度取决于所用聚合物和有机溶剂的分子量。通常，当使用相同的溶剂时，聚合物的分子量和浓度越高，粘度越高。优选地，组合物中聚合物的浓度小于70重量％。更优选地，组合物中聚合物的浓度为30-60重量％。

在本发明中优选使用聚(乳酸)、以及乳酸与乙醇酸的共聚物(PLGA)，包括聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)和聚(L-丙交酯-共-乙交酯)。聚合物(或热塑性聚酯)的乳酸与乙醇酸的单体比例为约50∶50至约100∶0，重均分子量为约2,000至约100,000。可使用本领域已知的方法，例如缩聚和开环聚合反应(例如，美国专利4,443,340、5,242,910、5,310,865，其全部通过引用并入本文)来制备可生物降解的热塑性聚酯。取决于聚合方法，聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)的末端基团可以是羟基、羧基或酯。合适的聚合物可以包括单官能醇或多元醇残基，并且可以不具有羧酸末端。单官能醇的实例是甲醇、乙醇或1-十二烷醇。多元醇可以是二醇、三醇、四醇、五醇和己醇，包括乙二醇、1，6-己二醇、聚乙二醇、甘油、糖、还原糖例如山梨糖醇等。

乳酸和乙醇酸或丙交酯和乙交酯的共聚物(PLGA)包括聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)和聚(L-丙交酯-共-乙交酯)。所述共聚物的乳酸与乙醇酸的单体摩尔比为约50∶50至约100∶0。当使用85∶15的摩尔比时，表明共聚物包含80-90％的乳酸或丙交酯和10-20％的乙醇酸或乙交酯。当使用75∶25的摩尔比时，表明共聚物包含70-80％的乳酸或丙交酯和20-30％的乙醇酸或乙交酯。当使用65∶35的摩尔比时，表明共聚物包含60-70％的乳酸或丙交酯和30-40％的乙醇酸或乙交酯。当使用50∶50的摩尔比时，表明共聚物包含45-55％的乳酸或丙交酯和45-55％的乙醇酸或乙交酯。

许多合适的PLGA是可商购的，并且根据现有技术可以容易地制备具有特定组成的PLGA。各种单体比例和分子量的PLGA可获得自勃林格殷格翰公司(Boehringer-Ingelheim，美国弗吉尼亚州彼得斯堡)、赢创公司(Evonik，美国阿拉巴马州伯明翰)、杜雷特公司(DURECT Corporation)(美国佩勒姆)。

组合物中存在的可生物降解聚合物的类型、分子量和数量会影响LHRH激动剂或拮抗剂从控释植入物中释放的时间长度。为了实现控释植入物的所需性能，组合物中存在的可生物降解聚合物的类型、分子量和数量的选择可以通过简单的实验确定。本发明的申请人令人惊讶地发现，由强酸形成的肽的盐(例如甲磺酸盐)一旦被注入水性环境比由弱酸形成的盐(例如乙酸盐)的肽引起的可生物降解的聚合物降解得更快，即使在储存过程中提高了制剂的稳定性。

术语“药学上可接受的有机溶剂”是指包括在水或体液中可混溶或分散的任何生物相容性有机溶剂。术语“可分散的”是指溶剂在水中部分可溶或可混溶。优选地，单一溶剂或溶剂混合物在水中的溶解度或溶混度大于0.1重量％。更优选地，溶剂在水中的溶解度或溶混度大于3重量％。最优选地，溶剂在水中的溶解度或混溶度大于7重量％。合适的有机溶剂应能够扩散到体液中，以便液体组合物凝结或固化。可以使用这些溶剂的单一溶剂和/或混合溶剂。这些溶剂的适用性可以通过简单的实验容易地确定。

药学上可接受的有机溶剂的例子包括但不限于：N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、甲氧基聚乙二醇、烷氧基聚乙二醇、聚乙二醇酯、甘油糠醇、甘油缩甲醛、乙酸甲酯、乙酸乙酯、甲乙酮、二甲基甲酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃、己内酰胺、癸基甲基亚砜、苯甲酸苄酯、苯甲酸乙酯、三醋精、双醋精、三丁酸甘油酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸三丁酯、乙酰基柠檬酸三乙酯、乙酰基柠檬酸三丁酯、甘油三乙酯、磷酸三乙酯、邻苯二甲酸二乙酯、酒石酸二乙酯碳酸亚丙酯、碳酸亚乙酯、丁内酯和1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮及其组合。

可生物降解的聚合物在各种药学上可接受的有机溶剂中的溶解度将根据聚合物的特性及其与各种溶剂的相容性而有所不同。因此，同一聚合物在不同溶剂中的溶解度不同。例如，PLGA在N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中的溶解度比在三醋精中的溶解度高得多。但是，当NMP中的PLGA溶液与水溶液接触时，由于其与水的高混溶性，NMP会迅速消散以形成固体聚合物基质。溶剂的快速扩散速率可能会迅速产生固体植入物，但是，它也可能导致较高的初始突发释放。当三乙酸甘油酯中的PLGA溶液与水溶液接触时，三乙酸甘油酯由于与水的混溶性低，其消散速度将非常缓慢。溶剂的缓慢扩散速率可能需要很长时间才能从粘性液体转变为固体基质。可能存在最佳的平衡，在该平衡下，溶剂扩散出去，并且聚合物凝结成胶囊剂。因此，组合不同的溶剂以获得理想的递送系统可能是有利的。可以将低和高水混溶性的溶剂混合使用，以提高聚合物的溶解度，改变组合物的粘度，优化扩散速率并减少初始的突发释放，

本发明的可注射聚合物组合物通常包含按重量计30％至80％范围内的有机溶剂。本发明的可注射组合物的粘度取决于所用聚合物和有机溶剂的分子量。优选地，组合物中聚合物的浓度小于70重量％。更优选溶液中聚合物的浓度为30-60重量％。

在本发明的一个优选实施方案中，液体组合物可用于配制盐酸亮丙瑞林或甲磺酸亮丙瑞林的控释递送系统。在这样的实施方案中，可生物降解的热塑性聚酯可优选为包含羟基末端基团和月桂酸酯末端的85/15聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)。可以占组合物重量的约30％至约60％。并且可以具有约8,000至约50,000的平均分子量。

在本发明的另一个优选实施方案中，液体组合物可用于配制甲磺酸亮丙瑞林的控释递送系统。在这样的实施方案中，可生物降解的热塑性聚酯可优选为包含两个羟基端基的85/15聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)；可以占组合物重量的约30％至约60％。且平均分子量可以为约8,000至约50,000道尔顿，优选为11,000至25,000道尔顿。

在本发明的另一个优选实施方案中，液体组合物可用于配制甲磺酸亮丙瑞林的控释递送系统。在这样的实施方案中，可生物降解的热塑性聚酯可优选为含有羧酸端基的85/15聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)；可以占组合物重量的约30％至约60％。且平均分子量可以为约8,000至约50,000道尔顿，优选为11,000至25,000道尔顿。

在本发明的另一个优选实施方案中，该组合物可用于配制甲磺酸亮丙瑞林的控释递送系统。在这样的实施方案中，可生物降解的聚合物可以优选地是具有/不具有羧酸端基的100/0聚(DL-丙交酯)；可以占组合物重量的约40％至约60％。且平均分子量可以为约8,000至约50,000道尔顿，优选为11,000至25,000道尔顿。当与药学上可接受的有机溶剂(例如NMP)一起配制时，与乙酸亮丙瑞林相比，该制剂具有更高的稳定性，并且可以递送亮丙瑞林6个月。

在本发明的另一个优选实施方案中，该组合物可用于配制甲磺酸亮丙瑞林的控释递送系统。在这样的实施方案中，可生物降解的聚合物可以优选为具有/不具有羧酸端基的85/15聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)。可以占组合物重量的约40％至约60％。且平均分子量可以为约8,000至约50,000道尔顿，优选为11,000至25,000道尔顿。当与药学上可接受的有机溶剂(例如NMP)一起配制时，与乙酸亮丙瑞林相比，该制剂具有改善的稳定性，并且可以递送亮丙瑞林3到4个月。

本文所用的术语“赋形剂”是指除用于形成组合物的肽剂或可生物降解的聚合物之外，在组合物中包括任何有用的成分。合适的赋形剂包括释放速率调节剂、降低突释效果的材料、缓冲材料、抗氧化剂等。

根据本发明，合适的释放速率调节剂包括但不限于两亲化合物或共聚物，例如链烷羧酸、油酸、烷基醇、极性脂质、表面活性剂、聚乙二醇与聚丙交酯的共聚物或聚(丙交酯-共-乙交酯)、苯甲酸苄酯、泊洛沙姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚山梨酯等；一元、二元和三元羧酸的酯，例如乙酸2-乙氧基乙酯、柠檬酸三乙酯、柠檬酸乙酰基三丁酯、柠檬酸乙酰基三乙酯、甘油三乙酸酯、癸二酸二(正丁酯)等；多羟基醇、例如聚乙二醇、山梨糖醇等；脂肪酸；甘油的三酯，例如甘油三酸酯、中链甘油三酸酯，例如MIGLYOL 810、812、818、829、840等。速率调节剂的混合物也可用于本发明的聚合物体系中。

释放速率调节剂可以在植入后的最初24小时内以有效减少从聚合物组合物中释放的肽剂的初始突释的量存在于可注射的聚合物组合物中。优选地，聚合物组合物包含按重量计约1％至约50％、更优选按重量计约2％至约20％的释放速率调节剂。

缓冲剂可以以在降解过程中有效稳定植入物内的pH的量存在于可注射的聚合物组合物中。优选地，聚合物组合物包含约1重量％至约30重量％、更优选约2重量％至约15重量％的缓冲剂。

抗氧化剂可以有效清除植入物内产生的任何自由基或过氧化物的量存在于可注射的聚合物组合物中。优选地，聚合物组合物包含约1重量％至约30重量％、更优选约3重量％至约15重量％的抗氧化剂。

一方面，本发明提供了稳定的可注射的可生物降解的聚合物组合物，其用于形成用于LHRH激动剂或拮抗剂的经济、实用、有效的控释递送系统，其包括：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐，其最小化或防止有机溶液中肽与聚合物之间的相互作用/反应；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂；以及d)任选地一种或多种赋形剂以实现肽剂的最佳递送。优选地，将可注射的组合物包装到试剂盒中，该试剂盒包括将所述组合物以即用型构造填充到注射器中的步骤。试剂盒中的组合物在合理的时间段内稳定，优选至少一年，以在受控的储存条件下具有合适的储存货架期。优选将组合物注射入受试者体内以原位形成植入物，在期望的延长的时间段内以治疗有效量从中释放肽剂。

在另一方面，本发明提供了稳定的可注射的可生物降解的聚合物组合物，其对于LHRH激动剂或拮抗剂在体外和体内具有选定的释放持续时间，包括：a)LHRH激动剂或拮抗剂与强酸形成的有益盐和LHRH激动剂或拮抗剂与弱酸形成的盐的混合物；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂，以实现肽剂的最佳递送。通过选择由强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐与由弱酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐的适当比例，可以实现LHRH激动剂或拮抗剂的期望释放持续时间。与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐和与弱酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的盐的比例为1∶0至0∶1。优选的比率可以是1∶0、1∶1、3∶2、7∶3、4∶1、17∶3、9∶1、10∶1、11∶1、12∶1、14∶1、16∶1、18∶1、19∶1、20∶1、30∶1、40∶1和50∶1中的任何比率。LHRH激动剂或拮抗剂的释放持续时间可以是1个月至9个月，优选3个月，4个月或6个月。

LHRH激动剂或拮抗剂可以与强酸或弱酸形成盐。除了用于形成LHRH激动剂或拮抗剂的盐的酸以外，本发明中使用的盐不包含过量的酸。由于弱碱和弱酸可能无法完全形成离子对，因此，一些弱碱基团可能以游离碱形式存在。因此，在某些情况下，酸的存在量可能少于用于化学计量形成LHRH激动剂或拮抗剂的盐的酸。

本发明的稳定的可注射的可生物降解的聚合物组合物可以通过适当地组合LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐、可生物降解的聚合物、药学上可接受的有机溶剂和任选的赋形剂来制备。用于给药的组合物可以方便地以剂量单位形式存在，并且可以通过药学领域已知的任何方法制备。制备本发明组合物的一种优选方法是将可生物降解的聚合物和/或赋形剂溶解在药学上可接受的有机溶剂中，首先获得均匀的聚合物溶液/悬浮液。然后将LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐加入该溶液/悬浮液中。使用任何适当的方法将各组分彻底混合，以获得均匀的溶液或悬浮液。然后将适量的溶液或悬浮液转移到注射器中，以获得即用型产品。

有益盐和聚合物在本发明组合物中的掺入水平自然会变化，这取决于LHRH激动剂或拮抗剂组分的效力、期望药物递送的时间段、聚合物的溶解度、在溶剂中的浓度、以及期望给药的可注射组合物的体积和粘度。

在本发明的某些优选实施方案中，用于形成经济、实用和有效的LHRH激动剂或拮抗剂的控释递送系统的可注射生物降解的聚合物组合物包含约0.01％至40％的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐以及约10％至70％的聚(丙交酯-共-乙交酯)聚合物。该组合物还包含约30％至70％的药学上可接受的有机溶剂。

在本发明的一个优选实施方案中，该组合物还包含约1％至40％的合适的赋形剂，包括释放速率调节剂、降低突释作用的材料、缓冲材料、抗氧化剂、组织转运剂等。

根据本发明，将可注射组合物转移到适合注射施用的无菌容器中，例如注射器。将该容器包装用于存储，并且在制造和存储过程中或在施用于受试者例如动物或人类之前，组合物的成分保留其原始分子量、结构和/或生物活性的至少80％、优选90％。

因此，根据本发明，可以将稳定的组合物施用于需要控制释放肽剂的对象。如本文所用，术语“受试者”旨在包括温血动物，优选为哺乳动物，最优选为人类。

如本文所用，术语“施用于受试者”是指通过任何合适的途径将组合物(例如药物制剂)分配、递送或施用至受试者，以将组合物递送至受试者中的期望位置。优选地，本发明的组合物可以通过皮下、肌内、腹膜内或皮内注射和/或植入来施用，以基于用于用肽剂治疗各种医学病症的已知参数提供所需剂量。

如本文所定义，术语“控释递送”是指在施用后的一段时间内，优选至少几周至一年，在体内连续递送肽剂。所述试剂的持续控释递送可以通过例如所述试剂随时间的持续治疗效果来证明(例如，对于LHRH类似物，所述类似物的持续递送可以通过随着时间的推移睾丸激素合成的持续抑制来证明)。备选地，可以通过随时间检测体内试剂的存在来证明肽剂的持续递送。

施用的可注射组合物的量通常将取决于控释植入物的期望性质。例如，可注射组合物的量可以影响肽剂从控释植入物中释放的时间长度。

在一个优选的实施方案中，要被注射到受试者的本发明的可注射聚合物组合物的体积为0.1mL至2.0mL；优选0.2mL至1.0mL；更优选0.3mL至0.5mL。

本发明进一步提供了一种在受试者中原位形成植入物的方法，该方法包括向受试者施用有效量的可注射组合物，所述组合物包括：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐，其最小化或防止了肽剂与聚合物在有机溶液中的相互作用/反应；b)可生物降解的聚合物；c)药学上可接受的有机溶剂；以及d)任选地一种或多种赋形剂，以实现LHRH激动剂或拮抗剂的最佳递送；使溶剂消散到周围的水环境中，通过相分离将液体组合物转变成储库。该贮库可以是粘性凝胶、半固体或固体基质。储库也可以是多孔的或无孔的。该贮库用作递送系统，LHRH激动剂或拮抗剂在期望的且延长的时间段从中释放。

在另一个优选的实施方案中，可以施用本发明的可注射组合物以适合体腔以形成贮库系统。这样的腔包括手术后产生的腔或诸如阴道、肛门等的天然体腔。

在另一方面，本发明提供了稳定的液体可生物降解的聚合物组合物，其用于形成用于LHRH激动剂或拮抗剂的经济、实用和有效的控释递送系统，其包括：a)与强酸形成的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐，其最小化或防止LHRH激动剂或拮抗剂与有机溶液中的聚合物之间的相互作用/反应；b)可生物降解的聚合物；c)有机溶剂；以及d)任选地一种或多种赋形剂以实现肽剂的最佳递送。液体可生物降解的聚合物组合物可以被制成可植入的聚合物基质。其中液体可生物降解的聚合物组合物在制造过程之前和期间保留其原始分子量、结构和/或生物活性的至少90％、优选95％。

如本文所用，术语“可植入的聚合物基质”旨在包括颗粒、薄膜、丸粒、圆柱体、圆盘、微胶囊、微球、纳米球、微粒、晶片以及用于药物递送的其他已知的聚合物构型。

形成各种药学上可接受的聚合物载体的方法是本领域众所周知的。例如，在美国专利6,410,044、5,698,213、6,312,679、5,410,016、5.529,914、5,501,863、和PCT公开号WO 93/16687、4.938,763、5,278,201、5,278,202、EP 0,058,481中描述了各种方法和材料，其全部通过引用并入本文。

根据本发明，通过将LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐包封在聚合物中来制备微球形式的可植入聚合物基质。LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐可以使用具有适于递送至不同生物环境或实现特定功能的独特性质的各种生物相容性和/或生物可降解的聚合物来封装。LHRH激动剂或拮抗剂的溶解速率以及因此的递送，取决于特定的包封技术、聚合物组成、聚合物交联、聚合物厚度、聚合物溶解度、生物活性化合物/聚阴离子复合物的大小和溶解度。

将要包封的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐溶解或悬浮在有机溶剂中的聚合物溶液中。将聚合物溶液添加到溶液中之后，必须将其浓缩至足以完全覆盖有益盐的浓度。该量是使有益盐与聚合物的重量比为约0.01至约50，优选约0.1至约30的量。LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐应保持悬浮状态，并且由于它们与聚合物接触而被包衣，因此不得聚集。

LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐的聚合物溶液因此可以进行多种微囊化技术，包括喷雾干燥、喷雾凝结、乳液和溶剂蒸发乳液。

根据本发明的一个实施方案，将LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐溶解或悬浮在有机溶剂中的聚合物溶液中。将该溶液或悬浮液转移至更大体积的包含乳化剂的水溶液中。在水溶液中，有机相被乳化，其中有机溶剂从聚合物中蒸发或扩散出去。固化的聚合物包封LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐以形成聚合物基质。乳化剂有助于在过程的硬化阶段降低系统中物质各个阶段之间的界面表面张力。或者，如果包封聚合物具有一些固有的表面活性，则可能不需要添加单独的表面活性剂。

可用于制备根据本发明的LHRH激动剂或拮抗剂的包封的有益盐的乳化剂包括如本文例举的泊洛沙姆和聚乙烯醇、表面活性剂和可降低聚合物包封的LHRH激动剂或拮抗剂的有益盐和溶液之间的表面张力的其他表面活性化合物。

除了上述公开的那些以外，可用于制备本发明的微球的有机溶剂还包括乙酸、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、氯仿和其他取决于聚合物性质的无毒溶剂。应该选择溶剂来溶解聚合物，并且最终是无毒的。

因此，根据本发明，可以将这些可植入的聚合物基质施用于需要LHRH激动剂或拮抗剂的持续控制释放递送的受试者。优选地，本发明的可植入的聚合物基质可以通过皮下、肌肉内、腹膜内或皮内注射和/或植入来施用，以基于已知参数用LHRH激动剂或拮抗剂治疗各种医学病症提供所需剂量。

本文引用的所有书籍、文章和专利均通过引用完全并入。

实施例

下列实施例说明了本发明的组合物和方法。以下实施例不应视为限制，而应视为仅教导如何制备有用的控释药物递送组合物。

实施例1：肽剂和可生物降解的聚合物在可注射聚合物组合物中的稳定性

将具有月桂酸酯端基的丙交酯与乙交酯的比率为85/15的聚(DL-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)溶解在N-甲基-2-吡咯烷酮(NMP)中，得到50％重量的溶液。将亮丙瑞林盐与PLGA溶液在NMP中混合，以表1所示的比例得到均匀的可注射组合物。将可注射的组合物填充到具有鲁尔锁(luer-lock)尖端的1.2mL聚丙烯注射器中。然后使用鲁尔锁帽密封预填充的注射器。将加盖的注射器包装在容器中，并在真空下密封在塑料袋中，然后在4℃和室温(约22℃)下保存长达18个月。在24小时、1、2、3、6、12和18个月的时间点对可注射组合物取样。通过HPLC测定样品中亮丙瑞林的纯度。聚合物的分子量通过凝胶渗透色谱法(GPC)使用具有已知分子量的聚苯乙烯标准物测定。

表1：测试的可注射聚合物制剂

令人惊讶地发现，使用亮丙瑞林的盐酸盐和甲磺酸盐代替乙酸盐可显著降低在4℃和室温下的NMP中PLGA溶液中亮丙瑞林和聚合物随时间的降解。表2和表3分别显示了NMP在PLGA溶液中在4℃和室温下亮丙瑞林随时间的降解情况。在4℃下，含有乙酸亮丙瑞林的聚合物组合物中高达23％的亮丙瑞林被降解，而对于含有盐酸亮丙瑞林和甲磺酸亮丙瑞林的那些制剂而言，不到2％的亮丙瑞林被降解。在室温下，乙酸亮丙瑞林制剂在12个月后观察到亮丙瑞林降解超过35％，而盐酸亮丙瑞林和甲磺酸亮丙瑞林制剂的降解率仅为约11％。

表2.亮丙瑞林在4℃下在PLGA/NMP制剂中的稳定性

表3.室温下PLGA/NMP制剂中亮丙瑞林的稳定性

时间(月)	LA-AC	LA-HCl-1	LA-HCl-2	LA-MS
					0	100	100	100	100
1	75	99	100	95
					2	78	98	97	97
3	86	100	100	100
					6	87	99	100	99
12	65	89	89	89

表4和5显示了不同制剂中聚合物的分子量变化。与空白对照相比，乙酸亮丙瑞林制剂中PLGA的分子量在4个月后下降超过10％，在室温下6个月后下降超过90％。盐酸亮丙瑞林和甲磺酸亮丙瑞林制剂中PLGA的分子量，即使在12个月后，在4℃和室温下也与空白对照的分子量相同。然而，在12个月后，来自空白对照和盐酸亮丙瑞林和甲磺酸亮丙瑞林制剂的聚合物中超过90％被降解。结果表明，与强酸(如HCl和甲磺酸)形成的亮丙瑞林盐完全阻止了肽与溶液中PLGA之间的相互作用/反应。而弱酸(例如乙酸)不能防止溶液中肽与PLGA之间的有害相互作用/反应。因此，通过使用与强酸形成的肽的盐来改善制剂的稳定性，使得能够制备具有至少一年的令人满意的储存稳定性的即用型可注射组合物。

表4.在4℃下不同制剂中PLGA的分子量随时间变化

时间(月)	空白	LA-AC	LA-HCl-1	LA-MS
					0	24655	23842	24369	24556
1	25214	24282	25203	24574
					3	24567	22775	24833	24833
6	23935	21957	24661	24034
					12	23905	18906	23837	23393
18	22178	16107	22802	22227

表5.室温下不同制剂中PLGA的分子量

时间(月)	空白	LA-AC	LA-HCl-1	LA-HCl-2	LA-MS
						0	24655.0	24282	24567	24468	24468
1	24282.2	20526	25022	25022	24832
						2	22969.3	15459	23230	23230	22969
3	23227.7	11073	23228	23311	21872
						6	ND	3409	18998	17952	15114
12	3112.3	380	4236	3388	2531

实施例2：亮丙瑞林6个月以上的递送

45mg可以持续递送乙酸亮丙瑞林6个月。产品在两个单独的注射器中提供，乙酸亮丙瑞林在一个注射器中，而聚合物溶液在另一个注射器中。将两者在注射前立即混合。聚合物溶液在NMP中包含50％的8515PLGA聚合物溶液。聚合物的分子量为约20k道尔顿。使用甲磺酸与亮丙瑞林的摩尔比为1.55∶1(LAMS(1.55))的甲磺酸亮丙瑞林和类似的8515PLGA聚合物制得了可比较的制剂。该聚合物的分子量也约为2万道尔顿，多分散指数(PDI)为1.7。甲磺酸亮丙瑞林是通过离子交换冻干法由乙酸亮丙瑞林制备的，其中含有少量的乙酸盐。将制剂混合并储存在单个注射器中。使用具有15k道尔顿(PLA-1)分子量和1.8的多分散指数(PDI)的PLA聚合物，用LAMS制备另一种制剂。同样将该制剂混合并储存在单个注射器中。然后在pH 7.4和37℃的PBS中体外测试这些制剂以及

45mg(Lot#3385)。在预定的时间点采集释放样品并通过HPLC进行分析。图1显示了亮丙瑞林随时间的释放。

亮丙瑞林从8515PLGA-3聚合物制剂中的释放在112天之前完成。此时颗粒也从释放介质中完全降解。亮丙瑞林从PLA-1和

45mg小丸中的释放持续到180天左右。释放持续时间的差异是出乎意料的，因为使用8515PLGA聚合物(如

45mg配方中的聚合物)时，植入物中使用LAMS的持续时间不长。因此，需要PLA聚合物才能具有与

45mg制剂相当的释放力，并且可持续6个月。出人意料的是，即使在贮藏期间使用LAMS的制剂比使用乙酸亮丙瑞林的制剂更稳定，聚合物分子量在释放介质中降解得更快。另一个令人惊讶的结果是，LAMS从PLA-1的初始释放与从

45mg亮丙瑞林的释放相比更低。

实施例3：亮丙瑞林在6个月内的体内递送

这项研究的目的是表征雄性大鼠皮下单次给药7个月后，含有甲磺酸亮丙瑞林的贮库的药代动力学，并研究在SC给药后不同聚合物的影响以及该制剂的活性。

45mg用作参考药物。通过分析SC给药后LA的血清浓度随时间的变化来确定亮丙瑞林(LA)的释放。

将雄性大鼠分成组(每组6只)，并接受以下甲磺酸亮丙瑞林(LAMS1.55)制剂。55.2％8515PLGA-3/44.8％NMP(辐照剂量25kGy)，57.6％PLA-1/42.4％NMP(辐照剂量25kGy)，或参考药物

45mg。8515PLGA-3聚合物的分子量类似于

45mg(20k)的分子量，PLA-1聚合物的分子量为15k。在给药之前和之后直至第196天均采集血样。图2显示了亮丙瑞林随时间的浓度。所有制剂的亮丙瑞林浓度直至约140天都是相似的。然后，对于8515PLGA-3制剂，亮丙瑞林的浓度开始急剧下降，直到在196天都无法检测到。

取回这项研究的植入物，并分析其亮丙瑞林含量和聚合物分子量。表6显示了亮丙瑞林的残留量和分子量降低的百分比。

表6：植入体分析

在接受含8515PLGA-3制剂的LAMS的动物中未发现植入物。这与血清亮丙瑞林的浓度相一致，后者的亮丙瑞林浓度在随后的时间急剧下降，在196天降至低于可检测限的水平。

LAMS-PLA-1配方和

45mg配方的分子量降解相似，聚合物分子量降低了约73％。仍然有一些亮丙瑞林残留，但是释放几乎完成，LAMS-PLA-1制剂中残留约2％，而

45mg制剂中残留少于1％。因此，与LAMS配制时，有必要使用分子量约为15k的PLA聚合物，以实现6个月的体内释放，类似于

45mg的释放。此结果是意外的。尽管该制剂在储存期间更稳定，但一旦注射，具有与

45mg相似的聚合物溶液的LAMS与在制剂中使用乙酸亮丙瑞林的

45mg类似，会更快地降解并且无法维持6个月的释放。

实施例4：对雄性大鼠皮下给药含有甲磺酸亮丙瑞林的制剂的PK/PD曲线的评估

这项研究的目的是表征将在N-甲基吡咯烷酮(NMP)的聚乳酸(PLA)溶液中的不同剂量的甲磺酸亮丙瑞林皮下注射至雄性Sprague-Dawley大鼠后的亮丙瑞林的药代动力学(PK)。甲磺酸亮丙瑞林通过柱离子交换从甲磺酸亮丙瑞林制备。所得产物的甲磺酸与亮丙瑞林的摩尔比为1.5∶1至1.8∶1。制剂中的PLA的重均分子量为11,000至18,000道尔顿，GPC使用聚苯乙烯标样在THF中测得的多分散度为1.8。使用十二烷醇(或月桂醇)作为引发剂制造所用的PLA聚合物，得到的PLA聚合物的一端为一个羟基端基，另一端为一个十二烷基酯基。该测试品旨在递送亮丙瑞林持续6个月。参考品

45mg(6个月的乙酸亮丙瑞林缓释制剂)用作参考对照。亮丙瑞林的释放是通过分析SC给药后作为时间的函数的亮丙瑞林的血清浓度来确定的，而亮丙瑞林在各种制剂中的活性是通过随着时间的推移抑制血清睾丸激素水平来评估的。

研究设计

在PK研究中，对总共80只雄性大鼠给药了三种不同剂量水平的甲磺酸与亮丙瑞林摩尔比为1.5∶1至1.8∶1的甲磺酸亮丙瑞林测试品和

45mg，三个测试品剂量组(第3、4和5组)和参考品处理组(第6组)的单剂量水平分别为6.8mg、20.3mg、33.8mg和30mg。用于PK研究的假手术组(sham)和载体对照组(第1、2组)总共包含40只雄性大鼠。在服药前、服药后4和24小时以及第3、5、8、15、22、29、43、57、71、85、99、113、127、141、155、169和183天从所有组中获得血样用于亮丙瑞林和睾丸激素的测定。使用经过验证的对于亮丙瑞林和睾丸激素的定量下限(LLOQ)为0.100ng/mL的LC-MS/MS方法分析血清样本中的亮丙瑞林和睾丸激素水平。使用

6.3将复合血清浓度-时间数据用于亮丙瑞林的PK参数计算。

结果

在所有由亮丙瑞林处理的组中给药后，在第一个采样时间4.0h达到了亮丙瑞林的平均Cmax值。

剂量从6.8mg分别增加了3倍和5倍增至20.3mg和33.8mg，导致雄性大鼠Cmax值分别增加了3.2倍和6.3倍。相同的3倍和5倍剂量增加分别导致雄性大鼠的AUC0-182天增加3.0倍和4.2倍，这表明在该研究中，随着增加的剂量，实现了测试品的剂量比例。

测试品处理组(低剂量、中剂量和高剂量)相对于参考品处理组的剂量标准化AUC0-182天之比分别为1.1、1.1和0.9。在六个月内，所有接受测试品处理的组中的亮丙瑞林均与参考品组相当。总体而言，按剂量归一化后，测试品的所有剂量组均显示与参考组

45mg非常相似的暴露。

PK结果总结在下表7中。

表7：单次皮下注射四种不同剂量的雄性大鼠中亮丙瑞林的PK参数

^a基于甲磺酸亮丙瑞林盐含量。

^b在没有异常高浓度亮丙瑞林的情况下，根据TK分布计算TK参数。

DNC_max：基于亮丙瑞林游离碱的剂量标准化Cmax。

DNAUC_0-182天：基于亮丙瑞林游离碱的剂量标准化的DNAUC_0-182天。

NC：未计算。

皮下注射所有的测试品和参考品后，血清平均睾丸激素浓度在第15天到第22天降至0.500ng/mL以下，并且直至以类似的方式结束研究维持在该水平附近。

结论

通过单次皮下注射6.8mg、20.3mg和33.8mg的测试品或30mg的参考品

45mg，将雄性Sprague-Dawley大鼠暴露于亮丙瑞林，并监测182天。与低剂量相比，中、高剂量的测试品的AUC相对剂量成比例增加。剂量标准化后，所有剂量的测试品显示亮丙瑞林的暴露量与参考品

45mg相似。

总体而言，LMIS 50mg的表现与参考品

45mg相似，在6个月的雄性大鼠中，其药物暴露和血清睾丸激素的抑制作用均相似。

实施例5：亮丙瑞林盐形式对制剂递送持续时间的影响

使用相同的分子量为16,000道尔顿的聚(D，L-丙交酯)(PLA)制备两种制剂。在此使用的PLA聚合物是用十二烷醇(或月桂醇)作为引发剂制造的，得到的PLA聚合物的一端为一个羟基端基，另一端为一个十二烷基酯基。将PLA聚合物以60重量％的浓度溶解在NMP中。使用该溶液，制备了包含约12％亮丙瑞林(按重量计)的制剂。亮丙瑞林在一种制剂中以甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为1.4∶1(LAMS1.4)的甲磺酸盐形式存在，而在另一种配方中(LAAc)以甲磺酸与亮丙瑞林的摩尔比为0∶1的乙酸盐形式存在。然后将所得制剂以25kGy的剂量进行γ辐射。

从这两种制剂中测试了亮丙瑞林的体外释放。体外释放测试是在37℃下pH7.4的PBS中进行的，并通过HPLC测定了亮丙瑞林随时间的释放。简言之，将等分的制剂(约100mg)在37℃下注射到pH 7.4的3mL具有0.1％叠氮化钠磷酸盐缓冲盐溶液中。在预定的时间点用新鲜的缓冲溶液替换接收液，并用HPLC分析用pH 7.4的磷酸盐缓冲液稀释2倍的去除缓冲液的药物浓度。计算每个时间点的释放量。图3显示了不同制剂中亮丙瑞林随时间的累积释放。

如图3所示，甲磺酸亮丙瑞林制剂中亮丙瑞林完成释放(约180天)快于乙酸亮丙瑞林制剂中的亮丙瑞林完成释放(约240天)。这是预料不到的，因为在相同的储存条件下，甲磺酸亮丙瑞林制剂中的聚合物分子量比乙酸亮丙瑞林更稳定。当在制剂中使用乙酸亮丙瑞林时比使用甲磺酸亮丙瑞林的体外释放持续60天以上。前列腺癌的标准治疗时间是1、3、4和6个月。通过使用甲磺酸亮丙瑞林代替乙酸亮丙瑞林来增强制剂的稳定性和6个月的递送持续时间，可以开发出更好的产品，即开发一种可立即使用的预填充注射器，以每6个月一次来治疗前列腺癌。

实施例6：亮丙瑞林的盐形式对制剂递送持续时间的影响

从几种

45mg的试剂盒中测试了亮丙瑞林的体外释放。这些试剂盒包含一个带乙酸亮丙瑞林(LAAc)的注射器和一个聚合物溶液注射器(NMP中的PLGA8515)。这里使用的PLGA8515是用己二醇作为引发剂制备的，且DL-丙交酯与乙交酯的摩尔比为85∶15。PLGA8515聚合物在聚合物链的两端均具有一个羟基端基。连接两个注射器，在注射前立即混合内含物。45mg的体外释放试验是在37℃的pH 7.4的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中进行的，并通过HPLC测定亮丙瑞林的释放度。使用

45mg比较甲磺酸亮丙瑞林(LAMS1.4)代替LAAc时的释放。

图4显示了亮丙瑞林从

45mg的体外释放，并与使用

45mg试剂盒中的聚合物溶液和甲磺酸亮丙瑞林(LAMS)的聚合物溶液代替LAAc的制剂中亮丙瑞林的释放进行了比较。使用LAMS代替LAAc时，释放时间要短得多。使用

试剂盒中的聚合物注射器的LAMS的释放＞99，并且在112天时聚合物几乎完全降解。使用

45mg试剂盒的植入物在160天后仍然保留，并且仍在释放。这是非常令人惊讶和违反直觉的，因为先前已经发现，在储存过程中，用LAMS配制的配方中PLGA聚合物比用LAAc配制的配方更稳定。

实施例7：在3个月内递送亮丙瑞林

22.5mg可以递送亮丙瑞林，以抑制睾丸激素3个月。

22.5mg由2个注射器组成，一个注射器中带有乙酸亮丙瑞林，另一个在聚合物溶液中。将两者在注射前立即混合。聚合物溶液在NMP中包含45％PLGA7525聚合物溶液。与具有较高丙交酯含量的聚合物相比，较低的聚丙交酯含量导致更快的降解。

为了用3个月的时间来递送亮丙瑞林，用甲磺酸亮丙瑞林制成制剂(LAMS(1.6))。甲磺酸亮丙瑞林甲磺酸盐是通过盐交换冻干法由甲磺酸亮丙瑞林制备的，其中含有少量的甲酸。这些制剂作为单个注射器稳定，可以直接注射。释放包括在37℃和pH 7.4下注入3mLPBS缓冲液。在每个时间点，将2.5mL释放介质移出并用新鲜缓冲液替换。通过HPLC分析除去的释放介质的亮丙瑞林含量。图5显示了体外测试的几种制剂的释放。

对于8515PLGA制剂(PLGA-1：MW 12.6k，PDI1.8；PLGA-2：MW 15.5k，PDI 1.5；PLGA-3MW 20k，PDI 2.5)，亮丙瑞林的释放预计在大约3个月内完成。使用较小分子量的8515PLGA可使降解时间甚至短于3个月。PLA聚合物可持续6个月(PLA-1：MW 15k，PDI 2.5)。

45mg也使用PLGA 8515聚合物，但释放可持续6个月。令人惊讶地发现，使用具有LAMS的PLGA8515聚合物，释放只能持续3个月。因此，当与LAMS配制时需要8515PLGA聚合物，以将亮丙瑞林的递送维持3个月。因此，通过使用LAMS并选择具有合适的MW和多分散性的PLGA，可以制备具有期望的储存稳定性，释放曲线和持续时间的制剂。

实施例8：取回大鼠SC给药3个月后制剂的植入物的体内分析

将具有不同8515PLGA聚合物的几种甲磺酸亮丙瑞林制剂(LAMS1.6)注入雄性SD大鼠中，以测试释放的持续时间，并与PLA制剂中LAMS的释放进行比较。91天后，取出植入物并进行分析，以确定剩余的亮丙瑞林含量和聚合物分子量降解的量。表8显示了从取回的植入物中获得的数据。

表8：取回植入物的概要分析

91天后，8515PLGA聚合物的分子量降低了约85％，而PLA聚合物的分子量仅降低了约45％。8515PLGA聚合物几乎已完全完成，这也可以通过植入物中残留的亮丙瑞林数量来反映。91天后仍有约5-10％的初始亮丙瑞林残留。PLA制剂尚剩余约50％，如果此制剂要递送6个月，则大致是符合的。因此，要从含有LAMS的制剂中递送亮丙瑞林3个月，就需要8515PLGA聚合物，而不是

22.5mg中使用的7525PLGA聚合物。这是令人惊讶的，因为在储存过程中LAMS使制剂比乙酸亮丙瑞林更稳定。这种出乎意料的特性可用于制备更稳定的制剂，以适合的递送持续时间长期保存。

实施例9：亮丙瑞林含量对制剂递送持续时间的影响

使用聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)聚合物制备了两种含有甲磺酸亮丙瑞林的制剂(LAMS(1.65))。此处使用的PLGA聚合物是用十二烷醇(或月桂醇)作为引发剂制造的，得到的PLGA共聚物的一端为一个羟基端基，另一端为一个十二烷基酯基，且DL-丙交酯与乙交酯＝85∶15。将PLGA聚合物(MW 20k，PDI 1.7)以55重量％的浓度溶解在NMP中。使用该溶液，制备了含有7.5％和3.75％的甲磺酸亮丙瑞林(LAMS1.65，按重量计)的制剂。然后使用电子束以大于25kGy的剂量辐照所得制剂。

从这两种制剂中测试了亮丙瑞林的体外释放。体外释放测试在37℃的pH7.4的PBS中进行，并通过HPLC随时间测量亮丙瑞林的释放。

图6显示了这两种制剂中亮丙瑞林的体外释放。亮丙瑞林的释放和PLGA聚合物的降解在大约90天内完成。这些制剂可用于递送甲磺酸亮丙瑞林持续至少3个月的时间。

还通过对雄性Sprague-Dawley大鼠单次皮下给药来评估这两种制剂，以通过随时间抑制血清睾丸激素水平来表征从这些制剂释放的亮丙瑞林的活性。使用经过验证的LC-MS/MS方法分析血清样品中的睾丸激素水平，其定量下限(LLOQ)为0.100ng/mL。图7显示了血清睾丸激素水平与时间的关系。给药后21天，大多数大鼠的血清睾丸激素水平被抑制到人阉割水平以下(≤0.5ng/mL)。对于55％PLGA/NMP溶液中的7.5％LAMS，在28天时，平均睾丸激素水平高于0.5ng/mL。这种激增是由于一只大鼠的睾丸激素水平明显高于其他大鼠。这可能是由于化验错误或动物个体差异引起的。总体而言，使用以十二烷醇(或月桂醇)为引发剂的PLGA聚合物制备的制剂，得到的PLGA共聚物的一端为一个羟基端基，另一端为一个十二烷基酯基，摩尔比为DL-丙交酯与乙交酯的比例为85∶15，可以提供治疗水平的亮丙瑞林持续至少3个月。

这些结果是出乎意料的。由乙酸亮丙瑞林、DL-丙交酯与乙交酯的摩尔比＝85∶15的PLGA、以及NMP组成的类似制剂商业产品

45mg被批准用于亮丙瑞林的递送，持续6个月。

中使用的聚合物需要6个月才能降解。结果证实，与乙酸亮丙瑞林相比，甲磺酸亮丙瑞林可以增强制剂的稳定性，但是可以在体外和体内释放过程中加速聚合物的降解。这些特性可有利地用于调整和微调配方以制备更好的产品-单个即用型预填充注射器。这种改进的产品是用户友好的，消除了复杂的混合程序，并且避免了在给药前由于不适当的混合而引起的任何配量错误。

实施例10：具有定制释放曲线或递送持续时间的制剂

使用聚(D，L-丙交酯-共-乙交酯)(PLGA)聚合物制备了三种含有甲磺酸亮丙瑞林和乙酸亮丙瑞林的混合物的制剂。此处使用的PLGA聚合物是用十二烷醇(或月桂醇)作为引发剂制造的，得到的PLGA共聚物的一端为一个羟基端基，另一端为一个十二烷基酯基，且DL-丙交酯与乙交酯＝85∶15。将PLGA聚合物以55重量％的浓度溶解在NMP中。使用该溶液，制备了含有7.5％亮丙瑞林(游离碱，按重量计)的制剂。甲磺酸亮丙瑞林与乙酸亮丙瑞林的比例为1∶0、4∶1和0∶1，或者甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为2∶1、1.6∶1和0∶1。然后使用电子束以大于25kGy的剂量辐照所得制剂。

从这两种制剂中测试了亮丙瑞林的体外释放。体外释放测试在37℃下pH7.4的PBS中进行，并通过HPLC测量亮丙瑞林随时间的释放。

对于甲磺酸亮丙瑞林与乙酸亮丙瑞林之比为约1∶0的制剂，亮丙瑞林的释放和PLGA聚合物的降解在约90天之内完成；对于比例为约4∶1的制剂，约114天完成。对于比例为0∶1的制剂，大约需要180天。通过使用由弱酸和强酸形成的亮丙瑞林盐的混合物，可以对这些制剂进行定制，使其在至少3个月至6个月的时间内递送甲磺酸亮丙瑞林。

实施例11：具有定制释放曲线或递送持续时间的制剂

通过使用LHRH的强酸盐和弱酸盐的不同组合，可以实现各种释放特性或递送时间。可以根据本领域已知的方法制备LHRH的各种盐。可以通过将一种LHRH弱酸盐与一种强酸盐混合以获得所需比例来制备盐的混合物。制备LHRH盐混合物的另一种方法是，向LHRH弱酸盐的水溶液中添加强酸。强酸离子可从盐离子对释放或解离弱酸。可以将混合物冷冻干燥或冻干以除去液体介质和任何解离的弱酸以获得所需的盐混合物。弱酸的例子包括甲酸、乙酸，而强酸的例子包括甲磺酸、HCl、硫酸、溴化氢。

制备甲磺酸亮丙瑞林和甲酸亮丙瑞林的混合物，使甲磺酸亮丙瑞林与甲酸亮丙瑞林的比例为1∶0、9∶1、4∶1、7∶3和0∶1，或者甲磺酸盐与亮丙瑞林的比例为2∶1、1.8∶1、1.6∶1、1.4∶1和0∶1。这些盐可以用PLGA在NMP溶液中配制，以获得具有不同递送持续时间的组合物。

如本文所公开的甲磺酸亮丙瑞林，也可以通过如下方式进行盐交换来制备：将亮丙瑞林的弱酸盐装载在例如离子交换柱上，从离子交换柱上洗去弱酸，用甲烷磺酸溶液将亮丙瑞林从柱上洗脱下来以得到甲磺酸亮丙瑞林溶液，并通过蒸发和冻干除去液体介质，制备得到甲磺酸亮丙瑞林干粉。

实施例12：具有甲磺酸盐与亮丙瑞林比例为1.4-1.8的LAMS的制剂

使用在具有甲磺酸亮丙瑞林的NMP中的PLA聚合物(MW 16k PDI 1.8)制备制剂，并通过约25kGy的伽马射线辐照灭菌。在pH 7.4的磷酸盐缓冲液中于37℃下测试了这些制剂的体外释放。图8显示了使用甲磺酸亮丙瑞林制备的制剂的体外释放曲线，其中甲磺酸盐∶亮丙瑞林的摩尔比为1.4至1.8。甲磺酸亮丙瑞林通过盐交换和冻干过程由乙酸亮丙瑞林制备。所得甲磺酸亮丙瑞林含有少量乙酸根反离子。(甲磺酸盐+乙酸盐)与亮丙瑞林的摩尔比≤2∶1。制备这些制剂并在不同的时间进行测试。在NMP中聚合物浓度为57.5％。总体而言，这些制剂的体外释放曲线是类似的，并且所有制剂均显示6个月或更短的释放持续时间。这些制剂的爆发释放范围为10-25％，持续6个月或稍微更长的时间。这些释放曲线类似于参考

45mg制剂的体外释放。

实施例13：1个月的制剂稳定性和释放

设计用于释放时间达1个月的制剂由在NMP中的50∶50PLGA聚合物(MW 50k，PDI 4.0)制备，该NMP使用具有甲烷磺酸与亮丙瑞林的比率为1.6∶1和2.0∶1的LAMS。将制剂储存在25℃，并随时间测量肽的纯度和聚合物分子量。表9和10分别显示了这些制剂的肽纯度和分子量稳定性。

表9.含25％PLGA50∶50-NMP的制剂在25℃下的肽纯度

时间(周)	LAMS(1.6)	LAMS(2.0)
			0	99.71	99.20
1	99.12	98.73
			2	98.54	98.43
4	97.56	98.46
			6	96.58	98.13
8	96.08	97.90

表10.具有25％PLGA50∶50-NMP的聚合物在25℃时的残留聚合物分子量占原始聚合物的百分比

表9和表10显示，甲磺酸盐的摩尔比越高，制剂的稳定性就越稳定，相比于低比例的肽纯度和聚合物分子量均显示更好的稳定性。与聚合物溶液本身相比，LAMS(2.0)的聚合物分子量降解没有差异。这些制剂的释放如图9所示。释放显示LAMS(2.0)的初始释放高于LAMS(1.6)。因此，可以调节甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比以开发具有所需的储存稳定性和药物释放持续时间的制剂。

Claims

1.一种聚合物组合物，其包含：

a)LHRH激动剂或拮抗剂的强酸盐，其中阴离子与所述LHRH激动剂或拮抗剂的摩尔比为1∶1至2∶1，包括端值；

b)可生物降解的聚合物，其选自由均聚物聚丙交酯或聚乳酸、以及共聚物聚(乳酸-共-乙醇酸)或聚(丙交酯-共-乙交酯)组成的组，其中所述共聚物的丙交酯∶乙交酯(或乳酸∶乙醇酸)的比例为50∶50至100∶0，包括端值；以及

c)药学上可接受的有机溶剂。

2.根据权利要求1所述的聚合物组合物，其中将所述聚合物组合物注射进哺乳动物组织中以形成贮库，所述LHRH激动剂或拮抗剂能够在一个月至六个月的时间段内从所述贮库释放。

3.根据权利要求1所述的聚合物组合物，其中所述LHRH激动剂的强酸盐是甲磺酸亮丙瑞林。

4.根据权利要求3所述的聚合物组合物，其中所述组合物不包含过量的强酸。

5.根据权利要求3所述的聚合物组合物，其中所述甲磺酸亮丙瑞林通过以下方式的离子交换而制备：将弱酸的亮丙瑞林盐溶解在液体介质中以形成溶液，在甲磺酸溶液中混合以形成混合物，并除去所述液体介质和任何解离的弱酸以形成甲磺酸亮丙瑞林。

6.根据权利要求3所述的聚合物组合物，其中所述甲磺酸亮丙瑞林通过以下方式的盐交换而制备：将弱酸的亮丙瑞林盐装载在离子交换柱上，从所述柱上洗去所述弱酸，用甲烷磺酸溶液从所述柱上洗脱亮丙瑞林以得到甲磺酸亮丙瑞林溶液，并通过蒸发和冻干除去液体介质。

7.根据权利要求1所述的聚合物组合物，其中所述可生物降解的聚合物具有至少一个羟基末端基团。

8.根据权利要求1所述的聚合物组合物，其中所述可生物降解的聚合物占所述组合物的30-60重量％，平均分子量为8,000至50,000，并且多分散度小于或等于2.5。

9.根据权利要求1所述的聚合物组合物，其中所述药学上可接受的有机溶剂选自N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜及其任意组合。

10.一种聚合物组合物，其包含：

a)甲磺酸亮丙瑞林，其中甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为1∶1至2∶1，包括端值；

b)选自由均聚物聚丙交酯或聚乳酸、以及共聚物聚(乳酸-共-乙醇酸)或聚(丙交酯-共-乙交酯)组成的组的可生物降解的聚合物，其中所述共聚物的丙交酯∶乙交酯(或乳酸∶乙醇酸)的比为50∶50至100∶0，包括端值；以及

c)药学上可接受的有机溶剂。

11.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中将所述聚合物组合物注射到哺乳动物组织中以形成贮库，所述甲磺酸亮丙瑞林能够在一个月至六个月的时间段内从所述贮库释放。

12.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中所述组合物不包含过量的强酸。

13.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中所述甲磺酸亮丙瑞林通过以下方式的离子交换而制备：将弱酸的亮丙瑞林盐溶解在液体介质中以形成溶液，在甲磺酸溶液中混合以形成混合物，并除去所述液体介质和任何解离的弱酸以形成甲磺酸亮丙瑞林。

14.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中所述甲磺酸亮丙瑞林通过以下方式的盐交换而制备：将弱酸的亮丙瑞林盐装载在离子交换柱上，从所述柱上洗去所述弱酸，用甲烷磺酸溶液从所述柱上洗脱亮丙瑞林以得到甲磺酸亮丙瑞林溶液，并通过蒸发和冻干除去液体介质。

15.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中所述可生物降解的聚合物具有至少一个羟基末端基团。

16.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中所述可生物降解的聚合物占所述组合物的30-60重量％，平均分子量为8,000至50,000，并且多分散度小于或等于2.5。

17.根据权利要求10所述的聚合物组合物，其中所述药学上可接受的有机溶剂选自N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜及其任意组合。

18.一种聚合物组合物，其包含：

a)甲磺酸亮丙瑞林，其中所述甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为1.4∶1至2∶1，包括端值；

b)可生物降解的均聚物聚丙交酯或聚乳酸；以及

c)选自N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜及其任意组合的药学上可接受的有机溶剂；

其中所述组合物不包含过量的强酸；

其中将所述组合物注射入哺乳动物组织以形成贮库，亮丙瑞林能够在超过6个月的时间内从所述贮库释放。

19.根据权利要求18所述的聚合物组合物，其中甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为1.5∶1至1.8∶1，包括端值。

20.根据权利要求18所述的聚合物组合物，其中甲磺酸亮丙瑞林的pH大于3。

21.一种聚合物组合物，其包含：

d)甲磺酸亮丙瑞林，其中甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为1.4∶1至2∶1，包括端值；

e)可生物降解的共聚物聚(乳酸-共-乙醇酸)、或聚(丙交酯-共-乙交酯)，其中所述共聚物的丙交酯∶乙交酯(或乳酸∶乙醇酸)的比为85∶15；以及

f)选自N-甲基-2-吡咯烷酮、二甲基乙酰胺、二甲基亚砜及其任意组合的药学上可接受的有机溶剂；

其中所述组合物不包含过量的强酸；

其中将所述组合物注射到哺乳动物组织中以形成贮库，亮丙瑞林可在超过3个月的时间内从所述贮库释放。

22.根据权利要求21所述的聚合物组合物，其中甲磺酸盐与亮丙瑞林的摩尔比为1.5∶1至1.8∶1，包括端值。

23.根据权利要求21所述的聚合物组合物，其中所述甲磺酸亮丙瑞林的pH大于3。