CN111485011B - 一种醋酸泼尼松的合成方法 - Google Patents

一种醋酸泼尼松的合成方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111485011B
CN111485011B CN202010302806.1A CN202010302806A CN111485011B CN 111485011 B CN111485011 B CN 111485011B CN 202010302806 A CN202010302806 A CN 202010302806A CN 111485011 B CN111485011 B CN 111485011B
Authority
CN
China
Prior art keywords
dehydrogenase
acetate
ala
gly
prednisone
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010302806.1A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111485011A (zh
Inventor
石淑敏
张迎新
黄勇开
陈海滨
马克·博科拉
蔡宝琴
应明华
张小强
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Xianju Pharmaceutical Co Ltd
Enzymaster Ningbo Bio Engineering Co Ltd
Original Assignee
Zhejiang Xianju Pharmaceutical Co Ltd
Enzymaster Ningbo Bio Engineering Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Xianju Pharmaceutical Co Ltd, Enzymaster Ningbo Bio Engineering Co Ltd filed Critical Zhejiang Xianju Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN202010302806.1A priority Critical patent/CN111485011B/zh
Publication of CN111485011A publication Critical patent/CN111485011A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111485011B publication Critical patent/CN111485011B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids
    • C12P33/02—Dehydrogenating; Dehydroxylating
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/001—Oxidoreductases (1.) acting on the CH-CH group of donors (1.3)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)

Abstract

本发明公开了一种醋酸泼尼松的合成方法，属于生物化学技术领域。该醋酸泼尼松的合成方法，包括以下步骤：以醋酸可的松为底物，将醋酸可的松与氢受体、助溶剂、脱氢酶进行混合，并置于水相缓冲液中进行酶促反应，得到所述的醋酸泼尼松；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素单核苷酸。本发明实施例通过以醋酸可的松为底物，选用黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素单核苷酸作为氢受体，并在脱氢酶的作用下进行酶促反应，可以得到较高转化率的醋酸泼尼松，其合成路线简单、原料环保，从而可以解决现有技术中采用化学法合成制备醋酸泼尼松过程中所存在的步骤繁琐、不环保等问题。

Description

一种醋酸泼尼松的合成方法
技术领域
本发明涉及生物化学技术领域，具体是一种醋酸泼尼松的合成方法。
背景技术
醋酸泼尼松是一种重要的肾上腺皮质激素类药，具有抗炎、抗过敏、抗风湿、免疫抑制作用。
目前，醋酸泼尼松一般可由醋酸可的松经过二氧化硒脱氢而得，或以二羟黄体酮脱氢物为原料，先经过碘代反应得到上碘产物，再经过置换反应得到置换产物，最后经过氧化反应得到醋酸泼尼松，又或者以17α-羟基黄体酮为原料进行合成。
然而，这些醋酸泼尼松的合成方法均存在合成路线复杂以及原料对环境污染大等问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种醋酸泼尼松的合成方法，以解决上述背景技术中提出的合成路线复杂以及原料对环境污染大问题。
为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
一种醋酸泼尼松的合成方法，包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将醋酸可的松与氢受体、助溶剂、脱氢酶进行混合，并置于水相缓冲液中进行酶促反应，得到所述的醋酸泼尼松；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素单核苷酸。
作为本发明实施例的一个优选方案，所述氢受体与所述醋酸可的松的摩尔比为(1-2)∶1。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述的助溶剂为二甲基亚砜或甲醇。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述助溶剂与水相缓冲液的体积比为(5～30)∶(70～95)。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述水相缓冲液为磷酸缓冲盐溶液或三乙醇胺缓冲液。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述水相缓冲液的pH值为7～9。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述步骤中，酶促反应的温度为30～40℃。
作为本发明实施例的另一个优选方案，所述脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示；所述脱氢酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示；所述脱氢酶以湿菌体、酶液或酶粉的形式存在。
作为本发明实施例的另一个优选方案，当所述脱氢酶以湿菌体或酶液的形式存在时，其与醋酸可的松的质量比为1∶(1-10)；当所述脱氢酶以酶粉的形式存在时，其与醋酸可的松的质量比为1∶(5-60)。
与现有技术相比，本发明实施例的有益效果是：
本发明实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，通过以醋酸可的松为底物，选用黄素腺嘌呤二核苷酸或黄素单核苷酸作为氢受体，并在脱氢酶的作用下进行酶促反应，可以得到较高转化率的醋酸泼尼松，其合成路线简单、原料环保，从而可以解决现有技术中采用化学法合成制备醋酸泼尼松过程中所存在的步骤繁琐、不环保等问题。
附图说明
图1为本发明实施例1提供的一种醋酸泼尼松的合成方法的反应过程图。
图2为本发明实施例6得到的反应液的高效液相色谱法(High PerformanceLiquid Chromatography，HPLC)峰谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。另外，下述实施例中所涉及的设备和试剂未经特别注明的话，均是采用市售的设备和试剂。
实施例1
该实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，其包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将10g/L醋酸可的松(0.0248mol/L)与0.0248mol/L氢受体、0.25mL助溶剂、10g/L脱氢酶湿菌体进行混合，并置于4.75mL的0.1mol/L水相缓冲液中进行酶促反应48h后，即可得到所述的醋酸泼尼松。其中，该合成反应的过程如附图1所示，S1为醋酸可的松的化学结构式，P1为醋酸泼尼松的化学结构式，该酶促反应的温度为30℃，酶促反应过程的搅拌速度为400rpm；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸(Flavin AdenineDinucleotide，FAD)；所述的助溶剂为二甲基亚砜；所述水相缓冲液为磷酸缓冲盐溶液，其pH值为7；另外，脱氢酶为宁波酶赛生物工程有限公司的产品，其以湿菌体/酶液/酶粉的形式存在，是通过在大肠杆菌重组表达出来的蛋白，物种来源为Rhodococcus erythropolis，3-ketosteroid deltal-dehydrogenase；其中，该脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ IDNO：1所示，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例2
该实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，其包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将60g/L醋酸可的松(0.149mol/L)与0.149mol/L氢受体、1.5mL助溶剂、10g/L脱氢酶酶液进行混合，并置于3.5mL的0.1mol/L水相缓冲液中进行酶促反应48h后，即可得到所述的醋酸泼尼松。其中，酶促反应的温度为40℃，酶促反应过程的搅拌速度为250rpm；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸；所述的助溶剂为甲醇；所述水相缓冲液为三乙醇胺缓冲液，其pH值为9；另外，脱氢酶为宁波酶赛生物工程有限公司的产品，其以湿菌体/酶液/酶粉的形式存在，是通过在大肠杆菌重组表达出来的蛋白，物种来源为Rhodococcus erythropolis，3-ketosteroid deltal-dehydrogenase；其中，该脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例3
该实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，其包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将50g/L醋酸可的松(0.124mol/L)与0.248mol/L氢受体、1mL助溶剂、1g/L脱氢酶酶粉进行混合，并置于4mL的0.1mol/L水相缓冲液中进行酶促反应48h后，即可得到所述的醋酸泼尼松。其中，酶促反应的温度为35℃，酶促反应过程的搅拌速度为400rpm；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸；所述的助溶剂为二甲基亚砜；所述水相缓冲液为磷酸缓冲盐溶液，其pH值为8；另外，脱氢酶为宁波酶赛生物工程有限公司的产品，其以湿菌体/酶液/酶粉的形式存在，是通过在大肠杆菌重组表达出来的蛋白，物种来源为Rhodococcus erythropolis，3-ketosteroid deltal-dehydrogenase；其中，该脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例4
该实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，其包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将50g/L醋酸可的松(0.124mol/L)与0.124mol/L氢受体、1mL助溶剂、5g/L脱氢酶湿菌体进行混合，并置于4mL的0.1mol/L水相缓冲液中进行酶促反应48h后，即可得到所述的醋酸泼尼松。其中，酶促反应的温度为37℃，酶促反应过程的搅拌速度为500rpm；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸；所述的助溶剂为甲醇；所述水相缓冲液为磷酸缓冲盐溶液，其pH值为7.5；另外，脱氢酶为宁波酶赛生物工程有限公司的产品，其以湿菌体/酶液/酶粉的形式存在，是通过在大肠杆菌重组表达出来的蛋白，物种来源为Rhodococcus erythropolis，3-ketosteroid deltal-dehydrogenase；其中，该脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例5
该实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，其包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将100g/L醋酸可的松(0.248mol/L)与0.496mol/L氢受体、1.5mL助溶剂、25g/L脱氢酶湿菌体进行混合，并置于3.5mL的0.1mol/L水相缓冲液中进行酶促反应48h后，即可得到所述的醋酸泼尼松。其中，酶促反应的温度为33℃，酶促反应过程的搅拌速度为550rpm；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸；所述的助溶剂为二甲基亚砜；所述水相缓冲液为三乙醇胺缓冲液，其pH值为8.5；另外，脱氢酶为宁波酶赛生物工程有限公司的产品，其以湿菌体/酶液/酶粉的形式存在，是通过在大肠杆菌重组表达出来的蛋白，物种来源为Rhodococcus erythropolis，3-ketosteroid deltal-dehydrogenase；其中，该脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例6
该实施例提供了一种醋酸泼尼松的合成方法，其包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将50g/L醋酸可的松(0.0124mol/L)与0.0124mol/L氢受体、0.5mL助溶剂、10g/L脱氢酶湿菌体进行混合，并置于4.5mL的0.1mol/L水相缓冲液中进行酶促反应48h后，即可得到所述的醋酸泼尼松。其中，酶促反应的温度为35℃，酶促反应过程的搅拌速度为400rpm；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸；所述的助溶剂为二甲基亚砜；所述水相缓冲液为磷酸缓冲盐溶液，其pH值为7；另外，脱氢酶为宁波酶赛生物工程有限公司的产品，其以湿菌体/酶液/酶粉的形式存在，是通过在大肠杆菌重组表达出来的蛋白，物种来源为Rhodococcus erythropolis，3-ketosteroid deltal-dehydrogenase；其中，该脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：1所示，其氨基酸序列如序列表SEQ ID NO：2所示。
实施例7
除了将黄素腺嘌呤二核苷酸替换成黄素单核苷酸外，其余步骤与实施例6相同。
另外，在上述实施例6～7的合成反应过程中，分别取50μL不同反应时间点的反应液，并分别添加1mL的乙腈进行振荡灭活，然后分别离心后取上清，通过HPLC检测各反应时间点的转化率，其检测结果如表1所示。其中，上述检测所使用的HPLC仪器为市售的安捷伦1100色谱仪，其装有Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18色谱柱(100*4.6mm，3.5μm)，检测时的参数设置如下：流动相为60％水和40％乙腈，流速1.5mL/min，检测波长240nm，柱温40℃，底物出峰时间为4.0min，产物出峰时间为3.7min，检测得到的色谱图如附图2所示。
表1
反应时间 2h 4h 20h 24h 48h
实施例6转化率 16.2％ 29.1％ 79.4％ 81.2％ 93.2％
实施例7转化率 10.5％ 18.2％ 25.0％ 24.9％ 25.6％
从上表1可以看出，相比于实施例7，本发明实施例6具有较好的转化率，反应48h可达90％以上。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
序列表
<110> sss
<120> sss
<130> 2222
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1533
<212> DNA
<213> Rhodococcus erythropolis
<400> 1
atgcaggatt ggaccagcga atgtgatgtt ctggtggttg gtagcggcgg tggtgcatta 60
accggtgcat ataccgcagc agcacagggt ctgaccacca ttgtgctgga aaaaaccgat 120
cgctttggcg gcaccagtgc atatagtggt gccagtattt ggctgccggg cacacaagtt 180
caggaacgtg caggtctgcc ggatagcaca gaaaatgcac gcacctatct gcgcgcactg 240
ctgggtgacg cagaaagcga gagacaggat gcatacgttg aaaccgcacc ggcagttgtt 300
gcactgctgg aacagaatcc gaatattgaa tttgagttcc gcgcctttcc ggattattat 360
aaagcagaag gccgtatgga caccggtcgt agtattaatc cgctggatct ggatccggcc 420
gatattggtg acctggctgg taaagttcgc ccggaactgg atcaggatcg taccggtcag 480
gatcatgccc ctggtcctat gattggtggt cgtgcactga ttggccgtct gttagcagcc 540
gttcagagca caggtaaagc cgaactgcgt accgaaagcg tgctgacaag tctgattgtt 600
gaagatggcc gcgttgtggg tgcagaagtg gaatcaggcg gtgaaaccca gcgcattaag 660
gccaatcgtg gcgttctgat ggcagccggt ggtattgaag gcaatgccga aatgcgcgaa 720
caggccggta cccctggtaa agcaatttgg agcatgggtc cgtttggcgc caataccggt 780
gacgcaatta gtgccggtat tgcagttggc ggcgcaacag cactgctgga ccaggcatgg 840
ttttgtccgg gtgtggaaca gccggatggt agtgcagcat tcatggtggg tgttcgcggc 900
ggtttagttg ttgatagcgc aggtgaacgc tatctgaatg aaagcctgcc gtatgatcag 960
tttggtcgtg caatggatgc acatgatgat aatggcagcg cagtgccgag ttttatgatt 1020
tttgatagcc gcgaaggggg tggcctgcct gcaatctgca ttcctaatac cgcaccggcc 1080
aaacatctgg aagcaggtac ctgggttggt gccgatacct tagaagaact ggccgccaaa 1140
accggtctgc ctgcagacgc attacgctca accgtggaaa aattcaatga cgcagccaaa 1200
ctgggtgtgg atgaagaatt tcatcgcggt gaagatccgt atgatgcctt tttctgcccg 1260
ccgaatggcg gtgcaaatgc agcattaacc gcaattgaaa acggcccgtt ttatgcagcc 1320
cgtattgtgc tgagtgatct gggcaccaaa ggtggcctgg ttaccgatgt taatggtcgt 1380
gttctgcgcg ccgatggtag tgccattgat ggtctgtatg ccgcaggcaa taccagtgcc 1440
agcctgagcg gtagatttta tccgggtccg ggtgtgccgc tgggtaccgc aatggtgttt 1500
agttatcgtg cagcacagga tatggccaaa taa 1533
<210> 2
<211> 510
<212> PRT
<213> Rhodococcus erythropolis
<400> 2
Met Gln Asp Trp Thr Ser Glu Cys Asp Val Leu Val Val Gly Ser Gly
1 5 10 15
Gly Gly Ala Leu Thr Gly Ala Tyr Thr Ala Ala Ala Gln Gly Leu Thr
20 25 30
Thr Ile Val Leu Glu Lys Thr Asp Arg Phe Gly Gly Thr Ser Ala Tyr
35 40 45
Ser Gly Ala Ser Ile Trp Leu Pro Gly Thr Gln Val Gln Glu Arg Ala
50 55 60
Gly Leu Pro Asp Ser Thr Glu Asn Ala Arg Thr Tyr Leu Arg Ala Leu
65 70 75 80
Leu Gly Asp Ala Glu Ser Glu Arg Gln Asp Ala Tyr Val Glu Thr Ala
85 90 95
Pro Ala Val Val Ala Leu Leu Glu Gln Asn Pro Asn Ile Glu Phe Glu
100 105 110
Phe Arg Ala Phe Pro Asp Tyr Tyr Lys Ala Glu Gly Arg Met Asp Thr
115 120 125
Gly Arg Ser Ile Asn Pro Leu Asp Leu Asp Pro Ala Asp Ile Gly Asp
130 135 140
Leu Ala Gly Lys Val Arg Pro Glu Leu Asp Gln Asp Arg Thr Gly Gln
145 150 155 160
Asp His Ala Pro Gly Pro Met Ile Gly Gly Arg Ala Leu Ile Gly Arg
165 170 175
Leu Leu Ala Ala Val Gln Ser Thr Gly Lys Ala Glu Leu Arg Thr Glu
180 185 190
Ser Val Leu Thr Ser Leu Ile Val Glu Asp Gly Arg Val Val Gly Ala
195 200 205
Glu Val Glu Ser Gly Gly Glu Thr Gln Arg Ile Lys Ala Asn Arg Gly
210 215 220
Val Leu Met Ala Ala Gly Gly Ile Glu Gly Asn Ala Glu Met Arg Glu
225 230 235 240
Gln Ala Gly Thr Pro Gly Lys Ala Ile Trp Ser Met Gly Pro Phe Gly
245 250 255
Ala Asn Thr Gly Asp Ala Ile Ser Ala Gly Ile Ala Val Gly Gly Ala
260 265 270
Thr Ala Leu Leu Asp Gln Ala Trp Phe Cys Pro Gly Val Glu Gln Pro
275 280 285
Asp Gly Ser Ala Ala Phe Met Val Gly Val Arg Gly Gly Leu Val Val
290 295 300
Asp Ser Ala Gly Glu Arg Tyr Leu Asn Glu Ser Leu Pro Tyr Asp Gln
305 310 315 320
Phe Gly Arg Ala Met Asp Ala His Asp Asp Asn Gly Ser Ala Val Pro
325 330 335
Ser Phe Met Ile Phe Asp Ser Arg Glu Gly Gly Gly Leu Pro Ala Ile
340 345 350
Cys Ile Pro Asn Thr Ala Pro Ala Lys His Leu Glu Ala Gly Thr Trp
355 360 365
Val Gly Ala Asp Thr Leu Glu Glu Leu Ala Ala Lys Thr Gly Leu Pro
370 375 380
Ala Asp Ala Leu Arg Ser Thr Val Glu Lys Phe Asn Asp Ala Ala Lys
385 390 395 400
Leu Gly Val Asp Glu Glu Phe His Arg Gly Glu Asp Pro Tyr Asp Ala
405 410 415
Phe Phe Cys Pro Pro Asn Gly Gly Ala Asn Ala Ala Leu Thr Ala Ile
420 425 430
Glu Asn Gly Pro Phe Tyr Ala Ala Arg Ile Val Leu Ser Asp Leu Gly
435 440 445
Thr Lys Gly Gly Leu Val Thr Asp Val Asn Gly Arg Val Leu Arg Ala
450 455 460
Asp Gly Ser Ala Ile Asp Gly Leu Tyr Ala Ala Gly Asn Thr Ser Ala
465 470 475 480
Ser Leu Ser Gly Arg Phe Tyr Pro Gly Pro Gly Val Pro Leu Gly Thr
485 490 495
Ala Met Val Phe Ser Tyr Arg Ala Ala Gln Asp Met Ala Lys
500 505 510

Claims (6)

1.一种醋酸泼尼松的合成方法，其特征在于，包括以下步骤：
以醋酸可的松为底物，将醋酸可的松与氢受体、助溶剂、脱氢酶进行混合，并置于水相缓冲液中进行酶促反应，得到所述的醋酸泼尼松；所述氢受体为黄素腺嘌呤二核苷酸；所述脱氢酶的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示；所述脱氢酶的氨基酸序列如序列表SEQID NO:2所示；所述脱氢酶以湿菌体、酶液或酶粉的形式存在；当所述脱氢酶以湿菌体或酶液的形式存在时，其与醋酸可的松的质量比为1:(1-10)；当所述脱氢酶以酶粉的形式存在时，其与醋酸可的松的质量比为1:(5-60)；所述氢受体与所述醋酸可的松的摩尔比为(1-2):1。
2.根据权利要求1所述的一种醋酸泼尼松的合成方法，其特征在于，所述的助溶剂为二甲基亚砜或甲醇。
3.根据权利要求1或2所述的一种醋酸泼尼松的合成方法，其特征在于，所述助溶剂与水相缓冲液的体积比为(5~30):(70~95)。
4.根据权利要求1所述的一种醋酸泼尼松的合成方法，其特征在于，所述水相缓冲液为磷酸缓冲盐溶液或三乙醇胺缓冲液。
5.根据权利要求4所述的一种醋酸泼尼松的合成方法，其特征在于，所述水相缓冲液的pH值为7~9。
6.根据权利要求1所述的一种醋酸泼尼松的合成方法，其特征在于，所述步骤中，酶促反应的温度为30~40℃。
CN202010302806.1A 2020-04-16 2020-04-16 一种醋酸泼尼松的合成方法 Active CN111485011B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010302806.1A CN111485011B (zh) 2020-04-16 2020-04-16 一种醋酸泼尼松的合成方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010302806.1A CN111485011B (zh) 2020-04-16 2020-04-16 一种醋酸泼尼松的合成方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111485011A CN111485011A (zh) 2020-08-04
CN111485011B true CN111485011B (zh) 2023-07-28

Family

ID=71812863

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010302806.1A Active CN111485011B (zh) 2020-04-16 2020-04-16 一种醋酸泼尼松的合成方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111485011B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104370988A (zh) * 2014-11-07 2015-02-25 浙江仙琚制药股份有限公司 醋酸泼尼松的制备方法
CN105734107A (zh) * 2016-04-05 2016-07-06 苏州汉酶生物技术有限公司 一种酶法制备甾体消炎药泼尼松龙的方法
CN105779552A (zh) * 2016-04-05 2016-07-20 苏州汉酶生物技术有限公司 一种酶法制备甾体消炎药醋酸泼尼松龙的方法
CN108588163A (zh) * 2018-04-28 2018-09-28 浙江仙琚制药股份有限公司 制备醋酸泼尼松的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104370988A (zh) * 2014-11-07 2015-02-25 浙江仙琚制药股份有限公司 醋酸泼尼松的制备方法
CN105734107A (zh) * 2016-04-05 2016-07-06 苏州汉酶生物技术有限公司 一种酶法制备甾体消炎药泼尼松龙的方法
CN105779552A (zh) * 2016-04-05 2016-07-20 苏州汉酶生物技术有限公司 一种酶法制备甾体消炎药醋酸泼尼松龙的方法
CN108588163A (zh) * 2018-04-28 2018-09-28 浙江仙琚制药股份有限公司 制备醋酸泼尼松的方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Zhang H等.Construction of engineered Arthrobacter simplex with improved performance for cortisone acetate biotransformation.《Appl Microbiol Biotechnol》.2013,第 第97卷 卷(第 第97卷 期),第9503-9514页. *
佚名.WP_020909157.《GenBank》.2020,第1页. *
徐慧静等.甾体激素药物的生物转化研究进展.《生物加工过程》.2019,第第17卷卷(第第17卷期),第542-550页. *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111485011A (zh) 2020-08-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108048417B (zh) 酮还原酶突变体及其应用
WO2017119731A1 (ko) Co 수화효소 및 이를 이용한 개미산의 제조방법
CN112662638B (zh) 一种r-选择性苯乙烯单加氧酶的功能
Andreesen et al. Various functions of selenols and thiols in anaerobic Gram‐positive, amino acids‐utilizing bacteria
Dickert et al. Molecular characterization of phenyllactate dehydratase and its initiator from Clostridium sporogenes
CN111235123B (zh) 一种醇溶液高浓度耐受的羰基还原酶及其应用
CN107805648B (zh) 制备具有多个手性中心的胺化合物的方法
CN110643557B (zh) 一种基因工程菌的构建及其在高效催化5α-雄烯二酮生产中的应用
CN111485011B (zh) 一种醋酸泼尼松的合成方法
Pei et al. Two “classical” old yellow enzymes from Chryseobacterium sp. CA49: broad substrate specificity of Chr-OYE1 and limited activity of Chr-OYE2
WO2019140682A1 (zh) 酮还原酶突变体及其应用
Xu et al. Rational design of fatty acid photodecarboxylase enables the efficient decarboxylation of medium-and short-chain fatty acids for the production of gasoline bio-alkanes
CN111041009B (zh) 一种短链脱氢酶及其突变体与基因的制备及应用
WO2020020844A1 (en) Process for the manufacture of nitrile compounds
CN112195198B (zh) 一种制备d-泛解酸的方法
CN107287256A (zh) 全细胞催化合成l-2-哌啶甲酸的方法
CN114457127A (zh) 一种重组工程菌及其构建方法和其应用
CN111254170B (zh) 一种多酶耦合制备(s)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸的方法
CN108690836A (zh) 一种环己酮单加氧酶及其在合成拉唑中的应用
CN107312787B (zh) 融合蛋白基因、工程菌及其在制备9α-羟基-雄烯二酮中的应用
JP5517118B2 (ja) １α，２５，２６−トリヒドロキシビタミンＤの製造方法
CN111254181A (zh) 一种化学酶法制备(s)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸的方法
CN111254180A (zh) 一种酶法拆分制备(s)-1,2,3,4-四氢异喹啉-3-甲酸的方法
CN112442523B (zh) 一种酶法拆分制备(r)-1,2,3,4-四氢异喹啉-1-甲酸及其衍生物的方法
CN108504701A (zh) 一种异丙甲草胺中间体的合成方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant