CN111466401A - 一种杀菌组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种杀菌组合物及其应用，属于植物防治领域。本发明将2‑苯乙醇和咪鲜胺锰盐混合防治芒果叶斑病，发现50％‑70％的5g/L 2‑苯乙醇水溶液和30％‑50％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液的防治效果显著高于单一药剂处理，杀菌组合物比咪鲜胺锰盐防效提高3％‑21％，比2‑苯乙醇单独防治效果提高112％‑193％。2‑苯乙醇与咪鲜胺锰盐混配可以显著提高防治效果，减少咪鲜胺锰盐的用量，实现减药增效。

Description

一种杀菌组合物及其应用

技术领域

本发明涉及植物保护领域，特别是涉及一种杀菌组合物及其芒果植株病害防治中的应用。

背景技术

2-苯乙醇(Phenylethyl alcohol)是一种具有玫瑰香气的芳香醇，广泛存在于自然界中，如新鲜水果(如番茄、苹果、香蕉、葡萄等)、花卉(如玫瑰)及酵母(如酿酒酵母)中均有存在，并且是奶酪、面包、啤酒、葡萄酒、可可、咖啡等多种食品的香气主要成分(方静凡.苯乙醇对柑橘青霉及生防菌34-9的作用研究[D].华中农业大学,2013.)。2-苯乙醇作为食品添加剂，在美国获得了FDA(食品药品监督管理局)的安全认证，在欧洲可以2mg/kg浓度用于人造香精。2-苯乙醇被广泛应用于日化产品及食品工业中，据估计每年有接近700,000kg的2-苯乙醇被添加于食品中(Maarse H,Visscher CA,Willensens L,BoelensMH.Volatile Components in Food-Qualitative and Quantitative Data.CentralInstitute Voor Voedingsondezioke.TNO Zeist,The Netherlands.2000)。目前，还未发现2-苯乙醇对人有刺激性或过敏的报道(陆军.微生物转化L-苯丙氨酸生成2-苯乙醇的研究[D].江南大学，2008)。

1953年，Lilley&Brewer首次报道了2-苯乙醇对革兰氏阴性菌(G^-)生长具有抑制作用，随后有研究发现2-苯乙醇对部分革兰氏阳性菌(G+)及真菌也具有抑菌活性(方静凡.苯乙醇对柑橘青霉及生防菌34-9的作用研究[D].华中农业大学,2013.)。在茶叶蜜环菌根腐病生防菌哈茨木霉菌(Trichoderma harzianum)和枝木霉菌(Trichodermalongibrachiatum)(Tarus PK,Lang′at-Thoruwa CC,Wanyonyi AW,Chhabra SC.Bioactivemetabolites from Trichoderma haraianum and Trichodermalongibrachiatum.Bulletin of the Chemical Society of Ethiopia，2003,17:185-190)、柑橘青霉生防菌柠檬形克勒克酵母(Klaeckera apiculata,3 4-9)(刘普.柑橘采后生防菌柠檬形克勒克酵母(34-9)产生的活性物质及其他抑菌机制的研究[D].华中农业大学，2011)、采后灰霉菌病原体的生防酵母异常毕赤酵母(Pichia anomala，SKM-T)(Mo EK,Kang HJ,Lee CT,Xu BJ,Kim JH,Wang QJ,Kim JC,Sung CK.Identification ofphenylethyl alcohol and other volatile flavor compounds from yeasts,Pichiafarinosa SKM-1,Pichia anomala SKM-T,and Galactomyces geotrichum SJM-59.Journal of Microbiology and Biotechnology,2003,13:800-808)等生防菌株的代谢产物中均有2-苯乙醇存在，同时证明2-苯乙醇具有较强抑菌活性。在PDA平板上，2-苯乙醇对柑橘绿霉病病菌、柑橘炭疽病病菌、柑橘酸腐病病菌、柑橘黑腐病病菌、苹果青霉病病菌、苹果灰霉病病菌、芒果炭疽病病菌、芒果蒂腐病病菌、番茄早疫病病菌、番茄根霉腐烂病病菌、葡萄灰霉病病菌、葡萄根霉腐烂病菌病均具有良好的抑菌效果(方静凡.苯乙醇对柑橘青霉及生防菌34-9的作用研究[D].华中农业大学,2013.)。

咪鲜胺(prochloraz)是一种广谱咪唑类杀菌剂，能够防治子囊菌和半知菌在作物上引起的病害，广泛运用于农业生产以及瓜果蔬菜类的保鲜和存储。由于其高效的抑菌作用，咪鲜胺的使用量逐年增加，目前国内用量已达8000吨(杨绪俊.咪鲜胺合成工艺改进的研究[D].南昌大学,2016.)。随着咪鲜胺的广泛使用，病原菌抗药性提高，药效降低，同时带来了环境污染问题。

芒果(Mangifera indica Linn.)为漆树科(Anacardiaceae)芒果属植物，在100多个国家和地区均有种植，我国是世界芒果重要的生产国之一，主要分布于海南、广东、广西、云南、四川和福建(胡美姣.芒果果实潜伏侵染、Botryodiplodia theobromae致腐机理及蒂腐病防治技术基础研究[D].海南大学,2013.)。芒果生长期叶片可发生炭疽病、拟盘多毛孢、拟茎点霉等多种病原菌导致的叶斑病，一般年份发病率30％，严重可达100％，造成严重的经济损失。目前，对芒果叶斑病的防治主要采用化学手段，施用如吡唑醚菌酯、咪鲜胺、咪鲜胺锰盐等化学药剂。化学杀菌剂高浓度的滥用极易导致病原菌抗药性提高和环境污染问题，严重影响食品安全。

发明内容

针对上述领域中的缺陷，本发明选择食品添加剂2-苯乙醇与咪鲜胺锰盐按照不同比例混配，可以延缓病原菌抗药性的产生，显著提高防病效果，减少化学农药的用量，实现减药增效，从而减少农药对环境的污染。

本发明的另一目的是提供2-苯乙醇与咪鲜胺锰盐的组合杀菌剂在防治植物病害(特别是芒果叶斑病)中的应用。

一种杀菌组合物，由下列组分及其体积百分比组成：

50％-70％的5g/L 2-苯乙醇水溶液：30％-50％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液；

优选：60％的5g/L 2-苯乙醇水溶液：40％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液。

一种杀菌组合物在防治芒果叶斑病中的应用，所述杀菌组合物为体积比50％-70％的5g/L2-苯乙醇水溶液：30％-50％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液。

优选:体积比60％的5g/L 2-苯乙醇水溶液：40％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液。

所述防治芒果叶斑病为防治芒果植株叶斑病。

为了实现本发明目的，发明人通过实验证明2-苯乙醇对芒果叶斑病病原菌及其他11种病原真菌的抑菌作用，当在PDA平板中添加的2-苯乙醇浓度达到100ul/20mL时，对病原菌的抑制率均到达100％。同时，通过实验表明2-苯乙醇混合咪鲜胺锰盐对芒果叶斑病及芒果果实采后病害具有防治作用。使用5ml/L(2-苯乙醇比重约为1g/ml)2-苯乙醇和1g/L咪鲜胺锰盐按不同比例体积进行混合，8:2、7:3、6:4、5:5、3:7混合比例处理组对芒果叶斑病防治效果优于单独使用1g/L咪鲜胺锰盐或5ml/L 2-苯乙醇，其中60％混合比例处理组防治效果高达72％。

本发明将2-苯乙醇和咪鲜胺锰盐混合对芒果植株叶斑病进行处理，表明50％-70％的5g/L2-苯乙醇水溶液和30％-50％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液较单一溶液的防治要好，2-苯乙醇与咪鲜胺锰盐在防治叶斑病方面具有增效作用。

附图说明

图1不同浓度2-苯乙醇对芒果叶斑病菌葡萄座腔菌YB11-2的抑制实验，

图2不同浓度2-苯乙醇对11种病原真菌的抑制实验，

图3不同体积比例混合2-苯乙醇+咪鲜胺锰盐对芒果叶斑病的防治实验，

其中A:无菌水浸泡，B:5ml/l 2-苯乙醇接种，C:1g/l咪鲜胺接种，D:5ml/l 2-苯乙醇未接种葡萄座腔菌，E:1g/l咪鲜胺未接种葡萄座腔菌，F:90％2-苯乙醇，G:80％2-苯乙醇，H:70％2-苯乙醇，I:60％2-苯乙醇，J:50％2-苯乙醇，K:40％2-苯乙醇，L:30％2-苯乙醇，M:20％2-苯乙醇，N:10％2-苯乙醇。(说明90％2-苯乙醇表示体积比：浓度为5ml/l的2-苯乙醇：浓度为1g/l咪鲜胺＝90％：10％，其余表示相同)

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明。

实施例1 2-苯乙醇对芒果叶斑病菌的抑菌活性测定

在PDA平板培养芒果蒂腐病菌葡萄座腔菌YB11-2(Botryosphaeria dothidea)，室温培养3天后用灭菌的5mm打孔器在平板菌落边缘打取菌饼。用灭菌量筒量取20ml融化的PDA培养基，分别加入1ul,10ul,100ul,1000ul 2-苯乙醇，混合均匀后倒入直径为9cm的平板中，配成2-苯乙醇浓度分别为1ul/20ml,10ul/20ml,100ul/20ml,1000ul/20ml的PDA平板。将直径为5mm的病原菌菌饼用灭菌的牙签转到平板中央，在25摄氏度培养箱进行培养。以不加入2-苯乙醇培养的病原菌为对照，每个处理三个重复。待对照组长满培养皿时，利用十字交叉法测量病原菌菌落直径，计算抑菌率。计算公式如下：

抑菌率(％)＝(对照菌落半径-处理菌落半径)/对照菌落半径×100％

25摄氏度培养3天后，空白对照组YB11-2菌丝长满PDA平板，气生菌丝发达；在1ul/20ml平板上YB11-2菌丝长满平板，抑菌率仅2％，无明显抑制效果，但是气生菌丝较空白对照明显减少；在10ul/20ml平板上YB11-2菌丝生长明显受到抑制，抑菌率达到57％；在100ul/20ml及1000ul/20ml平板上未见菌丝生长，抑菌率达100％。见图1所示。

实施例2 2-苯乙醇对11种病原真菌的抑菌活性测定

选取11种分离自芒果叶斑病样的病原菌(表1)在PDA平板上进行培养，室温培养3天后用灭菌的5mm打孔器在平板菌落边缘打取菌饼。用灭菌量筒量取20ml融化的PDA培养基，分别加入1ul,10ul,100ul,1000ul 2-苯乙醇，混合均匀后倒入直径为9cm的平板中，制成2-苯乙醇浓度分别为1ul/20ml,10ul/20ml,100ul/20ml,1000ul/20ml的平板。将病原菌菌饼用灭菌的牙签转到平板中央，在25摄氏度培养箱进行培养。以不加入2-苯乙醇培养的病原菌为对照，待对照组长满培养皿时，利用十字交叉法对病原菌菌落进行测量，每种病原菌三个重复。

表1文中所用菌株

不同浓度(1ul/20ml、10ul/20ml、100ul/20ml及1000ul/20ml)的2-苯乙醇对11种病原真菌均具有一定抑制作用，且抑菌效果差异显著。在100ul/20ml和1000ul/20ml的平板上11种真菌均未见菌丝生长，抑制率达100％。在1ul/20ml平板上，2-2-苯乙醇对11种真菌均有抑制效果。其中，对胶孢炭疽菌株FY25-1及拟茎点霉菌株YB20-2的抑制效果最好，菌落直径较空白对照组明显减小，抑菌率达46％，但对部分菌丝生长速率较快的真菌抑制效果较弱。在10ul/20ml平板上，2-苯乙醇对11种真菌均有明显抑制效果，抑菌率均在30％以上。其中对间座壳属真菌YB3抑制效果最好，抑菌率达到85％。见图2所示。

表2 2-苯乙醇对11种病原真菌的抑制率

实施例3 2-苯乙醇混合咪鲜胺锰盐对芒果叶斑病的防治实验

分别配制5ml/l 2-苯乙醇，1g/L咪鲜胺锰盐两种药液作为母液，并以不同比例进行混合(9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9)选取无明显病害的健康芒果叶片，分别在两种母液以及不同比例混合药液中浸泡5分钟。用灭菌的5mm打孔器在YB11-2平板菌落边缘打取菌饼。用灭菌的牙签在芒果叶片进行6次刺伤，伤口大致为圆形，用灭菌的牙签将菌饼接种到刺伤处，对照组接种空白琼脂块。接种后的芒果叶片放置于垫有用无菌水浸湿的带盖塑料盒中，每个塑料盒中放置6片芒果叶片，为一个重复，每个处理组3个重复。处理后的叶片在28摄氏度保湿培养，4天后，用十字交叉法测量叶片病斑，计算防治效果，计算公式如下：

防治效果(％)＝(对照菌落半径-处理菌落半径)/对照菌落半径×100％

在28摄氏度保湿培养4天后，接种葡萄座腔菌菌株YB11-2的芒果叶片刺伤部位产生明显的病斑，用无菌水浸泡处理的芒果叶片发病最严重，平均叶斑直径为1.90厘米。用5ml/l2-苯乙醇，1g/L咪鲜胺锰盐两种药液浸泡且未刺伤的芒果叶片未见变化。用5ml/L 2-苯乙醇及1g/L咪鲜胺锰盐浸泡的芒果叶片发病情况都有所减弱，前者抑菌率为24％，后者抑菌率为59％。以不同体积比例进行混合的2-苯乙醇混合咪鲜胺锰盐药剂对芒果叶斑病均有防治效果(表4)，但抑菌率与浓度比例不成线性关系(图3)。以9:1、8:2、7:3、6:4、5:5、4:6、3:7、2:8、1:9的体积比例与咪鲜胺锰盐混合的处理组，防治效果均显著优于单独使用5ml/l2-苯乙醇处理组的防治效果，其中8:2、7:3、6:4、5:5、3:7混合比例处理组防治效果优于单独使用1g/L咪鲜胺锰盐处理的防治效果。以6:4体积比例混合的2-苯乙醇咪鲜胺锰盐对芒果葡萄座腔菌导致的芒果叶斑病防治效果最好，防病效果达72％。

表3 2-苯乙醇混合咪鲜胺锰盐对芒果叶斑病的防治效果

Claims (5)

1.一种杀菌组合物，由下列组分及其体积百分比组成：

50％-70％的5g/L 2-苯乙醇水溶液和30％-50％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液。

2.根据权利要求1所述的杀菌组合物，由下列组分及其体积百分比组成60％的5g/L 2-苯乙醇水溶液：40％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液。

3.一种杀菌组合物在防治芒果叶斑病中的应用，所述杀菌组合物为由体积比50％-70％的5g/L 2-苯乙醇水溶液和30％-50％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液组成。

4.根据权利要求3所述的应用，所述杀菌组合物为由体积比60％的5g/L 2-苯乙醇水溶液：40％的1g/L咪鲜胺锰盐水溶液组成。

5.根据权利要求3所述的应用，所述防治芒果叶斑病为防治芒果植株叶斑病。

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