CN111454960B - 一种检测帕金森病的诊断试剂盒 - Google Patents

一种检测帕金森病的诊断试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN111454960B
CN111454960B CN202010283236.6A CN202010283236A CN111454960B CN 111454960 B CN111454960 B CN 111454960B CN 202010283236 A CN202010283236 A CN 202010283236A CN 111454960 B CN111454960 B CN 111454960B
Authority
CN
China
Prior art keywords
reagent
gene
amplification
detecting
mutation
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010283236.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111454960A (zh
Inventor
商慧芳
陈永平
欧汝威
顾孝静
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
West China Hospital of Sichuan University
Original Assignee
West China Hospital of Sichuan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by West China Hospital of Sichuan University filed Critical West China Hospital of Sichuan University
Priority to CN202010283236.6A priority Critical patent/CN111454960B/zh
Publication of CN111454960A publication Critical patent/CN111454960A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111454960B publication Critical patent/CN111454960B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种检测帕金森病的诊断试剂盒，属于疾病检测试剂领域。本发明首先公开了一种基因突变，所述突变为位于人类CHCHD2基因的c.156_157insGCAG突变位点。本发明还公开了检测前述基因突变的帕金森病筛查试剂盒。本发明的帕金森病筛查试剂盒能够识别全新的帕金森病致病基因CHCHD2的c.156_157insGCAG突变位点，扩大了目前帕金森病致病基因检测的范围，提高了帕金森病的筛查准确度，降低了假阴性。

Description

一种检测帕金森病的诊断试剂盒
技术领域
本发明属于疾病检测试剂领域。
背景技术
帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)又称为震颤性麻痹，是一种以静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势步态异常等运动症状为核心症状的神经退行性疾病，其主要的病理特征是黑质致密部多巴胺能神经元缺失、黑质纹状体退化及残存的神经元胞浆内Lewy小体的形成等。PD好发于中老年人群，是第二常见的神经系统退行性疾病(65岁以上人群的平均患病率为1.6-1.7％，80岁时其患病率为4％)。目前我国约有200万PD患者。该病起病隐匿，进行性加重，逐渐出现疗效减退、症状波动及异动症，目前仅为对症治疗，不能根治，给患者及其家庭乃至社会带来了极大的负担。
PD作为一种复杂的神经退行性疾病，研究显示遗传因素在疾病的发生发展中扮演了重要的角色。基因检测作为一种重要的临床辅助诊断手段，其不但可以对PD患者进行精准的诊断，同时根据基因检测结果可以判断疾病的预后，指导疾病的治疗，同时对于年轻的患者可以指导其进行遗传咨询，优生优育。
研究发现，已有超过27个基因与PD的发病相关，对这些基因的突变位点进行检测，可辅助PD的筛查。
目前，主流的基因检测包括基因靶向测序、全外显子和全基因组测序等高通量检测方法，也包括sanger测序、多重连接依赖探针扩增(MLPA)、限制性片段长度多态性等低通量检测方法。可供PD筛查的技术十分成熟且多样化。然而，这些检测方法各有优劣，且发明人既往的研究及其他的一些研究显示，不同种族PD患者的遗传学特征存在较大的异质性，这些单基因突变可解释的PD患者为5％-10％，容易漏检。目前已知的PD致病基因突变位点的集合还有待持续更新完善，以逐步减少漏检的情形。
发明内容
本发明要解决的问题是：提供一种PD相关的新的基因突变，及其在制备PD筛查试剂中的应用。
本发明的技术方案如下：
一种突变基因，所述突变基因为携带c.156_157insGCAG突变位点的人类CHCHD2基因。
检测前述突变基因或序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂在制备帕金森病筛查试剂盒中的用途。
如前述的用途，所述检测突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
如前述的用途，所述检测突变基因的试剂包括扩增试剂；
所述扩增试剂是扩增前述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
如前述的用途，所述扩增试剂包括扩增引物；
所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物；
优选的，所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
一种帕金森病筛查试剂盒，所述试剂盒包括检测前述突变基因的试剂或检测序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂。
如前述的试剂盒，所述检测突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
如前述的试剂盒，所述检测突变基因的试剂包括扩增试剂；
所述扩增试剂是扩增前述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
如前述的试剂盒，所述扩增试剂包括扩增引物；
所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物。
如前述的试剂盒，所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
CHCHD2基因，全称为coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domaincontaining2基因，Ensembl编号：ENSG00000106153，广泛表达于多种器官。既往的研究显示，CHCHD2基因突变导致了常染色体显性遗传的帕金森病(autosomal dominantpakinson’disease,ADPD)，认为CHCHD2是帕金森病的致病基因。
术语c.156_157insGCAG是本领域对基因突变的一种常规表示形式，其中c表示代表编码蛋白的DNA序列，156_157insGCAG表示在第156碱基和157碱基之间插入GCAG碱基。
CHCHD2基因的野生型序列如SEQ ID NO.1所示，翻译得到的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；携带c.156_157insGCAG突变的CHCHD2基因序列如SEQ ID NO.3所示，该突变导致其编码的蛋白质氨基酸序列第53位野生型脯氨酸(P)变为缬氨酸(A)，同时造成了框移突变，导致其在编码37个氨基酸后提前终止翻译蛋白质，表示为(记为p.P53Afs*37)，其蛋白质氨基酸序列为SEQ ID NO.4。
本发明首次公开并验证了c.156_157insGCAG突变的CHCHD2基因是帕金森病的致病基因，扩充了帕金森病致病基因CHCHD2的突变谱。
本发明的帕金森病筛查试剂盒能够识别全新的帕金森病致病基因突变位点，扩大了目前帕金森病基因检测的范围，提高了帕金森病的筛查准确度，一定程度降低了假阴性。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1：测序信号峰图。
图2：患者遗传家系图。
具体实施方式
实施例1本发明的测序试剂盒
本发明试剂盒中的全部组分、含量和使用方法如下：
1.PCR扩增试剂(50人份)：
PCR扩增试剂用于扩增突变位点所在的一段DNA序列，其组成见表1。
表1 PCR扩增试剂
Figure BDA0002446457180000031
表1中PCR混合液包括Taq酶、dNTP、镁离子等常规PCR所需成分；其中引物对信息如表2所示。
表2 CHCHD2基因扩增所用引物
Figure BDA0002446457180000041
2.使用方法：
1)DNA提取
取患者全血(EDTA抗凝)2ml，提取其基因组DNA。
2)通过PCR扩增含有所检测的突变位点的DNA片段，每个样本PCR扩增体系如表3所示：
表3 PCR扩增体系
试剂名称 试剂量(ul)
2×PCRmix 25
引物(10nm) 2
模板DNA(50-100ng/ul) 1
ddH<sub>2</sub>O 23
总量 50
反应条件如表4所示：
表4 PCR条件
Figure BDA0002446457180000042
PCR产物检测：
用2％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物，观察PCR反应的效果，并确定其作为模板在后续反应中加入的量。
3)Sanger测序检测
针对不同的琼脂糖凝胶电泳检测结果，采用产物直接纯化(电泳结果为单一的条带)或者凝胶回收纯化(电泳结果存在非特异性条带)的方法纯化PCR产物，将纯化的PCR产物采用ABI 3730XL测序仪进行测序。
如果PCR产物测序结果出现杂合双峰(如图1)，则说明该检测样本携带CHCHD2基因c.156_157insGCAG突变。
以下将以实验例的形式对本发明的有益效果做进一步说明。该实验例由国家重点研发计划资助项目(编号2016YFC0901504)、国家自然科学基金面上资助项目(编号：81871000)和四川大学华西医院“学科卓越发展135工程”项目(编号：ZYJC18038，ZYJC18003)资助。
实验例1突变位点致病性的验证
1.样本采集与处理
发明人通过对帕金森病患者及其家庭进行详细的病史、家族史的调查，及全面的体格检查和相关的辅助检查断。根据英国脑库帕金森病诊断指南及2015版国际帕金森病诊断指南，收集了700例帕金森病患者(具有显性遗传家族史的帕金森病患者400例，不具有家族史的散发性帕金森病患者300例)，签署知情同意书后，每人取肘静脉血5ml(EDTA抗凝)，4℃或者-20°保存，根据第二版《分子克隆》提取DNA的方法提取DNA。此外，对部分具有家族史的先证者，同时收集了其相关家庭成员的外周血。
2.CHCHD2(c.156_157insGCAG,p.P53Afs*37)的识别
对400例显性遗传帕金森病(ADPD)患者采用全外显子测序技术检测全部基因组的外显子序列遗传变异，结合多重连接依赖式探针扩增试剂盒(MRC-Holland,P051-D1)检测PARK2,PINK1,DJ1和ATP13A2基因的外显子区域的缺失和插入，发现2例ADPD患者携带CHCHD2(c.156_157insGCAG,p.P53Afs*37)，同时采用sanger测序对该突变位点进行验证。
CHCHD2蛋白属于CHCHD蛋白家族,该家族与线粒体结构关系密切,与细胞色素C氧化酶(COX)相互作用以增强COX活性,与BCL-XL直接相互作用抑制细胞凋亡等，先前的研究发现该基因突变与帕金森病、路易体痴呆、亨廷顿舞蹈病等神经变疾病有关，目前已有研究发现，CHCHD2基因的c.182C>T(p.T61I)突变、c.5C>T突变和c.196G>A(p.Val66Met)突变是PD的致病突变。而本发明中的CHCHD2突变(c.156_157insGCAG,p.P53Afs*37)，为蛋白截短突变，该突变导致CHCHD2蛋白缺少CHCH核心结构域，引起了loss of function导致的功能不足，根据2015版《ACMG遗传变异分类标准与指南》，属于“非常强致病性证据”PVS1。
注：《ACMG遗传变异分类标准与指南》的中译版可参考：遗传变异分类标准与指南[J].中国科学(生命科学),2017,047(006):668-688.
3.家系分析
发明人对携带这个基因突变的其中1个患者进行了家系共分离分析，发现携带基因突变的患者均发病，而未携带的患者并未发病(图2)，根据2015版《ACMG遗传变异分类标准与指南》，属于致病性证据中的“支持证据”PP1。因此，进一步支持了这个基因突变所致的致病性。
同时，对发病患者的年龄进行了分析，发现这个基因突变不仅出现在早发患者中，在晚发患者中也可检测到。因此，对家系进行分析，提示这个基因突变位点既可存在与早发性病例中，同时也存在与晚发性病例中。
4.对发现的突变位点进一步验证
为了验证本发明的突变位点，发明人对300散发性帕金森病和健康正常对照500例进行了该突变位点的sanger测序验证。所有参加调查和被取样的家庭成员、散发性帕金森病患者及健康正常对照均了解本研究的研究目的和意义，同时签署了知情同意书。样本采集和处理同前述第1节。
对所有样本目的DNA片段进行PCR扩增，引物序列如表2所示反应体系如表3所示，反应条件同表4。按照实施例1的方法进行产物纯化和Sanger测序。应用chromas软件对测序结果进行分析。
测序分析显示：
A.在300例散发性帕金森病患者中发现了1例患者具有CHCHD2(c.156_157insGCAG,p.P53Afs*37)突变。
B.299例散发性帕金森病患者和500例健康正常对照均未发现上述突变及其他致病性突变(致病性突变的标准是：依据2015版《ACMG遗传变异分类标准与指南》可判定为“致病的”的突变)。
5.数据库验证
在gnomAD数据库中查找CHCHD2(c.156_157insGCAG,p.P53Afs*37)突变基因，发现该突变基因频率是1/247008(因为人是2倍体，相当于123504个人中出现1个杂合突变)；而在本实验例中，帕金森病患者中出现该基因突变的比例是3/700，基因突变频率是3/1400，远低于gnomAD数据库中的基因频率。根据《ACMG遗传变异分类标准与指南》，该突变为“变异出现在患病群体中的频率显著高于对照群体”的情形，属于“强致病性证据”PS4。
总之，本实验例从400例显性遗传帕金森病患者和300例散发性帕金森病患者中分别筛选到2例和1例带有CHCHD2(c.156_157insGCAG,p.P53Afs*37)突变基因的患者，同时具备《ACMG遗传变异分类标准与指南》中的致病性证据PVS1、PS4、PP1，属于符合《ACMG遗传变异分类标准与指南》规定的“致病的”突变。
本发明首次公开并验证了CHCHD2基因c.156_157insGCAG位点是帕金森病的致病突变，扩充了帕金森病致病基因CHCHD2的突变谱。将本发明的突变基因用于制备帕金森病的筛查试剂盒，有利于提高帕金森病的筛查准确性。
本发明涉及的部分长序列如下:
1.人类CHCHD2基因序列(SEQ ID NO.1):
Figure BDA0002446457180000071
Figure BDA0002446457180000081
Figure BDA0002446457180000091
2.人类CHCHD2蛋白质(SEQ ID NO.2)：
Figure BDA0002446457180000092
Figure BDA0002446457180000101
3.突变CHCHD2基因(SEQ ID NO.3):
Figure BDA0002446457180000102
Figure BDA0002446457180000111
Figure BDA0002446457180000121
注：矩形框标记处为突变对应位置，
Figure BDA0002446457180000122
为CHCHD2在156位碱基和157位碱基之间插入的4个碱基。
4.突变CHCHD2蛋白(SEQ ID NO.4):
Figure BDA0002446457180000123
SEQUENCE LISTING
<110> 四川大学华西医院
<120> 一种检测帕金森病的诊断试剂盒
<130> GYKH1094-2020P019661CC20JS014
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5069
<212> DNA
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 1
ggcgttgacc gcgaaggacg aggcgtcccc gtgacgtcct gctcttccaa tgaacttcag 60
gcctgcggag acgacggaga acggaagttc tctgcctgtg tgctggttgg ttgcgcgttg 120
aggccagccc cgcctcccat cttccggtct cctcagaagt cgcttagctc ttcggtggtt 180
gtcccacgtc cggaggccta gccgtcgctt acctaggatg ccgcgtggaa gccgaagccg 240
cacctcccgc atggcccctc cggccaggtg agaccatcgc agggtttgag accaaagcgc 300
ggccgtccgg actctactgg ggcaatgacg cagagggagg ccgcgggcgg gggtgaacta 360
aggtcggctg cggcgtgggc tcgcctctgc caggcggggg tagattgaac gtaaagccta 420
tgttagggga gtgtggggag ggaattcact tacggaaaaa gcttcctatc caaacaacgg 480
gaaaggcata acgttatggc caggtggtag gaaggcataa attttgacct agcttgattt 540
cggggaaaag agcacccaag gaaataatcc ggaaatggtc agagggagcg tgatacatat 600
gaagattttt aaatacgtgc aggacataat tagtcttttg ttatttgaga aggggtctcg 660
aaattgttga aagcatctga acgttgaaca gatgaggaat agttgaagtt gcttttggta 720
taatagttca gacgagtcac tttggccagt cttgttttgt aatgtgtaaa atgaaggaat 780
tggactagat tatttcccca gttgaccatc tttaagtcct aattagaatg tttatttatt 840
tatattttga gtcagagtct aactcaggct gtagtgcagt gacgtaatta tggctaactg 900
cagccttgac ttcctgggct caagctattc taccacgtca gcctccagag taactgggac 960
tacaggcatg cgccacctgt gcaccacact tggcgacttt attctatttt atattttagc 1020
agagacaggg tctcattatg tggccctggc tggtctcaaa gtcctggcct caaatgatcc 1080
tttcgcctcc acttccctaa tcactgggat tacaggcaag agccaccact ccgcagccta 1140
tgttaattat ttgatccgtc aataaaatgt aaactccatg aatgcagaga tttttgtctc 1200
ttgttcacag ttacattacc agcgccttgt agttacctaa tacttgaatg aatgaatcct 1260
gtaagaatct ttctaacttt tagtagtctg tatttcttat gacatgttgg atatgtcttt 1320
aaagatactg tgggctatcc gaatacatgg aaattgttgc aaagaagcag aaaaaactag 1380
tatgtcctag gctattacta ttataagaaa agattaaagt ggccgggcgt ggtggctcat 1440
gcctgtaatc ccaacacttt gggaggtcga ggcgggtgga tcacttgagg tcaggagttc 1500
gagacgagcc tggccaacat ggtgaaactc cgtctctact agaaatacaa aaattagcta 1560
ggtgtggtgg tgcgcgcctg taatcccagc tacttgggaa gcggaggcag aagaatcggt 1620
tgaacccagg aggcagaggt tgcagtgaga ttggatcgtg acactgcact ccagtctggg 1680
catcagagtg aggccctgtc tcaaaaaaaa aaaaaaaatt aggccgtgcg tggtggttca 1740
cacctgtaat cccagcactt tgggagtccg aggcgggtgg atcacctgag gtcaggagct 1800
ggagaccagc catggtcacc atagtgaaac ctcgtctcaa ctaaaaatac aaaaaattag 1860
ccggaggtgg tcgcgggtgc ctgtaatccc agctactcgg aaggctgagg caagagaatc 1920
gcttgagtct gggaggtgga ggttgcagtg agctgagatt gcaccattgc actccagcct 1980
gggcaacaag agcgaagctc catctcaaaa aaaaaaaaat tgaagagaga aaatgatgta 2040
aataatttga aatgaaaatc ttgaggtcca ttttaatatg taagttattt taagttgaca 2100
atttccaaaa ctggttggaa ttgggaactt gatgtttttt tcttttcttt cacagccggg 2160
cccctcagat gagagctgca cccaggccag caccagtcgc tcagccacca gcagcggcac 2220
ccccatctgc agttggctct tctgctgctg cgccccggca gccaggtctg atggcccaga 2280
tggcaaccac tgcagctggc gtggctgtgg gctctgctgt ggggcacaca ttgggtcacg 2340
ccattactgg gggcttcagt ggaggaagta atgctgagcc tgcgaggcct gacatcactt 2400
accaggtggg aatttaggca gcatttccct tccatgggtg gattttatga gaaaagccag 2460
acgtttgtaa gttccttaag tgtaggaatt gtctttgatt ttagaaccca ctgtgctgtt 2520
aatagacaat gggttttaaa gccacatttg gccgttgagt tactgcctta ggccagcacc 2580
aacaagtact gtacaaattg tgtttcttcc caaggaggag acttacaaca gtccacttga 2640
ctcactgtaa aacaaccact tttccctttg aatatttcat cccagtgaca cttcctacta 2700
atcttgtctt gatcttagtt aacaaatcaa aaatctcgca tagctgtgtg ttcttttacg 2760
tgatgtttgc cattacccat ctttctgatg tgtgtgggct ttctagtcta atgagcatag 2820
gtgtgtatac tcttgtattt ccggtgtgct tgaaactgct ccatccagtt ttctataata 2880
gtaccatttt tcctccctga agcttcagta aaccatttag tcttgataac aagataataa 2940
ttccacttta tttgcatctt tatttaggaa tctttctggt tgtaattgga attttgttaa 3000
aactgttggc tttcagcttt taaatatttt cacttttggc tgggaacgga ggctcatgcc 3060
tataatccca gcacattggg aggctgaagt gaagggattg cttgaaccca gaagtttgag 3120
accaggctgg gcaacatagc gcaaccctgt ctttactaaa aatatttatt taaattcttc 3180
ttttttggag gtggagtctc gctctgttat ccaggctcca ccgcccgggt tcaagcgatt 3240
ctcctgcctc agcctcccga gtagctggga ttacaggtgc ctgctaccac gcctggctaa 3300
tttttgtatt tttagtaggg acggggtttc accatattgg ccaggctggt ctcaaacgcc 3360
tgacctcaag tgattcaccc ttctcggctt cccaaagtgt tggaattaca ggcgtgagcc 3420
accatgtttg gcctaaaata ttttttaagt aaatgaagat ttaaatgttt tcacttccca 3480
tgttaatagt tggaaacttt aattagcatc tggtgctagt tccattttcc attaacctca 3540
aagaggatgg atactcttca ttgtctaggc ataagtatga ttttctttct cagcaatgtt 3600
gaatgttttg cctttgcagg agcctcaggg aacccagcca gcacagcagc agcagccttg 3660
cctctatgag atcaaacagt ttctggagtg tgcccagaac cagggtgaca tcaagctctg 3720
tgagggtttc aatgaggtgc tgaaacagtg ccgacttgca aacggtaggt aatttgtcca 3780
atttacatct gcttaattca cagtggaatt cctggatcct gtagaactta gggtaatctg 3840
tgtttaataa attagagaag actttgttga aatttctcta gaattaactc ctaacaactg 3900
ggccggaggt ttctagtcat ttttatgagt aattttctga attttcttcc tttagaaggt 3960
ataggccagg cacagtggct cacgcttgta atcccagcac tttgggaggc caagacgggt 4020
ggatcacctg atgtcaggag tttgaggcca gcctggccaa catggcaaaa ccccatctgt 4080
actaaaaata caaaaaatta gctgggtgtg gtggcaggca cctgtaatcc cagctactca 4140
ggaggctgag gcaggagaat tgcttgaacc cgggaggcgg aggttgcagt gagccaagat 4200
cctgccactg cattccagcc tgggcaactg ggtgtctcca gtgggagaca ctgtctcaaa 4260
tttaaaagaa aaaaaaaaaa aagaaggtat aaatcagtat gccagatctt actgtgatta 4320
ctggatgtaa gtgaccttct aaccttaagg ctgcgaatat aagattagat tctgttttca 4380
ccaaaatcca ggaatagaca aaaagactga tacctggtat ctgtacctca ttgagtgaaa 4440
ggagttaatt aagttcctca ggggaactcc ggagattcag ggtgtcttgt tagttgtagg 4500
atgccttcag tagcttacaa acaaaaccat aaccttcctg gaacccagca ctctggaagg 4560
ccaaggtggg aggattgctt gagtccagga gttcgagacc agcctgggca acatagcaag 4620
acctcatctc tattttttat caaaaaaaaa caaaaaacaa aaaacccata gccttggcct 4680
tttgtcgctg ctttcataat ttggaaggct tctgttttat tgagtatacg aagctagcat 4740
tcttctaact taatcttttc tgtttgcagg attggcctaa tgaagaagtt caacctggag 4800
agatggaaaa tcagctctca taactaagtt aatttagtat aaaaatagaa ttgatagtga 4860
gggtataaag tgtaaccatc agttaaacct ctcctgtcat tcctggcttc cttgcttcag 4920
aattgaaatg gaagtggggg tgtccctact ctgtagaatc tgggactggg caaatgtttg 4980
tgtggcctcc ttaaactagc tgttatgtta tgattttatt ctttgtgagt taattagaat 5040
aaagtcattt tcttccaagg tatggttca 5069
<210> 2
<211> 151
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 2
Met Pro Arg Gly Ser Arg Ser Arg Thr Ser Arg Met Ala Pro Pro Ala
1 5 10 15
Ser Arg Ala Pro Gln Met Arg Ala Ala Pro Arg Pro Ala Pro Val Ala
20 25 30
Gln Pro Pro Ala Ala Ala Pro Pro Ser Ala Val Gly Ser Ser Ala Ala
35 40 45
Ala Pro Arg Gln Pro Gly Leu Met Ala Gln Met Ala Thr Thr Ala Ala
50 55 60
Gly Val Ala Val Gly Ser Ala Val Gly His Thr Leu Gly His Ala Ile
65 70 75 80
Thr Gly Gly Phe Ser Gly Gly Ser Asn Ala Glu Pro Ala Arg Pro Asp
85 90 95
Ile Thr Tyr Gln Glu Pro Gln Gly Thr Gln Pro Ala Gln Gln Gln Gln
100 105 110
Pro Cys Leu Tyr Glu Ile Lys Gln Phe Leu Glu Cys Ala Gln Asn Gln
115 120 125
Gly Asp Ile Lys Leu Cys Glu Gly Phe Asn Glu Val Leu Lys Gln Cys
130 135 140
Arg Leu Ala Asn Gly Leu Ala
145 150
<210> 3
<211> 5073
<212> DNA
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 3
ggcgttgacc gcgaaggacg aggcgtcccc gtgacgtcct gctcttccaa tgaacttcag 60
gcctgcggag acgacggaga acggaagttc tctgcctgtg tgctggttgg ttgcgcgttg 120
aggccagccc cgcctcccat cttccggtct cctcagaagt cgcttagctc ttcggtggtt 180
gtcccacgtc cggaggccta gccgtcgctt acctaggatg ccgcgtggaa gccgaagccg 240
cacctcccgc atggcccctc cggccaggtg agaccatcgc agggtttgag accaaagcgc 300
ggccgtccgg actctactgg ggcaatgacg cagagggagg ccgcgggcgg gggtgaacta 360
aggtcggctg cggcgtgggc tcgcctctgc caggcggggg tagattgaac gtaaagccta 420
tgttagggga gtgtggggag ggaattcact tacggaaaaa gcttcctatc caaacaacgg 480
gaaaggcata acgttatggc caggtggtag gaaggcataa attttgacct agcttgattt 540
cggggaaaag agcacccaag gaaataatcc ggaaatggtc agagggagcg tgatacatat 600
gaagattttt aaatacgtgc aggacataat tagtcttttg ttatttgaga aggggtctcg 660
aaattgttga aagcatctga acgttgaaca gatgaggaat agttgaagtt gcttttggta 720
taatagttca gacgagtcac tttggccagt cttgttttgt aatgtgtaaa atgaaggaat 780
tggactagat tatttcccca gttgaccatc tttaagtcct aattagaatg tttatttatt 840
tatattttga gtcagagtct aactcaggct gtagtgcagt gacgtaatta tggctaactg 900
cagccttgac ttcctgggct caagctattc taccacgtca gcctccagag taactgggac 960
tacaggcatg cgccacctgt gcaccacact tggcgacttt attctatttt atattttagc 1020
agagacaggg tctcattatg tggccctggc tggtctcaaa gtcctggcct caaatgatcc 1080
tttcgcctcc acttccctaa tcactgggat tacaggcaag agccaccact ccgcagccta 1140
tgttaattat ttgatccgtc aataaaatgt aaactccatg aatgcagaga tttttgtctc 1200
ttgttcacag ttacattacc agcgccttgt agttacctaa tacttgaatg aatgaatcct 1260
gtaagaatct ttctaacttt tagtagtctg tatttcttat gacatgttgg atatgtcttt 1320
aaagatactg tgggctatcc gaatacatgg aaattgttgc aaagaagcag aaaaaactag 1380
tatgtcctag gctattacta ttataagaaa agattaaagt ggccgggcgt ggtggctcat 1440
gcctgtaatc ccaacacttt gggaggtcga ggcgggtgga tcacttgagg tcaggagttc 1500
gagacgagcc tggccaacat ggtgaaactc cgtctctact agaaatacaa aaattagcta 1560
ggtgtggtgg tgcgcgcctg taatcccagc tacttgggaa gcggaggcag aagaatcggt 1620
tgaacccagg aggcagaggt tgcagtgaga ttggatcgtg acactgcact ccagtctggg 1680
catcagagtg aggccctgtc tcaaaaaaaa aaaaaaaatt aggccgtgcg tggtggttca 1740
cacctgtaat cccagcactt tgggagtccg aggcgggtgg atcacctgag gtcaggagct 1800
ggagaccagc catggtcacc atagtgaaac ctcgtctcaa ctaaaaatac aaaaaattag 1860
ccggaggtgg tcgcgggtgc ctgtaatccc agctactcgg aaggctgagg caagagaatc 1920
gcttgagtct gggaggtgga ggttgcagtg agctgagatt gcaccattgc actccagcct 1980
gggcaacaag agcgaagctc catctcaaaa aaaaaaaaat tgaagagaga aaatgatgta 2040
aataatttga aatgaaaatc ttgaggtcca ttttaatatg taagttattt taagttgaca 2100
atttccaaaa ctggttggaa ttgggaactt gatgtttttt tcttttcttt cacagccggg 2160
cccctcagat gagagctgca cccaggccag caccagtcgc tcagccacca gcagcggcac 2220
ccccatctgc agttggctct tctgctgctg cgccccggca ggcagccagg tctgatggcc 2280
cagatggcaa ccactgcagc tggcgtggct gtgggctctg ctgtggggca cacattgggt 2340
cacgccatta ctgggggctt cagtggagga agtaatgctg agcctgcgag gcctgacatc 2400
acttaccagg tgggaattta ggcagcattt cccttccatg ggtggatttt atgagaaaag 2460
ccagacgttt gtaagttcct taagtgtagg aattgtcttt gattttagaa cccactgtgc 2520
tgttaataga caatgggttt taaagccaca tttggccgtt gagttactgc cttaggccag 2580
caccaacaag tactgtacaa attgtgtttc ttcccaagga ggagacttac aacagtccac 2640
ttgactcact gtaaaacaac cacttttccc tttgaatatt tcatcccagt gacacttcct 2700
actaatcttg tcttgatctt agttaacaaa tcaaaaatct cgcatagctg tgtgttcttt 2760
tacgtgatgt ttgccattac ccatctttct gatgtgtgtg ggctttctag tctaatgagc 2820
ataggtgtgt atactcttgt atttccggtg tgcttgaaac tgctccatcc agttttctat 2880
aatagtacca tttttcctcc ctgaagcttc agtaaaccat ttagtcttga taacaagata 2940
ataattccac tttatttgca tctttattta ggaatctttc tggttgtaat tggaattttg 3000
ttaaaactgt tggctttcag cttttaaata ttttcacttt tggctgggaa cggaggctca 3060
tgcctataat cccagcacat tgggaggctg aagtgaaggg attgcttgaa cccagaagtt 3120
tgagaccagg ctgggcaaca tagcgcaacc ctgtctttac taaaaatatt tatttaaatt 3180
cttctttttt ggaggtggag tctcgctctg ttatccaggc tccaccgccc gggttcaagc 3240
gattctcctg cctcagcctc ccgagtagct gggattacag gtgcctgcta ccacgcctgg 3300
ctaatttttg tatttttagt agggacgggg tttcaccata ttggccaggc tggtctcaaa 3360
cgcctgacct caagtgattc acccttctcg gcttcccaaa gtgttggaat tacaggcgtg 3420
agccaccatg tttggcctaa aatatttttt aagtaaatga agatttaaat gttttcactt 3480
cccatgttaa tagttggaaa ctttaattag catctggtgc tagttccatt ttccattaac 3540
ctcaaagagg atggatactc ttcattgtct aggcataagt atgattttct ttctcagcaa 3600
tgttgaatgt tttgcctttg caggagcctc agggaaccca gccagcacag cagcagcagc 3660
cttgcctcta tgagatcaaa cagtttctgg agtgtgccca gaaccagggt gacatcaagc 3720
tctgtgaggg tttcaatgag gtgctgaaac agtgccgact tgcaaacggt aggtaatttg 3780
tccaatttac atctgcttaa ttcacagtgg aattcctgga tcctgtagaa cttagggtaa 3840
tctgtgttta ataaattaga gaagactttg ttgaaatttc tctagaatta actcctaaca 3900
actgggccgg aggtttctag tcatttttat gagtaatttt ctgaattttc ttcctttaga 3960
aggtataggc caggcacagt ggctcacgct tgtaatccca gcactttggg aggccaagac 4020
gggtggatca cctgatgtca ggagtttgag gccagcctgg ccaacatggc aaaaccccat 4080
ctgtactaaa aatacaaaaa attagctggg tgtggtggca ggcacctgta atcccagcta 4140
ctcaggaggc tgaggcagga gaattgcttg aacccgggag gcggaggttg cagtgagcca 4200
agatcctgcc actgcattcc agcctgggca actgggtgtc tccagtggga gacactgtct 4260
caaatttaaa agaaaaaaaa aaaaaagaag gtataaatca gtatgccaga tcttactgtg 4320
attactggat gtaagtgacc ttctaacctt aaggctgcga atataagatt agattctgtt 4380
ttcaccaaaa tccaggaata gacaaaaaga ctgatacctg gtatctgtac ctcattgagt 4440
gaaaggagtt aattaagttc ctcaggggaa ctccggagat tcagggtgtc ttgttagttg 4500
taggatgcct tcagtagctt acaaacaaaa ccataacctt cctggaaccc agcactctgg 4560
aaggccaagg tgggaggatt gcttgagtcc aggagttcga gaccagcctg ggcaacatag 4620
caagacctca tctctatttt ttatcaaaaa aaaacaaaaa acaaaaaacc catagccttg 4680
gccttttgtc gctgctttca taatttggaa ggcttctgtt ttattgagta tacgaagcta 4740
gcattcttct aacttaatct tttctgtttg caggattggc ctaatgaaga agttcaacct 4800
ggagagatgg aaaatcagct ctcataacta agttaattta gtataaaaat agaattgata 4860
gtgagggtat aaagtgtaac catcagttaa acctctcctg tcattcctgg cttccttgct 4920
tcagaattga aatggaagtg ggggtgtccc tactctgtag aatctgggac tgggcaaatg 4980
tttgtgtggc ctccttaaac tagctgttat gttatgattt tattctttgt gagttaatta 5040
gaataaagtc attttcttcc aaggtatggt tca 5073
<210> 4
<211> 89
<212> PRT
<213> 人类(Homo sapiens)
<400> 4
Met Pro Arg Gly Ser Arg Ser Arg Thr Ser Arg Met Ala Pro Pro Ala
1 5 10 15
Ser Arg Ala Pro Gln Met Arg Ala Ala Pro Arg Pro Ala Pro Val Ala
20 25 30
Gln Pro Pro Ala Ala Ala Pro Pro Ser Ala Val Gly Ser Ser Ala Ala
35 40 45
Ala Pro Arg Gln Ala Ala Arg Ser Asp Gly Pro Asp Gly Asn His Cys
50 55 60
Ser Trp Arg Gly Cys Gly Leu Cys Cys Gly Ala His Ile Gly Ser Arg
65 70 75 80
His Tyr Trp Gly Leu Gln Trp Arg Lys
85
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gaaatgaaaa tcttgaggtc c 21
<210> 6
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
acagcacagt gggttctaaa 20

Claims (11)

1.一种突变基因，其特征在于：所述突变基因为携带c.156_157insGCAG突变位点的人类CHCHD2基因，其特征在于：其基因序列如SEQ ID NO.3所示。
2.检测权利要求1所述突变基因的试剂或检测序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂在制备帕金森病筛查试剂盒中的用途。
3.如权利要求2所述的用途，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
4.如权利要求2或3所述的用途，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂包括扩增试剂；所述扩增试剂是扩增权利要求1所述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
5.如权利要求4所述的用途，其特征在于：所述扩增试剂包括扩增引物；
所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物。
6.如权利要求5所述的用途，其特征在于：所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
7.一种帕金森病筛查试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括检测权利要求1所述突变基因的试剂或检测序列如SEQ ID NO.4所示蛋白的试剂。
8.如权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂为DNA测序试剂、基因芯片检测试剂、多重连接依赖探针扩增试剂、qPCR试剂、环介导等温扩增试剂、限制性长度多态性方法用试剂或单链构象多态性分析用试剂。
9.如权利要求7或8所述的试剂盒，其特征在于：所述检测权利要求1所述突变基因的试剂包括扩增试剂；所述扩增试剂是扩增权利要求1所述基因c.156_157insGCAG突变位点的试剂。
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述扩增试剂包括扩增引物；所述扩增引物是能够通过PCR扩增出包含c.156_157insGCAG突变位点所处位置碱基的任意引物。
11.如权利要求10所述的试剂盒，其特征在于：所述扩增引物序列如SEQ ID NO.5～6所示。
CN202010283236.6A 2020-04-10 2020-04-10 一种检测帕金森病的诊断试剂盒 Active CN111454960B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010283236.6A CN111454960B (zh) 2020-04-10 2020-04-10 一种检测帕金森病的诊断试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010283236.6A CN111454960B (zh) 2020-04-10 2020-04-10 一种检测帕金森病的诊断试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111454960A CN111454960A (zh) 2020-07-28
CN111454960B true CN111454960B (zh) 2022-02-15

Family

ID=71678580

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010283236.6A Active CN111454960B (zh) 2020-04-10 2020-04-10 一种检测帕金森病的诊断试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111454960B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114146180B (zh) * 2021-12-22 2022-12-23 首都医科大学附属北京地坛医院 抑制chchd2活性的物质在制备治疗nash和肝损伤所致肝纤维化的产品中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108660194A (zh) * 2018-06-26 2018-10-16 中南大学湘雅医院 一种帕金森病致病基因突变筛查检测方法
CN108841949A (zh) * 2018-07-10 2018-11-20 北京大学 帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置
CN110628894A (zh) * 2019-10-09 2019-12-31 中南大学湘雅三医院 用于帕金森病基因突变检测的靶向捕获测序试剂盒及其应用

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP3910641B1 (en) * 2015-04-13 2022-10-05 Invitae Corporation Methods, systems and processes of identifying genetic variation in highly similar genes
CN107365800A (zh) * 2017-08-09 2017-11-21 广东省实验动物监测所 一种人正常chchd2过表达慢病毒载体和人突变chchd2过表达慢病毒载体

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108660194A (zh) * 2018-06-26 2018-10-16 中南大学湘雅医院 一种帕金森病致病基因突变筛查检测方法
CN108841949A (zh) * 2018-07-10 2018-11-20 北京大学 帕金森病早期检测和诊断试剂盒及装置
CN110628894A (zh) * 2019-10-09 2019-12-31 中南大学湘雅三医院 用于帕金森病基因突变检测的靶向捕获测序试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
CHCHD2基因相关帕金森病的遗传学分析及发病机制研究;毛澄源;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20190115(第1期);第E070-31页 *
Mutation Screening of the CHCHD10 Gene in Chinese Patients with Amyotrophic Lateral Sclerosis;QingQing Zhou et al.;《Mol Neurobiol》;20160407;第54卷;第3189–3194页 *
New Genes Causing Hereditary Parkinson’s Disease;Andreas Puschmann;《Curr Neurol Neurosci Rep》;20170721;第17卷(第66期);第1-11页 *
中国帕金森病和特发性震颤患者CHCHD2基因的遗传学分析;吴泓蔚;《中国优秀博硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》;20180215(第2期);第E070-86页 *
帕金森病靶向治疗研究进展;蒋政等;《中国现代神经疾病杂志》;20191130;第19卷(第11期);第902-908页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111454960A (zh) 2020-07-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Yamashita et al. Two sporadic cases of Liddle’s syndrome caused by de novo ENaC mutations
ES2524643T3 (es) Genes control para la normalización de datos de análisis de expresión génica
KR102481305B1 (ko) 유전자에 기반한 염증성 장 질환의 진단
KR20150023904A (ko) 전립선암의 진단 및 치료에서의 마커의 용도
CN111454960B (zh) 一种检测帕金森病的诊断试剂盒
KR101695866B1 (ko) 전립선 암 마커로서의 포스포디에스테라제 9ａ
CA2497597A1 (en) Methods for identifying subjects at risk of melanoma and treatments
CN108624683B (zh) Usp48基因突变在acth型垂体腺瘤分子诊断中的应用
CN109355386B (zh) 一种用于鉴定宫颈癌易感性的检测试剂盒
KR102102051B1 (ko) 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물 및 이를 이용한 아토피 피부염 예측또는 진단 방법
CN110592198B (zh) 高灵敏度检测flt3/d835y基因突变的方法、系统和试剂盒
US7608401B2 (en) Mutations in the ferroportin 1 gene associated with hereditary haemochromatosis
US20040101863A1 (en) Method of detecting lipid metabolic errors
KR101114033B1 (ko) 단일염기다형을 포함하는 폴리뉴클레오티드, 이를 포함하는 마이크로어레이 및 진단키트, 및 이를 이용한 분석방법
CN108770360B (zh) 对癌性疾病进行分期、分型和治疗的手段和方法
KR102327623B1 (ko) 천식 진단용 snp 및 이를 이용한 천식 진단 방법
US20040138441A1 (en) Novel gene functionally related to dyslexia
KR102314972B1 (ko) Pex26 유전자의 메틸화 수준을 이용한 비만의 예측 또는 진단을 위한 정보제공방법 및 이를 위한 조성물
CN114277123B (zh) 与精神分裂症相关的含有snp位点的多核苷酸和用途
KR20120073261A (ko) 카텝신 ｈ의 용도
US20030190617A1 (en) Optineurin nucleic acid molecules and uses thereof
US20040053232A1 (en) Haplotype structures of chromosome 21
US20030077633A1 (en) Haplotype structures of chromosome 21
US20030219787A1 (en) Novel human gene functionally related to dyslexia
KR20220144837A (ko) Htt 발현을 감소시키기 위한 방법

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant