KR102102051B1

KR102102051B1 - 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물 및 이를 이용한 아토피 피부염 예측또는 진단 방법

Info

Publication number: KR102102051B1
Application number: KR1020180111472A
Authority: KR
Inventors: 홍수종
Original assignee: 재단법인 아산사회복지재단; 울산대학교 산학협력단
Priority date: 2018-09-18
Filing date: 2018-09-18
Publication date: 2020-04-17
Also published as: WO2020060170A1; KR20200032439A

Abstract

본 발명은 PTGR2 유전자 내의 rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 포함하는 연속된 DNA 서열로 구성된 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물을 제공한다. 본 발명은 다양한 원인에 의해 발병되는 아토피 피부염 관련 유전자의 단일염기다형성 및 해플로타입들의 연관성 분석을 통해 유전적 특성을 확인하였으며, 이를 통해 발굴한 마커 조성물은 아토피 피부염을 구분할 수 있는 기능을 보이며, 이 기능을 이용하여, 아토피 피부염에 대한 예측 또는 진단 조성물로써 유용하게 활용될 수 있다.

Description

아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물 및 이를 이용한 아토피 피부염 예측또는 진단 방법{Composition and method for diagnosing atopic dermatitis}

본 발명은 PTGR2 유전자 내의 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물 및 이를 이용한 아토피 피부염 예측 또는 진단 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 본 발명의 마커 조성물은 PTGR2 다형성이 아토피 피부염과 연관되어 있음을 확인함으로써, 이의 진단용도로 사용될 수 있다.

아토피 피부염(AD, Atopic Dermatitis)은 정상인에게는 해가 되지 않은 유발인자들에 피부가 과민반응상태를 보임으로써 만성적으로 피부에 염증이 생기는 만성 염증성 피부질환이다. 아토피 피부염은 세균, 바이러스, 곰팡이 등에 의한 감염, 꽃가루 등과 같은 특정 물질, 음식물, 인공적 화합물질 등에 의하여 면역체계가 과민반응하여 발생하는 것으로 알려져있으나, 정확한 원인은 확실하게 밝혀진 바 없다.

현재 아토피 피부염은 전세계적으로 가장 흔한 피부 질환으로, 전세계 20% 어린이와 3% 성인이 고통받고 있는 것으로 추정되고 있으며, 점차 그 발병율이 상승하고 있다.

아토피 피부염 환자들은 일반적으로 외인성 아토피 피부염 및 내인성 아토피 피부염의 두 그룹으로 분류된다. 외인성 아토피 피부염(extrinsic atopic dermatitis, EAD) 환자들은 혈청(serum)의 전체 이뮤노글로불린(immunoglobulin) E (IgE) 및 알레르겐(allergen)-특이적 IgE 레벨이 증가한다. 알레르겐-특이적 IgE가 없는 정상 혈청의 전체 IgE 레벨을 가진 환자들을 내인성 아토피 피부염(intrinsic atopic dermatitis, IAD) 또는 아토피양 습진(atopiform dermatitis)이라 한다.

현재까지 아토피피부염에서 가장 흔하게 측정되는 바이오마커는 IgE로, 그 결과를 바탕으로 아토피피부염의 표현형을 내인성과 외인성으로 분류해 왔다. 하지만 중증 아토피피부염 환자의 총 IgE 수치가 상승하지 않은 경우가 많고 총 IgE가 아토피피 부염의 중증도와 상관성이 높지 않아, 객관적인 판단이 어렵고, 병변의 경증을 판단하는데 많은 시간이 요구되며 개인별로 다르게 판단할 위험성이 있었다.

상술한 문제점을 해결하기 위해, 아토피 진단과 관련된 다양한 방법들이 개발되었다. 특히, 환자와 건강한 대조군에서의 T 림프구 역할 연구를 통해, 혈액 내 갈렉틴(galectin)-10(특허문헌 1), 호산구 양이온 단백질(eosinophil cationic protein, ECP), 인터류킨(interleukin, IL)-2R, IL-18, IL-31, 흉선 및 활성화-조절 케모카인(thymus and activation-regulated chemokine)(TARC/CCL17), 젖산 탈수소효소(lactate dehydrogenase, LDH)와 같은 새로운 바이오마커들이 아토피 피부염의 중증도를 추적 관찰할 수 있을 것으로 보고되었다. 그러나 이들은 병태 생리의 다양성을 제대로 반영하지 못하고, 아토피 피부염을 효과적으로 진단하는데 많은 시간이 요구되거나, 정확도 혹은 신뢰도가 떨어지는 문제점이 있었다.

따라서, 아토피 피부염을 진단 및 검진하는 것은 본 기술 분야에서 매우 중요한 기술적 과제이나, 아토피 피부염에 관여하는 병인학적 소인은 매우 광범위하기 때문에 기존에 사용해오던 바이오마커 발굴전략으로는 한계가 있다.

상기한 배경기술로서 설명된 사항들은 본 발명의 배경에 대한 이해 증진을 위한 것일 뿐, 이 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 이미 알려진 종래기술에 해당함을 인정하는 것으로 받아들여져서는 안 될 것이다.

특허문헌 1. 대한민국 등록특허공보 제10-1512121호

본 발명자들은 아토피 피부염을 진단하는 새로운 방법의 개발에 유용한 PTGR2 다형성을 발굴하고자 예의 노력을 하였다. 그 결과, PTGR2 유전자의 단일염기다형성 또는 해플로타입이 아토피 피부염과 연관성을 가지고 있음을 분석하는 전략을 고안하였고, 이를 이용하여 아토피 피부염을 예측 또는 진단함으로써 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 PTGR2 유전자의 단일염기다형성 또는 해플로타입으로 구성되는 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물 및 이를 이용하여 아토피 피부염 예측 또는 진단방법을 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적은 PTGR2 유전자의 단일염기다형성 또는 해플로타입을 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 진단용 조성물 또는 이를 포함하는 키트를 제공하는데 있다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명, 청구범위 및 도면에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 아토피 피부염을 예측 또는 진단할 수 있는 단일염기다형성(single nucleotide polymerphism, SNP)과 해플로타입(haplotype)으로 구성된 마커 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 장내 미생물이 면역발달과 면역 반응과 관련이 있으며, 알레르기 질환의 발명에 중요한 역할을 하고 있음을 통해, 이로부터 아토피 피부염을 예측 또는 진단할 수 있는 신규 마커를 발굴하고자 노력한 결과, 아토피 피부염 환자와 정상 대조군과의 회귀 분석을 이용하여 PTGR2 유전자의 다형성과 해플로타입이 아토피 피부염과 유의한 연관성을 가지고 있음을 확인하였다.

구체적으로 대변 샘플에서 대장 세포의 유전체수준의 유전자 발현을 프로파일링한 결과, PTGR2가 아토피 피부염의 잠재적 위험인자임을 확인하였고, PTGR2 유전자 내의 서열을 분석하고, 한국인 아토피 피부염 환자와 정상 대조군에서 아토피 피부염 표현형과 PTGR2의 연관성을 분석하였다. 한국인 군집(아토피 피부염 환자 420명, 정상 대조군 444명)에서 17개의 단일염기다형성을 직접적인 분석을 통해 유전형을 확인하였다. PTGR2 다형성들과의 연관성을 연령, 성별을 조정하면서 로지스틱과 선형 회귀를 사용하여 분석하였고, 그 결과 PTGR2 유전자 내 유전적 다형성 사이에 현저한 연관성이 있음을 검출하였다. 추가적인 해플로타입 분석을 살펴보면 ht2 해플로타입이 관련성을 가지고 있음을 확인하였다(haplotype ht2에서 P=0.026). 특히, 2 개의 SNP(rs1968105#G 또는 rs9646165#A)는 아토피 피부염 발병과 상당한 유의성을 가지고 있음을 확인하였다. 또한 PTGR2의 해플로타입 중에서 ht2(해플로타입2#)는 아토피 피부염의 발병과 현저한 연관성을 가지는 것으로 확인되었다. 또한 선형 회귀 분석에서 상기 rs9646165 SNP와 해플로타입 ht2는 SCORAD 값에 유의한 영향을 미치고 있는 것으로 확인되었다. 즉 PTGR2 유전자의 다형성과 아토피 피부염의 강력한 연관성을 통해, 개체로부터 유전적 역학 분석으로, 아토피 피부염 질환을 정확히 예측 또는 진단하는데 유용하게 활용할 수 있다.

상기 마커 조성물은 바람직하게는 PTGR2 유전자의 SNP를 포함하는 전체 또는 일부 폴리뉴클레오타이드일 수 있고, 보다 바람직하게는 서열번호 1로 구성된 폴리뉴클레오타이드의 전체 또는 일부 폴리뉴클레오타이드일 수 있으며, 가장 바람직하게는 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 포함하는 20 내지 100 개의 연속된 DNA 서열로 구성되는, 아토피 피부염 진단용 마커 조성물일 수 있다.

본 명세서에서 용어, "뉴클레오타이드"는 단일가닥 또는 이중가닥 형태로 존재하는 디옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드이며, 다르게 특별하게 언급되어 있지 않은 한 자연의 뉴클레오타이드의 유사체를 포함한다(Scheit, Nucleotide Analogs, John Wiley, New York(1980); Uhlman 및 Peyman, Chemical Reviews, 90:543-584(1990)).

본 발명은 PTGR2 유전자의 다형성을 이용해, 아토피 피부염 예측 또는 진단 마커로서의 용도에 관한 것으로, PTGR2 유전자의 특정 SNP가 아토피 피부염과 연관성이 있음을 처음으로 규명하였다.

보다 구체적으로 서열번호 1의 핵산서열로 구성된 DNA에 있어서, 12372번째 T 염기를 포함하거나(rs1968105), 8274번째 A 염기(본 발명에서 표시된 minor A의 major 염기)를 포함하는(rs9646165) 20~100 개의 연속서열로 구성되는 폴리뉴클레오타이드, 아토피 피부염을 진단할 수 있는 마커 조성물일 수 있다. 본 발명의 서열번호 1의 핵산서열은 Homo sapiens prostaglandin reductase 2 (PTGR2) sequence 중에서 hg38_ncbiRefSeqCurated_NM_001146154.1의 chr14에 대한 73849831 번째부터 73885465 번째까지의 서열이고, 본원발명에서 서열번호 1의 핵산서열에서의 위치는 이를 기준으로 나타내었다.

본 발명에서 PTGR2 유전자란 prostaglandin reductase 2로, 프로스타글란딘(prostaglandins) 촉매 작용에 관여하는 효소이다. 상기 PTGR2 유전자의 염기서열은 NCBI의 GenBank 및 UCSC의 Genome Browser 등 공지의 데이터베이스에서 얻을 수 있는데, 그 예로서 GenBank Accession No. NM_001146154.1로 표시되는 유전자가 될 수 있으며, 바람직하게는 서열번호 1의 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다.

상기 마커 조성물은 상기 SNP 각각으로 아토피 피부염 예측 또는 진단을 위한 정보를 제공할 수 있을 뿐만 아니라, 상기 SNP의 haplotype 조합으로 더욱 우수한 마커로서 작용할 수도 있다.

"유전적 다형성(genetic polymorphism)"은 하나의 유전자 좌위(locus)에 두가지 이상의 대립 유전자(allele)가 존재하는 경우를 말하며, 인구집단에서 적어도 1% 이상의 빈도로 유전자 변이가 나타나는 경우를 말한다. DNA에서 한 개의 뉴클레오타이드의 삽입, 소실, 또는 치환이 일어나는 것을 단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP) 이라고 한다.

"다형성"이라는 용어는 군집 내에서 변하는 유전자의 서열에서의 배치를 지칭한다. 다형성은 상이한 "대립유전자"로 구성된다. 이러한 다형성의 배치는 유전자에서의 그의 위치 및 그에서 발견되는 상이한 아미노산 또는 염기에 의해 확인될 수 있다. 이러한 아미노산 변이는 2개의 상이한 대립유전자인, 2개의 가능한 변이체 염기, C 및 T의 결과이다. 유전자형은 2개의 다른 별개의 대립유전자로 구성되기 때문에, 여러 가능한 변이체 중 임의의 변이체가 어느 한 개체에서 관찰될 수 있다 (예를 들어, 이 예에서, CC, CT 또는 TT). 개개의 다형성은 또한 당업자에게 공지되어 있고, 예를 들면, NCBI 웹사이트 상에서 이용가능한 뉴클레오타이드 염기 변이의 단일 뉴클레오타이드 다형성 데이터베이스(Single Nucleotide Polymorphism Database (dbSNP) of Nucleotide Sequence Variation)에서 사용되는 것인, 지정된 독특한 식별자 ("기준 SNP", "refSNP" 또는 "rs#")이다.

"단일염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP)"은 게놈에서 단일염기(A, T, C 또는 G)가 종의 멤버들간 또는 한 개체(individual)의 쌍 염색체 간에 다른 경우에 발생하는 DNA 서열의 다양성을 의미한다. 예를 들어, 서로 다른 개체의 세 개의 DNA 단편들(예: AAGT[A/A]AG, AAGT[A/G]AG,AAGT[G/G]AG)처럼 단일염기에서 차이를 포함하는 경우, 두 개의 대립 유전자(C 또는 T)라고 부르며, 일반적으로 거의 모든 SNPs는 두 개의 대립 유전자를 가진다. 한 집단(population)내에서, SNP는 소수 대립인자 빈도(minor allele frequency, MAF; 특정 집단에서 발견되는 유전자위치(locus)에서 가장 낮은 대립인자 빈도)로 할당될 수 있다. 단일염기는 폴리뉴클레오타이드 서열에 변화(대체), 제거(결실) 또는 첨가(삽입)될 수 있다. SNP는 번역 프레임의 변화를 유발할 수 있다.

"유전자형(genotype)"이라는 용어는 세포 또는 조직 샘플에서 특정 유전자의 특이적 대립유전자를 지칭한다.

"대립 인자" 또는 '대립 유전자(allele)'란 같은 염색체 위치(same chromosomal locus)를 점유하는 한 유전자의 둘 또는 그 이상의 선택적인 형태(alternative forms) 중 하나를 뜻한다. 대립유전자는 다형성을 나타내는데 사용되기도 하며, 예를 들어 SNP는 두 종류의 대립인자(biallele)를 갖는다.

"대립유전자 빈도"는 대립유전자가 개체 내, 계통 내, 또는 계통의 집단 내에 존재하는 빈도(비율 또는 백분율)을 지칭한다. 계통 또는 집단 내에서의 대립유전자 빈도를, 계통 또는 집단으로부터의 개체들의 샘플의 대립유전자 빈도를 평균화함으로써 추정할 수 있다.

"진단"은 병리 상태의 존재 또는 특징을 확인하는 것을 의미한다. 그 중에서도 본 발명은 특히 아토피 피부염(AD) 진단에 유용하다. 본 발명에서는 아토피 피부염 진행, 발병을 예측하는 것을 포함한다. 이에, 아토피 피부염의 진행과 발병을 정확히 예측할 수 있는 지표가 매우 중요하며 임상적 지표를 보완하면서 치료의 반응을 예측할 수 있는 인자가 필요한데, 본 발명의 PTGR2의 SNP가 이러한 지표 기능을 하므로 아토피 피부염 진단 인자로 이용할 수 있다. 즉, 이러한 유전자들의 다형성 특성 측정은 아토피 피부염을 예측 또는 진단하는데 유용한 지표(진단 마커)로 사용될 수 있다.

"진단용 마커 또는 진단 마커(diagnosis marker)란 아토피 피부염을 가진 세포를 정상 세포와 구분하여 진단할수 있는 물질로, 정상 세포에 비하여 아토피 피부염이 발병한 세포에서 증가양상을 보이는 폴리펩타이드 또는 핵산(예: mRNA 등), 지질 , 당지질, 당단백질, 당(단당류, 이당류, 다당류 등) 등과 같은 유기 생체 분자 등을 포함한다.

"아토피 피부염 예측용 마커"란 아토피 피부염 발병 위험성, 발병한 아토피 피부염의 완치 여부, 혹은 경과를 예측할 수 있는 다형성을 가진 마커를 의미하며, 바람직하게는 상기에서 서술한 뉴클레오타이드를 의미한다. 또한, 상기 환자는 아토피 피부염 발병 위험성을 판별하기 위한 환자 또는 가족병력상에 아토피 피부염이 존재하는 환자를 의미한다. "위험"은 특정 다형성 대립유전자를 보유하지 않은 개체의 구성원에서의 질환 또는 상태의 발생 빈도에 비교하여, 특정 다형성 대립유전자를 보유한 개체에서의 질환 또는 상태의 발생 빈도가 통계적으로 높음을 나타낸다.

"대상" 또는 "환자"는 인간, 소, 개, 기니아 피그, 토끼, 닭, 파충류, 어류, 양서류, 곤충 등을 포함하여 치료가 요구되는 임의의 단일 개체를 의미한다. 또한, 임의의 질병 임상 소견을 보이지 않는 임상 연구 시험에 참여한 임의의 대상 또는 역학연구에 참여한 대상 또는 대조군으로 사용된 대상이 대상에 포함된다.

"조직 또는 세포 샘플"은 대상 또는 환자의 조직으로부터 얻은 유사한 세포의 집합체를 의미한다. 조직 또는 세포 샘플의 공급원은 신선한, 동결된 및/또는 보존된 장기 또는 조직 샘플 또는 생검 또는 흡인물로부터의 고형 조직; 혈액 또는 임의의 혈액 구성분; 대상의 임신 또는 발생의 임의의 시점의 세포일 수 있다. 조직 샘플은 또한 1차 또는 배양 세포 또는 세포주일 수 있다.

"핵산"은 임의의 DNA 또는 RNA, 예를 들어, 조직 샘플에 존재하는 염색체, 미토콘드리아, 바이러스 및/또는 세균 핵산을 포함하는 의미이다. 이중가닥 핵산 분자의 하나 또는 두개 모두의 가닥을 포함하고, 무손상 핵산 분자의 임의의 단편 또는 일부를 포함한다.

"유전자"는 단백질 코딩 또는 전사시에 또는 다른 유전자 발현의 조절시에 기능적 역할을 갖는 임의의 핵산 서열 또는 그의 일부를 의미한다. 유전자는 기능적 단백질을 코딩하는 모든 핵산 또는 단백질을 코딩 또는 발현하는 핵산의 일부만으로 이루어질 수 있다. 핵산 서열은 엑손, 인트론, 개시 또는 종료 영역, 프로모터 서열, 다른 조절 서열 또는 유전자에 인접한 특유한 서열 내에 유전자 이상을 포함할 수 있다.

본 발명은 PTGR2 유전자 관련하여 아토피 피부염 진단용 마커를 개발하였고, 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따른 마커 조성물은 아토피 피부염과 밀접한 연관성이 있음을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 마커 조성물의 유전자형을 검출하거나 또는 상기 유전자형을 검출할 수 있는 프라이머를 이용하면, 아토피 피부염을 갖거나 가지고 있을 것으로 예상되는 개체로부터 아토피 피부염을 정확하게 예측 또는 진단할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 아토피 피부염 및 임상지표와 연관성이 확인된 SNP는 본 발명자들에 의해 최초로 규명된 것이다.

본 발명의 다른 측면은 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 아토피 피부염 예측 또는 진단용 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 용어 "SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제"란, 상기와 같은 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위를 증폭을 통해 확인하여 아토피 피부염을 판단할 수 있는 조성물을 의미하며, 바람직하게는 상기 SNP 마커의 폴리뉴클레오타이드를 특이적으로 증폭할 수 있는 프라이머를 의미한다. 상기 SNP 마커 증폭에 사용되는 프라이머는, 적절한 버퍼 중의 적절한 조건(예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도 하에서 주형-지시 DNA 합성(template-directed DNA synthesis)의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오타이드가 될 수 있는데, 상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 통상 15 내지 30 뉴클레오타이드이다. 짧은 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 안정한 혼성체를 형성하기 위해서는 더 낮은 온도를 필요로 한다. 상기 프라이머 서열은 상기 SNP 마커와 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 상기 SNP 마커와 혼성화 할 정도로 충분히 상보적이어야 한다.

본 발명의 용어 "프라이머"란, 짧은 자유 3' 말단 수산화기(free 3' hydroxyl group)를 가지는 염기 서열로 상보적인 주형(template)과 염기쌍(base pair)을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 서열을 의미한다. 프라이머는 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응(즉, DNA 폴리머레이즈 또는 역전사효소)을 위한 시약 및 상이한 4가지 뉴클레오사이드 트리포스페이트의 존재하에서 DNA 합성을 개시할 수 있다. PCR 증폭을 실시하여 원하는 생성물의 생성 여부를 통해 아토피 피부염을 예측할 수 있다. PCR 조건, 센스 및 안티센스 프라이머의 길이는 당업계에 공지된 것을 기초로 변형할 수 있다.

본 발명의 프라이머는 포스포르아미다이트(phosphoramidite) 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, "캡화", 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 측면은 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 아토피 피부염 예측 또는 진단용 키트에 관한 것이다.

본 발명의 키트는 아토피 피부염을 진단할 수 있는 PTGR2 유전자의 SNP를 증폭을 통해 확인하거나, SNP 마커의 발현 수준을 확인함으로써, 아토피 피부염을 예측 또는 진단할 수 있게하는 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 키트를 사용하고자 하는 대상은 한국인, 일본인 또는 중국인을 대상으로 하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

상기 진단용 키트에는 본 발명의 PTGR2 유전자의 SNP(rs1968105#G 또는 rs9646165#A)를 증폭시킬 수 있는 프라이머 뿐만 아니라, 중합 반응에 필요한 시약, 예를 들면 dNTP, 각종의 중합효소 및 발색제 등을 포함할 수 있다.

상기 "증폭시킬 수 있는 프라이머"란 적절한 버퍼 중의 적절한 조건(예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도 하에서 주형-지시 DNA 합성의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오타이드를 말한다. 상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 통상 15 내지 30 뉴클레오타이드이다. 짧은 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 안정한 혼성체를 형성하기 위해서는 더 낮은 온도를 필요로 한다. 프라이머 서열은 주형과 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 주형과 혼성화 할 정도로 충분히 상보적이어야 한다.

본 발명에서 아토피 피부염 예측 또는 진단용 조성물의 mRNA 발현 수준을 측정하기 위한 키트는 RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. RT-PCR 키트는, 상기 SNP 마커의 유전자에 대한 특이적인 각각의 프라이머 쌍 외에도 RT-PCR 키트는 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액(pH 및 마그네슘 농도는 다양), 데옥시뉴클레오타이드(dNTPs), Taq-폴리머라아제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNAse 억제제, DEPC-수(DEPCwater), 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한 정량 대조군으로 사용되는 유전자에 특이적인 프라이머 쌍을 포함할 수 있다. 또한 바람직하게는, 본 발명의 키트는 DNA 칩을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 아토피 피부염 예측 또는 진단용 키트일 수 있다. DNA 칩 키트는, 일반적으로 편평한 고체 지지판, 전형적으로는 현미경용 슬라이드보다 크지않은 유리 표면에 핵산 종을 격자형 배열(gridded array)로 부착한 것으로, 칩 표면에 핵산이 일정하게 배열되어, DNA 칩 상의 핵산과 칩 표면에 처리된 용액 내에 포함된 상보적인 핵산 간에 다중 혼성화(hybridization) 반응이 일어나 대량 병렬 분석이 가능하도록 하는 도구이다.

본 발명의 또 다른 측면은 아토피 피부염 질환의 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)을 증폭하는 단계를 포함하는 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형 분석방법에 관한 것이다.

구체적으로 피검자로부터 체외로 분리된 샘플을 취득하고, 상기 샘플에서 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)을 증폭한 후, 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형을 분석함으로써, 아토피 피부염 예측 또는 진단에 필요한 정보를 제공할 수 있다.

우선, 피검자로부터 체외로 분리된 샘플은 특별히 한정된 것은 아니며, 일례로, 털, 뇨, 타액, 각종 체액, 근육, 표피, 혈액, 뼈, 장기로부터 얻은 것일 수 있고, 바람직하게는 근육 또는 혈액일 수 있다.

상기 SNP 유전자형을 분석하기 위해, 상기 분리된 샘플로부터 DNA를 추출할 수 있다. gDNA의 분리는 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 실시될 수 있으며(참조: Rogers & Bendich (1994)), 출발물질이 mRNA인 경우에는, 역전사효소를 이용하여 cDNA로 합성될 수 있다.

다음으로, 상기 샘플로부터, 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에서의 rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP) 부위를 증폭하거나 프로브와 혼성화할 수 있는데, 이는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용가능하다. 예를 들면, 표적 핵산을 PCR을 통하여 증폭하고 이를 정제하여 얻을 수 있다. 그 외 리가제 연쇄 반응(LCR)(Wu 및 Wallace, Genomics 4, 560(1989), Landegren 등, Science 241, 1077(1988)), 전사증폭(transcription amplification)(Kwoh 등, Proc. Natl.Acad. Sci. USA 86, 1173(1989)) 및 자가유지 서열 복제(Guatelli 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874(1990)) 및 핵산서열 기반 증폭(nucleic acid sequence-based amplication, NASBA)이 사용될 수 있다.

이후, 상기 산물로부터 유전자형을 확인함으로써, 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형 분석방법을 제공하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 산물로부터 유전자형을 분석하기 위해서는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용가능하나, 예를 들어 서열 분석, 마이크로어레이(microarray)에 의한 혼성화, 대립유전자 특이적인 PCR(allele specific PCR), 동적 대립유전자-특이적 혼성화 기법(dynamic allele-specific hybridization, DASH), PCR 연장 분석, PCR-SSCP(Polymerase Chain Reaction-Single Strand Conformation Polymorphism, 중합효소 연쇄 반응-단일가닥 구조 다형성), PCR-RFLP(Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism, 중합효소 연쇄 반응-제한효소 단편 길이 다형성) 분석 또는 TaqMan 기법, SNPlex 플랫폼(Applied Biosystems), 질량 분석법(예를 들면, Sequenom의 MassARRAY 시스템), 미니-시퀀싱(mini-sequencing) 방법, Bio-Plex 시스템(BioRad), CEQ and SNPstream 시스템(Beckman), Molecular Inversion Probe 어레이 기술(예를 들면, Affymetrix GeneChip), Fludigm 시스템 및 Bead Array Technologies(예를 들면, Illumina GoldenGate 및 Infinium 분석법)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 방법들 또는 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 이용 가능한 다른 방법에 의해, 미소부수체(microsatellite), SNP 또는 다른 종류의 다형성 마커를 포함한, 다형성 마커에서의 하나 이상의 대립유전자가 확인될 수 있다. 이와 같은 다형성 부위의 염기를 결정하는 것은 바람직하게는 SNP 칩을 통해 수행할 수 있다.

상기에서, 시퀀싱 분석은 염기서열 결정을 위한 통상적인 방법을 사용할 수 있으며, 자동화된 유전자분석기를 이용하여 수행될 수 있다. 또한, 대립유전자 특이적 PCR은 SNP가 위치하는 염기를 3' 말단으로 하여 고안한 프라이머를 포함한 프라이머 세트로 상기 SNP가 위치하는 DNA 단편을 증폭하는 PCR 방법을 의미한다. 상기 방법의 원리는, 예를 들어, 특정 염기가 C 또는 A로 치환된 경우, 상기 치환되지 않은 원래 서열을 포함하는 프라이머 및 적당한 크기의 DNA 단편을 증폭할 수 있는 반대 방향 프라이머를 고안하여 PCR 반응을 수행할 경우, 상기 SNP 위치의 염기가 치환되지 않은 경우에는 증폭반응이 정상적으로 수행되어 원하는 위치의 밴드가 관찰되고, 상기 염기가 C 또는 A로 치환된 경우에는 프라이머는 주형 DNA에 상보결합할수 있으나, 3' 말단 쪽이 상보결합을 하지 못함으로써 증폭반응이 제대로 수행되지 않는 점을 이용한 것이다. DASH는 통상적인 방법으로 수행될 수 있고, 바람직하게는 프린스 등에 의한 방법에 의하여 수행될 수 있다.

한편, PCR 연장 분석은 먼저 단일염기 다형성이 위치하는 염기를 포함하는 DNA 단편을 프라이머 쌍으로 증폭을 한 다음, 반응에 첨가된 모든 뉴클레오타이드를 탈인산화시킴으로써 불활성화시키고, 여기에 SNP 특이적 연장 프라이머, dNTP 혼합물, 디디옥시뉴클레오타이드, 반응 완충액 및 DNA 중합효소를 첨가하여 프라이머 연장반응을 수행함으로써 이루어진다. 이때, 연장 프라이머는 SNP가 위치하는 염기의 5' 방향의 바로 인접한 염기를 3' 말단으로 삼으며, dNTP 혼합물에는 디디옥시뉴클레오타이드와 동일한 염기를 갖는 핵산이 제외되고, 상기 디디옥시뉴클레오타이드는 SNP를 나타내는 염기 종류 중 하나에서 선택된다. 예를 들어, A에서 G로의 치환이 있는 경우, dGTP, dCTP 및 TTP 혼합물과 ddATP를 반응에 첨가할 경우, 상기 치환이 일어난 염기에서 프라이머는 DNA 중합효소에 의하여 연장되고, 몇 염기가 지난 후 A 염기가 최초로 나타나는 위치에서 ddATP에 의하여 프라이머 연장반응이 종결된다. 만일 상기 치환이 일어나지 않았다면, 그 위치에서 연장반응이 종결되므로, 상기 연장된 프라이머의 길이를 비교함으로써 SNP를 나타내는 염기 종류를 판별할 수 있게 된다.

이때, 검출방법으로는 연장 프라이머 또는 디디옥시뉴클레오타이드를 형광 표지한 경우에는 일반적인 염기서열 결정에 사용되는 유전자 분석기(예를 들어, ABI사의 Model 3700 등)를 사용하여 형광을 검출함으로써 상기 SNP을 검출할 수 있으며, 무-표지된 연장 프라이머 및 디디옥시뉴클레오타이드를 사용할 경우에는 MALDI-TOF(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight, 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화-비행 시간) 기법을 이용하여 분자량을 측정함으로써 상기 SNP를 검출할 수 있다.

또한 상기 산물의 유전자형에서, 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 유전자형이 rs1968105#G 또는 rs9646165#A 또는 이들 모두를 포함하고 있는 경우, 피검자는 아토피 피부염이 발병한 것으로 예측 또는 진단할 수 있다.

본 발명의 또 다른 측면은 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 구성하는 SNP 증폭을 위한 20 내지 100 개의 연속된 DNA 서열로 구성되는 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물에 관한 것이다.

상기 해플로타입은 PTGR2에서의 SNP들의 조합으로, 더욱 정확도가 높은 아토피 피부염의 예측 또는 진단을 위한 정보를 제공할 수 있는데, 이는 SNP간에 연관불평형을 구성하고 있기 때문이다. 상기 연관불평형(Linkage Disequilibrium)이란 집단 유전학에서 반드시 동일 염색체상에 존재하지는 않는 둘 이상의 유전자좌(loci)에서의 대립 유전자의 비-무작위적 연관(non-random association)을 의미한다.

본 발명에서 PTGR2 유전자에 있어서, 각각의 SNP 간의 완전한 또는 절대적인 결합으로 인해, 0.05 초과의 빈도를 갖는 4개 이상의 해플로타입이 구성될 수 있었다. 이들 4개의 해플로타입중에서, ht2는 아토피 피부염 발병과 상당히 유의한 연관성을 가지고 있음을 확인하였다(표 3). 게다가 아토피 피부염의 SCORAD와의 연관성 분석에서도 확인하였다. 이 분석은 피검자의 수에 따라 통계적 유의성이 0.02~0.06으로 보전되었다. 상술한 결과들을 통해 PTGR2 유전자의 SNP 조합인 해플로타입 2(ht2)이 아토피 피부염과 강하게 연관성을 가지고 있음을 시사한다 할 것이다.

본 발명자들은 PTGR2 유전자 다형성을 지노타이핑(genotyping)하고, 아토피 피부염 환자들에서 아토피 피부염과 관련있는 이들 유전자의 해플로타입을 확인하였다. 이에 본 발명의 ht2 해플로타입일 때 더욱 현저해짐을 확인한 바, 이는 아토피 피부염의 진단을 위한 새로운 방법을 제시하는데 매우 유용하다 할 것이다.

따라서, 본 발명의 마커 조성물의 유전자형을 검출하거나 또는 상기 유전자형을 검출할 수 있는 프라이머를 이용하면, 아토피 피부염을 갖거나 가지고 있을 것으로 예상되는 개체로부터 아토피 피부염을 정확하게 예측 또는 진단할 수 있을 것으로 기대되며, 상기 SNP는 본 발명자들에 의해 최초로 규명된 것이다.

본 발명의 다른 측면은 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 포함하는 SNP 증폭을 위한 20 내지 100 개의 연속된 DNA 서열을 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 아토피 피부염 예측 또는 진단용 조성물에 관한 것이다.

공개 데이터베이스 NCBI에서는 일부 SNP의 경우 아시안 자료가 없거나 인종간의 차이로 인하여 minor allele이 뒤바뀌어 표시될 수 있으나, 본 발명에서 표시된 해플로타입 2에서 minor allele로 치환된 한국인 유전자형 기준의 SNP 부위가, 73858104 번째 염기가 A이고(rs9646165), 73874094 번째 염기가 A이고(rs11159042), 73874421 번째 염기가 G(rs45559033)이고, 73882116 번째 염기가 A(rs6574151)인 것이 바람직하다. 상기 73874094, 73874421, 73882116의 경우, NCBI DB에 아시안 빈도가 없거나 인종간의 차이로 인하여 minor allele이 상이한 경우가 있기 때문으로, 상술한 해플로타입을 구성하는 SNP 증폭을 위한 20 내지 100 개의 연속된 DNA 서열을 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 아토피 피부염 예측 또는 진단용 조성물인 것이 바람직하다.

본 발명의 용어 "SNP 마커를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제"란, 상기와 같은 유전자의 단일염기다형성(SNP) 부위를 증폭을 통해 확인하여 아토피 피부염을 판단할 수 있는 조성물을 의미하며, 바람직하게는 상기 SNP 마커의 폴리뉴클레오타이드를 특이적으로 증폭할 수 있는 프라이머를 의미한다. 상기 SNP 마커 증폭에 사용되는 프라이머는, 적절한 버퍼 중의 적절한 조건(예를 들면, 4개의 다른 뉴클레오시드 트리포스페이트 및 DNA, RNA 폴리머라제 또는 역전사 효소와 같은 중합제) 및 적당한 온도 하에서 주형-지시 DNA 합성의 시작점으로서 작용할 수 있는 단일가닥 올리고뉴클레오타이드가 될 수 있는데, 상기 프라이머의 적절한 길이는 사용 목적에 따라 달라질 수 있으나, 통상 15 내지 30 뉴클레오타이드이다. 짧은 프라이머 분자는 일반적으로 주형과 안정한 혼성체를 형성하기 위해서는 더 낮은 온도를 필요로 한다. 상기 프라이머 서열은 상기 SNP 마커와 완전하게 상보적일 필요는 없으나, 상기 SNP 마커와 혼성화할 정도로 충분히 상보적이어야 한다.

본 발명의 프라이머는 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비-제한적인 예로는 메틸화, "캡화", 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다.

또한, 본 발명의 또 다른 측면은 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 구성하는 SNP 증폭을 위한 20 내지 100 개의 연속된 DNA 서열을 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 아토피 피부염 예측 또는 진단용 키트에 관한 것이다.

본 발명의 키트는 아토피 피부염을 진단할 수 있는 PTGR2 유전자의 SNP를 증폭을 통해 확인하거나, SNP 마커의 발현 수준을 확인함으로써, 아토피 피부염을 예측 또는 진단할 수 있게 하는 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 키트를 사용하고자 하는 대상은 동아시아인을 대상으로 하는 것이 바람직하고, 한국인, 일본인 또는 중국인을 대상으로 하는 것이 더욱 바람직하나 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 또 다른 측면은 아토피 피부염 질환의 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여, 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 증폭하는 단계;를 포함하는 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형 분석방법에 관한 것이다.

구체적으로 피검자로부터 체외로 분리된 샘플을 취득하고, 상기 샘플에서 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 증폭한 후, 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형을 분석함으로써, 아토피 피부염 예측 또는 진단에 필요한 정보를 제공할 수 있다.

다음으로, 상기 샘플로부터, 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입 부위를 증폭하거나 프로브와 혼성화할 수 있는데, 이는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용가능하다. 예를 들면, 표적 핵산을 PCR을 통하여 증폭하고 이를 정제하여 얻을 수 있다. 그 외 리가제 연쇄 반응(LCR)(Wu 및 Wallace, Genomics 4, 560(1989), Landegren 등, Science 241, 1077(1988)), 전사증폭(transcription amplification)(Kwoh 등, Proc. Natl.Acad. Sci. USA 86, 1173(1989)) 및 자가유지 서열 복제(Guatelli 등, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 1874(1990)) 및 핵산에 근거한 서열 증폭(NASBA)이 사용될 수 있다.

이후, 상기 산물로부터 유전자형을 확인함으로써, 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형 분석방법을 제공하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 산물로부터 유전자형을 분석하기 위해서는 당업자에게 알려진 어떠한 방법이든 사용가능하나, 예를 들어 서열 분석, 마이크로어레이(microarray)에 의한 혼성화, 대립유전자 특이적인 PCR(allele specific PCR), 다이나믹 대립유전자 혼성화 기법(dynamic allelespecifichybridization, DASH), PCR 연장 분석, PCR-SSCP, PCR-RFLP 분석 또는 TaqMan 기법, SNPlex 플랫폼(Applied Biosystems), 질량 분석법(예를 들면, Sequenom의 MassARRAY 시스템), 미니-시퀀싱(mini-sequencing) 방법, Bio-Plex 시스템(BioRad), CEQ and SNPstream 시스템(Beckman), Molecular Inversion Probe 어레이 기술(예를 들면, Affymetrix GeneChip), Fludigm 시스템 및 BeadArray Technologies(예를 들면, Illumina GoldenGate 및 Infinium 분석법)를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 방법들 또는 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자에게 이용 가능한 다른 방법에 의해, 마이크로새틀라이트, SNP 또는 다른 종류의 다형성 마커를 포함한, 다형성 마커에서의 하나 이상의 대립유전자가 확인될 수 있다. 이와 같은 다형성 부위의 염기를 결정하는 것은 바람직하게는 SNP 칩을 통해 수행할 수 있다.

이때, 검출방법으로는 연장 프라이머 또는 디디옥시뉴클레오타이드를 형광 표지한 경우에는 일반적인 염기서열 결정에 사용되는 유전자 분석기(예를 들어, ABI사의 Model 3700 등)를 사용하여 형광을 검출함으로써 상기 SNP을 검출할 수 있으며, 무-표지된 연장 프라이머 및 디디옥시뉴클레오타이드를 사용할 경우에는 MALDI-TOF(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight) 기법을 이용하여 분자량을 측정함으로써 상기 SNP를 검출할 수 있다.

또한 상기 산물의 유전자형에서, 서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 포함하고 있는 경우를 확인하면, 피검자는 아토피 피부염이 발병한 것으로 예측 또는 진단할 수 있다.

본 발명의 특징 및 이점을 요약하면 다음과 같다:

(ⅰ) 본 발명은 PTGR2 유전자 내의 rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 포함하는 연속된 DNA 서열로 구성된 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물을 제공한다.

(ⅱ) 또한, 본 발명은 PTGR2 유전자 내에서의 연관불평형 분석을 통해 해플로타입 마커 조성물을 제공한다.

(ⅲ) 본 발명은 다양한 원인에 의해 발병되는 아토피 피부염 관련 유전자들의 연관성 분석을 통해 유전적 특성을 확인하였으며, 이를 통해 발굴한 마커 조성물은 아토피 피부염을 정확히 구분할 수 있는 기능을 보이며, 이 기능을 이용하여, 아토피 피부염에 대한 예측 또는 진단 조성물로써 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 PTGR2 유전자의 물리적 지도, 해플로타입 및 LD(Linkage Disequilibrium)를 나타낸 것이다. 도 1A는 PTGR2 유전자의 물리적 지도와 본 연구에서 확인된 SNP의 위치를 나타낸 것으로, 염색체 14q24.3(참조 게놈 서열 NM_001146154.1) 상의 PTGR2에서 확인된 다형성을 나타낸다. 이때, ■은 암호화된 엑손이고, □은 5'-UTR(5'-untranslated region, 5'-비번역 부위)과 3'-UTR(3'-비번역 부위)을 의미한다.
도 1B는 PTGR2 유전자의 해플로타입을 나타낸 것이다.
도 1C는 PTRG2 유전자의 LD 플롯이고, 본 실험에서 조사된 SNP는 하나의 LD 블록을 구성하며, 블록 번호는 LD 계수 |D'|의 수치를 나타낸다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예

<실시예 1> 피검자의 선정

서울 아산 병원 소아 천식 아토피 센터에서 Hanifin and Rajka의 기준에 따라 진단된 아토피 피부염(AD) 환자 420명을 모집하였다. 상기 환자들의 고통 정도는 SCOring AD(SCORAD)를 사용하여 다음과 같이 평가 및 구분하였다: 경미증 (mild)<15, 15≤중등도(moderate)<40, 중증(severe)≥40.

정상 대조군(n=444)은 서울지역에 위치한 9개 초등학교와 16 개의 유치원으로부터 모집하였다. 정상 대조군은 아토피 피부염(AD), 음식 알레르기, 알레르기 비염, 천식, 알츠하이머 병력이 없거나, 부보님의 아토피 피부염 병력이 없고, 피부 발진 검사 결과가 음성인 구성원들로 모집하였다.

모든 피검자들에 대해 말초혈액(peripheral blood)으로부터 총 혈청 IgE 수치를 측정하였고, 이때 총 혈청 IgE 수치는 형광 효소 면역 측정법(ImmunoCAP system; Phadia AB, Uppsala, Sweden)을 사용하였다. 또한 피검자는 16 알레르겐에 대하여 피부단자검사를 통해 민감도를 측정하였다(사상세모무늬먼지진드기(Dermatophagoides pteronyssinus), 큰다리먼지진드기(Dermatophagoides farina), 개 상피(dog epithelium), 고양이 상피(cat epithelium), 바퀴벌레(cockroach), 잔디, 여러 나무의 꽃가루 혼합물 1 및 2, Alternaria(알터나리아), Aspergillus(아스페르길루스), 돼지풀(ragweed), 쑥(mugwort), 우유, 달걀 흰자, 땅콩 및 콩).

상기 피부단자검에서 하나 이상의 포지티브 반응을 나타내면 아토피로 정의하였고, 포지티브 반응은 음성 대조군을 뺀 후, 직경 3 ㎜ 초과하는 것으로 정의하였다. 본 발명에서 한국판 어린이 천식 및 알레르기에 관한 국제 조사(ISAAC) 설문지를 사용하였고, 모든 피험자는 본 발명에 참가하기 위해 부모로부터 서면 동의를 받아 진행하였고, 프로토콜은 지역윤리위원회로부터 승인받았다.

피검자들의 임상학적 특징들을 표 1에 요약하였다. 앞서 살펴본 바와 같이 420명의 아토피 피부염 환자와 444명의 정상 대조군으로 구성된 집단(cohort)을 모집하였고, 아토피 피부염 환자들의 평균연령이 정상 대조군보다 대체적으로 낮았다(7.0±3.7 year vs. 11.9±2.1 year, P < 0.01). 총 혈청 IgE 수치는 아토피 피부염 환자가 정상 대조군보다 유의하게 더 높았다(660.8±1040.1 IU/ml vs. 119.9±225.1 IU/ml, P < 0.01).

임상 프로파일 (Clinical profile )	아토피 피부염 환자	정상 대조군	P-value
피검자 수(n)	420	444	-
연령(year)	7.0±3.7	11.9±2.1	< 0.01
성별(male, %)	54.9	41.0	-
SCORAD	69.66±18.28	NA	-
총 IgE(IU/ml)	660.8±1040.1	119.9±225.1	< 0.01

SCORAD, scoring AD; NA, not applicable.

데이터는 평균 ± 표준편차이다.

P값은 아토피 피부염 환자와 정상 대조군 사이의 차이에 대한 수치이다.

< 실시예 2> PTGR2 의 단일염기다형성(SNP) 유전자형( genotyping ), LD, 해플로타입 ( Haplotype ) 분석

추적연구 대상으로 GWAS에서 가장 유의한 연관성을 보인 유전자인 PTGR2를 선택하였다. 마이너 대립형질 빈도(minor allele frequency, MAF) 및 연관 불평형(linkage disequilibrium, LD)를 고려하여 유전자로부터 유전자 앞쪽 2 kb 와 뒤쪽 1 kb의 범위를 포함하는 17개의 PTGR2 유전자 SNP를 선택하였다. 구체적으로 MAF 0.05 이상인이고, 아시아 인종 자료(중국 및 일본 포함)에서 LD를 고려하여 1000 Genomes Project(http://browser.1000genomes.org/index.html)로부터 총 17개의 SNP를 선택하였다.

DNA는 WizPrepTM gDNA Mini Kit(Wizbio solutions, 성남, 한국)를 이용하여 말초 혈액으로부터 분리하였다. 상기 혈액 시료의 유전형은 Fluidigm SNP Type^TM 분석 플랫폼을 갖춘 고효율 플루이다임 EP1 시스템(high-throughput Fluidigm EP1 system)(Fluidigm, South San Francisco, CA)을 사용하여 분석하였다. 메뉴얼에 따라 수행하였고, 특정 표적 증폭 반응을 사용하여 Qiagen 2X Multiplex PCR Master Mix(Qiagen, Hilden, Germany)를 사용하여 표적 게놈 영역의 카피수를 증가시켰다. 동적 어레이 IFC(Integrated Fluidic Circuits, Fluidigm)에서 증폭 반응을 수행하고, 형광 강도를 EP1 판독기로 측정하였다. 유전형은 Fluidigm SNP Genotyping Analysis 프로그램을 사용하여 분석하였다. SNP 결정(determination)은 육안 검사를 통해 수행되었고, 전체 시료 중에서 call rate가 95% 이상인 SNP를 선택하였다.

통계분석(statistics)은 다음과 같이 수행되었다. 연관 불평형(LD)은 Broad Institute((http://www.broadinstitute.org/mpg/haploview)로부터 얻은 Haploview v4.2 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. Lewontin's D'(|D'|) 및 LD 상관계수 r²를 검사하여 2대립유전자 위치(biallelic loci)의 모든 쌍 사이의 연관 불균형(LD)를 측정하였다. PHASE 소프트웨어를 사용하여 해플로타입(Haplotypes) 연관성을 평가하였다. 해플로타입 연관성(association)의 경우, 0.05 이상의 빈도를 갖는 일반적인 해플로타입만 분석되었다.

로지스틱 분석 및 선형 회귀 분석은 통계 분석 시스템 소프트웨어(SAS, v9.4)을 사용하여 연관 분석을 수행하였다. 다변수 분석을 위해, 연령과 성별을 공변량으로 하여 P 값을 계산하였다. 0.05 미만의 P 값은 통계적으로 유의하다고 간주하였다.

도 1은 PTGR2 유전자의 물리적 지도, 해플로타입 및 LD를 나타낸 것이다. 도 1A는 PTGR2 유전자의 물리적 지도와 본 연구에서 확인된 SNP 유전형을 나타낸 것이다. ■은 암호화된 엑손이고, □은 5'-UTR(5'-untranslated region)과 3'-UTR을 의미한다. 도 1B는 PTGR2 유전자의 해플로타입을 나타낸 것이다. 도 1C는 PTRG2 유전자의 LD 플롯이고, 본 실험에서 조사된 SNP는 하나의 LD 블록을 구성하며, 블록 번호는 LD 계수 |D'|의 수치를 나타낸다.

도 1에 나타난 바와 같이, 상술한 방법에 따라 염색체 14q24.3(~35 kb)에서 PTGR2(NM_001146154.1)의 총 17개 SNP(단일염기다형성)을 확인 및 선택되었고, 성공적으로 864명 피검자들을 대상으로 유전형을 결정하였음을 확인하였다. 또한, 염기서열의 쌍(Pair-wise) 비교를 통해 하나의 LD 블록을 확인하였고, PHASE 소프트웨어를 사용하여 4 개의 해플로타입(ht1, ht2, ht3, ht4)을 확인하였다.

< 실시예 3> PTGR2 임상 유전형( clincal phenotypes)과 아토피 피부염의 연관성 분석(Association analysis)

Case-control 분석을 위해 피검자들의 나이와 성별을 공변량으로 하여, 로지스틱 회귀 분석(Logistic regression analysis)을 수행하였고, 이를 표 2, 3에 나타내었다. 표 2는 아토피 피부염과 SNP의 연관성 분석 결과이다. 표 3은 아토피 피부염과 해플로타입의 연관성 분석 결과이다.

SNP	위치 (a.a. change)	Minor allele	MAF		Genetic model
			MAF		Additive		Dominant		Recessive
			아토피 피부염 환자 (420명)	정상 대조군 (444명)	OR (95% CI)	P	OR (95% CI)	P	OR (95% CI)	P
rs35423936	Promoter	G	0.062	0.062	0.98 (0.52-1.62)	0.93	0.96 (0.56-1.62)	0.86	1.88 (0.12-29.20)	0.65
rs17092737	Promoter	T	0.425	0.431	0.98 (0.77-1.26)	0.90	0.96 (0.66-1.40)	0.83	1.00 (0.64-1.58)	0.99
rs72627109	Promoter	C	0.431	0.444	0.96 (0.75-1.23)	0.74	0.93 (0.63-1.35)	0.69	0.97 (0.62-1.52)	0.90
rs8020630	5'UTR	A	0.163	0.166	0.82 (0.57-1.18)	0.29	0.82 (0.56-1.21)	0.32	0.59 (0.11-3.08)	0.53
rs17092878	Intron	A	0.473	0.498	0.89 (0.69-1.14)	0.36	0.86 (0.58-1.28)	0.45	0.85 (0.56-1.29)	0.45
rs9646165	Intron	A	0.289	0.264	1.36 (1.01-1.83)	0.044	1.45 (1.00-2.11)	0.05	1.50 (0.73-3.05)	0.27
rs1962795	Intron	A	0.121	0.111	0.95 (0.64-1.43)	0.82	0.94 (0.61-1.44)	0.77	1.25 (0.19-8.10)	0.82
rs1968106	Intron	G	0.033	0.048	0.55 (0.29-1.04)	0.07	0.58 (0.30-1.12)	0.10	.	0.98
rs1968105	Intron	G	0.037	0.059	0.50 (0.27-0.92)	0.026	0.52 (0.28-0.98)	0.041	.	0.98
rs17782222	Intron	A	0.061	0.044	1.33 (0.75-2.34)	0.33	1.38 (0.77-2.47)	0.28	.	0.99
rs11159042	Exon (Gly76Gly)	A	0.406	0.391	1.15 (0.89-1.48)	0.28	1.25 (0.86-1.81)	0.24	1.14 (0.71-1.83)	0.60
rs45559033	Intron	G	0.467	0.435	1.20 (0.94-1.54)	0.14	1.45 (0.98-2.13)	0.06	1.11 (0.72-1.71)	0.63
rs11621087	Intron	T	0.061	0.052	1.12 (0.64-1.97)	0.70	1.12 (0.64-1.97)	0.70	.	.
rs78870464	Intron	G	0.073	0.071	0.87 (0.53-1.43)	0.59	0.90 (0.54-1.51)	0.69	.	0.98
rs17782239	Intron	T	0.150	0.150	0.78 (0.54-1.14)	0.20	0.76 (0.51-1.14)	0.18	0.85 (0.17-4.37)	0.85
rs6574151	Intron	A	0.342	0.327	1.17 (0.90-1.52)	0.23	1.16 (0.81-1.65)	0.42	1.43 (0.83-2.46)	0.20
rs8005140	Intron	A	0.121	0.113	0.95 (0.64-1.42)	0.81	0.94 (0.61-1.43)	0.76	1.25 (0.19-8.10)	0.82

Haplotype	빈도		Genetic model
	빈도		Additive		Dominant		Recessive
	아토피 피부염 환자 (420명)	정상대조군 (444명)	OR (95% CI)	P	OR (95% CI)	P	OR (95% CI)	P
ht1	0.424	0.428	0.99 (0.77-1.27)	0.91	0.97 (0.67-1.41)	0.86	1.00 (0.63-1.58)	0.99
ht2	0.286	0.253	1.39 (1.05-1.85)	0.02	1.43 (0.99-2.05)	0.05	1.82 (0.92-3.62)	0.09
ht3	0.061	0.068	0.73 (0.43-1.24)	0.24	0.74 (0.43-1.27)	0.27	0.26 (0.01-10.47)	0.48
ht4	0.062	0.062	0.98 (0.59-1.62)	0.93	0.96 (0.56-1.62)	0.86	1.88 (0.12-29.20)	0.65

표 2 및 3에서 로지스틱 회귀 분석의 p 값은 나이와 성별을 공변량으로 하여 조정하였고, 아토피 피부염 환자와 정상대조군으로부터 편차에 대한 수치이다. 굵은 글씨는 P<0.05의 통계적 유의성을 나타내며, MAF는 마이너 대립형질 빈도, a.a는 아미노산, OR은 승산비(odds ratio), CI는 신뢰 구간(confidence interval)을 의미한다.

표 2에 나타난 바와 같이, 2 개의 SNP(P = 0.026 at rs1968105, P = 0.044 at rs9646165)이 아토피 피부염 발병과 상당히 유의한 연관성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 상기 SNP를 제외한 PTGR2 유전자 내의 다른 유전적 다형성과 아토피 피부염 사이에는 어떠한 연관성도 검출되지 않았다. 또한, 해플로타입 분석에서 해플로타입2(ht2, P = 0.02)가 아토피 피부염 발병과 상당히 유의한 연관성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 즉, 2 개의 SNP(P = 0.026 at rs1968105, P = 0.044 at rs9646165)와 ht2는 아토피 피부염의 위험성에 대해 민감한 효과를 가지고 있음을 알 수 있다.

아토피 피부염 환자와 정상 대조군 사이에서 PTGR2 유전자형과 아토피 피부염의 SCORAD와의 연관성 분석을 위해, 피검자들의 나이와 성별을 공변량으로 하여, 선형 회귀 분석(linear regression analysis)을 수행하였고, 이를 표 4에 나타내었다.

SNP	위치 (a.a. change)	Minor allele	SCORAD
			Score			P-value
			M/M (n)	M/m (n)	m/m (n)	Additive	Dominant	Recessive
rs35423936	Promoter	G	69.23±5.41 (164)	72.87±14.87 (24)	62.6 (1)	0.39	0.33	0.73
rs17092737	Promoter	T	69.76±8.79 (63)	69.15±7.25 (91)	70.80±11.97 (35)	0.99	0.84	0.81
rs72627109	Promoter	C	70.00±8.89 (62)	68.99±7.23 (91)	70.73±11.79 (36)	0.94	0.76	0.82
rs8020630	5'UTR	A	67.78±5.99 (128)	74.34±9.76 (58)	59.13±34.14 (3)	0.09	0.036	0.30
rs17092878	Intron	A	69.96±9.70 (52)	69.55±7.21 (93)	69.54±10.48 (44)	0.76	0.77	0.85
rs9646165	Intron	A	72.90±7.40 (97)	65.92±7.51 (77)	64.15±20.29 (10)	0.020	0.017	0.38
rs1962795	Intron	A	67.92±5.66 (144)	75.45±11.37 (44)	65.4 (1)	0.021	0.015	0.77
rs1968106	Intron	G	69.39±5.28 (173)	72.54±18.14 (16)	.	0.87	0.87	.
rs1968105	Intron	G	69.34±5.30 (171)	72.62±17.12 (18)	.	0.81	0.81	.
rs17782222	Intron	A	69.28±5.36 (167)	72.53±15.46 (22)	.	0.44	0.44	.
rs11159042	Exon (Gly76Gly)	A	70.44±8.67 (66)	70.94±7.28 (95)	63.45±11.99 (28)	0.24	0.77	0.07
rs45559033	Intron	G	70.94±9.74 (53)	69.937.03 (99)	67.10±11.03 (37)	0.43	0.61	0.43
rs11621087	Intron	T	69.43±5.37 (167)	69.90±15.25 (21)	.	0.90	0.90	.
rs78870464	Intron	G	68.81±5.41 (162)	74.73±14.38 (27)	.	0.13	0.13	.
rs17782239	Intron	T	67.24±5.77 (136)	76.21±10.78 (50)	69.93±40.38 (3)	0.006	0.002	0.96
rs6574151	Intron	A	71.95±7.80 (85)	68.40±7.46 (84)	65.17±14.57 (20)	0.10	0.12	0.32
rs8005140	Intron	A	67.92±5.66 (144)	75.45±11.37 (44)	65.40 (1)	0.021	0.015	0.77
Haplotype
ht1			69.78±8.79 (63)	69.15±7.25 (91)	70.80±11.97 (35)	0.99	0.84	0.81
ht2			72.83±7.21 (102)	65.54±7.72 (72)	67.85±17.52 (15)	0.06	0.02	0.79
ht3			68.55±5.34 (165)	77.30±15.78 (24)	.	0.02	0.02	.
ht4			69.23±5.41 (164)	72.87±14.87 (24)	62.60 (1)	0.39	0.33	0.73

선형 회귀 분석의 P 값은 공변수로서 연령, 성별을 조정한 공동-우성-열성 유전자형 모델을 사용하여 계산되었다.

M/M, M/m, 및 m/m은 각각 보편적 대립유전자(major allele)에 대한 동형접합자(homozygote), 이형접합자(heterozygote) 및 희귀 대립유전자(minor allele)에 대한 동형접합자(homozygote)를 나타낸다.

굵은 수치는 P<0.05의 통계적 유의성을 나타내며, a.a는 아미노산, n은 피검사자의 수를 의미한다.

표 4는 아토피 피부염 환자에서 SCORAD와 총 IgE를 위해 연령과 성별을 공변량으로 하여 조정된 선형 회귀 분석 결과이다. 이에 따르면 아토피 피부염 환자에서 아토피 피부염 평가의 유의한 지침으로써 사용될 수 있다. 구체적으로 4 SNP(rs9646165에서 P = 0.02, rs1962795에서 P = 0.021, rs17782239에서 P = 0.006 , rs8005140에서 P = 0.021)와 해플로타입3(haplotype 3, ht3, P = 0.02)은 SCORAD에서 유의한 신호를 갖고 있는 것으로 확인되었다. 게다가 rs8020630(P = 0.036)과 ht2(P = 0.02)는 우성 유전자형 모델에서 SCORAD과 유의한 연관성을 보였다.

아토피 피부염 환자와 정상 대조군 사이에서 PTGR2 유전자형과 총 IgE의 연관성 분석을 위해, 피검자들의 나이와 성별을 공변량으로 하여, 선형 회귀 분석(linear regression analysis)을 수행하였고, 이를 표 5에 나타내었다.

SNP	Position (a.a. change)	Minor allele	Total IgE
			Score			P-value
			M/M (n)	M/m (n)	m/m (n)	Additive	Dominant	Recessive
rs35423936	Promoter	G	650.9±34.0 (366)	735.5±106.2 (48)	186.6±131.9 (2)	0.88	0.76	0.47
rs17092737	Promoter	T	591.9±49.5 (143)	724.9±52.4 (191)	625.0±69.4 (81)	0.57	0.31	0.86
rs72627109	Promoter	C	594.9±50.1 (141)	720.9±52.2 (191)	623.2±68.0 (84)	0.63	0.37	0.85
rs8020630	5'UTR	A	661.5±39.1 (286)	668.8±60.1 (124)	298.9±122.0 (6)	0.96	0.88	0.43
rs17092878	Intron	A	555.1±50.7 (120)	719.7±51.1 (198)	661.1±66.8 (98)	0.37	0.18	0.92
rs9646165	Intron	A	631.5±45.1 (196)	654.9±51.0 (165)	563.3±102.8 (30)	0.66	0.83	0.54
rs1962795	Intron	A	684.0±38.3 (319)	587.3±60.9 (93)	272.8±136.4 (4)	0.47	0.56	0.38
rs1968106	Intron	G	665.7±33.8 (388)	557.7±105.4 (28)	.	0.70	0.70	.
rs1968105	Intron	G	669.9±34.1 (385)	516.2±92.7 (31)	.	0.55	0.55	.
rs17782222	Intron	A	672.5±35.2 (365)	557.6±78.1 (51)	.	0.54	0.54	.
rs11159042	Exon (Gly76Gly)	A	667.6±55.1 (147)	659.8±46.5 (201)	634.6±77.0 (68)	0.64	0.75	0.65
rs45559033	Intron	G	716.8±66.0 (118)	631.2±43.8 (208)	644.8±68.0 (90)	0.45	0.39	0.74
rs11621087	Intron	T	677.2±35.5 (364)	536.1±75.1 (51)	.	0.46	0.46	.
rs78870464	Intron	G	678.2±36.0 (355)	543.4±69.6 (61)	.	0.49	0.49	.
rs17782239	Intron	T	687.6±39.9 (297)	606.7±57.3 (112)	286.3±116.9 (6)	0.61	0.75	0.40
rs6574151	Intron	A	694.1±51.2 (184)	608.2±45.2 (181)	708.1±99.2 (51)	0.62	0.48	0.98
rs8005140	Intron	A	684.0±38.3 (319)	587.3±60.9 (93)	272.8±136.4 (4)	0.47	0.56	0.38
Haplotype
ht1			589.1±49.1 (144)	724.9±52.4 (191)	835.6±69.4 (81)	0.55	0.30	0.87
ht2			654.7±44.7 (215)	665.3±51.8 (165)	648.8±108.1 (36)	0.74	0.81	0.73
ht3			669.5±34.9 (367)	584.0±84.3 (48)	168.0 (1)	0.70	0.74	0.72
ht4			650.9±34.0 (366)	735.5±106.2 (48)	186.6±131.9 (2)	0.88	0.76	0.47

총 IgE과의 연관성 분석 결과인 표 5를 살펴본 결과, SNPs와 haplotypes와의 유의성이 있는 연관성은 관찰되지 않았다(P> 0.05, 표 5). 이를 통해 아토피 피부염의 임상지표 중 하나인 인 총 IgE에 대해서는 유전적 연관성이 나타나지 않음을 확인하였다.

이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현 예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

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atagaaatgt 540 acctataaat cctctactca tctcttgaat ttttgggaac tcattttggc gagaaaaatc 600 acacttgtta caaggagttc acagacccta gaatcaagag agctaaaact aattaataca 660 catacatata tttaaaattt ttgagacaag gtatcagtct gtcacccagg ctggagtgca 720 gtggtgtgat caaggctcgc tgcagcctac tgagcagctg agagactacc agcaagcacc 780 accacaccta gctaatttca ttttattttt tattttttga agaaatgcgg tttcaccacg 840 ttgcccaggc tggtctcgaa ctcctgactc aagcaatcca cctgcctctg cctcccaaag 900 gtctgagatt acaggcgtga gccactgcgt ccagccccaa aactaattta atattgcagg 960 gcttcttttc tattttgaaa gtgtttcttt taaatcaagt tctagattac ctttatttta 1020 tactactact ttttgtctat ttgagcattt tatttttcat catttggttt aagtcattac 1080 aaaaggcatt gaaggtctgt ctacctgtcc atgacagata aaagagatta gctcctgtct 1140 gaaaatgttt gcaaagtagt gtaattctcc tagtccttcc tgaagctttc ccaaagaagc 1200 aaaaatattc agacataaag ctaccaggaa ctccaacctg tttgatcact attcccttgc 1260 tcaccaacct agtcatcttt cagctactcc atgcatgact tgtgctgagc tattagctcc 1320 cacatgaata caagcaattc ttatacctgc ctaattcaga tgatctttct tagggtttga 1380 agtccctggg gatccgaagc tgtcctaggt atacacttct ctcaacccag tccagcacaa 1440 aaggagacga ctaacgatga atgaaattga gaaatcagcc cacactggta atcttggagg 1500 aatttggtat tcttcgtgaa ataaaagagg cgcaaagggg ccctggatta gggtccggag 1560 agaggggttt tatcccagca ctgcccctaa ccagctgaaa ggtaggtggt ccaatcacat 1620 cagctctccg agactcagtt tccccatcta taaaacaagg agtaggcttg acggtccctg 1680 tctcactata atttcccaat cgaggttcag ggagaaatcc acaaaactaa taaaacttct 1740 tcacggactg ctaaatgtga actcactggt caaggctgca agatttgctc tttgggtcaa 1800 ggcagtaggg gcggccacaa ggaaccaatc tcagttaagt tattaatgca ctttgcccag 1860 actagtaact ctcccctgac gttccgcatt tcccttgctt ctcccggaaa cgtggggcgc 1920 ccaggaatcc taaacttcca atccctaagc ttccaaaccc cgcccctggg aggggagggg 1980 gcgcggagcc gggcctagtc gcgcgcctgc gtactgcggt cagagggccg aggcctgggg 2040 gcgagctggg gtcgtgcagt acagcctctt tccggcaaat cacgcgagat ttcgttcacc 2100 cgggctccac agggtcagtg acgcgcgagc ggctcccgcg actgtggctc ccgaagctgc 2160 ttcgggcccc agcggtgagg aagaagactc tcaaccaggg tgacttctag gcgtcctccc 2220 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tctcggctca ctgcagcctc agtctcctgg gttcaggcag ttctccagct tcagcctcct 3120 gtgtagctgg gactataggc gcccaccacc acgcttaatt tttgtatttt tagtagagcg 3180 gggttttccc atgttggcca gactggtctc gaattcctgg cctcaagtga gcctcccacc 3240 tcagcctccc aaagtgctgg aattacaggt gtgagccacg gctctgggcc cagaaagata 3300 cgttttataa caaggcgtgg tcaacagggt tgctagtggc agaataatcg cacgaaataa 3360 gggtattaaa aggtattagg aagctcatgt gatggaaata gcaggtgccg tgttggagta 3420 tgggttctag cgttattaca agttgggcga ctctgggcga attattctct ttctgtacct 3480 cttttttctt ctcttttttc tttttttttg agatggagtt tcgctcttgt cgcccatgct 3540 ggagtgcaat ggcgtgatct cggctcactg caacctccac ctcccggttt aaagcgattc 3600 cccagcctca gcctccagag tagctgggat tacaggcgcc cgccaccacg ccgggctgat 3660 ttttgtattt ttagtagagg tggggtttcg ccgttttgtc ggagctggtc tcaaactcct 3720 gacctcaagt gatctgccca cctcagcttc ccaaagtgct gggattacag gcctgagcca 3780 ccatacccgg ccccttttct catctataaa attgagagga tgatattacc aacctcacag 3840 tttttttggg gtgagggtgg gggaggtggt ttaaacaggc tagtgaatga gtctgtgctc 3900 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tataatatac atattaatat gttaaacaaa taaagcatac cattgacagt aattagaggg 4800 caaatatgat atttcatttg gaaagactgc tttgaaaatt tagccattat ggttctatta 4860 ctacttaagg acttttagac ccacttaatt tggaaaactt tggcttttta atccttatat 4920 aattgacaca tatggtgatt ctgtagaaag tttccttttt aaaacatatg tagccctaca 4980 tgacattatg gacctcttgg tgtgatgaat ggatgtggca ccacccttaa agattcttgc 5040 ctgaaaaatt gaacctgaag taatcaagcc tctagatgta actagcagtc atggataagg 5100 ggaggagata gaagaaacat ttccttcttt ctttaaaagc tagtcattta ccttgtgatg 5160 gtaaatgaca ccatgaggaa gcaatcaaag aacattctac aagcaaagta atgaagaaac 5220 aaatcaaggg catgaaataa atggaaggga gactcaaact gtagtatgtg gaccttgaat 5280 cctgatttta atgaaccaac tgtaaaaaga catctttgaa acatttttga aaccaactgt 5340 aaaaagatat ctttgaacat cctgaaacgt caggaaattt gaatatgcac taggtattag 5400 atgatgataa ggaattgcca gtactactat taggtgtaat aatggcatag tgtttatgtt 5460 taaatctgtg atggctgggt tatagtcatt tgccatataa tgacggttca gacaatgaca 5520 gacgatgagc ctcccataac attataatgg aattgaaaaa ttcctcttgc ctggtgatgt 5580 catagtcatc agaacgttat agtgcaatta ctttattttt attatttatt tattgagaca 5640 gggtctcact ctgtcaccca gactggagta cagtggcgtg atctcggctc accgcaacct 5700 ccacctcttg agttcaagca attctcctgc ctcagtctct gagtagctgg gattacaggc 5760 gtgcaccacc atgcctggct gatttttgta tgtttagtag agacagggtt tcaccatgtt 5820 ggtcaggctg gttgtgaact cctgacctta aatgatgcac ctgcctcagc ctcccaaagt 5880 gctgggatta caggcatgag ccaccacgcc cggagtatta ctttattttt taagaaattt 5940 agtggggccg ggcgcggtgg ctcatgcctg taatcccagc actttgggag gccgaggcgg 6000 gtggatcatg aggtcaggag tttgagaaca gcctgaccaa catggtgaaa ccccgtctct 6060 actaaaaata caaaaattag ccgggcatgg tggcacgcac ctgtaatccc agctacttgg 6120 gaggctgagg caggagaatc gcttgaatct ggaaggcaga ggttgcagtg agctgagatt 6180 gcgccactgc actccagcct gggcgacaga gcaagactct gtttcaaaaa aaaaagaaag 6240 aaatttagtg tagtctaagt gcatagtgtt aataaagtct aagtagccta cagtaatgtc 6300 ctaggctttc acattccctc accactcact ccctgactca tccagagcaa cttctaatct 6360 ggtaggctcc attcatggta agttacccta tataggtata ccattttaaa atcttttttg 6420 ttgttgtttt ttttgaggcg gagtttcact cgtcacccag actggagtgc agtggcgcaa 6480 tcttggctca ctgcaatctc cacctccagg gttcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc 6540 aagtagctgg gactacaggc atgggccacc tgcccaccgg ctattttttt ttgtattttt 6600 agtagagaca ggatttcatc atgttagcca ggctggtctc gaactcctga cctcaggtga 6660 tctgcccgcc ttggcctccc aaagtgctgg gattacaagg gtgagccacc gctcccagcc 6720 catttttaaa tcttttaccc catattttta ctgtactttt tctatgttta gatacacaaa 6780 tacttaccat cgtgttccag ttgtctgcag cattcagtac agcaacatgc catataggtt 6840 tgtaccgtag aagttataag ctaaaccata tcacctaggt gtctagtaat ctgtaccatg 6900 taggtttgtg taagtatact ctgatgttca cacaatgatt aaatcaccta atgtcacatt 6960 tctcagcatg tatcccagta gtcaagctgt acaaagcact cacaagagtg cttggcacat 7020 agtaacacta agggcttgat tttctaattt tcactggtgg ataaagtaag caaagtgatt 7080 ttcagcaagt cagatagtgc tagtactgga agttcttttg ctttcttcat tagctcaaat 7140 tctaaatcca gaataaactg gccagatgta gtggctcacg cctgtaatcc cagcactttg 7200 ggaggtcgag atgggaggat cacttgagcc caggaattcg agaccagcct gagcaacata 7260 gcgagacctc atctcaaaaa acaaaacaga ataaactgat cctttactta ttggccatat 7320 tgtgatatgg aatttcctat aaggtaagga tttttaaatt ccttgatata ttacttttat 7380 tgtcagctaa actataaagg aatttccgtt tttttttttt ttaattcacc actgataaga 7440 aggcaaagga atttccattt tgatgaacga atagaagagc ctttgaaaat ttggttacgt 7500 ggctgggctt ggtggctcat gcctgtaatc ccagcacttt gtgaggccaa ggtgggcaga 7560 tcacttgagg tcaggagttc aagacccgcc tggccaacat ggtgaaaccc tgtctctact 7620 aaaaatacaa aaaattagca gggcaccgtg gtgcacgcct gtaatcccag ctacttggga 7680 agctgaggca ggagaattgt ttgaacccag gaagcagagg ttgcggtgag ctgagatcgc 7740 gccactgcac tccagcttgg gtgacagagt aagattctgt cccccactcc aaaaaaaaaa 7800 tttttttgat tacatgtcaa ttaagcagtt agtgtttttt tttttttttt ttttttgaga 7860 cagaatctcg ctctgttgcc caggctggag tgcagtggtg cgatctcggc tcactgcaag 7920 ctccgcctcc cgggtccacg ccattctcct gcgtcagcct ccggagtagc tgggactaca 7980 ggctcccgct accacgcctg gcttattttt ttgtattttt agtagagacg gggtttcacc 8040 atgttaggca ggatggtctt gaactcttga ccttgtgatc cacccgcctc ggcctcccaa 8100 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tttttttgtt atgtagaggc 12300 tgattatctt tttcattatt gaagacattt ttaaaaaatg agcaacttta ttatttttat 12360 taacttttgt tgttgttgtt tgtttgtttg tttttgagac agagtcttgc tctgtcgccc 12420 aggctggagt gcagtggcgc gatctcggct cactgcaagc tccgcctccc gggttcacgc 12480 cattctcctg cctcagccac ccgagcagcc aggactacag gcaaccgcca ccacgcccgg 12540 ctaatttttt gtatttttag tagagatggg gtttcactgt gttagccagg atggtcttga 12600 tctcctgacc tcgtgatcca cccgcctcgg cctcccaaag tgctgggatt acaggcgtga 12660 gccactgcgc ctggcctatt tttatcaaca ttctaaatag ttgaaacaga agtatataaa 12720 gtaggaagtg aaagagtgcc cgtacaaagg atcgcttatt gatctgctgt ctaggtaaca 12780 gcaatgtacc aatgttaatg tcctgctttt gatattatat tgcagctatt aaagacgtca 12840 ctactgcggc aagctgagtg aaggactgtg gacttcattt tattaatttt taactttttt 12900 gaaatgagat ctctattgct gaggctgagt gcagtggtgt gaatacagct cactgcagcc 12960 tcgacctcct gggctcaagc agtcctccca tctcagcttc ccaactagca gggaccacag 13020 gtatgcacca ccacacccgg ctaatttttt tgttttttgt agagatgggg tcttgccatg 13080 ttgcccaggt tggtcttgaa ctcctggact 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ggcacagtgg ctcatgcctg caatcccagt 28080 gctttgggag gccaacttgg caggattact tgaggaaagg agcacaagac cagcctgggc 28140 aacatagtaa gactcttcag taaataaatt agcccagcgt ggtggcacgc ctgttgtcct 28200 aactacttga gaggctgagg caggaagagt acttcagccc aggagtttga agttacagtg 28260 agctatgatt gcaccactgt actccagcct gggtgacaga ccctgtttct ttaaaaaaac 28320 aaaaaaagaa tcttataaaa gtacatcctt ttataaataa tagcctttat aggttgaaac 28380 cattgaaaac aaacattgtg tccgagctgt gattttagtt cgccacaagc ttgaaaaata 28440 atgaattgca cgtgatgttt tgggtctgat tatttattcc ttttatgaaa tcagatttaa 28500 tttgcgaaat tttatttttt taaatttaat tattattctt tgattttata tttttcaatg 28560 agtgaaagcc aaaaattgtg agattttaac atttaaacta cctatggtcc ccaacttatg 28620 atggttctac tttacagtga tgcaaaagcc ctatgcattc agtggaagcc atactttgaa 28680 ttttgaattt tggtcttttc ccaggctagc gatatcagta tgacactctc tcgagatgct 28740 gggcagcggc aacaagctgt agctcctggt cagccaccgt atgtggctga acaactccgt 28800 gaatcatgcc cagctggagt ggatgtttat tttgacaatg accataaggg taaacaactg 28860 gtactctacg gtgtactgtg ttgccagatg attttgccca gccataagtg ttctgagcat 28920 gttttaggta ggctaggcta agctatgatg ttcagtaggt taggtatatt aaatgcattt 28980 tttgcttagg atattttcaa ctaatgatgg ttttattggg acatatccct atcataagtt 29040 gaggaacata agtctacctt tgttcaattt taataatttt tttttaggat gacattgtct 29100 gccctcagtt cttttagttt caaattactt ttcattaaaa gcagcgtaat ctaaccttaa 29160 ttgtaatgaa cactgtcata tacctgtaat atcttgtata ctggtacatt tttacattta 29220 aatgtgacaa tataaagcca tttaatcttc aaatttcccc cctagattgg ccatttctta 29280 ggttgttcca gagtggtggg aatttgtgga acacatgaga aatgcatcct cttgacctca 29340 gaactgggct ttgatgctgc aattaattat aaaaaagaca atgtggcaga acagctccgt 29400 gaatcatgcc cagctggagt ggatgtttat tttgacaatg ttggtggtaa catcagtgat 29460 acagtgataa gtcaggttgt ttgctgattt ctataacaaa tttgaatact gcactttata 29520 tgttgtgata tctttttacc taatactgag aaaaaaattt ataaaattgg agggattatt 29580 gtgacttaat gtgatgatca gtattgtatt taagtgatac aaaagagctt gctgatacct 29640 acttccattt acttgcagat ttgtactatg aacttcaatt tcagttattt gctaccaata 29700 ttatattttt cacttttggt ttatttttgt gaaaaattac agttgcattg ttgaaatgct 29760 gaagcactga tccctaactc accactgacc aactcacagc catggcccca gacctatggg 29820 tttcataggc tgcatgtatt tatgcatatt tactaacaat attataaaat atcaacatga 29880 ggtattaaca ctacatagtc ctttgctgca tctaaaatta tttgcagttg agattattaa 29940 attgtttaaa tccaaaaaaa tacagttcta ccactaataa gtagcaacaa caactaatgt 30000 aattcttttg ctgattacca accatttatt tgccttggtg ttcctttgga atgtaattat 30060 ttctagctag ttaaaattct taaatacctc taacaggtaa attaaaaaaa aaatcgaact 30120 agttgacaga aaggattaaa tagtcaagga ggcttccatt atggcagcca taaaatcagt 30180 aaacatagga aagggatatt ttatcattat ttttctctgt gcagatgaat gagaacagcc 30240 acatcatcct gtgtggtcaa atttctcagt acaacaaaga tgtgccttat cctcccccgc 30300 tatcccctgc tatagaggca atccagaaag aaagaaacat cacaaggtgt gttcttcctc 30360 tttgccctta ttaccaggtt catggggttt taaatatcat agatgtgtat gaaatctatt 30420 gttcttcata gacacttttt ctttattaaa taaaacttta ggtcgggcat agtggcttat 30480 gcctgtaatc ctagcacttt gggatgccga gacgggtgga ttgcttgagg ccaggagttc 30540 aaaactagcc tggccaacat ggtgaaaccc cttctctact aaaaatacaa aaaaattagc 30600 cgggtgtagt gatgggcgcc tgtaatccca gctacttggg aggctgaggc aggagaatca 30660 cttgaacctg ggaggtggag gttgcagtga gccaaaatca tgccactgca ctccatccag 30720 cctgggcaat gaaaacgaaa ctccatctca aaaaaacaaa aaaaaaaaaa caaaaaaaaa 30780 cctttaaaat acacattttt taagctggtt caatatttag gttctggcta actagctacc 30840 tgaaaactga tagttattgg ctttgactgg cctgggttaa gtcacatgag ggtcgagaaa 30900 ggatgctacc cacaaaggaa aaattcacgg tgctattaac aaatggggtt gtagatactg 30960 ggcagacaaa aattattatt atttgagatg gagtctcgct cagccgccca ggctggagta 31020 aagtggcgcg atcgcagctc actaaaacca ccgtctccca ggttcaagcg attctcctgt 31080 ctcagcctcc cgagtagctg ggactacagg cgctcactac catgcccggc taattttttt 31140 gtatttttag tagagacggg ggtttcaccg tgttggccag gctggtcttg aaaaattatt 31200 aatagaagtc tacatttaca cctgtaacta tgcataaaac tatctgatca gactcaatgt 31260 gttatgtcct aatattttaa ggattaacag atattagaat tctggaatgg tttgatcttg 31320 gaataccact cccgttatat tctctgatca ttatcctttt cttcctcact gcagggaaag 31380 atttctggta ttaaattata aagacaaatt tgagcctggc attctacagc tgagtcagtg 31440 gtttaaagaa ggaaagctaa aggtagaact tctattcttt atcaatataa ttcttcctgc 31500 tacttgatat aattttgcat tatttaaatg tactatagca aacatactag tttcattata 31560 aaaattccta caaaagaaaa gtatgctgaa tattataaat taactctacc tcccaggtga 31620 gtataacctc ctgatcaaca aacccttgct tgttattccc tttatctaaa attttttagc 31680 tttactttcc atagattata ttacaaaatc attaggtttt cccccaaatg taaaattatg 31740 tttattaatt taacaaatat ttatgggatg ctactatgtg ttagaagctg tgctttctca 31800 aaaataatgt gagcacctcc tgatgcttat accaccatac ttcttccctg tcctccctgg 31860 acattctaat gtatgtctta gttgttgatc gaaaatcagg agttattaat ctgggcttca 31920 gacatactgg cctaggctat tctttttttt tttttttttt tttttttttt tgagacggag 31980 tctcactttg tcacccaggc tgtagtgcag tggcgcaatc tcggctcact gcaacctccg 32040 cctcctaggt tcaagcaatt attctgcttc agcctcccga gtagctggga ttacaggcac 32100 atgccactcg ctcagctaat ttttgtattt ttagtagaga tggggtttca ccatgttggc 32160 caggctggtc tcaaactcct gacctcaagt gttctgccca tccagcctcc caaagtgctg 32220 ggattacagt tgtgaaccag tgcacctgga ctggcctagg ctattcttga aacctgcaaa 32280 tgataagcaa agttgtacct ttgtgtgctt ctgtactgtt ctttttctgt tttagagtgt 32340 atagcttgtg atctgttact aattgaagag attaaacaat gggaaaatag gatattactt 32400 taaaaaatca attgatagga agcttttctg ggctacctac atgaaataaa gaatatctat 32460 ttttagacaa agtgctaaat agtattgctg gcttttgtaa gtatggaaac tatcatatag 32520 aaacattgaa gtttaaagac tattaaatct agctattttg atttacagat taaagagacg 32580 gtaataaatg ggttggaaaa catgggaggt aagatgaatg tagacttatt atatacacat 32640 gctcagcaca caaagataaa gtctctttat ttttatttat ttatttttga gacggagtct 32700 tgctctgttg cccaggctgg agtgtagtgg catgatctca gctcactgca agctccgcct 32760 tccaggctca cgccattctc ctgcctcagc ctcccaagta gctgggacta caggcgcctg 32820 ccaccacgcc tggctaattt tttgtatttt tagtagagac ggggtttcac tgtcttagcc 32880 aggatggtat cgatctcctg acctcgtgat ctgcctgcct tggcctccca aagtgctggg 32940 attacaagcg tgagccacca cgcctggccc tttttttttt tttttttttt tttttttttt 33000 ttttttttga gacggagtct tgctctgtct cccaggctgg agtgcagtgg tatgatcttg 33060 gctcactgca acctccacct cccgagatca agcaattctc ctgcctcagt ctaccaagta 33120 gctgggacta caggcgtgca ctggtatgcc tggctaattt ttgtattttt agtagagaca 33180 gggtttcaac atattggcca ggctggtctt gaactcctga attcaagtga tttgcctgcc 33240 tcggcctctc aaagtgctgg gattacaggc gtgagccacc gcacaggcca aagtctttta 33300 tcttttaatg ctacctctct ggcctcccct tccctgccct tccctcccct cacctccctt 33360 tttttttttt tttttttttt tttttttttt aaagagatga tcttgctctg ttgcccaggc 33420 tggagtgcag tggcatgatc atagctaact gtaacttatg aacccatggg ctcaagcaat 33480 cctctcacca gagtagctgg tactacaatt acctgccact atgcccaacc tttttttttt 33540 ttttaatttt ccatagaaac agggtctcac tatattgtcc aggcaactcc tggcctcaaa 33600 tgatccttct gcctcagcct cccaaagtgc tggaatttac aggtgtgagt gcctagccct 33660 ttttttaatt tttgagacag ggccatgctc tgtcacccgg gctggagtgc agtggtgcga 33720 tcatggctca ctgcagcctc tacctcccag gttcaggtga tgctcccacc ttagcccccc 33780 gagtagctgg gactacaggc acacaccacc actcccagct gatttttgta tttttagtag 33840 agatggggtt tcaccatgtt ggtcaggctg gtcttaaact cctgacttca agtgatccac 33900 ccaccttggc ctcccaaagt gctgggatta cagtcgtgag gccccatgcc cggccttcac 33960 tcacatttta ttcccatttt tttttgcctc tagtcttcag atactgtaaa caatgaacat 34020 tgatgtgcat accagttaga taccaattaa atctttccag tatgggcaaa acattttttt 34080 aagatgttaa ttgggttagt ttgtgtgtaa ctttttactt gagatttctt ttcatgacca 34140 ttttcttcta tgcttaatat tcaaaatcat tgaaaaagtt atttaacata attttatatg 34200 ttgtaccttt tggaaacaag tatgatagtg acatttatct tttcagataa cctactttct 34260 ctttttccag ctgcattcca gtccatgatg acaggaggta acattggaaa gcagatagtt 34320 tgcatttcag aagaaatctc tttgtaattg ctgtaaatgt catcaaggca atcatagatt 34380 tcttttccat tttgcatatt ttcaaagata tgttaaaaaa tccttagact atacatagct 34440 cttgatttaa atgtgatcat aggtgttatt tttagttgca tagggtattt gatacaatca 34500 ttaatggatc atacacaata ggtttttaaa aattaataac ttttagtaat tacttttatt 34560 aatttaaaat agaacgcttg agaggcactt tgtaaagatt tgttaaactg gaaacgtttt 34620 acatgatctg atacaaccat taatgaatca tacacaatag gttttttaaa attaatatta 34680 ataactttta ttaatttaaa atagaatgct taaaataaaa tagaatgctt gagaggcact 34740 gagtaaagat ttgttgaact ggaaatgttt tacatgattc ttaaactgaa acttggtgta 34800 aaaatagaat tgagatggcc tttttttcac attgtagact gaaaagagac ttaatggtat 34860 gatgtgtaca tagggactgg gggcaggatt gggggtttcg gagcttgtgt aacagttttt 34920 gggataggag accagcggtt ttgggttggg attagtatgg gaagataaat aacttaggtt 34980 ggttaagttg acaagattta ctccagagga tcatctcttt gtatttgcca aataatttac 35040 tgtatagcct aaaaactcca tatatattga gaaaagcata tgtttatttt aggttagcag 35100 gcacatactg tcaagttgta aagattgaga gggcaaacag atgtaaacat cacttgtagg 35160 tgattaaaaa gattgacagc cgggcctgat gtctcaagcc tgtaatccta gcactttggg 35220 aggcagaggc gggcagatca cttgaggtca ggagttcaag accagcctgg ccaacacggt 35280 gaaaccccat ctctctaaaa atacaaaaat tagctgggcg tggtggcaca cgcctgtaat 35340 cccagctact caggaggctg aggctggaga atcatttgaa cctgggaggg ggaggttgcc 35400 gtgagctgag cttgcaccat tgcactccag cctgggcgac aagagtgaaa ttccatctca 35460 aaaaacaaaa acagattgac aacaaagaca gtttcagaaa atgacaggac tgggcaaatt 35520 aacaaatgtt tgtaaacatg aatgttcagg aactactgat gtacctcaaa agtttgtttt 35580 attaattgta ctcaaccctc gcagaacagt aaaactgaag attattgttt ctgaa 35635

Claims

서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 포함하는 20 내지 100 개의 연속된 DNA를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 한국인의 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물.
서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 한국인의 아토피 피부염 예측 또는 진단용 조성물.
제1항의 조성물을 포함하는 한국인의 아토피 피부염 예측 또는 진단용 키트.
아토피 피부염 질환의 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,
서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, rs1968105#G 또는 rs9646165#A의 단일염기다형성(SNP)을 증폭하는 단계;를 포함하는 한국인의 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형 분석방법.
서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 구성하는 SNP 증폭을 위한 20 내지 100 개의 연속된 DNA로 구성되는 한국인의 아토피 피부염 진단을 위한 마커 조성물.
서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 구성하는 SNP 각각을 포함하는 20 내지 100 개의 연속된 DNA를 검출 또는 증폭할 수 있는 제제를 포함하는 한국인의 아토피 피부염 예측 또는 진단용 조성물.
제6항에 따른 조성물을 포함하는 한국인의 아토피 피부염 예측 또는 진단용 키트.
아토피 피부염 질환의 진단에 필요한 정보를 제공하기 위하여,
서열번호 1의 PTGR2 유전자의 염기서열에 있어서, 55 번째 염기가 C이고, 467 번째 염기가 C이며, 1603 번째 염기가 T이고, 2140 번째 염기가 G이며, 4789 번째 염기가 G이고, 8274 번째 염기가 A이고, 8718 번째 염기가 G이고, 12369 번째 염기가 T이고, 12372 번째 염기가 T이고, 22016 번째 염기가 T이고, 24264 번째 염기가 A이고, 24591 번째 염기가 G이고, 25623 번째 염기가 C이고, 30880 번째 염기가 A이고, 30906 번째 염기가 C이고, 32286 번째 염기가 A이고, 32694 번째 염기가 G인 해플로타입을 구성하는 SNP를 증폭하는 단계;를 포함하는 한국인의 아토피 피부염에 대한 유전자 PTGR2의 유전자형 분석방법.