CN111454925A - 桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用 - Google Patents

桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用。所述基因、蛋白的序列分别如基因编码序列表中SED ID NO.1和SED ID NO.2所示。本发明通过桑树在镉胁迫下的生理生化检测以及公开桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2，完善桑树在镉胁迫下生理生化以及信号通道蛋白的表达分析和应用。可以用于桑树在镉胁迫下生理生化变化分析以及桑树中信号通道蛋白基因研究。使用VIGS技术，将桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因转入根瘤农杆菌GV3101，利用病毒沉默原理减少基因的表达，后检测转基因植株的生理生化指标以研究桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2在提高植物抗逆性上的作用。

Description

桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，涉及一种桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用。
背景技术
重金属污染指由重金属或其化合物造成的环境污染。主要由采矿、废气排放、污水灌溉和使用重金属超标制品等人为因素所致。因人类活动导致环境中的重金属含量增加，超出正常范围，直接危害人体健康，并导致环境质量恶化。其中，重金属镉被公认为是对植物伤害最为严重的一种重金属，每年因农业实践、垃圾倾倒、冶金和制造业发展等因素向环境中释放的镉高达3万吨，其中约87％的镉会进入到土壤中，镉极易被植物吸收继而在植物中累计，导致农作物减产，还会进一步危害动物以及人类的健康。如今利用生态改造环境成为环境治理的热门手段，想要通过植物吸附土壤中的重金属镉以减轻重金属镉的毒害作用，需深入研究植物对镉的吸附作用机理，才能从分子生物学途径改良植物品种，提高植物对镉的耐受力。
在镉胁迫下，植物体内的可溶性蛋白质、过氧化物酶活性、超氧化物歧化酶活性、脯氨酸含量、丙二醛含量等生理生化指标会产生一系列变化，来响应植物镉胁迫。Ca2+作为植物第二信使广泛参与植物对多种生物和非生物胁迫的响应，在细胞信号转导中发挥着重要作用，植物受到外界逆境胁迫时，细胞中的钙信号经钙传感蛋白传递到下游组分从而引起相关基因的差异表达，钙依赖蛋白激酶(calcium-dependent protein kinase,CDPK)作为Ca2+的感受器普遍存在于植物和部分原生动物中，是植物特有的一类丝氨酸/苏氨酸型蛋白激酶，参与了多种Ca2+介导的信号通路，在植物发育信号和逆境信号转导中具有重要作用。
CDPK在植物体内分布十分广泛，在植物的种子、果实、根、茎、叶、花以及花粉中均有分布，与此同时在多种组织细胞中也有分布。植物体内的CDPK会以可溶性以及膜融合两种方式分布在细胞的各个组成中。在拟南芥中，CDPK表达量快速增加以应对干旱和高盐胁迫。OsCDPK7超量表达来参与水稻在面临干旱、低温以及盐胁迫下的信号转导。
病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing，VIGS)是近年来发现的一种转录后基因沉默现象，是植物抵抗病毒侵染的一种自然机制。VIGS现已被开发为快速鉴定植物基因功能的一种反向遗传学新技术，至今已经建立了以RNA病毒、DNA病毒、卫星病毒和DNA卫星分子为载体的VIGS体系。VIGS无需构建转基因植株，具有周期短、操作简便、获得表型快速、成本低等优点，目前，这种反向遗传学新技术已广泛应用于与植物抗病、逆境胁迫、细胞信号转导以及生长发育等相关基因功能的研究，在植物功能基因组学的研究中发挥重要作用。
我国拥有悠久的桑树种植历史，经过桑树种质资源以及育种人员的努力，全国现已保存的桑树种质资源近3000份，种质资源极为丰富。而现在，桑产业多元化发展成为主流，其中生态桑越来越引起人们关注。而关于桑树在镉胁迫环境下的CDPK基因转录水平的变化及如何利用桑树在镉胁迫下的基因表达调控来缓解镉胁迫对桑树的影响还鲜有报道。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中的不足，提供一种钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用，桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2主要存在与桑树中，可用于桑树在镉胁迫环境下的基因表达调控。
本发明公开一种桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2在作为桑树镉胁迫条件下表达标志物中的应用，所述桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2为由基因编码序列表中SEQ ID NO.2所示序列。
所述桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示序列。
本发明的有益效果：
本发明公开一种钙依赖蛋白激酶MmCDPK2，在完善桑树生理生化指标检测数据以及基因组同时提供了桑树钙依赖蛋白激酶在不同含量镉条件下的表达分析和应用。可以用于桑树中的钙依赖蛋白激酶在不同镉含量条件下的表达调控以及提高植物抗镉能力中的研究。
附图说明
图1为桑树在镉胁迫下可溶性蛋白质检测结果图；
图2为桑树在镉胁迫下过氧化物酶活性检测结果图；
图3为桑树在镉胁迫下超氧化物歧化酶活性检测结果图；
图4为桑树在镉胁迫下脯氨酸含量检测结果图；
图5为桑述在镉胁迫下丙二醛含量检测结果图；
图6为钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2的扩增结果图：M：5000bp DNA分子标记，1：RT-PCR产物；
图7为钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因推导的氨基酸序列保守区预测软件截图；
图8为钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因原核表达检测结果图，其中，M：proteinMarker，1：诱导前样品，2～6：诱导后样品；
图9为转基因桑树在镉胁迫下可溶性蛋白质检测结果图；
图10为转基因桑树在镉胁迫下过氧化物酶活性检测结果图；
图11为转基因桑树在镉胁迫下超氧化物歧化酶活性检测结果图；
图12为转基因桑树在镉胁迫下脯氨酸含量检测结果图；
图13为转基因桑述在镉胁迫下丙二醛含量检测结果图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改和替换，均属于本发明的范围。
实施例1桑树在镉胁迫环境下的生理生化含量检测
供试桑树品种为广东桑(Morus atropurpurea Roxb)“大10”，保存于中国农业科学院蚕业研究所国家种质镇江桑园圃。在供试桑苗的新梢生长至约20cm长时，对桑苗分别进行试验条件处理，实验条件分别为：对照组无重金属镉处理；实验组用含100mg/kg CdCl2的营养土进行种植。
在整个处理过程中，所有试验用苗的温度、光照强度、光周期以及湿度等非生物条件均保持不变。
每天定时处理和观察桑树苗的生长趋势，分别于0d、1d、3d、5d和10d时取对照组和实验组的桑树幼叶(第1-3叶位)作为实验材料，用铝箔纸包裹后迅速投入液氮中，放于-80℃的冰箱中保存。在整个处理过程中，所有扦插苗的光照强度、光周期及湿度均保持不变。后根据相应的生理生化检测说明进行检测(检测试剂盒均为苏州科铭生物技术有限公司提供)。所有实验均重复3次。
桑树可溶性蛋白检测：称取约0.1g桑树幼叶，加入1mL提取液，冰浴匀浆，10000rpm、4℃离心10min，取上清。后根据说明书加入工作液，于562nm处测定吸光值，并进行计算。结果如图1所示，在镉胁迫下，桑树幼叶中的可溶性蛋白呈降低后升高的趋势，在第5天时含量最低，但实验组较对照组均为降低趋势。
桑树过氧化物酶活性检测：称取约0.1g桑树幼叶，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。8000g、4℃离心10min，取上清，置于冰上。根据说明书配置工作液，加样，记录470nm下1min时吸光值A1和2min后的吸光值，并进行计算。结果如图2所示，在镉的胁迫下，桑树幼叶中的过氧化物酶活性呈先降低后升高的趋势，其中第10天最低，而第15天和第20天超过对照组的过氧化物酶活性。
桑树超氧化物歧化酶活性检测：称取约0.1g桑树幼叶，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。8000g、4℃离心10min，取上清，置于冰上。根据说明书配置工作液，加样，于560nm处测定吸光值，并进行计算。结果如图3所示，在镉胁迫下，桑树幼叶超氧化歧化酶活性除第一天较对照组活性低，后期均高于对照组酶活。
桑树脯氨酸含量检测：称取约0.1g桑树幼叶，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆；之后置于95℃水浴震荡提取10min；10000g、25℃离心10min，取上清。根据说明书加样配置，于520nm波长处比色，记录吸光值并计算。结果如图4所示，镉胁迫下，桑树幼叶中脯氨酸含量随着处理时间增加而增加。
桑树丙二醛含量检测：称取约0.1g桑树幼叶，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。8000g、4℃离心10min，取上清，置于冰上。后根据说明书加样配置，测定532nm和600nm处的吸光值并计算。结果如图5所示，镉胁迫下，桑树幼叶中丙二醛含量的变化趋势与超氧化歧化酶活性变化趋势一致，均是除第一天较对照组活性低，后期均高于对照组酶活。
实施例2钙依赖蛋白激酶MmCDPK2基因的克隆
利用已获得的包含桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因cDNA片段的CDS序列，设计引物，并加以验证，引物序列如下：
MmCDPK2-F:5'-ATGGGAAATAACTGTGTGAGTTC-3'；
MmCDPK2-R:5'-TTAACAAACAGGCAGTGGCTCC-3'；
桑树钙依赖蛋白激酶2MmCDPK2基因中间cDNA片段的克隆
取广东桑“大10”嫁接苗顶端幼叶，用RNA试剂盒提取桑树总RNA。先准备RNAiso抽提液于离心管中，将桑树嫩叶液氮研磨成粉末状，将粉末放入抽提液的离心管，冰盒上放30min，然后4℃，12000rpm，离心5min，抽取700-800μL上清到新离心管，然后加入200μL氯仿，震荡1min，混匀，冰盒上放置6-10min，然后4℃，12000rpm，20min离心，吸取300μL上清至另一个离心管内。加入等体积预冷的异丙醇，混匀后冰上静置10-15min，13000rpm、4℃离心20min，除上清，缓缓加入1mL预冷的75％乙醇，4℃，13000rpm离心5min，弃上清。然后室温干燥沉淀2-5min。最后加入适量ddH2O，轻弹管壁，以充分溶解RNA。
RNA自身不能作为PCR反应的模板，须现将其反转录为cDNA。以9μL提取的总RNA为模板，oligo(dT)18 4μL为引物进行反转录，70℃保温10min，然后迅速放入冰上至少2min，离心数秒，在上述13μL的模板RNA/oligo(dT)18变性溶液中加入5×M/MLV缓冲液4μL、10mMdNTP混合物1μL、40U/μL RNase Inhibitor 1μL、200U/μL Rtase M-MLV(RnaseH-)1μL，总体积20μL。离心后，在42℃静置1h，70℃静置15min后冰上冷却，得到cDNA第1链，-20℃保存备用。
以合成的cDNA第1链为模板，分别利用上述设计的MmCDPK2-F和MmCDPK2-R为引物进行RT-PCR扩增。PCR扩增程序为：94℃预变性5min；94℃30s，57.6℃35s，72℃50s，循环38次；72℃延伸10min；4℃保存。
各取5μL的RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测目的片段的大小，检测目的片段大小与预测大小是否相符。结果如图6所示，经检验条件相符后，用TAE缓冲液制作的1％琼脂糖凝胶，各取40μL RT-PCR产物进行电泳，采用生工生物工程(公司Gel Extraction Kit)快速琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒进行目的片段的胶回收和纯化。胶回收产物通过DNA连接酶与pMDTM19-T载体连接。连接产物转化到宿主菌E.coli DH10B菌株感受态细胞，涂布于在含有X-Gal、IPTG、Amp的LB固体平板上。挑取单菌落白斑培养后送样测序，测序结果blast分析并与CDS原始序列比对验证。
桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因序列mRNA如序列表中的SEQ ID NO.1所示。
桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因的生物信息学分析
利用在线工具PSORT，根据已报道的文献对目的基因进行核定位序列的预测及相关保守基因序列的分析(图7)；运用NCBI的Blast工具对其进行同源搜索和比对，并下载部分同源氨基酸序列；利用Clustal X软件将基因编码的氨基酸序列与桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因相关蛋白的氨基酸序列进行同源比对；利用DNAStar软件和在线分析(http://www.ebi.ac.uk/interpro/)对桑树钙依赖蛋白激酶MmCDPK2基因进行较全面的分析，比如：该基因所编码的氨基酸及ORF预测，基因编码蛋白质的等电点及分子质量的预测等；然后，用MEGA4.1软件构建进化树，并研究相关蛋白的关系。
桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2蛋白序列全长如SEQ ID NO.2所示。
桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因的原核表达与鉴定
通过测序结果blast分析并与CDS原始序列比对验证，确定广东桑“大10”桑树中钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因序列。在该基因两端分别加上NdeI，XhoI酶切位点，交由安徽环球基因科技有限公司进行序列优化合成，带有酶切位点的基因与pet-22b(+)链接，由安徽环球基因科技有限公司进行检测和原核表达。
桑树VIGS体系的建立及MmCDPK2基因功能鉴定
利用Oligo 7设计桑树MmCDPK2基因的特异性引物MmCDPK2-F1/R1(上游引物和下游引物5’端分别添加BamH I和Xho I酶切位点)进行目的干扰片段的扩增，构建TRV重组病毒载体，通过转化农杆菌GV3101注射接种桑树子叶；引物如下：
MmCDPK2-F1:5'-CGGGATCCAGATGGGTTGTTTCAATCAGT-3'；
MmCDPK2-R2:5'-CCGCTCGAGGCTTTGCTGATTCCAGTTCTC-3'；
根据本实验室现有的桑树VIGS体系的建立技术，培养重组体农杆菌GV3101。选择生长状况良好且生长一致的桑苗，用一次性注射器针头在桑苗子叶背面轻轻划破，注射含有重组病毒载体的农杆菌菌液，每片子叶注射约10μL，使菌液在叶片中扩散，以接种pTRV2空载体的植株作为阴性对照(CK)，接种缓冲液的野生型作为空白对照(WT)，每组10棵，3次重复。注射重组病毒载体后30d，选取形态长势基本一致的幼苗，移栽入上口径20cm，下口径10cm，高20cm的塑料盆进行幼苗培养，基质为含有100mg/kg CdCl2的营养土。分别于0d,1d,3d,5d,8d,10d采样，如上进行生理生化检测。
通过转录组检测，比较对照组与实验组基因表达差异，桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因在镉胁迫下表达量增加，分析CDPK基因在植物遭遇非生物胁迫时会产生表达调控，且基因的催化区在植物中具有高保守性。后经过VIGS技术处理桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因，发现桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因被沉默后，对桑树生理生化指标均产生改变；因此，桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因可以作为桑树是否受到非生物胁迫的标识基因。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。但是以上所述仅为本发明的具体实施例，本发明的技术特征并不局限于此，任何本领域的技术人员在不脱离本发明的技术方案下得出的其他实施方式均应涵盖在本发明的专利范围之中。
序列表
<110> 江苏科技大学
<120> 桑树钙依赖型蛋白激酶及其编码基因和应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1824
<212> DNA
<213> Morus multicaulis
<400> 1
atgggaaata actgtgtgag ttcaagggct atgaaagatg ggttgtttca atcagtttcc 60
aattcaattt ggtggcctaa atcctcctca gattgtttgt ttttccatac tggtaaagaa 120
atcacaagta ctcaggatca atcagattca gaacctcaaa aaattgtcca aaacaaaccc 180
ccagaaacac taaagattgt caaggattat gatgatgaga aaccatttga acccacaaaa 240
gtcagtgtag aggtttcaca agaaaagtcc aaggaagaga ataaaccaag agaacccatt 300
agagaactgg aatcagcaaa gccgacagca cggccgaaaa agcctcacaa tgtcaagaga 360
ttggcgagtg cagggctcca ggcagagtca gttttgcaga ccaaaactgg tcatcttaag 420
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gttcaagttg atggagtggc accagacaag ccccttgatt ccgcggtctt aagtcgcttg 1260
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ctctctgccg aagaaattgc gggcctgaaa gaaatgttta gaatgataga cactgacaat 1380
agtggccaaa ttacttttga agaacttaaa gatggattga aaagatttgg tgctaattta 1440
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cttcaacagg cctgtgagga gtttggcatt gaggatttcc acttagaaga agttatccga 1680
gaagctgatc aggataatga tggtcgaata gatttcaatg aattcgtagc catgatgcag 1740
aaaggcgatg ctgatttggg taagaagagt ctaaagagta gtagttttag tgttggattt 1800
agggagccac tgcctgtttg ttaa 1824
<210> 2
<211> 607
<212> PRT
<213> Morus multicaulis
<400> 2
Met Gly Asn Asn Cys Val Ser Ser Arg Ala Met Lys Asp Gly Leu Phe
1 5 10 15
Gln Ser Val Ser Asn Ser Ile Trp Trp Pro Lys Ser Ser Ser Asp Cys
20 25 30
Leu Phe Phe His Thr Gly Lys Glu Ile Thr Ser Thr Gln Asp Gln Ser
35 40 45
Asp Ser Glu Pro Gln Lys Ile Val Gln Asn Lys Pro Pro Glu Thr Leu
50 55 60
Lys Ile Val Lys Asp Tyr Asp Asp Glu Lys Pro Phe Glu Pro Thr Lys
65 70 75 80
Val Ser Val Glu Val Ser Gln Glu Lys Ser Lys Glu Glu Asn Lys Pro
85 90 95
Arg Glu Pro Ile Arg Glu Leu Glu Ser Ala Lys Pro Thr Ala Arg Pro
100 105 110
Lys Lys Pro His Asn Val Lys Arg Leu Ala Ser Ala Gly Leu Gln Ala
115 120 125
Glu Ser Val Leu Gln Thr Lys Thr Gly His Leu Lys Glu Tyr Tyr Asn
130 135 140
Leu Gly His Lys Leu Gly Ser Gly Gln Phe Gly Thr Thr Phe Leu Cys
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gly Lys Glu Tyr Ala Cys Lys Ser Ile Ala Lys
165 170 175
Arg Lys Leu Leu Thr Asn Asp Asp Val Asp Asp Val Arg Arg Glu Ile
180 185 190
Gln Ile Met His His Leu Ala Gly Asn Ser Asn Val Ile Ser Ile Lys
195 200 205
Gly Ala Tyr Glu Asp Ala Val Ala Val His Val Val Met Glu Leu Cys
210 215 220
Ser Gly Gly Glu Leu Phe Asp Arg Ile Val Lys Arg Gly His Tyr Thr
225 230 235 240
Glu Arg Lys Ala Ala Gln Leu Thr Arg Thr Ile Val Gly Val Ile Glu
245 250 255
Ala Cys His Ser Leu Gly Val Met His Arg Asp Leu Lys Pro Glu Asn
260 265 270
Phe Leu Phe Val Asn Glu Glu Glu Asp Ser Pro Leu Lys Ala Ile Asp
275 280 285
Phe Gly Leu Ser Val Phe Phe Lys Pro Gly Glu Val Phe Ser Asp Val
290 295 300
Val Gly Ser Pro Tyr Tyr Val Ala Pro Glu Ile Leu Gly Arg Arg Tyr
305 310 315 320
Gly Pro Glu Ala Asp Ile Trp Ser Ala Gly Val Ile Val Tyr Ile Leu
325 330 335
Leu Arg Gly Val Pro Pro Phe Trp Ala Glu Asn Glu His Asp Ile Phe
340 345 350
Glu Glu Val Leu His Gly Asp Leu Asp Phe Ser Ser Asp Pro Trp Pro
355 360 365
Ser Ile Ser Asp Ser Ala Lys Asp Leu Val Lys Lys Met Leu His Arg
370 375 380
Asp Pro Lys Lys Arg Pro Thr Ala His Glu Val Leu Cys His Pro Trp
385 390 395 400
Val Gln Val Asp Gly Val Ala Pro Asp Lys Pro Leu Asp Ser Ala Val
405 410 415
Leu Ser Arg Leu Lys Gln Phe Ser Ala Met Asn Lys Leu Lys Lys Met
420 425 430
Ala Leu Arg Val Ile Ala Glu His Leu Ser Ala Glu Glu Ile Ala Gly
435 440 445
Leu Lys Glu Met Phe Arg Met Ile Asp Thr Asp Asn Ser Gly Gln Ile
450 455 460
Thr Phe Glu Glu Leu Lys Asp Gly Leu Lys Arg Phe Gly Ala Asn Leu
465 470 475 480
Asn Glu Ser Glu Ile Tyr Gln Leu Met Gln Ala Ala Asp Val Asp Asn
485 490 495
Ser Gly Thr Ile Asp Tyr Lys Glu Phe Ile Ala Ala Thr Leu His Ile
500 505 510
Asn Lys Val Asp Arg Glu Asp His Leu Val Ala Ala Phe Ser Tyr Phe
515 520 525
Asp Arg Asp Gly Ser Gly Tyr Ile Thr Gln Asp Ala Leu Gln Gln Ala
530 535 540
Cys Glu Glu Phe Gly Ile Glu Asp Phe His Leu Glu Glu Val Ile Arg
545 550 555 560
Glu Ala Asp Gln Asp Asn Asp Gly Arg Ile Asp Phe Asn Glu Phe Val
565 570 575
Ala Met Met Gln Lys Gly Asp Ala Asp Leu Gly Lys Lys Ser Leu Lys
580 585 590
Ser Ser Ser Phe Ser Val Gly Phe Arg Glu Pro Leu Pro Val Cys
595 600 605
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atgggaaata actgtgtgag ttc 23
<210> 4
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ttaacaaaca ggcagtggct cc 22

Claims (2)

1.一种桑树钙依赖型蛋白激酶在作为桑树镉胁迫条件下表达标志物中的应用，其特征在于，桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2为由基因编码序列表中SEQ ID NO.2所示序列。
2.如权利要求1所述的桑树钙依赖型蛋白激酶在作为桑树镉胁迫条件下表达标志物中的应用，其特征在于，桑树钙依赖型蛋白激酶MmCDPK2基因的序列如序列表中SEQ ID NO.1所示序列。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112480222A (zh) * 2020-11-27 2021-03-12 江苏科技大学 桑树类驱动蛋白MmKIN-14N及其编码基因和应用
CN114657188A (zh) * 2022-03-24 2022-06-24 湖南农业大学 一种调控水稻镉积累的基因pk1及其蛋白和应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108118063A (zh) * 2017-12-25 2018-06-05 江苏科技大学 桑树钾离子通道相关基因MaKCO5及其应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108118063A (zh) * 2017-12-25 2018-06-05 江苏科技大学 桑树钾离子通道相关基因MaKCO5及其应用

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112480222A (zh) * 2020-11-27 2021-03-12 江苏科技大学 桑树类驱动蛋白MmKIN-14N及其编码基因和应用
CN114657188A (zh) * 2022-03-24 2022-06-24 湖南农业大学 一种调控水稻镉积累的基因pk1及其蛋白和应用
CN114657188B (zh) * 2022-03-24 2023-09-12 湖南农业大学 一种调控水稻镉积累的基因pk1及其蛋白和应用

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