CN111449056A - 一种新型细胞保存液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新型细胞保存液及其制备方法，其涉及保存液领域，旨在解决口腔细胞在现有细胞保存液中存活率低的问题，新型细胞保存液包括以下组分：氯化钠0.41‑1.3wt%，磷酸二氢钠0.07‑1.3wt%，磷酸氢二钠0.01‑1.1wt%，无水乙醇10‑36wt%，柠檬酸钠0.02‑1.5wt%，胰蛋白酶0.02‑1.5wt%，杀菌剂0.2‑0.68wt%，离子补充剂0.16‑0.66wt%，离子螯合剂0.08‑0.23wt%，稳定剂0.03‑1.11wt%，其余为纯化水。本申请制备得到的细胞保存液有效防止常温下样本中微生物种类、相对丰度和完整性发生改变，细胞保存率高，后继可用于酶切、PCR和二代测序等多种生物学实验；而且制备方法简单。

Description

一种新型细胞保存液及其制备方法
技术领域
本发明涉及细胞的技术领域，尤其是涉及一种新型细胞保存液及其制备方法。
背景技术
细胞保存液是起到保持、固定细胞原形态结构的作用的一种试剂，是病理细胞诊断基础，但是，如果细胞形态结构发生变化，可能会带来诊断结果的误差，所以需要利用细胞保存液进行固定细胞形态。
现有申请号为CN201710732482.3的中国专利，公开了一种样本保存液其特征在于：由醇类40-50％，甲醛10-15％，碱类物质适量，保湿剂0.1％，0.5％，氯化钾溶液10-20％，其余为水。
而在人体结构中，口腔和咽部是微生物进入呼吸道、消化道、血液的重要门户，正常情况下口腔微生物群落之间、微生物与宿主之间密切且复杂的相互作用维持着宿主健康，这种生态平衡被打破将会引发疾病，因此口腔细胞的检测十分重要。
但是，由于口腔和喉部会分泌处大量的粘液，使得细胞不能很好地分散在细胞保存液中，造成细胞丰度和完整性的破坏，细胞存活率低影响后续的实验和检测。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种新型细胞保存液及其制备方法，本申请制备得到的细胞保存液可在常温条件下保存口腔和咽部的微生物基因组，有效防止常温下样本中微生物种类、相对丰度和完整性发生改变，细胞保存率高；而且制备方法简单。
本发明的上述发明目的是通过以下技术方案得以实现的：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41-1.3wt％，磷酸二氢钠0.07-1.3wt％，磷酸氢二钠0.01-1.1wt％，无水乙醇10-36wt％，柠檬酸钠0.02-1.5wt％，胰蛋白酶0.02-1.5wt％，杀菌剂0.2-0.68wt％，离子补充剂0.16-0.66wt％，离子螯合剂0.08-0.23wt％，稳定剂0.03-1.11wt％，其余为纯化水。
通过采取上述技术方案，纯化水作为细胞保存液的基体，氯化钠作为细胞保存液的渗透压调节剂，磷酸二氢钠和磷酸氢二钠作为细胞保存液的缓冲剂，无水乙醇作为细胞保存液的固定剂，同时柠檬酸钠作为细胞保存液的抗凝剂，满足细胞在细胞保存液中的基本存活条件；
同时本申请还加入了适宜量的胰蛋白酶，作为一种蛋白质水解酶，可以选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，有效稀释口腔粘液，使得细胞可以充分释放到细胞保存液中；同时本申请还加入了离子补充剂和离子螯合剂，在补充钙离子的同时，对部分钙离子进行络合，规定含量的离子补充剂和离子螯合剂相互配合，可以有有效提高胰蛋白酶的活性稳定性，从而使得口腔细胞更好地分散在细胞保存液中。
杀菌剂和稳定剂则作为功能性添加剂，配合细胞保存液中的其他组分，使得口腔细胞很好地分散在细胞保存液中，使得口腔细胞长时间保持良好的丰度和完成性，提高细胞的存活率，使得细胞后继可用于酶切、PCR和二代测序等多种生物学实验；而且制备方法简单。
本发明的进一步设置为，新型细胞保存液包括以下组分：氯化钠0.82-0.99wt％，磷酸二氢钠0.56-0.98wt％，磷酸氢二钠0.33-0.66wt％，无水乙醇22-32wt％，柠檬酸钠0.64-1.23wt％，胰蛋白酶0.95-1.32wt％，杀菌剂0.4-0.6wt％，离子补充剂0.23-0.46wt％，离子螯合剂0.12-0.21wt％，稳定剂0.12-0.55wt％，其余为纯化水。
通过采取上述技术方案，对细胞保存液中的各个组分含量范围进行进一步地优化，使得细胞保存液中各个组分更好地相互配伍，进一步提高口腔细胞在细胞保存液中的存活率。
本发明的进一步设置为，新型细胞保存液包括以下组分：氯化钠0.88wt％，磷酸二氢钠0.71wt％，磷酸氢二钠0.42wt％，无水乙醇30.2wt％，柠檬酸钠0.76wt％，胰蛋白酶1.26wt％，杀菌剂0.55wt％，离子补充剂0.36wt％，离子螯合剂0.18wt％，稳定剂0.32wt％其余为纯化水。
通过采取上述技术方案，对细胞保存液中的各个组分含量范围进行进一步地确定，使得细胞保存液中各个组分最好地相互配伍，最大限度地提高口腔细胞在细胞保存液中的存活率。
本发明的进一步设置为，所述杀菌剂为聚六亚甲基双胍、咪唑烷基脲、异噻唑啉酮中的一种。
通过采取上述技术方案，聚六亚甲基双胍作为一种环保型的高分子聚合物杀菌消毒剂，不仅溶于水，而且性质稳定，无副作用，将聚六亚甲基双胍加入到细胞保存液中，可以很好地对细胞保存液进行杀菌，减少细胞保存液的变质；咪唑烷基脲极易溶于水，可以很好地分散在细胞保存液中，可以有效减少细胞保存液的腐败变质；异噻唑啉酮作为一种防腐剂，对常见细菌、真菌、藻类等具有很强的抑制和杀灭作用，减少细胞保存液的变质。
本发明的进一步设置为，所述离子螯合剂为乙二胺四乙酸、葡萄糖酸钠、羟基乙叉二膦酸中的一种。
通过采取上述技术方案，乙二胺四乙酸和羟基乙叉二膦酸可以很好地络合细胞保存液中的钙离子，使得细胞保存液中的钙离子保持平衡，从而保持胰蛋白酶的活性，同时乙二胺四乙酸也是一种很好的抗凝剂，可以有效抑制细胞保存液的凝结；葡萄糖酸钠是一种高效螯合剂，同样可以对钙离子进行络合，而且葡萄糖酸钠作为一种缓凝剂和稳定剂，可以提高细胞保存液的稳定性。
本发明的进一步设置为，所述离子补充剂为氯化钙和肝素钙中的一种。
通过采取上述技术方案，氯化钙和肝素钙分散在细胞保存液中后，可以有效增加细胞保存液中的钙离子数量，与离子螯合剂相互配合，可以很高地维持细胞保存液中的钙离子含量平衡，保持胰蛋白酶的活性，同时肝素钙作为一种抗凝剂，可以进一步防止口腔细胞的凝结，提高口腔细胞的存活率。
本发明的进一步设置为，所述稳定剂为丁二醇、山梨糖醇和木糖醇中的一种。
通过采取上述技术方案，丁二醇对水分具有良好的吸附性能，从而可以起到超强的保湿性能，保持细胞保存液的浓度稳定；山梨糖醇和木糖醇同样作为一种吸湿性物质，可以起到良好得稳定效果；
本发明的另一目的在于提供一种新型细胞保存液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至38-40℃，保温1-2分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌1-2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌1-2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2-3分钟后，密封保存。
通过采取上述技术方案，本发明将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠预先混合，然后将混合液加热至合适温度后，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，利用温度将胰蛋白酶的活性提高，再加入离子补充剂，使得离子补充剂和离子螯合剂配合，将胰蛋白酶的活性维持在最佳，最后加入稳定剂和杀菌剂，即可得到性能良好的细胞保存液。
综上所述，本发明的有益技术效果为：
1.本发明加入了适宜量的胰蛋白酶，使得胰蛋白酶选择地水解蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，有效稀释口腔粘液，使得口腔细胞可以充分释放到细胞保存液中；同时本申请还加入了离子补充剂和离子螯合剂，在补充钙离子的同时，对部分钙离子进行络合，规定含量的离子补充剂和离子螯合剂相互配合，可以有有效提高胰蛋白酶的活性稳定性，从而使得口腔细胞更好地分散在细胞保存液中；
2.本发明在制备细胞保存液时，按照规定的顺序和适当的温度，保持了胰蛋白酶的活性，使得细胞保存液可在常温条件下保存口腔和咽部的微生物基因组，有效防止常温下样本中微生物种类、相对丰度和完整性发生改变，细胞保存率高，后继可用于酶切、PCR和二代测序等多种生物学实验；而且制备方法简单。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细说明。
Figure BDA0002506750000000041
实施例一：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，离子补充剂(肝素钙)0.16wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.08wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
实施例二：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.82wt％，磷酸二氢钠0.56wt％，磷酸氢二钠0.33wt％，无水乙醇22wt％，柠檬酸钠0.64wt％，胰蛋白酶0.95wt％，杀菌剂(咪唑烷基脲酮)0.4wt％，离子补充剂(氯化钙)0.23wt％，离子螯合剂(葡萄糖酸钠)0.12wt％，稳定剂(丁二醇酸)0.12wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至40℃，保温2分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌1分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
实施例三：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.88wt％，磷酸二氢钠0.71wt％，磷酸氢二钠0.42wt％，无水乙醇30.2wt％，柠檬酸钠0.76wt％，胰蛋白酶1.26wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.55wt％，离子补充剂(氯化钙)0.36wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.18wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.32wt％其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至38℃，保温2分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌1分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
实施例四：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.99wt％，磷酸二氢钠0.98wt％，磷酸氢二钠0.66wt％，无水乙醇32wt％，柠檬酸钠1.23wt％，胰蛋白酶1.32wt％，杀菌剂(异噻唑啉酮)0.6wt％，离子补充剂(氯化钙)0.46wt％，离子螯合剂(羟基乙叉二膦酸)0.21wt％，稳定剂(木糖醇)0.55wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至40℃，保温2分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌3分钟后，密封保存。
实施例五：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠1.3wt％，磷酸二氢钠1.3wt％，磷酸氢二钠1.1wt％，无水乙醇36wt％，柠檬酸钠1.5wt％，胰蛋白酶1.5wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.68wt％，离子补充剂(氯化钙)0.66wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.23wt％，稳定剂(丁二醇)1.11wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温2分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌1分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌3分钟后，密封保存。
对比例一：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，再以40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
对比例二：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.08wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
对比例三：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，离子补充剂(肝素钙)0.16wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，再以40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
对比例四：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，离子补充剂(肝素钙)0.68wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.08wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
对比例五：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，离子补充剂(肝素钙)0.16wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.25wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
对比例六：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)将步骤(1)中的混合液加热至39℃，保温1分钟，再以40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
对比例七：
一种新型细胞保存液，包括以下组分：氯化钠0.41wt％，磷酸二氢钠0.07wt％，磷酸氢二钠0.01wt％，无水乙醇10wt％，柠檬酸钠0.02wt％，胰蛋白酶0.02wt％，杀菌剂(聚六亚甲基双胍)0.2wt％，离子补充剂(肝素钙)0.16wt％，离子螯合剂(乙二胺四乙酸)0.08wt％，稳定剂(山梨糖醇)0.03wt％，其余为纯化水。
新型细胞保存液的制备方法，包括以下步骤：
(1)将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
(2)在步骤(1)中的混合液中，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2分钟后，密封保存。
性能检测：
取实施例一至实施例五和对比例一至对比例六制备得到的细胞保存液，用同样的取样拭子取人体细胞，细胞浓度在3×10-6-10-7个/m的范围内，然后将取样拭子静置密封保存与细胞保存液中，将细胞保存液置于4℃环境中密封保存；在保存24h、48h、72h、96h后分别取出细胞，用台盼蓝染色，在显微镜下计数观察存活细胞的数量。
表1
时间 实施例一 实施例二 实施例三 实施例四 实施例五
24h细胞存活率(％) 97.88 98.67 99.01 97.12 98.21
48h细胞存活率(％) 94.26 95.02 95.56 93.25 95.00
72h细胞存活率(％) 90.23 91.25 92.12 90.01 92.33
96h细胞存活率(％) 87.99 88.36 89.23 87.56 88.75
表2
Figure BDA0002506750000000091
由实施例一至实施例五的检测结果可知，本申请制备得到的细胞保存液，使得口腔细胞具有优异的存活率；
而且，由对比例一、对比例二、对比例三和对比例六的检测结果可知，由于胰蛋白酶、离子螯合剂和离子补充剂的加入，使得本申请细胞保存液中的口腔细胞存活率大大提高；
由对比例四和对比例五的检测结果可知，胰蛋白酶、离子螯合剂和离子补充剂的含量配合，也影响着细胞的存活率；
由对比例七的检测结果可知，在制备过程中，本申请的温度控制，也进一步提高了口腔细胞在细胞保存液中的存活率。
本具体实施方式的实施例均为本发明的较佳实施例，并非依此限制本发明的保护范围，故：凡依本发明的结构、形状、原理所做的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种新型细胞保存液，其特征在于包括以下组分：氯化钠0.41-1.3wt%，磷酸二氢钠0.07-1.3wt%，磷酸氢二钠0.01-1.1wt%，无水乙醇10-36wt%，柠檬酸钠0.02-1.5wt%，胰蛋白酶0.02-1.5wt%，杀菌剂0.2-0.68wt%，离子补充剂0.16-0.66wt%，离子螯合剂0.08-0.23wt%，稳定剂0.03-1.11wt%，其余为纯化水。
2.根据权利要求1所述的一种新型细胞保存液，其特征在于包括以下组分：氯化钠0.82-0.99wt%，磷酸二氢钠0.56-0.98wt%，磷酸氢二钠0.33-0.66wt%，无水乙醇22-32wt%，柠檬酸钠0.64-1.23wt%，胰蛋白酶0.95-1.32wt%，杀菌剂0.4-0.6wt%，离子补充剂0.23-0.46wt%，离子螯合剂0.12-0.21wt%，稳定剂0.12-0.55wt%，其余为纯化水。
3.根据权利要求2所述的一种新型细胞保存液，其特征在于包括以下组分：氯化钠0.88wt%，磷酸二氢钠0.71wt%，磷酸氢二钠0.42wt%，无水乙醇30.2wt%，柠檬酸钠0.76wt%，胰蛋白酶1.26wt%，杀菌剂0.55wt%，离子补充剂0.36wt%，离子螯合剂0.18wt%，稳定剂0.32wt%，其余为纯化水。
4.根据权利要求1所述的一种新型细胞保存液，其特征在于：所述杀菌剂为聚六亚甲基双胍、咪唑烷基脲、异噻唑啉酮中的一种。
5.根据权利要求1所述的一种新型细胞保存液，其特征在于：所述离子螯合剂为乙二胺四乙酸、葡萄糖酸钠、羟基乙叉二膦酸中的一种。
6.根据权利要求1所述的一种新型细胞保存液，其特征在于：所述离子补充剂为氯化钙和肝素钙中的一种。
7.根据权利要求1所述的一种新型细胞保存液，其特征在于：所述稳定剂为丁二醇、山梨糖醇和木糖醇中的一种。
8.根据权利要求1-7任意一项所述的一种新型细胞保存液的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）将纯化水、氯化钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、无水乙醇和柠檬酸钠置于混合器中混合均匀；
（2）将步骤（1）中的混合液加热至38-40℃，保温1-2分钟，加入胰蛋白酶和离子螯合剂，40转/分钟的转速，搅拌1-2分钟后，加入离子补充剂和稳定剂，再搅拌1-2分钟后，加入杀菌剂，搅拌2-3分钟后，密封保存。
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