CN111443205A - 一种精神类药品滥用五联检测试纸及其制备 - Google Patents

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Abstract

本发明属于药物成瘾检测、免疫传感技术领域，涉及一种精神类药品滥用五联检测试纸及其制备。本发明所述的胶体金试纸条包括PVC底板、样品垫、结合物垫、硝酸纤维素膜以及吸水纸；所述PVC底板上粘贴硝酸纤维素膜，所述硝酸纤维素膜的一端粘贴有结合物垫，另一端粘贴有吸水纸，所述结合物垫上粘贴有样品垫；所述硝酸纤维素膜上设置有测试线(T线)和控制线(C线)，所述测试线上包被有管制类精神药品抗原，所述控制线上包被羊抗鼠单克隆抗体；所述结合物垫上包被有管制类精神药品单克隆抗体。本发明选择五种常见的管制类精神药品苯二氮卓、巴比妥、安眠酮、三环类抗抑郁药、美沙酮作为检测对象，利用胶体金免疫层析技术，制备胶体金管制类精神药品检试剂盒，该方法操作简单，检测时间短，灵敏度高，适合样本的现场批量筛查。

Description

一种精神类药品滥用五联检测试纸及其制备
技术领域
本发明涉及生物试剂快速检测领域，具体而言，涉及管制类精神药品的胶体金试纸条及制备方法。
背景技术
目前常见的管制类精神药品检测方法主要是依靠气相色谱(GS)、高效液相色谱(HPLC)、质谱(MS)和毛细管电泳等方法进行检测，其中，色谱检测法包括气相色谱法，高效液相色谱法以及色谱质谱联用法等，气相色谱法是一种用气体作为流动相的色谱方法，用于分离复杂样品的化合物分析方法，；高效液相色谱法是用液体作为流动相的色谱，分子量较大的、物质热稳定性不好的、不易气化的、沸点高的物质用该仪器分析；但这些方法需要配置昂贵的仪器，复杂的操作过程，专业的人员以及检测时间较长等，不适合样本的快速批量筛查。
目前市场上管制类精神药品试纸条检测产品以尿液产品居多，但尿液在采样过程中受场所限制、性别限制、配合度限制等，所以本专利开发以唾液为样本的管制类精神药品试纸条产品的研究。
发明内容
有鉴于此，本发明实施例的目的在于目前市场上管制类精神药品试纸条检测产品以尿液产品居多，关于唾液试纸条产品的研究还很少。
本发明的技术方案
1)标记物-胶体金制备：取一定量的HAuCl4溶液到三口烧瓶，磁力搅拌下加热30min到120℃，迅速加入一定量的柠檬酸钠到反应液，20min 后停止反应，得到胶体金溶液，调节HAuCl4和柠檬酸钠的添加量，得到不同粒径的胶体金，并对材料大小及形貌进行表征；
2)胶体金标记抗体：取一定量的胶体金，调节pH值，加入一定量的抗精神药品单克隆抗体，搅拌2h。取一定体积10％BSA溶液，继续搅拌30 min。取一定体积的稳定剂，逐滴加入，搅拌30min。一定转速下离心40min。加入重悬液，将重悬液保存备用，优化胶体金的粒径、抗体种类、抗体标记量、T线全抗原喷量、标记pH及封闭方式，得到性能最佳的胶体金-抗体复合物。
3)免疫层析检测方法的建立：
分别在NC膜的适当位置喷涂管制类精神药品-BSA全抗原、羊抗鼠二抗形成检测线(T线)和质控线(C线)。依次按样本垫、结合垫、NC膜、吸水垫的顺序将各部分粘贴于底板上，组装成试纸条。
(1)将所述硝酸纤维素膜粘贴在所述底板固定位置；
(2)将所述吸水纸粘贴在所述硝酸纤维素膜的一侧底板上，所述吸水纸与所述硝酸纤维素膜之间有0.2cm的重叠；
(3)将所述结合物垫粘贴在所述硝酸纤维素膜的另外一侧底板上，所述结合物垫与所述硝酸纤维素膜间有0.2cm的重叠；所述结合物垫包被有胶体金标记的单克隆抗体；
(4)将所述样品垫粘贴在所述结合物垫的另一侧底板上，所述样品垫是由玻璃纤维浸泡处理，37℃烘干制备。
滴加一定量的样本到试纸条加样孔，5min后完成免疫层析过程，可用肉眼判定结果。
本发明技术方案带来的有益效果
1)本发明不需要专门的仪器设备，不需要专业的人员，操作简单、灵敏度高，适用于样本的现场快速检测；
2)本发明选择唾液作为检测对象，与常用的尿液检测相比，唾液检测具有明显的优势，如：可随时随地取样，不受场地和性别的限制；可避免掺假调包；节省人力物料；大幅度提高检测效率等。因此，相比尿液试纸条产品，唾液试纸条产品具有广阔的应用空间；
3)本发明选择常见的五种管制类精神药品苯二氮卓、巴比妥、安眠酮、三环类抗抑郁药、美沙酮作为检测对象，对唾液中五种管制类精神药品含量进行定性检测，该产品填补了国内空白，具有广阔的市场前景。
4)本发明选择粒径为20-40nm胶体金，分别筛选高灵敏抗原抗体，调节ph从6-10，抗体添加量从2-100μg，全抗原喷量从0.05-10mg/ml，金标喷量为1-100μl/ml，使唾液免疫层析试纸条检测灵敏度得到显著提高苯二氮卓、巴比妥、安眠酮、三环类抗抑郁药、美沙酮的检测灵敏度分别为 50ng/ml、50ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、50ng/ml。
5)与常见的尿液试纸条产品相比，唾液试纸条产品具有更高的经济效益，唾液试纸条产品单条收益是尿液试纸条产品的2-2.5倍，该产品开发有利于促进国家GDP增长。
6)本发明选择新型的熬金方法，提高了试纸条的检测灵敏度。为使本发明的上述目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，并配合所附附图，作详细说明如下。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例提供的一种检测管制类精神药品的胶体金试纸条的结构示意图；
图2为本发明所述的联合检测管制类精神药品外观示意图。
图3为本发明所述的联合检测管制类精神药品结果判定图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
应注意到：相似的标号和字母在下面的附图中表示类似项，因此，一旦某一项在一个附图中被定义，则在随后的附图中不需要对其进行进一步定义和解释。同时，在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”等仅用于区分描述，而不能理解为指示或暗示相对重要性。
实施例1
制备一种精神类药品滥用五联检测试纸
A.制备胶体金标记的单克隆抗体
(1)在圆底烧瓶中加入100mL 0.01％的氯化金溶液，磁力搅拌加热至沸腾；然后向上述溶液中加入1.5mL 1％柠檬酸钠，溶液变成酒红色后，继续煮沸10分钟，停止加入，继续搅拌15分钟，得到胶体金溶液，4℃避光保存。
(2)分别向5管，每管1mL的胶体金溶液中加入0.2mol/L K2CO3溶液3微升，混均。5管胶体金溶液分别编号为1，2，3，4，5；分别向编号1的试管中加入10微升苯二氮卓单克隆抗体，编号2试管中加入8微升巴比妥单克隆抗体，编号3试管中加入 12微升安眠酮单克隆抗体，编号4试管中加入10微升三环类抗抑郁药单克隆抗体，编号5试管中加入15微升美沙酮单克隆抗体。室温振荡30分钟，加入10％BSA封闭30分钟，4℃ 10000rmp离心10分钟，弃上清液，用0.01PBS重悬得到五种胶体金标记的单克隆抗体。
B.制备胶体金试纸条：分别将单一种试纸条依次按样本垫、结合垫、 NC膜、吸水垫的顺序将各部分粘贴于底板上，组装成试纸条。再将五种试纸条组合安装到五联卡板(如图2)
(1)将所述硝酸纤维素膜粘贴在所述底板固定位置；
(2)将所述吸水纸粘贴在所述硝酸纤维素膜的一侧底板上，所述吸水纸与所述硝酸纤维素膜之间有0.2cm的重叠；
(3)将所述结合物垫粘贴在所述硝酸纤维素膜的另外一侧底板上，所述结合物垫与所述硝酸纤维素膜间有0.2cm的重叠；所述结合物垫包被有胶体金标记的单克隆抗体；
(4)将所述样品垫粘贴在所述结合物垫的另一侧底板上，所述样品垫是由玻璃纤维浸泡处理，37℃烘干制备。
所述的硝酸纤维素膜上设置有测试线和控制线，靠近吸水纸一端为控制线(C线)，靠近结合物垫一端为测试线(T线)，所述测试线包含被测药品的抗原，所述控制线包被羊抗鼠单克隆抗体。
其中，此种方法制备的胶体金试纸条检测原理：将待测的样本溶液滴加到样品垫，通过与结合物垫的胶体金标记的单克隆抗体特异性结合，结合物层析到包被有待测抗原区域，样品中待测抗原与测试线 (T线)上包被的抗原竞争性结合结合物垫上包被的特异性单克隆抗体，即样品中待测抗原浓度越高，测试带红色越浅；
实施例2
本发明所述的一种精神类药品滥用五联检测试纸，其检测方法如下：
取唾液0.5毫升加入到样本口中，水平静置5分钟，观察试验结果。试验结果表明，随着样品中待测抗原浓度增加，测试线(T线)的红色逐渐变浅。当样品中含有待测抗原浓度高于检出限时，测试线(T 线)完全不显色，即阳性；当样品中不含有待测抗原或者待测抗原浓度低于检出限时，测试线(T线)显示红色色带，即阴性；如果控制线 (C线)不显色，即无效卡。
应当指出，以上所述本发明的具体实施方式，并不构成对本发明保护范围的限定。任何根据本发明的技术构思所作出的各种其他相应的改变与变形，均应包含在本发明权利要求的保护范围内。

Claims (3)

1.一种联合检测管制类精神药品的胶体金试纸条，其特征在于，所述胶体金试纸条包括样品垫、底板、硝酸纤维素膜、结合物垫以及吸水纸，其制备方法如下：
(1)将所述硝酸纤维素膜粘贴在所述底板固定位置；
(2)将所述吸水纸粘贴在所述硝酸纤维素膜的一侧底板上，所述吸水纸与所述硝酸纤维素膜之间有0.2cm的重叠；
(3)将所述结合物垫粘贴在所述硝酸纤维素膜的另外一侧底板上，所述结合物垫与所述硝酸纤维素膜间有0.2cm的重叠；所述结合物垫包被有胶体金标记的单克隆抗体；
(4)将所述样品垫粘贴在所述结合物垫的另一侧底板上，所述样品垫是由玻璃纤维浸泡处理，37℃烘干制备。
2.联合检测选择常见的五种管制类精神药品苯二氮卓、巴比妥、安眠酮、苯环己哌啶、三环类抗抑郁药作为检测对象，制备胶体金五联检试纸条对唾液中五种管制类精神药品含量进行检测。
3.该发明具有重要的实际应用该价值，另外，本发明利用专门的熬金方法制备了高分散度、大小均一的胶体金颗粒，该胶体金对提高胶体金唾液试纸条的检测灵敏度具有重要的作用。
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