CN111440199B - 大环类谷氨酰胺酶gls1抑制剂或其可药用的盐、其制备方法及用途 - Google Patents

大环类谷氨酰胺酶gls1抑制剂或其可药用的盐、其制备方法及用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及生物医药领域，具体包括一系列大环类谷氨酰胺酶的抑制剂、其合成方法以及医药用途，特别是作为预防或治疗谷氨酰胺酶相关疾病。同时发明人针对合成的化合物做了一系列的体外抗肿瘤活性评价，具体来说本发明大部分化合物对癌细胞均有良好的抑制活性。

Description

大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐、其制备方法 及用途
技术领域
本发明涉及谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐、其制备方法及用途，特别涉及大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐、其制备方法及用途。
背景技术
近年来的研究表明，癌细胞为了满足恶性肿瘤快速增殖的需要发展出了一些特殊的新陈代谢方式。肿瘤细胞中葡萄糖以非常规代谢方式，即葡萄糖分解产生的丙酮酸在有氧条件下仍然发生糖酵解转化为乳酸，而不是在线粒体中发生氧化。随后的研究发现，肿瘤细胞的线粒体功能正常，是谷氨酰胺代替葡萄糖供能导致了一系列异常现象的产生。大多数癌细胞可以利用谷氨酰胺提供的碳源进行Krebs循环，以支持蛋白质，核苷酸，脂质和谷胱甘肽的生物合成，其具体表现为癌细胞中的谷氨酰胺成瘾。而近十年来，随着认知程度的逐渐加深，谷氨酰胺代谢已经成为癌症生理学中一个极具吸引力的领域。针对谷氨酰胺代谢途径中各个节点的新型小分子调节剂不断被开发出来。为抗癌药物的发现和治疗调节提供了新的策略。谷氨酰胺酶控制着谷氨酰胺代谢途径的第一步，哺乳动物细胞中有两种GLS同工酶，即肾型谷氨酰胺酶(GLS1)和肝脏型谷氨酰胺酶(GLS2)，其中GLS1在组织中表达更为广泛，被认为是肿瘤抑制的明确靶点。总之，GLS对肿瘤的诊断、进展具有重要的意义在多种肿瘤的发生发展过程中起重要作用。作为肿瘤代谢治疗的潜在靶点，GLS1特异性抑制剂有望成为新型的抗肿瘤代谢药物。
发明内容
发明目的：本发明目的是提供大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐。
本发明另一目的是提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
本发明另一目的是提供一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种所述的具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐，及药学上可接受的辅料。
本发明另一目的是提供所述大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐的制备方法。
本发明最后一目的是提供所述大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐在制备治疗GLS1介导的疾病的药物中的用途。
技术方案：本发明提供一种大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐，所述的具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐在制备治疗GLS1介导的疾病的药物中的用途。
Figure BDA0002407162100000021
其中，n1为1-4的整数；n2,n3为0-8的整数
L1为：CH2SCH2、CH2CH2、CH2CH2CH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、CH＝CH或者
Figure BDA0002407162100000022
其中CH或者CH2中的任何一个氢都可以被烷基或者烷氧基取代；-NH基团中的氢可以被烷基取代；-CH2CH2、CH2CH2CH2基团中的单个CH2可以被羟基取代；
L2为：CH＝CH、CH2CH2、CH2SCH2、CH2、CH2S、SCH2、CH2NHCH2、或者
Figure BDA0002407162100000023
其中CH或者CH2中的任何一个氢都可以被烷基或者烷氧基取代；-NH基团中的氢可以被烷基取代；-CH2CH2基团中的单个CH2可以被羟基取代；
X1、X2分别为：S、O及CH＝CH，其中CH中的任何一个氢都可以被烷基取代；X3为S,O,CH2,CONH,卤原子；
Y为：H或者CH2O(CO)R8，R8为：H、取代的或者不取代的烷基、烷氧基、氨基、杂环烷基、芳香环烷基或者杂环烷氧基；
R1、R2、R6、R7分别为：H、烷基、烷氧基或羟基；
R3、R5分别为：烷烃、取代的烷烃、芳香烃、芳香烷烃、环烷烃、环芳香烷烃、卤素取代的烷烃、杂原子芳香烃、杂原子芳香烷烃、杂原子环烷烃、C(R9)(R10)(R11)、N(R12)(R13)、OR14,任何羟基都可以乙酰化为C(O)R10；
R4为：烷烃、取代的烷烃、环烷烃、芳香烃、芳香烷烃、取代的芳香烃或取代的芳香烷烃、杂原子芳香烃、杂原子芳香烷烃、杂原子环烷烃；
R9、R10、R11分别为：氢、取代或者不取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、乙酰氨基、烯烃、炔烃、烷氧基、芳香基、芳香烷基、环芳香烷烃、环烷烃、杂环或杂原子芳香烃；
R12、R13分别为：氢、取代或者不取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、乙酰氨基、烯烃、炔烃、烷氧基、芳香基、芳香烷基、环烷烃、杂环、杂原子芳香烃，任何羟基都可以乙酰化为C(O)R10；
R14为：氢、取代或者不取代的烷基、羟基、羟基烷基、氨基、乙酰氨基、烯烃、炔烃、烷氧基、芳香基、芳香烷基、环烷烃、杂环、杂原子芳香烃，任何羟基都可以乙酰化为C(O)R10。
进一步地，所述L1为CH2CH2CH2CH2,L2为CH2＝CH2。
进一步地，所述的具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐，为以下任一种：
Figure BDA0002407162100000031
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000032
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000033
Figure BDA0002407162100000034
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000041
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000042
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000043
其中n＝1,3。
Figure BDA0002407162100000044
其中n＝1,3。
Figure BDA0002407162100000051
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000052
其中n＝1,2,3,4。
Figure BDA0002407162100000053
其中n＝2,4。
Figure BDA0002407162100000054
其中n＝2,4。
一种药物组合物，其含有治疗有效量的所述的具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐，及药学上可接受的辅料。
所述的具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
Figure BDA0002407162100000061
化合物(III)分别和不同末端烯烃侧链反应得到对应的化合物(II)，化合物(II)发生RCM反应得到具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂终产物。
所述的具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐在制备治疗GLS1介导的疾病的药物中的用途。
进一步地，所述疾病为结肠癌、乳腺癌或肺癌。
本发明发现了结构新颖高效低毒治疗癌症的新药药物，根据谷氨酰胺酶和代表性GLS1抑制剂BPTES、CB839化合物的晶体结构，设计了大环类抑制剂，并且不同长度环链和取代基对活性的影响，优化最优配置，总结构效关系。设计合成的化合物具有靶向性，能够有效抑制谷氨酰胺酶的活性，阻断谷氨酰胺水解成谷氨酸为肿瘤细胞供应能量，对谷氨酰胺依赖的肿瘤抑制能力非常强。
有益效果：本发明基于谷氨酰胺酶变构位点的晶体结构，设计合成了一系列大环类谷氨酰胺酶抑制剂化合物，可显著抑制谷氨酰胺酶的生物活性。实验结果表明这些化合物在分子水平可以显著地抑制谷氨酰胺酶的活性，阻断谷氨酰胺水解为谷氨酸，在细胞水平和动物水平均表现出良好的抗肿瘤作用，可用于制备抗肿瘤药物。
附图说明
图1为GLS1抑制剂对GLS1蛋白的热稳定迁移实验；
图2化合物LL202与GLS1的共晶结构(PDB:6LOX)；
图3化合物LL202与GLS1的结合模型。
具体实施方式
实施例1
通式化合物I(LL101-LL104)的制备
Figure BDA0002407162100000071
中间体I3a的制备
将3-羟基苯乙酸I1(2.00g，13.14mmol)和3-溴丙烯I2a(3.97g，32.85mmol)溶于50mL乙醇中，加入碳酸钾(7.26g，52.56mmol)，加热回流5小时，冷却至室温后加入氢氧化钾(2.94g，52.56mmol)，室温搅拌12小时。抽滤，将滤液减压除去乙醇和多余的I2a，柱层析得白色固体1.45g，收率71.2％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C11H12O3:193.0859,found:193.0872。
中间体I3b的制备
如制备I3a所述，使用4-溴丁烯I2b代替I2a制备中间体I3b，收率66.4％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C12H14O3:207.1016,found:207.1018。
中间体I3c的制备
如制备I3a所述，使用5-溴戊烯I2c代替I2a制备中间体I3c，收率66.3％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C13H16O3:221.1172,found:221.1175。
中间体I3d的制备
如制备I3a所述，使用6-溴己烯I2d代替I2a制备中间体I3d，收率67.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C14H18O3:235.1329,found:235.1330。
中间体I5的制备
将己二酸I4(10.00g，68.43mmol)和氨基硫脲(12.45g，136.86mmol)置于100ml单颈瓶中，加入三氯氧磷(52.46g，342.15mmol)，加热至回流反应5h，减压蒸除大部分三氯氧磷，加80mL水淬灭剩余三氯氧磷，6N氢氧化钠调pH＝9，析出白色固体后抽滤，滤饼除水干燥，得白色固体13.53g，收率76.9％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C8H12N6S2:257.0638,found:257.0640。
中间体I6a的制备
将中间体I3a(1.50g，7.80mmol)，中间体I5(1.00g，3.90mmol)，HATU(3.26g，8.58mmol)溶于5mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(2.02g，15.60mmol)，室温搅拌4h，将反应液倾入水中有白色固体析出，抽滤，滤饼用甲醇洗涤得白色固体1.14g，收率63.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H32N6O4S2:605.1999,found:605.1999。
中间体I6b的制备
如制备I6a所述，使用I3b代替I3a制备中间体I6b，收率52.6％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H36N6O4S2:633.2321,found:633.2319。
中间体I6c的制备
如制备I6a所述，使用I3c代替I3a制备中间体I6c，收率62.1％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H40N6O4S2:661.2625,found:661.2624。
中间体I6d的制备
如制备I6a所述，使用I3d代替I3a制备中间体I6d，收率收率62.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H44N6O4S2:689.2938,found:689.2938。
化合物LL101的制备
将中间体I6a(0.3g，0.50mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.12g，0.20mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。抽滤，滤饼为未反应完的I6a，滤液减压浓缩后用二氯甲烷洗涤两次，四氢呋喃热洗涤一次，得浅绿色固体30.11mg，收率10.5％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C28H28N6O4S2:577.1686,found:577.1669。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.60(s,2H,-NHCO-),7.23(t,J＝6.0Hz,2H,Ar-H),6.88(s,6H,Ar-H),6.00(s,2H,-CH＝CH-),4.59(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.72(s,4H,-CH2Ph),3.00(s,4H,-CH2CH2-),1.67(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL102的制备
如制备LL101所述，使用中间体I6b代替I6a制备化合物LL102，收率9.6％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H32N6O4S2:605.1999,found:605.1971。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.59(s,2H,-NHCO-),7.24-7.18(m,2H,Ar-H),6.91-6.79(m,6H,Ar-H),5.65(s,2H,-CH＝CH-),3.97(t,J＝6.0Hz,4H,-CH2CH＝CH-),3.73(s,4H,-CH2Ph),3.61(s,4H,-CH2CH2-),2.99(s,4H,-CH2CH2-),1.67(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL103的制备
如制备LL101所述，使用中间体I6c代替I6a制备化合物LL103，收率13.1％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H36N6O4S2:633.2312,found:633.2284。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.63(s,2H,-NHCO-),7.23-7.18(m,2H,Ar-H),6.87-6.79(m,6H,Ar-H),5.48(s,2H,-CH＝CH-),3.91(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.72(s,4H,-CH2Ph),3.60(s,4H,-CH2CH2-),2.99(s,4H,-CH2CH2-),2.12(s,4H,-CH2CH2-),1.69(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL104的制备
如制备LL101所述，使用中间体I6d代替I6a制备化合物LL104，收率11.2％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H40N6O4S2:661.2625,found:661.2607。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.63(s,2H,-NHCO-),7.21(s,2H,Ar-H),6.89-6.80(m,6H,Ar-H),5.43(s,2H,-CH＝CH-),3.92(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.73(s,4H,-CH2Ph),3.60(s,4H,-CH2CH2-),3.00(s,4H,-CH2CH2-),2.02(s,4H,-CH2CH2-),1.69(s,4H,-CH2CH2-),1.47(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
实施例2
通式化合物I(LL105-LL108)的制备
Figure BDA0002407162100000091
中间体I3a-1的制备
将4-羟基苯乙酸I1-1(5.00g，32.86mmol)和3-溴丙烯I2a(9.94g，82.16mmol)溶于50mL乙醇中，加入碳酸钾(18.17g，131.45mmol)，加热回流5小时，冷却至室温后加入氢氧化钾(7.38g，131.45mmol)，25℃下反应12h。抽滤，滤液减压除去乙醇和多余的I2a，柱层析得白色固体1.43g，收率71.2％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C11H12O3:193.0859,found:193.0859。
中间体I3b-1的制备
如制备I3a-1所述，使用4-溴丁烯I2b代替I2a制备中间体I3b-1，收率63.4％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C12H14O3:207.1016,found:207.1018。
中间体I3c-1的制备
如制备I3a-1所述，使用5-溴戊烯I2c代替I2a制备中间体I3c-1，收率55.2％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C13H16O3:221.1172,found:221.1175。
中间体I3d-1的制备
如制备I3a-1所述，使用6-溴丁烯I2d代替I2a制备中间体I3d-1，收率55.8％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C14H18O3:235.1329,found:235.1330。
中间体I6a-1的制备
将中间体I3a-1(1.50g，7.80mmol)，中间体I5(1.00g，3.90mmol)，HATU(3.26g，8.58mmol)溶解在5mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(2.02g，15.60mmol)，25℃下反应4h，将反应液缓慢倾入冰水中有白色固体析出，抽滤，滤饼用甲醇洗涤得白色固体1.05g，收率44.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H32N6O4S2:605.1999found:605.1999。
中间体I6b-1的制备
如制备I6a-1所述，使用I3b代替I3a制备中间体I6b-1，收率42.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H36N6O4S2:633.2321,found:633.2319。
中间体I6c-1的制备
如制备I6a-1所述，使用I3c代替I3a制备中间体I6c-1，收率46.1％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H40N6O4S2:661.2625,found:661.2624。
中间体I6d-1的制备
如制备I6a-1所述，使用I3d-1代替I3a制备中间体I6d-1，收率收率41.01％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H44N6O4S2:689.2938,found:689.2938。
化合物LL105的制备
将中间体I6a-1(0.29g，0.48mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.12g，0.19mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。抽滤，滤饼为未反应完的I6a-1，滤液减压浓缩后用二氯甲烷洗涤两次，四氢呋喃热洗涤一次，得浅绿色固体31.45mg，收率11.4％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C28H28N6O4S2:577.1686,found:577.1667。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.55(s,2H,-NHCO-),7.22(s,2H,Ar-H),6.86(s,6H,Ar-H),5.94(s,2H,-CH＝CH-),4.61(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.62(s,4H,-CH2Ph),2.98(s,4H,-CH2CH2-),1.76(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL106的制备
如制备LL105所述，使用中间体I6b-1代替I6a-1制备化合物LL106，收率8.7％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H32N6O4S2:605.1999,found:605.1975。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.58(s,2H,-NHCO-),7.20-7.17(m,2H,Ar-H),6.86-6.83(m,6H,Ar-H),5.60(s,2H,-CH＝CH-),3.94(t,J＝6.0Hz,4H,-CH2CH＝CH-),3.67(s,4H,-CH2Ph),3.01(s,4H,-CH2CH2-),2.40(s,4H,-CH2CH2-),1.69(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL107的制备
如制备LL105所述，使用中间体I6c-1代替I6a-1制备化合物LL107，收率10.8％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H36N6O4S2:633.2312,found:633.2293。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.59(s,2H,-NHCO-),7.25-7.19(m,2H,Ar-H),6.92-6.89(m,6H,Ar-H),5.87(s,2H,-CH＝CH-),3.98(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.69(s,4H,-CH2Ph),3.55(s,4H,-CH2CH2-),2.99(s,4H,-CH2CH2-),2.18(s,4H,-CH2CH2-),1.72(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL108的制备
如制备LL105所述，使用中间体I6d-1代替I6a-1制备化合物LL-108，收率10.7％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H40N6O4S2:661.2625,found:661.2611。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.61(s,2H,-NHCO-),7.32(s,2H,Ar-H),6.91-6.84(m,6H,Ar-H),5.56(s,2H,-CH＝CH-),3.95(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.68(s,4H,-CH2Ph),3.58(s,4H,-CH2CH2-),3.00(s,4H,-CH2CH2-),2.11(s,4H,-CH2CH2-),1.71(s,4H,-CH2CH2-),1.49(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
实施例3
通式化合物Ⅱ(LL201-LL204)的制备
Figure BDA0002407162100000121
中间体II2的制备
将4-戊炔酸II7(15.00g，152.90mmol)，硫代氨基脲(15.33g，168.19mmol)加入到500mL单颈瓶中，加入三氯氧磷(117.22g，764.52mmol)，加热至回流反应3h，减压蒸除大部分三氯氧磷，加150ml水淬灭剩余三氯氧磷，将溶液用6N氢氧化钠调pH至9后有白色固体析出，抽滤，滤饼干燥，100mL甲醇洗涤，抽滤得黄色固体16.83g，收率71.9％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C6H7N3S:154.0433,found:155.0435。
中间体II4的制备
3-氨基-6-氯哒嗪II3(10.00g，77.19mmol)，氢碘酸(29.62g，231.58mmol)，加入到250mL单颈瓶中，55℃搅拌24h，将反应液冷却至室温，倾入50mL水中，2N氢氧化钠水溶液调pH至10，有黄色固体析出，抽滤，干燥得黄色固体12.56g，收率73.6％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C4H4IN3:221.9523,found:221.9524。
中间体II6的制备
将中间体II5(8.30g，54.18mmol)，中间体II4(11.97g，54.18mmol)，碘化亚铜(1.03g，5.42mmol),三乙胺(27.41g，270.88mmol)，溶于100mL N,N-二甲基乙酰胺中，氮气保护。加Pd(PPh3)4(4.38g，3.79mmol)，再次氮气置换，加热到60℃，搅拌12h，反应液倾入水中，抽滤，滤液用正丁醇萃取，减压蒸除正丁醇，得黄色固体8.53g，收率63.9％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C10H10N6S:247.0760,found:247.0770。
中间体II7的制备
将中间体III(8.53g，34.63mmol)溶于500mL甲醇中，加0.85g雷尼镍，通氢气，室温搅拌24h，抽滤，滤液减压蒸除溶剂得黄色固体7.96g，收率91.81％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C10H14N6S:251.1073,found:251.1069。
中间体II8a的制备
将中间体I3a(0.77g，3.99mmol)，中间体II7(0.50g，2.00mmol)，HATU(1.75g，4.59mmol)溶解在15mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(1.03g，7.99mmol)，25℃反应8h。将反应液倾入水中，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压蒸除溶剂得黄色油状物0.91g，柱层析得黄色固体0.45g，收率37.6％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N6O4S:599.2435,found:599.2438。
中间体II8b的制备
如制备II8a所述，使用I3b代替I3a制备中间体II8b，收率28.7％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N6O4S:627.2748,found:627.2755。
中间体II8c的制备
如制备II8a所述，使用I3c代替I3a制备中间体II8c，收率31.4％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H42N6O4S:655.3061,found:655.3065。
中间体II8d的制备
如制备II8a所述，使用I3d代替I3a制备中间体II8d，收率27.8％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C38H46N6O4S:683.3374,found:683.3375。
化合物LL201的制备
将中间体II8a(0.30g，0.50mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.13g，0.20mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应3h，TLC检测产物点与原料点基本消失，停反应。滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得白色固体20.51mg，收率7.2％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC30H30N6O4S:571.2122,found:571.2106。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.58(s,1H,-NHCO-),11.19(s,1H,-NHCO-),8.18-8.15(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.52-7.49(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.26-7.20(m,2H,Ar-H),6.98-6.85(m,6H,Ar-H),6.01(s,2H,-CH＝CH-),4.58(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.72-3.67(m,4H,-CH2Ph),3.01-2.88(m,4H,-CH2CH2-),1.76-1.69(m,4H,-CH2CH2-)ppm；13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ＝170.98,169.61,164.38,159.89,158.50,158.40,154.53,137.50,136.50,129.85,128.74,122.40,122.34,118.90,116.64,116.16,112.67,112.56,67.29,55.35,43.59,34.41ppm；
化合物LL202的制备
如制备LL201所述，使用中间体II8b代替II8a制备化合物LL202，收率8.9％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N6O4S:599.2435,found:599.2415。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.58(s,1H,-NHCO-),11.16(s,1H,-NHCO-),8.17-8.14(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.52-7.49(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.24-7.19(m,2H,Ar-H),6.89(m,6H,Ar-H),5.60(s,2H,-CH＝CH-),3.97(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.73-3.69(m,4H,-CH2Ph),3.01-2.86(m,4H,-CH2CH2-),2.44(s,4H,-CH2CH2-),1.77-1.69(m,4H,-CH2CH2-)ppm；13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ＝171.00,169.64,164.40,159.86,158.95,158.60,154.52,137.31,136.42,129.84,128.81,128.68,122.22,118.88,114.99,113.87,67.47,41.97,32.40,29.45,29.11,25.58ppm；
化合物LL203的制备
如制备LL201所述，使用中间体II8c代替II8a制备化合物LL203，收率8.3％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N6O4S:627.2748,found:627.2727。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.66(s,1H,-NHCO-),11.26(s,1H,-NHCO-),8.20-8.17(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.55-7.52(m,1H,Ar-H),7.26-7.21(m,2H,Ar-H),6.90(m,6H,Ar-H),5.51(s,2H,-CH＝CH-),3.94(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.74-3.71(m,4H,-CH2Ph),3.02-2.88(m,4H,-CH2CH2-),2.15(s,4H,-CH2CH2-),1.78(s,4H,-CH2CH2-),1.26(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL204的制备
如制备LL201所述，使用中间体II8d代替II8a制备化合物LL204，收率7.0％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H42N6O4S:655.3061,found:655.3040。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.58(s,1H,-NHCO-),11.16(s,1H,-NHCO-),8.17-8.14(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.51-7.48(m,1H,Ar-H),7.23-7.18(m,2H,Ar-H),6.96-6.79(m,6H,Ar-H),5.42(s,2H,-CH＝CH-),3.94(s,4H,-CH2CH＝CH-),3.72-3.69(m,4H,-CH2Ph),3.02-2.86(m,4H,-CH2CH2-),2.02(s,4H,-CH2CH2-),1.79-1.74(s,4H,-CH2CH2-),1.52-1.45(s,4H,-CH2CH2-),1.24(s,4H,-CH2CH2-)ppm；13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ＝171.00,169.62,164.37,159.94,159.14,159.07,158.61,154.52,138.98,137.24,136.42,130.55,129.86,129.75,128.64,122.03,118.88,113.28,67.47,43.46,42.10,33.29,32.03,25.86,25.57ppm；
实施例4
通式化合物ⅡI(LL205)的制备
Figure BDA0002407162100000151
中间体III2的制备
将3-硝基苯乙腈II1(7.8g，48.10mmol)溶于30mL水中，缓慢滴加浓硫酸(23.59g，240.52mmol)，乙酸(28.89g，481.04mmol)，控制温度低于四十度，滴加完毕加热至110℃，反应6h，TLC检测反应完全，反应液冷却至室温后缓慢加入水中，有固体析出，抽滤，滤饼干燥得白色固体7.50g，收率86.1％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C8H7NO4:182.0448,found:182.0448。
中间体III3的制备
将中间体III2(7.5g，41.40mmol)溶于甲醇中，缓慢滴加氯化亚砜(6.40g，52.82mmol)，控制温度低于20℃，滴加完毕后加热至回流，反应4.5h，减压浓缩除去溶剂，得黄色油状物7.13g，收率87.9％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C9H9NO4:196.0604,found:196.0600。
中间体III4的制备
将中间体III3(7.13g，36.38mmol)溶于甲醇中，加入0.7gPd/C，氢气置换。反应6h，抽滤，滤液减压浓缩后得油状物7.5g，硅胶柱层析得透明油状物5.50g，收率91.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C9H11NO2:166.0863,found:166.0865。
中间体III5的制备
将中间体III4(5.50g，33.29mmol)，4-烯戊酸(3.33g，33.29mmol)，HATU(16.46g，43.28mmol)溶于100mL二氯甲烷中，加入DIPEA(12.91g，99.88mmol),室温搅拌30min，TLC检测原料点基本消失，停反应，水洗，1N盐酸洗，饱和食盐水洗，减压浓缩除去溶剂得黄色油状液体6.33g，收率76.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C14H17NO3:248.1281,found:248.1280。
中间体III6的制备
将中间体III5(6.33g，25.60mmol)溶于50ml乙醇中，加入15.3mL 2N氢氧化钠水溶液(5.97g，25.60mmol)，室温搅拌1h，TLC检测基本反应完全，减压浓缩除去乙醇，反应液调pH至酸性，有白色固体析出，抽滤，滤饼干燥得白色固体4.32g，收率72.4％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C13H15NO3:234.1125,found:234.1125。
中间体III7的制备
将中间体II7(0.5g，2mmol),中间体III6(0.88g，3.99mmol)，HATU(1.75g，4.59mmol)溶于15mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(1.03g，7.99mmol)室温搅拌2h，停反应，反应液倾入30mL水中，二氯甲烷萃取，有机相水洗，1N盐酸洗，饱和食盐水洗，减压浓缩除去溶剂，硅胶柱层析得黄色固体0.33g，收率24.27％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculatedfor C36H40N8O4S:681.2966,found:681.2968。
化合物LL205的制备
将中间体III7(0.33g，0.48mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.12g，0.19mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应3h，TLC检测产物点与原料点基本消失，停反应。滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得白色固体31.51mg，收率9.9％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC34H36N8O4S:653.2653,found:653.2635。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:12.64(s,1H,-NHCO-),11.16(s,1H,-NHCO-),9.85(s,2H,-NHCO-),8.18-8.15(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.55-7.51(m,5H,Ar-H),7.25-7.20(m,2H,Ar-H),7.02-6.96(m,6H,Ar-H),5.48(s,2H,-CH＝CH-),3.73-3.71(d,J＝6.0Hz,4H,-CH2CH＝CH-),3.02-2.87(m,4H,-CH2Ph),2.33(s,4H,-CH2CH2-),1.71-1.65(m,4H,-CH2CH2-)ppm；13CNMR(75MHz,DMSO-d6):δ＝171.04,169.71,164.41,160.00,158.61,154.55,139.82,136.48,135.56,129.79,129.18,128.72,124.75,119.77,118.94,118.14,43.44,42.07,36.57,34.51,29.49,28.29ppm；
实施例5
通式化合物IV(LL301-LL304)的制备
Figure BDA0002407162100000171
中间体IV2的制备
将2.45g(27mmol)氨基硫脲，15ml无水乙醇及1.68ml(27mmol)碘甲烷置于单颈烧瓶内，回流反应一小时，得到浅黄色澄清溶液，冷却至0℃，析出大量白色晶体，抽滤得到S-甲基硫代氨基脲。冰盐浴下，将1.5g(40.5mmol)硼氢化钠及2.13g(27mmol)硒粉置于三颈烧瓶内，混合均匀，体系经抽真空并通入氮气，缓慢滴加乙醇15ml，剧烈反应。反应结束后，去冰浴，将S-甲基硫代氨基脲的乙醇溶液注入体系，室温反应过夜。后过滤并用无水乙醇洗涤滤饼，干燥得灰白色氨基硒脲，经柱层析，得到1.2g纯品，收率61％。
中间体IV3的制备
将己二酸I4(10.00g，68.43mmol)和氨基硒脲(19.02g，136.86mmol)置于100ml单颈瓶中，加入三氯氧磷(52.46g，342.15mmol)，加热至回流反应5h，减压蒸除大部分三氯氧磷，加80mL水淬灭剩余三氯氧磷，6N氢氧化钠调pH＝9，析出白色固体后抽滤，滤饼除水干燥，得白色固体13.53g，收率76.9％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C8H12N6Se2:352.9527,found:352.9525。
中间体IV4a的制备
将中间体I3a(1.50g，7.80mmol)，中间体IV3(1.40g，3.90mmol)，HATU(3.26g，8.58mmol)溶于15mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(2.02g，15.60mmol)，室温搅拌4h，将反应液倾入水中有白色固体析出，抽滤，滤饼用甲醇洗涤得白色固体1.14g，收率63.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H32N6O4Se2:701.0888,found:701.0888。
中间体IV4b的制备
如制备IV4a所述，使用中间体I3b代替I3a制备中间体IV4b，收率61.66％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H36N6O4Se2:729.1201,found:729.1200。
中间体IV4c的制备
如制备IV4a所述，使用中间体I3c代替I3a制备中间体IV4c，收率64.56％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H40N6O4Se2:757.1514,found:757.1512。
中间体IV4d的制备
如制备IV4a所述，使用中间体I3d代替I3a制备中间体IV4d，收率65.77％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H54N6O4Se2:785.1827,found:785.1825。
化合物LL301的制备
中间体IV4a(0.2g，0.29mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.07g，0.11mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。抽滤，滤饼为未反应完的IV4a，滤液减压浓缩后柱层析，得到浅黄色固体12.13mg，收率6.15％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H30N8O4Se2:673.0575,found:673.0577。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.03(s,2H,-NHCO-),7.10-7.01(m,4H,Ar-H),6.86-6.68(m,4H,Ar-H),5.86(s,2H,-CH＝CH-),4.65(t,J＝6.0Hz,4H,-CH2CH＝CH-),3.49(s,4H,-CH2Ph),2.11-2.02(m,4H,-CH2CH2-),1.56-1.45(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL302的制备
如制备LL301所述，使用中间体IV4b代替IV4a制备化合物LL302，收率6.71％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N8O4Se2:701.0888,found:701.0886。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.20(t,J＝5.0Hz,2H,Ar-H),7.11(s,2H,Ar-H),7.04(s,2H,-NHCO-),6.90-6.84(m,4H,Ar-H),5.43(s,2H,-CH＝CH-),3.96(t,4H,J＝6.0Hz,-CH2CH2-),3.42(s,4H,-CH2Ph),2.38-2.30(m,4H,-CH2CH＝CH-),2.13(s,4H,-CH2CH2-),1.53(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL303的制备
如制备LL301所述，使用中间体IV4c代替IV4a制备化合物LL303，收率5.81％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N8O4Se2:729.1201,found:729.1203。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.16(t,J＝5.0Hz,2H,Ar-H),7.08(s,2H,Ar-H),7.03(s,2H,-NHCO-),6.92-6.82(m,4H,Ar-H),5.44(s,2H,-CH＝CH-),3.88(t,4H,J＝6.0Hz,-CH2CH2-),3.41(s,4H,-CH2Ph),2.14(s,4H,-CH2CH2-),1.92(s,4H,-CH2CH＝CH-),1.73(s,4H,-CH2CH2-),1.58(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL304的制备
如制备LL301所述，使用中间体IV4d代替IV4a制备化合物LL304，收率7.21％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H40N8O4Se2:757.1514,found:757.1512。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:7.25(t,J＝5.0Hz,2H,Ar-H),7.15(s,2H,Ar-H),6.98(s,2H,-NHCO-),6.94-6.83(m,4H,Ar-H),5.43(s,2H,-CH＝CH-),3.95(t,4H,J＝5.5Hz,-CH2CH2-),3.46(s,4H,-CH2Ph),2.07(s,4H,-CH2CH2-),1.96(s,4H,-CH2CH＝CH-),1.65(s,4H,-CH2CH2-),1.52(s,4H,-CH2CH2-),1.27(s,4H,-CH2CH2-)ppm；
实施例6
通式化合物V(LL401-LL404)的制备
Figure BDA0002407162100000191
中间体V1的制备
将4-戊炔酸II7(15.00g，152.90mmol)，氨基硒脲IV2(23.35g，168.19mmol)加入到500mL单颈瓶中，加入三氯氧磷(117.22g，764.52mmol)，加热至回流反应3h，减压蒸除大部分三氯氧磷，加150ml水淬灭剩余三氯氧磷，将溶液用6N氢氧化钠调pH至9后有白色固体析出，抽滤，滤饼干燥，100mL甲醇洗涤，抽滤得黄色固体16.83g，收率71.9％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C6H7N3Se:201.9878,found:201.9876。
中间体V2的制备
将中间体V1(10.89g，54.18mmol)，中间体II4(11.97g，54.18mmol)，碘化亚铜(1.03g，5.42mmol),三乙胺(27.41g，270.88mmol)，溶于100mL N,N-二甲基乙酰胺中，氮气保护。加Pd(PPh3)4(4.38g，3.79mmol),再次氮气置换，加热到60℃，搅拌12h，反应液倾入水中，抽滤，滤液用正丁醇萃取，减压蒸除正丁醇，得黄色固体10.23g，收率64.22％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C10H10N6Se:295.0205,found:295.0203。
中间体V3的制备
将中间体V2(10.18g，34.63mmol)，溶于500mL甲醇中，加2.65g雷尼镍，通氢气，室温搅拌48h，抽滤，滤液减压蒸除溶剂得黄色固体9.56g，收率92.63％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C10H14N6Se:299.0518,found:299.0516。
中间体V4a的制备
将中间体I3a(0.77g，3.99mmol)，中间体V3(0.60g，2.00mmol)，HATU(1.75g，4.59mmol)溶解在15mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(1.03g，7.99mmol)，25℃反应8h。将反应液倾入水中，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压蒸除溶剂得黄色油状物1.11g，柱层析得黄色固体0.46g，收率38.62％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N6O4Se:647.1880,found:647.1882。
中间体V4b的制备
如制备V4a所述，使用中间体I3b代替I3a制备中间体V4b，收率37.55％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N6O4Se:675.2193,found:675.2195。
中间体V4c的制备
如制备V4a所述，使用中间体I3c代替I3a制备中间体V4c，收率36.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H40N6O4Se:703.2506,found:703.2504。
中间体V4d的制备
如制备V4a所述，使用中间体I3d代替I3a制备中间体V4d，收率37.59％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C38H44N6O4Se:731.2819,found:731.2817。
化合物LL401的制备
将中间体V4a(0.32g，0.50mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.13g，0.20mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应3h，TLC检测产物点与原料点基本消失，停反应。滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得黄色固体20.12mg，收率6.5％，m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC30H30N6O4Se:619.1567,found:619.1566。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.75(s,1H,-NHCO-),8.62(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.14(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.11(s,1H,-NHCO-),7.11-7.02(m,4H,Ar-H),6.89-6.80(m,4H,Ar-H),5.92(s,2H,-CH＝CH-),4.65-4.58(m,4H,-CH2CH＝CH-),3.41(s,4H,-CH2Ph),2.50(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),2.07(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),1.64-1.53(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL402的制备
如制备LL401所述，使用中间体V4b代替V4a制备化合物LL402，收率6.27％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N6O4Se:647.1880,found:647.1882。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.80(s,1H,-NHCO-),8.62(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.24-7.12(m,4H,Ar-H),7.11(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.03(s,1H,-NHCO-),6.92-6.85(m,4H,Ar-H),5.52(s,2H,-CH＝CH-),3.94(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),3.40(s,4H,-CH2Ph),2.51(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),2.39-2.32(m,4H,-CH2CH＝CH-),2.13(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),1.62-1.51(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL403的制备
如制备LL401所述，使用中间体V4c代替V4a制备化合物LL403，收率6.45％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N6O4Se:675.2193,found:675.2195。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.09(s,1H,-NHCO-),8.60(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.22-7.11(m,4H,Ar-H),7.10(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),6.91(s,1H,-NHCO-),6.95-6.86(m,4H,Ar-H),5.44(s,2H,-CH＝CH-),3.96(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),3.41(s,4H,-CH2Ph),2.49(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),2.39-2.32(m,4H,-CH2CH＝CH-),2.10(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),1.77-1.71(m,4H,-CH2CH2-),1.62-1.51(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL404的制备
如制备LL401所述，使用中间体V4d代替V4a制备化合物LL404，收率7.05％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H42N6O4Se:703.2506,found:703.2508。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.72(s,1H,-NHCO-),8.62(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),7.22-7.15(m,4H,Ar-H),7.13(d,J＝9.0Hz,1H,Ar-H),6.92(s,1H,-NHCO-),6.94-6.88(m,4H,Ar-H),5.41(s,2H,-CH＝CH-),3.93(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),3.45(s,4H,-CH2Ph),2.57(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),2.13(t,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH2-),1.97-1.92(m,4H,-CH2CH＝CH-),1.72-1.68(m,4H,-CH2CH2-),1.64-1.50(m,4H,-CH2CH2-)，1.36-1.30(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
实施例7
通式化合物VI(LL501-LL504)的制备
Figure BDA0002407162100000221
中间体VI2的制备
将己二酸单乙酯VI1(10.00g，57.44mmol)和硫代氨基脲(6.03g，57.44mmol)置于250ml单颈瓶中，加入三氯氧磷100ml，加热至回流反应0.5h，减压蒸除大部分三氯氧磷，加100mL水淬灭剩余三氯氧磷，6N氢氧化钠调至中性，析出白色固体后抽滤，滤饼除水干燥，得白色固体10.13g，收率77.3％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C9H15N3O2S:230.0958,found:230.0959。
中间体VI3a的制备
将中间体I3a(1.50g，7.80mmol)，中间体VI2(1.79g，7.80mmol)，HATU(3.26g，8.58mmol)溶于15mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(2.02g，15.60mmol)，室温搅拌4h，将反应液倾入水中有白色固体析出，抽滤，滤饼用甲醇洗涤得白色固体2.04g，收率65.2％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C20H25N3O4S:404.1639,found:404.1638。
中间体VI3b的制备
如制备VI3a所述，使用中间体I3b代替I3a制备中间体VI3b，收率61.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C21H27N3O4S:418.1795,found:418.1797。
中间体VI3c的制备
如制备VI3a所述，使用中间体I3c代替I3a制备中间体VI3c，收率60.11％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C22H29N3O4S:432.1952,found:432.1954。
中间体VI3d的制备
如制备VI3a所述，使用中间体I3d代替I3a制备中间体VI3d，收率67.44％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C23H31N3O4S:446.2108,found:446.2109。
中间体VI4a的制备
将中间体VI3a(2.00g,4.96mmol)溶于30ml甲醇中，滴加入30ml氢氧化钠水溶液(2N)，室温搅拌8h，减压除去甲醇，6N的盐酸调节PH为酸性，析出大量固体，抽滤得白色固体1.59g，收率85.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C18H21N3O4S:376.1326,found:376.1328。
中间体VI4b的制备
如制备VI4a所述，使用中间体VI3b代替VI3a制备中间体VI4b，收率87.99％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C19H23N3O4S:390.1482,found:390.1484。
中间体VI4c的制备
如制备VI4a所述，使用中间体VI3c代替VI3a制备中间体VI4c，收率84.12％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C20H25N3O4S:404.1639,found:404.1640。
中间体VI4d的制备
如制备VI4a所述，使用中间体VI3d代替VI3a制备中间体VI4d，收率89.11％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C21H27N3O4S:417.1795,found:417.1797。
中间体VI5a的制备
将中间体VI4a(5.00g，13.33mmol)和硫代氨基脲(1.82g，17.33mmol)置于250ml单颈瓶中，加入150ml二氯甲烷作溶剂，搅拌溶解后，加入三氯氧磷(10.12g，66.65mmol)，加热至回流反应6h，减压蒸除二氯甲烷，柱层析后，得白色固体4.93g，收率86.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C19H22N6O2S2:431.1318,found:431.1320。
中间体VI5b的制备
如制备VI5a所述，使用中间体VI4b代替VI4a制备中间体VI5b，收率85.34％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C19H23N3O4S:445.1475,found:445.1477。
中间体VI5c的制备
如制备VI5a所述，使用中间体VI4c代替VI4a制备中间体VI5c，收率88.33％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C20H25N3O4S:459.1631,found:459.1633。
中间体VI5d的制备
如制备VI5a所述，使用中间体VI4d代替VI4a制备中间体VI5d，收率90.01％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C21H27N3O4S:473.1788,found:473.1790。
中间体VI6a的制备
将中间体VI5a(1.00g，2.32mmol)，4-戊烯酸(0.23g，2.32mmol),HATU(1.32g，3.50mmol)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(2.02g，7.00mmol)，室温搅拌4h，将反应液倾入水中有白色固体析出，抽滤，滤饼除水干燥后柱层析，得到0.66g白色固体，收率55.2％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C24H28N6O3S2:513.1737,found:513.1739。
中间体VI6b的制备
如制备VI6a所述，使用中间体VI5b代替VI5a制备中间体VI6b，收率50.12％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C25H30N6O3S2:527.1894,found:527.1896。
中间体VI6c的制备
如制备VI6a所述，使用中间体VI5c代替VI5a制备中间体VI6c，收率51.67％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C26H32N6O3S2:541.2050,found:541.2052。
中间体VI6d的制备
如制备VI6a所述，使用中间体VI5d代替VI5a制备中间体VI6d，收率50.22％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H34N6O3S2:555.2207,found:555.2209。
化合物LL501的制备
中间体VI6a(0.2g，0.39mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.10g，0.17mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。抽滤，滤饼为未反应完的VI6a，滤液减压浓缩后用二氯甲烷洗涤两次，四氢呋喃热洗涤一次，得浅绿色固体24.56mg，收率13.06％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C22H24N6O3S2:485.1424,found:485.1426。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.72(s,2H,-NHCO-),7.10-7.05(m,2H,Ar-H),6.89-6.80(m,2H,Ar-H),5.69-5.59(m,2H,-CH＝CH-),4.62(d,J＝9.0Hz,2H,-CH2CH＝CH-),3.43(s,2H,-CH2Ph),2.56-2.50,(m,4H,-CH2CH2-),2.27-2.23(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.65-1.55(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL502的制备
如制备LL501所述，使用中间体VI6b代替VI6a制备化合物LL502，收率9.71％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C23H26N6O3S2:499.1581,found:499.1583。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.71(s,2H,-NHCO-),7.23-7.10(m,2H,Ar-H),6.97-6.86(m,2H,Ar-H),5.53-5.43(m,2H,-CH＝CH-),3.95(t,J＝6.0Hz,2H,-CH2-O-),3.41(s,2H,-CH2Ph),2.53-2.48,(m,4H,-CH2CH2-),2.46-2.34(m,2H,-CH2CH＝CH-),2.28-2.22(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.67-1.57(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL503的制备
如制备LL501所述，使用中间体VI6c代替VI6a制备化合物LL503，收率10.22％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C24H28N6O3S2:513.1737,found:513.1739。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.74(s,2H,-NHCO-),7.22-7.11(m,2H,Ar-H),6.93-6.84(m,2H,Ar-H),5.48-5.41(m,2H,-CH＝CH-),3.93(t,J＝6.0Hz,2H,-CH2-O-),3.40(s,2H,-CH2Ph),2.55-2.49,(m,4H,-CH2CH2-),2.29-2.20(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.95-1.89(m,2H,-CH2CH＝CH-),1.76-1.72(m,2H,-CH2CH2-),1.66-1.58(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL504的制备
如制备LL501所述，使用中间体VI6d代替VI6a制备化合物LL504，收率11.23％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C25H30N6O3S2:527.1894,found:527.1896。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.71(s,2H,-NHCO-),7.22-7.11(m,2H,Ar-H),6.95-6.86(m,2H,Ar-H),5.50-5.41(m,2H,-CH＝CH-),3.95(t,J＝6.0Hz,2H,-CH2-O-),3.44(s,2H,-CH2Ph),2.56-2.50(m,4H,-CH2CH2-),2.27-2.18(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.96-1.90(m,2H,-CH2CH＝CH-),1.73-1.67(m,2H,-CH2CH2-),1.63-1.57(m,4H,-CH2CH2-),1.35-1.27(m,2H,-CH2CH2-)ppm；
实施例8
通式化合物VII(LL601-LL602)的制备
Figure BDA0002407162100000261
中间体VII1的制备
将中间体II2(10g，65.34mmol)，二碳酸二叔丁酯(42.73g，196.02mmol)()和三乙胺(13.20g，130.68mmol)置于100ml单颈瓶内，加入二氯甲烷150ml作溶剂，室温反应12h，减压蒸除溶剂，柱层析得到9g白色固体，收率54.55％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC11H15N3O2S:254.0958,found:254.0960。
中间体VII2的制备
将中间体VII1(13.71g，54.18mmol),中间体II4(11.97g，54.18mmol)，碘化亚铜(1.03g，5.42mmol),三乙胺(27.41g，270.88mmol)，溶于120mLN,N-二甲基乙酰胺中，氮气保护。加入Pd(PPh3)4(4.38g，3.79mmol),再次氮气置换，加热到60℃，搅拌4h，反应液倾入水中，抽滤，滤液用正丁醇萃取，减压蒸除正丁醇，得黄色固体12.18g，收率65.13％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C15H18N6O2S:347.1285,found:347.1287。
中间体VII3的制备
将中间体VII2(5.00g，14.44mmol)溶于1000mL甲醇中，加0.85g雷尼镍，通氢气，室温搅拌48h，抽滤，滤液减压蒸除溶剂得黄色固体4.65g，收率92.23％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C15H22N6O2S:351.1598,found:351.1599。
中间体VII4a的制备
将中间体I3b(0.59g，2.86mmol)，中间体VII3(1.00g，2.86mmol)，HATU(1.63g，4.29mmol)溶解在10mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(1.11g，8.58mmol)，25℃反应8h。将反应液倾入水中，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压蒸除溶剂得黄色油状物1.86g，柱层析得黄色固体0.60g，收率39.00％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H34N6O4S:539.2435,found:539.2437。
中间体VII4b的制备
如制备VII4a所述，使用中间体I3d代替I3b制备中间体VII4b，收率37.55％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C25H30N6O3S:567.2748,found:567.2750。
中间体VII5a的制备
将中间体VII4a(0.60g，1.11mmol)置于100ml单颈瓶内，加入20ml二氯甲烷作溶剂，滴加7ml三氟乙酸，室温搅拌10h，减压蒸除二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠水溶液调节PH＝9，抽滤，烘干，得到黄色固体0.45g，收率92.3％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC22H26N6O2S:439.1911,found:439.1913。
中间体VII5b的制备
如制备VII5a所述，使用中间体VII4b代替VII4a制备中间体VII5b，收率94.34％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C24H30N6O2S:467.2224,found:467.2226。
中间体VII6a的制备
将中间体VII5a(0.40g，0.91mmol)，4-戊烯酸(0.09g，0.91mmol)，HATU(0.52g，1.37mmol)溶解在10mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(0.35g，2.73mmol)，25℃反应2h。将反应液倾入水中，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压蒸除溶剂得黄色油状物0.76g，柱层析得黄色固体0.25g，收率53.19％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H32N6O3S:521.2329,found:521.2331。
中间体VII6b的制备
如制备VII6a所述，使用中间体VII5b代替VII5a制备中间体VII6b，收率51.45％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C29H36N6O3S:549.2642,found:549.2644。
化合物LL601的制备
将中间体VII6a(0.20g，0.36mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.10g，0.15mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点基本消失，停反应。滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得黄色固体24.51mg，收率12.25％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC25H28N6O3S:493.2016,found:493.2018。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.71(s,2H,-NHCO-),8.64(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),7.24-7.14(m,2H,Ar-H),7.16(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),6.95-6.85(m,2H,Ar-H),5.47-5.40(m,2H,-CH＝CH-),3.97(t,J＝8.0Hz,2H,-CH2-O-),3.45(s,2H,-CH2Ph),2.56-2.47,(m,4H,-CH2CH2-),2.42-2.36(m,2H,-CH2CH＝CH-),2.27-2.21(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.64-1.57(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL602的制备
如制备LL601所述，使用中间体VII6b代替VII6a制备化合物LL602，收率10.45％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H32N6O3S:521.2329,found:521.2331。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.73(s,2H,-NHCO-),8.63(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),7.22-7.11(m,2H,Ar-H),7.13(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),6.96-6.86(m,2H,Ar-H),5.45-5.37(m,2H,-CH＝CH-),3.95(t,J＝8.0Hz,2H,-CH2-O-),3.43(s,2H,-CH2Ph),2.57-2.47,(m,4H,-CH2CH2-),2.26-2.20(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.92-1.83(m,2H,-CH2CH＝CH-),1.69-1.60(m,2H,-CH2CH2-),1.58-1.51(m,4H,-CH2CH2-),1.35-1.28(m,2H,-CH2CH2-)ppm；
实施例9
通式化合物VIII(LL603-LL604)的制备
Figure BDA0002407162100000291
中间体VIII1的制备
将中间体VII3(2.00g，5.71mmol)，4-戊烯酸(0.57g，5.71mmol)，HATU(3.25g，8.56mmol)溶解在30mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(2.22g，17.14mmol)，25℃反应10h。将反应液倾入水中，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压蒸除溶剂得黄色油状物3.76g，柱层析得黄色固体1.36g，收率55.45％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C20H28N6O3S:433.2016,found:433.2018。
中间体VIII2的制备
将中间体VIII1(1.50g，3.47mmol)置于100ml单颈瓶内，加入40ml二氯甲烷作溶剂，滴加16ml三氟乙酸，室温搅拌10h，减压蒸除二氯甲烷，用饱和碳酸氢钠水溶液调节PH＝9，抽滤，烘干，得到黄色固体1.02g，收率92.72％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC15H20N6OS:333.1492,found:333.1494。
中间体VIII3a的制备
将中间体VIII2(0.50g，1.51mmol)，中间体I3b(0.29g，1.51mmol)，HATU(0.86g，2.26mmol)溶解在8mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(0.58g，4.52mmol)，25℃反应2h。将反应液倾入水中，二氯甲烷萃取，有机相干燥，减压蒸除溶剂得黄色油状物0.71g，柱层析得白色固体0.25g，收率31.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H32N6O3S:521.2329,found:521.2331。
中间体VIII3b的制备
如制备VIII3a所述，使用中间体I3d代替I3b制备中间体VIII3b，收率36.88％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C29H36N6O3S:549.2642,found:549.2644。
化合物LL603的制备
将中间体VIII3a(0.20g，0.36mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.10g，0.15mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点基本消失，停反应。滤液减压蒸除溶剂，硅胶柱层析得黄色固体21.51mg，收率10.50％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC25H28N6O3S:493.2016,found:493.2018。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.73(s,2H,-NHCO-),8.66(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),7.22-7.12(m,2H,Ar-H),7.18(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),6.94-6.86(m,2H,Ar-H),5.45-5.37(m,2H,-CH＝CH-),3.96(t,J＝8.0Hz,2H,-CH2-O-),3.43(s,2H,-CH2Ph),2.57-2.48(m,4H,-CH2CH2-),2.41-2.35(m,2H,-CH2CH＝CH-),2.28-2.20(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.65-1.55(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL604的制备
如制备LL603所述，使用中间体VIII3b代替VIII3a制备化合物LL604，收率12.65％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H32N6O3S:521.2329,found:521.2329。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.70(s,2H,-NHCO-),8.66(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),7.25-7.15(m,2H,Ar-H),7.16(d,J＝6.0Hz,1H,Ar-H),6.95-6.85(m,2H,Ar-H),5.46-5.38(m,2H,-CH＝CH-),3.96(t,J＝8.0Hz,2H,-CH2-O-),3.43(s,2H,-CH2Ph),2.56-2.48,(m,4H,-CH2CH2-),2.28-2.21(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.90-1.85(m,2H,-CH2CH＝CH-),1.68-1.59(m,2H,-CH2CH2-),1.57-1.50(m,4H,-CH2CH2-),1.37-1.28(m,2H,-CH2CH2-)ppm；
实施例10
通式化合物IX(LL701-LL704)的制备
Figure BDA0002407162100000311
中间体IX3a的制备
将2-氨基-2-苯基乙酸甲酯IX1(2.00g，12.11mmol)，丁烯酸IX2a(1.00g，12.11mmol)和HATU(7.00g，18.16mmol)溶于10mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(4.69g，36.32mmol)，室温搅拌4h，将反应液倾入水中，二氯甲烷(20ml×3)萃取，饱和食盐水(20ml×5)洗涤，有机层无水硫酸钠干燥后，减压浓缩，得2.15g白色固体析出，收率72.5％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C13H15NO3:234.1125,found:234.1127。
中间体IX3b的制备
如制备IX3a所述，使用戊烯酸IX2b代替IX2a制备中间体IX3b，收率70.33％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C14H17NO3:248.1281,found:248.1283。
中间体IX3c的制备
如制备IX3a所述，使用己烯酸IX2c代替IX2a制备中间体IX3b，收率71.24％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C15H19NO3:262.1438,found:262.1440。
中间体IX3d的制备
如制备IX3a所述，使用庚烯酸IX2d代替IX2a制备中间体IX3d，收率74.56％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C16H21NO3:276.1594,found:276.1596。
中间体IX4a的制备
将中间体IX3a(2.00g)溶于30ml甲醇中，滴加入30ml氢氧化钠水溶液(2N)，室温搅拌8h，减压除去甲醇，6N的盐酸调节PH为酸性，析出大量固体，抽滤得白色固体1.5g，收率82.34％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C16H21NO3:220.0968,found:220.0970。
中间体IX4b的制备
如制备IX4a所述，使用中间体IX3b代替IX3a制备中间体IX4b，收率85.76％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C17H23NO3:234.1125,found:234.1127。
中间体IX4c的制备
如制备IX4a所述，使用中间体IX3c代替IX3a制备中间体IX4c，收率85.79％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C18H25NO3:248.1281,found:248.1283。
中间体IX4d的制备
如制备IX4a所述，使用中间体IX3d代替IX3a制备中间体IX4d，收率89.56％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C19H27NO3:262.1438,found:262.1440。
中间体IX5a的制备
将中间体I5(1.50g，5.80mmol)，中间体IX4a(2.70g，12.18mmol)，HATU(5.55g，14.5mmol)溶于20mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入DIPEA(3.80g，30mmol)，室温搅拌4h，将反应液倾入水中有白色固体析出，抽滤。滤饼烘干后柱层析，得到2.05g白色固体，收率53.52％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N8O4S2:659.2217,found:659.2219。
中间体IX5b的制备
如制备IX5a所述，使用中间体IX4b代替IX4a制备中间体IX5b，收率50.56％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N8O4S2:687.2530,found:687.2532。
中间体IX5c的制备
如制备IX5a所述，使用中间体IX4c代替IX4a制备中间体IX5c，收率54.46％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H42N8O4S2:715.2843,found:715.2845。
中间体IX5d的制备
如制备IX5a所述，使用中间体IX4d代替IX4a制备中间体IX5d，收率51.66％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C38H46N8O4S2:743.3156,found:743.3158。
化合物LL701的制备
中间体IX5a(0.2g，0.30mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.07g，0.12mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应5h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。抽滤，滤饼为未反应完的IX5a，滤液减压浓缩后柱层析，得到浅黄色固体10.16mg，收率5.6％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H30N8O4S2:631.1904,found:631.1906。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.73(s,2H,-NHCO-),7.56(s,2H,-NHCO-),7.34-7.25(m,10H,Ar-H),5.89-5.84(m,2H,-CH＝CH-),5.80(s,2H,-COCH(Ph)NH-),2.89-2.80(m,4H,-CH2CH＝CH-),2.57-2.47(m,4H,-CH2CH2-),1.65-1.56(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL702的制备
如制备LL701所述，使用中间体IX5b代替IX5a制备化合物LL702，收率6.71％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H34N8O4S2:659.2217,found:659.2219。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.75(s,2H,-NHCO-),7.55(s,2H,-NHCO-),7.35-7.24(m,10H,Ar-H),5.84(s,2H,-COCH(Ph)NH-),5.47-5.40(m,2H,-CH＝CH-),2.58-2.50(m,4H,-CH2CH2-),2.26-2.20(m,8H,-CH2CH2CH＝CH-),1.64-1.55(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL703的制备
如制备LL701所述，使用中间体IX5c代替IX5a制备化合物LL703，收率5.81％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H38N8O4S2:687.2530,found:687.2532。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.70(s,2H,-NHCO-),7.52(s,2H,-NHCO-),7.34-7.25(m,10H,Ar-H),5.80(s,2H,-COCH(Ph)NH-),5.45-5.39(m,2H,-CH＝CH-),2.58-2.50(m,4H,-CH2CH2-),1.96-1.90(m,4H,-CH2CH＝CH-),2.19-2.13(m,4H,-CH2CONH-),1.64-1.58(m,8H,-CH2CH2CH2CH2-)ppm；
化合物LL704的制备
如制备LL701所述，使用中间体IX5d代替IX5a制备化合物LL704，收率7.21％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C36H40N8O4S2:715.2843,found:715.2845。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.74(s,2H,-NHCO-),7.51(s,2H,-NHCO-),7.36-7.25(m,10H,Ar-H),5.83(s,2H,-COCH(Ph)NH-),5.50-5.43(m,2H,-CH＝CH-),2.59-2.51(m,4H,-CH2CH2-),2.20-2.14(t,J＝6Hz,4H,-CH2CONH-),1.97-1.92(m,4H,-CH2CH＝CH-),1.62-1.53(m,8H,-CH2CH2CH2CH2-),1.36-1.30(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
实施例11
通式化合物X(LL801-LL804)的制备
Figure BDA0002407162100000341
中间体X3的制备
将2-氨基-5-溴-1,3,4-噻二唑X1(10g，55.90mmol)，4-氨基哌啶X2(11.18g，111.80mmol)和三乙胺(16.94g，167.70mmol)置于250ml单颈瓶内，加入150ml乙醇作溶剂，回流反应2h，减压蒸除乙醇，得到灰色固体，后用200ml水打浆，抽滤，烘干得到13.00g灰白色固体，收率78.02％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C9H14N8S2:299.0856,found:299.0858。
中间体X4a的制备
将中间体X3(1.50g，5.03mmol)，中间体I3a(2.13g，11.07mmol)，HATU(4.80g，12.58mmol)溶解在20mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(2.60g，20.12mmol)，25℃反应2h。将反应液倾入水中，抽滤，滤饼干燥后得到黄色固体3.05g，柱层析后得到白色固体1.04g，收率32.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C31H34N8O4S2:647.2217,found:647.2219。
中间体X4b的制备
如制备X3a所述，使用中间体I3b代替I3a制备中间体X4b，收率31.45％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C33H38N8O4S2:675.2530,found:675.2532。
中间体X4c的制备
如制备X3a所述，使用中间体I3c代替I3c制备中间体X4c，收率35.44％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C35H42N8O4S2:703.2843,found:703.2845。
中间体X4d的制备
如制备X3a所述，使用中间体I3d代替I3a制备中间体X4d，收率33.56％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C37H46N8O4S2:731.3156,found:731.3158。
化合物LL801的制备
中间体X3a(0.2g，0.32mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.08g，0.13mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应3h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。反应液减压浓缩后柱层析，得到浅黄色固体15.56mg，收率7.78％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C29H30N8O4S2:619.1940,found:619.1942。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.68(s,2H,-NHCO-),7.10-7.05(m,4H,Ar-H),6.89-6.80(m,4H,Ar-H),5.88-5.85(m,2H,-CH＝CH-),4.65-4.60(m,4H,-CH2CH＝CH-),3.64(s,1H,-NHCH),3.41(s,4H,-CH2Ph),3.32-3.22(m,4H,-NCH2CH2CHNH-),2.67-2.63(m,1H,-NHCH(CH2)CH2-),1.81-1.56(m,4H,-NCH2CH2CHNH-)ppm；
化合物LL802的制备
如制备LL801所述，使用中间体X3b代替X3a制备化合物LL802，收率7.71％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C31H34N8O4S2:647.2217,found:647.2219。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.70(s,2H,-NHCO-),7.22-7.12(m,4H,Ar-H),6.94-6.88(m,4H,Ar-H),5.50-5.45(m,2H,-CH＝CH-),4.00-3.95(t,J＝6Hz,4H,-CH2-O-),3.62(s,1H,-NHCH),3.43(s,4H,-CH2Ph),3.35-3.25(m,4H,-NCH2CH2CHNH-),2.67-2.60(m,1H,-NHCH(CH2)CH2-),2.43-2.37(m,4H,-CH2CH＝CH-),1.83-1.56(m,4H,-NCH2CH2CHNH-)ppm；
化合物LL803的制备
如制备LL801所述，使用中间体X3c代替X3a制备化合物LL803，收率8.91％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C33H38N8O4S2:675.2530,found:675.2532。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.72(s,2H,-NHCO-),7.25-7.15(m,4H,Ar-H),6.98-6.89(m,4H,Ar-H),5.52-5.47(m,2H,-CH＝CH-),4.00-3.95(t,J＝6Hz,4H,-CH2-O-),3.64(s,1H,-NHCH),3.46(s,4H,-CH2Ph),3.37-3.27(m,4H,-NCH2CH2CHNH-),2.65-2.58(m,1H,-NHCH(CH2)CH2-),1.97-1.90(m,4H,-CH2CH＝CH-),1.83-1.57(m,4H,-NCH2CH2CHNH-),1.77-1.73(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL804的制备
如制备LL801所述，使用中间体X3d代替X3a制备化合物LL804，收率5.21％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C35H42N8O4S2:703.2843,found:703.2845。1HNMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.70(s,2H,-NHCO-),7.22-7.14(m,4H,Ar-H),6.93-6.87(m,4H,Ar-H),5.51-5.47(m,2H,-CH＝CH-),3.99-3.92(t,J＝6Hz,4H,-CH2-O-),3.62(s,1H,-NHCH),3.43(s,4H,-CH2Ph),3.36-3.26(m,4H,-NCH2CH2CHNH-),2.67-2.60(m,1H,-NHCH(CH2)CH2-),1.96-1.90(m,4H,-CH2CH＝CH-),1.84-1.60(m,4H,-NCH2CH2CHNH-),1.73-1.67(m,4H,-CH2CH2-),1.35-1.30(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
实施例12
通式化合物XI(LL901-LL902)的制备
Figure BDA0002407162100000361
中间体XI1a的制备
将中间体VI5b(4.00g，9.30mmol),三乙胺(2.82g，27.90mmol)置于150ml三颈瓶内，加入20mlN,N-二甲基甲酰胺作溶剂，冰浴至0℃，缓慢滴加氯乙酰氯(1.14g，10.23mmol)，1h后将反应液倾至冰水中，抽滤，滤饼用甲醇洗涤，真空烘干，得到3.75g白色固体，收率78.45％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C22H25N6O3S2Cl:521.1191,found:521.1193。
中间体XI1b
如制备XI1a所述，使用中间体VI5d代替VI5b制备中间体XI1b，收率76.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C24H29N6O3S2Cl:549.1504,found:549.1506。
中间体XI2a的制备
将中间体XI1a(4.00g，7.70mmol)和叠氮化钠(0.75g，11.53mmol)置于单颈瓶内，加入20mlN,N-二甲基甲酰胺作溶剂，室温反应8h后，将反应液倾至水中，抽滤，滤饼真空烘干，得到3.77g白色固体，收率92.42％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C22H25N9O3S2:528.1595,found:528.1597。
中间体XI2b
如制备XI2a所述，使用中间体XI1b代替XI1a制备中间体XI2b，收率90.23％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C24H29N9O3S2:556.1908,found:556.1910。
中间体XI3a的制备
将中间体XI2a(1.00g，1.90mmol)，3-乙炔基苯胺(0.44g，2.85mmol)溶于7mlN,N-二甲基甲酰胺，加入碘化亚铜(36mg，0.19mmol)，微波反应120℃，反应20min，反应液倾入水中，抽滤，滤饼用甲醇洗涤，真空烘干，得到灰白色固体0.53g，收率41.67％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H32N10O3S2:645.2173,found:645.2175。
中间体XI3b
如制备XI3a所述，使用中间体XI2b代替XI2a制备中间体XI3b，收率42.56％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H36N10O3S2:673.2486,found:673.2488。
中间体XI4a的制备
将中间体XI3a(0.50g，0.78mmol)，4-戊烯酸(0.08g，0.78mmol)，HATU(0.44g，1.17mmol)溶解在20mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(0.30g，2.34mmol)，室温反应3h。将反应液倾入水中，抽滤，滤饼干燥后得到黄色固体0.56g，柱层析后得到白色固体0.20g，收率34.65％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C35H38N10O4S2:727.2592,found:727.2594。
中间体XI4b的制备
如制备XI4a所述，使用中间体XI3b代替XI3a制备中间体XI4b，收率32.45％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C37H42N10O4S2:755.2905,found:755.2907。
化合物LL901的制备
中间体XI4a(0.2g，0.28mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.07g，0.11mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应3h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。反应液减压浓缩后柱层析，得到浅黄色固体9.23mg，收率4.62％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC33H34N10O4S2:699.2279,found:699.2281。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.68(s,2H,-NHCO-),10.11(s,1H,-NHCO-),7.69-7.72(m,4H,Ar-H),7.54(s,1H,Ar-H),7.23-7.12(m,2H,Ar-H),7.94-7.87(m,2H,Ar-H),5.46-5.42(m,2H,-CH＝CH-),4.60(s,2H,-CH2CONH-),3.97(t,J＝6Hz,2H,-CH2-O-),3.41(s,2H,-CH2Ph),2.55-2.50(m,4H,-CH2CH2-),2.40-2.32(m,4H,-CH2CH＝CH-),2.29-2.25(m,2H,-CH2CH2CH＝CH-),1.65-1.59(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL902的制备
如制备LL901所述，使用中间体XI4b代替XI4a制备中间体化合物LL902，收率5.56％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C34H40N10O4S2:727.2592,found:727.2594。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.71(s,2H,-NHCO-),10.12(s,1H,-NHCO-),7.68-7.71(m,4H,Ar-H),7.55(s,1H,Ar-H),7.24-7.13(m,2H,Ar-H),7.93-7.87(m,2H,Ar-H),5.45-5.44(m,2H,-CH＝CH-),4.61(s,2H,-CH2CONH-),3.95(t,J＝6Hz,2H,-CH2-O-),3.43(s,2H,-CH2Ph),2.56-2.51(m,4H,-CH2CH2-),2.35-2.28(m,4H,-CH2CH2CH＝CH-),1.95-1.90(m,2H,-CH2CH2-),1.69-1.66(m,2H,-CH2CH2-),1.65-1.59(m,4H,-CH2CH2-),1.34-1.29(m,2H,-CH2CH2-)ppm；
实施例13
通式化合物XII(LL903-LL904)的制备
Figure BDA0002407162100000381
中间体XII1a的制备
将中间体XI2a(1.00g，1.90mmol)，4-戊炔酸(0.28g，2.85mmol)溶于7ml N,N-二甲基甲酰胺，加入碘化亚铜(36mg，0.19mmol)，微波反应120℃，反应20min，反应液倾入水中，抽滤，滤饼用甲醇洗涤，真空烘干，得到灰白色固体0.60g，收率50.85％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C27H31N9O5S2:626.1962,found:626.1964。
中间体XII1b
如制备XII1a所述，使用中间体XI2b代替XI2a制备中间体XII1b，收率49.12％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C29H35N9O5S2:654.2275,found:654.2277。
中间体XII2a的制备
将中间体XII1a(0.50g，0.80mmol)，3-氨基丙烯(0.05g，0.80mmol)，HATU(0.46g，1.20mmol)溶解在20mLN,N-二甲基甲酰胺中，加DIPEA(0.31g，2.40mmol)，室温反应3h。将反应液倾入水中，抽滤，滤饼干燥后得到黄色固体0.60g，柱层析后得到白色固体0.18g，收率34.02％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H36N10O4S2:665.2435,found:665.2437。
中间体XII2b
如制备XII2a所述，使用中间体XII1b代替XII1a制备中间体XII2b，收率35.67％。HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C32H40N10O4S2:693.2748,found:693.2750。
化合物LL903的制备
中间体XII2a(0.2g，0.30mmol),Hoveyda-Grubbs催化剂(0.08g，0.12mmol)加入到干燥过的250mL单颈瓶中，加入重蒸过的四氢呋喃150mL(二苯甲酮检测变蓝)，充分氮气置换。反应3h，TLC检测产物点与原料点大小相似，停反应。反应液减压浓缩后柱层析，得到浅黄色固体10.11mg，收率5.06％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated forC28H32N10O4S2:637.2122,found:637.2124。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.71(s,2H,-NHCO-),7.82(s,1H,-NHCO-),7.56(s,1H,Ar-H),7.24-7.13(m,2H,Ar-H),6.94-6.86(m,2H,Ar-H),5.64-5.58(m,2H,-CH＝CH-),4.63(s,2H,-CH2CONH-),3.99(t,J＝6Hz,2H,-CH2-O-),3.90-3.86(m,2H,-CH2CH＝CH-),3.42(s,2H,-CH2Ph),2.86-2.80(m,2H,-CH2CH2CONH-),2.56-2.51(m,4H,-CH2CH2-),2.40-2.34(m,2H,-CH2CH＝CH-),1.64-1.58(m,4H,-CH2CH2-)ppm；
化合物LL904的制备
如制备LL903所述，使用中间体XII2b代替XII2a制备中间体化合物LL904，收率6.11％。m.p.>300℃.HRMS(ESI)m/z(M+H)+calculated for C30H36N10O4S2:665.2435,found:665.2437。1H NMR(300MHz,DMSO-d6)δ:10.72(s,2H,-NHCO-),7.80(s,1H,-NHCO-),7.54(s,1H,Ar-H),7.23-7.13(m,2H,Ar-H),6.95-6.87(m,2H,Ar-H),5.66-5.57(m,2H,-CH＝CH-),4.61(s,2H,-CH2CONH-),3.99(t,J＝6Hz,2H,-CH2-O-),3.92-3.87(m,2H,-CH2CH＝CH-),3.45(s,2H,-CH2Ph),2.88-2.82(m,2H,-CH2CH2CONH-),2.55-2.49(m,6H,-CH2CH2-,-CH2CONH-),1.97-1.93(m,2H,-CH2CH＝CH-),1.73-1.65(m,6H,CH2CH2-),1.35-1.28(m,2H,-CH2CH2-)ppm；
实施例14：是本发明部分化合物的药理学试验及结果
(1)化合物在体外对肿瘤细胞增殖抑制试验
试验目的：观察供试化合物对肿瘤细胞的增殖抑制作用。机制研究表明：三阴性乳腺癌MDA-MB-436细胞和结肠癌HCT116细胞对于谷氨酰胺高度敏感，过分依赖谷氨酰胺维持细胞的生长和生殖，呈现出“谷氨酰胺成瘾性”。同时，肿瘤基因图谱表明：MDA-MB-436和HCT116细胞的谷氨酰胺酶GLS1基因水平和蛋白水平高度表达，而且GLS1表现出很强的酶活性。因此，化合物对这两株细胞的增殖抑制作用可以体现所设计的化合物是通过抑制GLS1从而达到抗肿瘤细胞增殖的作用。
试验原理：MTT分析法以活细胞代谢物还原剂MTT(全称为3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐，商品名：噻唑蓝)为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下tetrazolium环开裂，生成蓝色的formazan结晶，formazan结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(细胞死亡则琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)。还原生成的formazan结晶可在DMSO中溶解，利用酶标仪测定492nm处的光密度OD值，以反映出活细胞数目。
试验方法：将处于对数生长期的细胞(三阴乳腺癌细胞MDA-MB-436；结肠癌细胞HCT-116；Hela细胞)按1000-10000个/孔的细胞量接种于96孔培养皿内，5％CO2、37℃孵育6-10小时，加入待测化合物(悬浮细胞接板后可直接加)，细胞在5％CO2、37℃条件下继续培养48-72小时后，弃上清，每孔加100μL新鲜配制的含0.5mg/mL3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)的无血清培养基，继续培养4h，弃上清，每孔加200μLDMSO溶解MTT甲簪沉淀，用微型振荡器振荡混匀，用ThermoScientificMK3型酶标仪在参考波长450nm，检测波长570nm条件下测定光密度值(OD)，以溶剂对照处理的肿瘤细胞为对照组，计算药物对肿瘤细胞的抑制率，并按中效方程计算IC50。
其中Telaglenastat(CB-839)购自MCE，作为测试的阳性对照。
表1.本发明部分化合物对肿瘤细胞(MDA-MB-436、HCT116)增殖抑制试验结果
化合物编号 IC<sub>50</sub>/μM(MDA-MB-436) IC<sub>50</sub>/μM(HCT116)
LL101 0.98±0.02 4.87±0.10
LL102 35.65±1.14 47.59±1.18
LL103 35.97±0.86 32.29±0.48
LL104 N.A. 67.68±0.81
LL105 2.85±0.04 8.20±0.23
LL106 0.96±0.02 3.30±0.08
LL107 46.25±1.48 38.30±0.80
LL108 7.08±0.24 19.20±0.40
LL201 2.67±0.15 6.44±0.13
LL202 0.31±0.01 0.81±0.02
LL203 1.92±0.06 2.75±0.05
LL204 3.89±0.81 7.51±0.26
LL205 5.21±0.18 12.36±0.37
LL302 3.92±0.23 8.01±0.23
LL402 0.55±0.34 1.01±0.05
LL501 37.89±0.51 40.12±0.23
LL602 1.45±0.03 1.02±0.11
LL604 12.34±0.23 14.56±0.20
LL702 50.45±0.44 56.34±0.31
LL802 18.22±0.08 20.45±0.15
LL901 55.45±0.21 57.23±0.06
LL903 25.09±0.22 26.19±0.15
CB839 1.49±0.03 4.56±0.14
(2)化合物在体外对谷氨酰胺水解酶GLS1的抑制作用试验
试验目的：确证待测化合物是否是通过作用于GLS1，从而阻断谷氨酰胺代谢来影响肿瘤细胞生长生殖。
实验原理：GLS蛋白将其底物谷氨酰胺水解为谷氨酸，后者在谷氨酸脱氢酶的作用下，将氢原子转移到NAD上生成NADH，检测NADH在340nm下的吸光度，从而反映GLS蛋白的活性。
试验步骤：人源GLS1蛋白(0.1mM hGAC)与一定浓度的化合物在50mM Tris-Acetate pH＝8.6，0.2mM EDTA一起25℃孵育10min。然后，加入200mM谷氨酰胺，开始第一步反应，37℃反应60分钟。加入0.6M HCl淬灭反应。再加入3.7units GDH,160mM Tris-Acetate pH＝9.4,400mM hydrazine,5mM ADP,2mM NAD+,25℃孵育30min。最后，检测样品在340nm下的吸光度值。
表2本发明部分化合物对谷氨酰胺水解酶GLS1的抑制作用试验结果
化合物编号 IC<sub>50</sub>/nM(GLS1)
LL101 30.67±2.17
LL102 27.01±1.65
LL103 68.50±1.32
LL104 105.50±3.38
LL105 55.45±2.17
LL106 67.77±6.95
LL107 2890±56.40
LL108 136.56±2.32
LL201 15.56±0.75
LL202 6.53±0.53
LL203 12.33±0.67
LL204 28.45±1.31
LL205 51.60±3.93
LL302 36.05±1.01
LL402 12.23±0.57
LL501 410.00±2.12
LL602 20.41±0.45
LL604 93.44±3.11
LL702 NA
LL802 10.11±1.11
LL901 NA
LL903 100.45±0.48
BPTES 3690±77.49
CB839 22.02±0.46
(3)蛋白热稳定性迁移实验
实验目的：考察小分子化合物和谷氨酰胺酶GLS1蛋白之间的相互作用。确证抑制剂是否是直接作用于GLS1蛋白。
试验原理：试验在7500 Fast RT-PCR System(ABI)仪器上进行，产生GLS1蛋白在特定缓冲液环境中的特异荧光图像，在温度变化时记录荧光强度的变化情况，计算出Tm(熔解温度)的相对变化。通过Tm的变化反映受试化合物与GLS1的亲合力。
实验流程：以SYPRO Orange(Invitrogen)作为荧光染料监测体系荧光值的变化，激发光和发射光波长分别设定为492nm(FAM)和610nm(ROX)。在20μL反应缓冲溶液中(25mMHEPES pH 8.0,150mM NaCl)中加入2μM GLS1蛋白，5X荧光染料和不同浓度化合物。在7500Fast RT-PCR System(ABI)仪器上，以1％升温速率，将体系温度从25℃逐渐升温至95℃，同时以20秒为间隔记录荧光强度随温度的变化情况。进一步，在Protein Thermal ShiftSoftware Version 1.1(ABI)程序中，利用Boltzmann拟合方法，计算不同化合物浓度条件下EED的溶解温度(Tm)。实验结果如图1所示：
(4)大环类GLS1抑制剂的构效关系
1.间位系列化合物LL101-LL104的总体GLS1抑制活性略优于对位系列化合物LL105-LL108；I系列化合物对GLS1的抑制活性和细胞活性随环链长度的增加而降低。
2.IV系列化合物用硒二唑取代噻二唑后，其GLS1抑制活性略有降低，但细胞活性有一定的提升；II系列化合物用哒嗪环取代噻二唑后，总体的GLS1抑制活性和细胞活性优于I系列化合物。
3.VI系列化合物在I系列化合物的基础上去掉一侧苯环，其对GLS1和肿瘤细胞的抑制活性均有所降低。
4.IX系列化合物在I系列化合物的卞位引入环链，其GLS1抑制活性丧失，细胞活性明显降低。环链位置的改变可能造成结合模式的改变，从而导致活性的丧失。
5.X系列化合物在I系列化合物的结构基础上引入哌啶胺为连接链，其GLS1抑制活性和细胞活性均有所提高。
6.XI系列化合物在I系列的结构基础上，插入三氮唑基团，其对GLS1和肿瘤细胞的抑制活性均明显降低；XII系列化合物将一侧苯环替换为三氮唑，其对GLS1抑制活性有所降低，但对肿瘤细胞的抑制活性有所提升。
7.II系列化合物的GLS1抑制活性和细胞活性均以LL202最优，表明6个碳原子是最合适的碳链长度；在环链引入酰胺键的化合物LL205与环链长度相同的LL203相比，GLS1抑制活性和细胞活性均有下降，表明在环链引入刚性更强一些的酰胺键对活性有不利影响。
8.V系列化合物系列化合物用硒二唑取代噻二唑后，其GLS1抑制活性略有降低，但细胞活性有一定的提升。
9.VII系列化合物在II系列化合物的基础去掉噻二唑侧的苯环，其GLS1抑制活性略有降低，但细胞活性基本保持；VIII系列化合物去掉哒嗪侧的苯环，其GLS1抑制活性和细胞活性均明显降低。
实施例15：本发明化合物LL202的共晶结构及结合模式分析
天然GLS1是以二聚体和四聚体的形式存在，四聚体为其活化形式，无机磷酸盐可以催化二聚体向四聚体的转变。LL202和GLS1的共晶复合结构(图2)显示，LL202结合在两个二聚体界面之间的变构结合位点，一个GLS1四聚体结合两个LL202分子。LL202与GLS1结合使其靠近催化位点的关键loop(Leu316～320)发生剧烈构象变化，从而抑制其酶活性。
从LL202与GLS1的结合模式(图3)来看，二者形成了很多相互作用。末端苯环苄位的亚甲基与Asn324形成氢键，哒嗪环一侧的羰基与Leu321形成氢键，哒嗪环相连的亚甲基与Lys320形成氢键。而1,3,4-噻二唑环的氮原子，以及与其相连的亚甲基，羰基均与Lys320形成了氢键，此外，噻二唑环的硫原子还与Leu323形成了氢键。与CB839相比，哒嗪环处的相互作用消失，在哒嗪环和1,3,4-噻二唑环相连的亚甲基上形成了新的相互作用，这可能与环链对整体构象的限制有关。

Claims (5)

1.一种大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐为以下结构式中任一种：
Figure FDA0004036669330000011
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000012
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000013
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000014
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000021
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000022
其中n＝1,3；
Figure FDA0004036669330000023
其中n＝1,3；
Figure FDA0004036669330000024
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000031
其中n＝1,2,3,4；
Figure FDA0004036669330000032
其中n＝2,4；
Figure FDA0004036669330000033
其中n＝2,4。
2.一种药物组合物，其含有治疗有效量的一种或多种如权利要求1所述的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐，及药学上可接受的载体。
3.根据权利要求1所述的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐的制备方法，包括如下步骤：
Figure FDA0004036669330000041
化合物(III)分别和不同末端烯烃侧链反应得到对应的化合物(II)，化合物(II)发生RCM反应得到具有通式(I)的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂终产物，其中所述的终产物中的取代基含有权利要求1所述的化合物所对应的取代基。
4.根据权利要求1的大环类谷氨酰胺酶GLS1抑制剂或其可药用的盐或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗GLS1介导的疾病的药物中的应用。
5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述疾病为结肠癌、乳腺癌或肺癌。
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