CN111434352B - 一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN111434352B
CN111434352B CN201811604254.9A CN201811604254A CN111434352B CN 111434352 B CN111434352 B CN 111434352B CN 201811604254 A CN201811604254 A CN 201811604254A CN 111434352 B CN111434352 B CN 111434352B
Authority
CN
China
Prior art keywords
reaction
dimethylformamide
boron
amino acid
carrier resin
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201811604254.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111434352A (zh
Inventor
高远
姚庆鑫
黄振涛
郝好
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
National Center for Nanosccience and Technology China
Original Assignee
National Center for Nanosccience and Technology China
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by National Center for Nanosccience and Technology China filed Critical National Center for Nanosccience and Technology China
Priority to CN201811604254.9A priority Critical patent/CN111434352B/zh
Publication of CN111434352A publication Critical patent/CN111434352A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111434352B publication Critical patent/CN111434352B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/009—Neutron capture therapy, e.g. using uranium or non-boron material
    • A61K41/0095—Boron neutron capture therapy, i.e. BNCT, e.g. using boronated porphyrins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/542—Carboxylic acids, e.g. a fatty acid or an amino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用，所述含硼药物包括多肽和位于多肽氮末端的疏水分子；组成所述多肽的氨基酸包括磷酸化的L‑酪氨酸、4‑硼‑L‑苯丙氨酸和L‑苯丙氨酸。其制备方法采用经典的固相合成法，操作简单，总产率高，且制备得到的含硼药物在肿瘤细胞内具有特异性、快速、高效的累积能力，生物相容性好，无系统毒性，能够更好地满足硼中子俘获治疗的治疗需要。

Description

一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于化学医药领域，具体涉及一种含硼药物及其制备方法和应用，尤其涉及一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用。
背景技术
硼中子俘获治疗(BNCT)是通过在肿瘤细胞内的原子核反应来摧毁癌细胞的治疗方法。通过注射含硼化合物，使其聚集于肿瘤细胞，而其他组织内分布很少。当用一种超热中子射线进行照射时，中子与进入癌细胞里的硼能发生很强的核反应，释放出一种杀伤力极强的射线，从而杀死癌细胞。
含硼药物作为BNCT疗法中重要的一员，在临床应用中表现尚不尽人意，因为BNCT要求药物靶向肿瘤，并能在肿瘤细胞累积足量的含硼药物，具体来说是药物在肿瘤与正常组织或血液中的浓度比值应大于3.0，进入每克肿瘤的10B量平均要求为20-35μg，并对应于一个肿瘤细胞至少含有109个10B原子，但现有技术例如目前FDA批准的两种BNCT药物BSH(巯基多面体硼笼化物)和BPA(4-硼-L-苯丙氨酸)还达不到此水平，而且各种硼载荷的靶向药物例如低分子量硼化物、掺硼肽、抗体碎片与各种蛋白质、完整的抗体与基于抗体的结合物以及脂质体等等，也由于载药量低、穿透力差、系统毒性强等问题难以满足BNCT的治疗要求。
CN106279231A公开了一种用于BNCT的含硼化合物及其制备方法和用途，该发明提供的新的含硼化合物通过缩合、氨解及成环反应得到，易于制备、成本低，并具有良好的生物性能，在肿瘤细胞的摄取、积累和保留方面都优于BPA，在BNCT方面具有良好的应用前景，还有望成为临床潜在的正电子发射断层扫描肿瘤显像剂，为恶性肿瘤的诊断、良恶性疾病的鉴别和全身转移病灶的探查等创造了有利条件，但该含硼化合物在肿瘤细胞靶向和积累方面依然不够理想。
CN1968705公开了一种低毒性的含硼化合物及其在肿瘤的治疗、观察和诊断中的使用方法，具体涉及到低毒性含碳硼烷5，10，15，20-四苯基卟啉化合物，特别是其在硼中子俘获治疗(BNCT)和光动力疗法(PDT)用于治疗大脑、头部和颈部及其周围组织中的肿瘤时的应用方法。该发明所涉及的含硼化合物并不能运输足量的含硼药物进入肿瘤，实现良好的抗肿瘤效果。
CN100417421C公开了一种基于磁性纳米材料的有机金属碳硼烷靶向制剂的制备方法及其制成的靶向制剂，该发明将表面修饰和功能化的磁性纳米颗粒Fe3O4与单/双金属中心碳硼烷通过自组装而制成有机金属碳硼烷靶向制剂。在外加磁场的作用下，通过纳米颗粒的磁性导航，靶向制剂能够“宏观”定向移动到肿瘤部位，实现了硼携带剂在靶向器官和细胞水平上的精确定位。但该制剂需要借助外界磁场的作用才能将其靶向至肿瘤部位，且可能存在载药量低和穿透力差等问题。
因此，开发一种满足BNCT治疗要求，生物相容性好，且具有在肿瘤细胞快速高效的累积能力的掺硼靶向药物具有重要的意义。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种含硼药物及其制备方法和应用，尤其提供一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用。
为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：
一方面，本发明提供一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物，所述含硼药物包括多肽和位于多肽氮末端的疏水分子；组成所述多肽的氨基酸包括磷酸化的L-酪氨酸、4-硼-L-苯丙氨酸和L-苯丙氨酸。
本发明涉及的含硼药物功能单元明确，其中磷酸化的L-酪氨酸作为磷酸酶响应单元，4-硼-L-苯丙氨酸作为硼提供单元，疏水分子和L-苯丙氨酸作为π-π作用单元。当所述含硼药物进入肿瘤细胞后，肿瘤细胞中过表达的磷酸酶能将磷酸化的L-酪氨酸去磷酸化，含硼药物通过氢键、π-π堆积作用在肿瘤细胞中原位自组装形成含硼组装体，从而实现含硼药物在肿瘤细胞内的特异性富集，每个癌细胞富集量可达1.98×109个10B原子，满足BNCT治疗的需要。正常细胞由于没有过表达的磷酸酶，因此不能导致L-酪氨酸去磷酸化，进而不能使含硼药物富集于正常细胞。因此实现含硼药物对肿瘤细胞的靶向。此外，该含硼药物的生物相容性好、低免疫原性、低毒性。
所述多肽中的L-酪氨酸、4-硼-L-苯丙氨酸和L-苯丙氨酸可以根据实际需要任意排列其连接顺序。
优选地，所述多肽还包括L-赖氨酸、L-甘氨酸或L-精氨酸中的任意一种或至少两种的组合，所述至少两种的组合例如L-赖氨酸和L-甘氨酸的组合、L-甘氨酸和L-精氨酸的组合、L-赖氨酸和L-甘氨酸以及L-精氨酸的组合等。
所述L-赖氨酸、L-甘氨酸和L-精氨酸在多肽中的连接位置也根据实际需要任意选择，其数目也可以根据实际需要任意增减。
优选地，所述多肽的氨基酸残基数为3-6个，例如3个、4个、5个或6个。
优选地，所述疏水分子包括2-萘乙酸或芘乙酸。
另一方面，本发明提供一种如上所述的含硼药物的制备方法，所述制备方法为：采用2-氯-三苯甲基氯树脂为载体树脂，以末端氨基和侧链氨基均得到保护的氨基酸为原料，通过固相合成法，合成多肽，将疏水分子与制得的多肽进行连接，从载体树脂上脱除，并脱除侧链氨基保护基团，得到所述含硼药物。
该制备方法采用经典的固相合成法，操作简单，所得含硼药物具备高化学纯度以及高总产率等优点。
优选地，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)将载体树脂在二氯甲烷中进行溶胀；
(2)采用末端氨基得到Fmoc保护、侧链氨基也得到保护的氨基酸为原料，根据所要合成的多肽的氨基酸顺序，将第一个氨基酸加入载体树脂与载体树脂进行反应并连接；
(3)脱去第一个氨基酸上的Fmoc保护基；
(4)将第二个氨基酸加入载体树脂进行反应并连接；
(5)脱去第二个氨基酸上的Fmoc保护基；
(6)再将下一个氨基酸加入载体树脂进行反应并连接，重复上述(4)和(5)操作，直到完成所有氨基酸的缩合，得到多肽；
(7)将疏水分子与步骤(6)制得的多肽进行反应并连接；
(8)将步骤(7)得到的产物从载体树脂上脱除，并脱除侧链氨基保护基团，得到所述含硼药物。
在本发明中，步骤(1)所述溶胀的时间为20-40min，例如20min、25min、28min、30min、33min、35min或40min等。
步骤(2)所述侧链氨基得到保护的氨基酸是指侧链氨基得到Boc试剂保护的氨基酸。
优选地，步骤(2)所述将第一个氨基酸加入载体树脂之前，先将其与N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂中。
优选地，步骤(2)所述反应在保护气氛下进行。
优选地，所述保护气氛为氮气。
优选地，步骤(2)所述反应的时间为1.5-3h，例如1.5h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h或3h等。
优选地，步骤(2)所述反应的温度为20-30℃，例如20℃、22℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃或30℃等。
优选地，步骤(2)所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗，再将甲醇、N,N-二异丙基乙胺与二氯甲烷的混合液加入树脂中进行反应，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
优选地，所述甲醇与二氯甲烷的体积比为15:5:80。
在本发明中，步骤(3)所述脱去第一个氨基酸上的Fmoc保护基的方法为：将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的混合液加入至载体树脂中，进行反应。
优选地，所述哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4。
优选地，所述反应的时间为20-40min，例如20min、22min、25min、30min、32min、35min、36min、38min或40min等。
优选地，所述反应的温度为20-30℃，例如20℃、22℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃或30℃等。
优选地，所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
优选地，步骤(4)所述将第二个氨基酸加入载体树脂之前，先将其与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂中。
优选地，步骤(4)所述反应在保护气氛下进行。
优选地，所述保护气氛为氮气。
优选地，步骤(4)所述反应的时间为1.5-3h，例如1.5h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h或3h等。
优选地，步骤(4)所述反应的温度为20-30℃，例如20℃、22℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃或30℃等。
优选地，步骤(4)所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
优选地，步骤(5)所述脱去第二个氨基酸上的Fmoc保护基的方法与步骤(3)相同。
在本发明中，步骤(7)所述将疏水分子与步骤(6)制得的多肽进行反应之前，先将其与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再与多肽进行反应。
优选地，步骤(7)所述反应在保护气氛下进行。
优选地，所述保护气氛为氮气。
优选地，步骤(7)所述反应的时间为1.5-3h，例如1.5h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h或3h等。
优选地，步骤(7)所述反应的温度为20-30℃，例如20℃、22℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃或30℃等。
优选地，步骤(7)所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
在本发明中，步骤(8)的具体操作为：将三氟乙酸加入载体树脂中，进行反应，过滤，将滤液加入冰乙醚，过滤，得到白色固体即所述含硼药物。
优选地，所述反应在保护气氛下进行。
优选地，所述保护气氛为氮气。
优选地，所述反应的时间为1.5-3h，例如1.5h、1.8h、2h、2.2h、2.4h、2.5h、2.6h、2.7h、2.8h或3h等。
优选地，所述反应的温度为20-30℃，例如20℃、22℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃或30℃等。
优选地，所述加入冰乙醚的方式为逐滴加入。
作为本发明的优选技术方案，所述含硼药物的制备方法具体包括如下步骤：
(1)将载体树脂在二氯甲烷中进行溶胀20-40min；
(2)采用末端氨基均由Fmoc保护、侧链氨基由Boc保护的氨基酸为原料，根据所要合成的多肽的氨基酸顺序，将第一个氨基酸与N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂，通氮气，在20-30℃下与载体树脂进行1.5-3h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗，再将甲醇、N,N-二异丙基乙胺与二氯甲烷以体积比15:5:80混合加入树脂中进行反应，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(3)将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺以体积比1:4混合加入至载体树脂中，通氮气，在20-30℃下进行反应20-40min，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(4)将第二个氨基酸与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂，通氮气，在20-30℃下与载体树脂进行1.5-3h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(5)将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺以体积比1:4混合加入至载体树脂中，通氮气，在20-30℃下进行反应20-40min，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(6)再将下一个氨基酸加入载体树脂进行反应并连接，重复上述(4)和(5)操作，直到完成所有氨基酸的缩合，得到多肽；
(7)将疏水分子与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，通氮气，在20-30℃下与制得的多肽进行1.5-3h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(8)将三氟乙酸加入载体树脂中，通氮气，在20-30℃下进行1.5-3h反应，过滤，将滤液逐滴加入冰乙醚，过滤，得到白色固体即所述含硼药物。
再一方面，本发明提供一种如上所述的含硼药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明涉及的含硼药物在肿瘤细胞内具有特异性、快速、高效的累积能力，每个细胞内的硼积累量在9h即可达到109个，24h可达1.98×109个，是同等条件下传统药物4-硼-L-苯丙氨酸的4.1倍，能够更好地满足BNCT的治疗需要。
(2)本发明涉及的含硼药物生物相容性好，无系统毒性。
(3)本发明涉及的含硼药物的制备方法采用经典的固相合成法，操作简单，所得含硼药物具备高化学纯度以及高总产率等优点。
附图说明
图1是实施例1制得含硼药物和4-硼-L-苯丙氨酸在HeLa细胞内硼累积量与培养时间的关系图；
图2是实施例1制得含硼药物对HeLa细胞毒性的统计结果图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
实施例1
本实施例提供一种含硼药物，所述含硼药物包括多肽和位于多肽氮末端的疏水分子2-萘乙酸；所述多肽包括磷酸化的L-酪氨酸、4-硼-L-苯丙氨酸、L-赖氨酸和L-苯丙氨酸，其分子结构如下所示：
Figure BDA0001923239740000091
其制备方法包括如下步骤：
(1)在固相合成管中，将1.0g 2-氯-三苯甲基氯树脂在10mL二氯甲烷中进行溶胀30min；
(2)采用末端氨基由Fmoc保护的磷酸化的L-酪氨酸、4-硼-L-苯丙氨酸、L-苯丙氨酸、末端氨基和侧链氨基分别由Fmoc和Boc保护的L-赖氨酸为原料，根据上述多肽的氨基酸顺序，将1.3g Fmoc保护的4-硼-L-苯丙氨酸与992μL N,N-二异丙基乙胺溶解于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，再加入到载体树脂，通氮气，在25℃下与载体树脂进行2h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；将甲醇、N,N-二异丙基乙胺与二氯甲烷以体积比15:5:80混合加入树脂中进行反应30min，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(3)将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺以体积比1:4混合(总体积为10mL)加入至载体树脂中，通氮气，在25℃下进行反应30min，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(4)再将下一个氨基酸即Fmoc保护的L-苯丙氨酸与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯、N,N-二异丙基乙胺加入载体树脂进行反应并连接，重复上述操作，直到完成所有氨基酸的缩合，得到多肽；
(5)将0.56g疏水分子2-萘乙酸与1.14g苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和992μL N,N-二异丙基乙胺溶解于5mL N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂，通氮气，在25℃下与制得的多肽进行2h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(6)将5mL三氟乙酸加入载体树脂中，通氮气，在25℃下进行2h反应，过滤，将滤液逐滴加入30mL冰乙醚，过滤，得到白色固体即所述含硼药物。
将制得的含硼药物用半制备HPLC进行提纯得到精制产品，产率为75.8％。
用1H-NMR法、13C-NMR法及电喷雾-质谱(ESI-MS)法分别对所制得的含硼药物进行表征，结果如下：
1H-NMR表征结果为：1H NMR(DMSO-d6,400MHz)δ(ppm):8.8.29-8.20(m,2H),8.10-8.06(d,1H),8.00-7.89(s,2H),7.73-7.67(m,8H),7.49-7.37(m,3H),7.21-6.96(m,13H),4.58-4.41(m,3H),4.05-3.96(m,1H),3.69-3.54(q,2H),3.08-2.87(m,5H),2.82-2.61(m,3H),1.41-1.24(m,4H),1.04-0.88(m,2H)。
13C-NMR表征结果为：13C NMR(DMSO-d6,400MHz)δ(ppm):172.72,171.19,170.88,170.77,170.27,139.18,137.58,134.17,133.88,132.96,131.74,129.84,129.15,128.17,128.03,127.67,127.58,127.44,127.39,126.57,126.22,126.04,125.49,119.18,99.52,53.81,53.58,53.42,53.33,36.38,31.55,26.53,22.02。
高分辨ESI-MS表征结果为：C45H51BN5O12P，895.34(m/z)；[M-H+-H2O]-，876.32223(m/z)。
表明成功制得所述含硼药物。
实施例2
将实施例1制得的含硼药物进行在HeLa细胞内的累计性能测试，具体方法为：
选取HeLa细胞作为模型细胞，在接种有2×105个细胞的6孔板中，分别加入2mL含500μM实施例1制得含硼药物的DMEM培养基或2mL含500μM4-硼-L-苯丙氨酸的DMEM培养基，并在37℃以及5％CO2的条件下，孵育36h。分别在孵育1h、6h、12h、18h、24h、30h和36h时，将细胞用胰蛋白酶进行消化处理、计数、加入硝酸进行加热消解，最后用ICP-MS测得累积硼的量，统计结果如图1所示。
由图1可以看出：含硼药物组在HeLa细胞中的累积硼量显著地大于4-硼-L-苯丙氨酸组在HeLa细胞中的累积硼量，且随着孵育时间的延长，这种优势愈发明显。
实施例3
将实施例1制得的含硼药物进行细胞毒性测试，具体方法为：
选取HeLa细胞作为模型细胞，在接种有5000个细胞的96孔板中，分别加入0.1mL含1μM、10μM、20μM、50μM、100μM、200μM、300μM、400μM、500μM实施例1制得含硼药物的DMEM培养基，并在37℃以及5％CO2的条件下，孵育72h，然后用MTT法检测细胞毒性，统计结果如图2所示。
由图2可以看出：实施例1制得的含硼药物在1μM-500μM的范围内对HeLa细胞几乎没有细胞毒性，表明该含硼药物的生物相容性好，无系统毒性。
申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用，但本发明并不局限于上述实施例，即不意味着本发明必须依赖上述实施例才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。
以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于上述实施方式中的具体细节，在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本发明的保护范围。
另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

Claims (33)

1.一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物，其特征在于，所述含硼药物包括多肽和位于多肽氮末端的疏水分子；组成所述多肽的氨基酸包括磷酸化的L-酪氨酸、4-硼-L-苯丙氨酸和L-苯丙氨酸；其分子结构如下所示：
Figure FDA0003543614060000011
2.如权利要求1所述的含硼药物的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：采用2-氯-三苯甲基氯树脂为载体树脂，以末端氨基和侧链氨基均得到保护的氨基酸为原料，通过固相合成法，合成多肽，将疏水分子2-萘乙酸与制得的多肽进行连接，从载体树脂上脱除，并脱除侧链氨基保护基团，得到所述含硼药物。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)将载体树脂在二氯甲烷中进行溶胀；
(2)采用末端氨基得到Fmoc保护、侧链氨基也得到保护的氨基酸为原料，根据所要合成的多肽的氨基酸顺序，将第一个氨基酸加入载体树脂与载体树脂进行反应并连接；
(3)脱去第一个氨基酸上的Fmoc保护基；
(4)将第二个氨基酸加入载体树脂进行反应并连接；
(5)脱去第二个氨基酸上的Fmoc保护基；
(6)再将下一个氨基酸加入载体树脂进行反应并连接，重复上述(4)和(5)操作，直到完成所有氨基酸的缩合，得到多肽；
(7)将疏水分子2-萘乙酸与步骤(6)制得的多肽进行反应并连接；
(8)将步骤(7)得到的产物从载体树脂上脱除，并脱除侧链氨基保护基团，得到所述含硼药物。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述溶胀的时间为20-40min。
5.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述将第一个氨基酸加入载体树脂之前，先将其与N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂中。
6.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述反应在保护气氛氮气下进行。
7.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述反应的时间为1.5-3h。
8.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述反应的温度为20-30℃。
9.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗，再将甲醇、N,N-二异丙基乙胺与二氯甲烷的混合液加入树脂中进行反应，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
10.如权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述甲醇、N,N-二异丙基乙胺与二氯甲烷的体积比为15:5:80。
11.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(3)所述脱去第一个氨基酸上的Fmoc保护基的方法为：将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的混合液加入至载体树脂中，进行反应。
12.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述哌啶与N,N-二甲基甲酰胺的体积比为1:4。
13.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述反应的时间为20-40min。
14.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为20-30℃。
15.如权利要求11所述的制备方法，其特征在于，所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
16.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述将第二个氨基酸加入载体树脂之前，先将其与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂中。
17.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述反应在保护气氛氮气下进行。
18.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述反应的时间为1.5-3h。
19.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述反应的温度为20-30℃。
20.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(4)所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
21.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(5)所述脱去第二个氨基酸上的Fmoc保护基的方法与步骤(3)相同。
22.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)所述将疏水分子2-萘乙酸与步骤(6)制得的多肽进行反应之前，先将其与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再与多肽进行反应。
23.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)所述反应在保护气氛下氮气进行。
24.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)所述反应的时间为1.5-3h。
25.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)所述反应的温度为20-30℃。
26.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(7)所述反应结束后进行过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗。
27.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(8)的具体操作为：将三氟乙酸加入载体树脂中，进行反应，过滤，将滤液加入冰乙醚，过滤，得到白色固体即所述含硼药物。
28.如权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述反应在保护气氛氮气下进行。
29.如权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述反应的时间为1.5-3h。
30.如权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为20-30℃。
31.如权利要求27所述的制备方法，其特征在于，所述加入冰乙醚的方式为逐滴加入。
32.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法具体包括如下步骤：
(1)将载体树脂在二氯甲烷中进行溶胀20-40min；
(2)采用末端氨基得到Fmoc保护、侧链氨基也得到保护的氨基酸为原料，根据所要合成的多肽的氨基酸顺序，将第一个氨基酸与N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂，通氮气，在20-30℃下与载体树脂进行1.5-3h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗，再将甲醇、N,N-二异丙基乙胺与二氯甲烷以体积比15:5:80混合加入树脂中进行反应，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(3)将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺以体积比1:4混合加入至载体树脂中，通氮气，在20-30℃下进行反应20-40min，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(4)将第二个氨基酸与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，再加入载体树脂，通氮气，在20-30℃下与载体树脂进行1.5-3h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(5)将哌啶与N,N-二甲基甲酰胺以体积比1:4混合加入至载体树脂中，通氮气，在20-30℃下进行反应20-40min，过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(6)再将下一个氨基酸加入载体树脂进行反应并连接，重复上述(4)和(5)操作，直到完成所有氨基酸的缩合，得到多肽；
(7)将疏水分子2-萘乙酸与苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯和N,N-二异丙基乙胺溶解于N,N-二甲基甲酰胺中，通氮气，在20-30℃下与制得的多肽进行1.5-3h反应并连接；过滤，并用N,N-二甲基甲酰胺进行清洗；
(8)将三氟乙酸加入载体树脂中，通氮气，在20-30℃下进行1.5-3h反应，过滤，将滤液逐滴加入冰乙醚，过滤，得到白色固体即所述含硼药物。
33.如权利要求1所述的含硼药物在制备抗肿瘤药物中的应用。
CN201811604254.9A 2018-12-26 2018-12-26 一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用 Active CN111434352B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811604254.9A CN111434352B (zh) 2018-12-26 2018-12-26 一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201811604254.9A CN111434352B (zh) 2018-12-26 2018-12-26 一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111434352A CN111434352A (zh) 2020-07-21
CN111434352B true CN111434352B (zh) 2022-05-17

Family

ID=71579803

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201811604254.9A Active CN111434352B (zh) 2018-12-26 2018-12-26 一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111434352B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112972679B (zh) * 2021-03-18 2022-07-01 北京大学 一种多肽偶联硼携带剂及其制备方法和药物制剂
CN114767884B (zh) * 2022-05-17 2024-01-26 国家纳米科学中心 一种可视化的前药激活化合物、前药体系及其制备方法和应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106822036A (zh) * 2016-12-15 2017-06-13 国家纳米科学中心 特异靶向多肽自组装纳米载体、载药纳米颗粒及制备方法
CN108078958A (zh) * 2017-12-28 2018-05-29 国家纳米科学中心 一种抗肿瘤多肽纳米药物及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106822036A (zh) * 2016-12-15 2017-06-13 国家纳米科学中心 特异靶向多肽自组装纳米载体、载药纳米颗粒及制备方法
CN108078958A (zh) * 2017-12-28 2018-05-29 国家纳米科学中心 一种抗肿瘤多肽纳米药物及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Enzymatic Cleavage of Branched Peptides for Targeting Mitochondria;Hongjian He等;《J. Am. Chem. Soc.》;20180112;第140卷;第1215-1218页 *
Enzyme-Instructed Self-Assembly for Spatiotemporal Profiling of the Activities of Alkaline Phosphatases on Live Cells;Jie Zhou等;《Chem》;20160811;第1卷;第246-263页 *
Enzyme-instructed supramolecular assemblies promote intracellular boron accumulation for boron neutron capture therapy;Qingxin Yao等;《Nanotechnology》;20210804;第32卷;第435602页 *
Synergistic enzymatic and bioorthogonal reactions for selective prodrug activation in living systems;Qingxin Yao等;《NATURE COMMUNICATIONS》;20181128;第9卷;第1-9页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111434352A (zh) 2020-07-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111718395B (zh) 一种前药激活化合物、前药体系及其制备方法和应用
CN111434352B (zh) 一种具有肿瘤靶向能力的含硼药物及其制备方法和应用
WO2021139395A1 (zh) 细胞及活体内自催化合成的高效低毒抗癌化合物及其合成方法
EP1915381B1 (en) Boron compounds useful in bnct
US8217137B2 (en) Fullerene-based amino acids
CN102911252B (zh) 含肽类树状分子的阳离子脂质、转基因载体及其制备方法和应用
EP1830882B1 (en) Process for the preparation of a boron-substituted porphyrin
CN113318227B (zh) 一种掺硼肿瘤靶向药物及其制备方法和应用
CN115010786B (zh) 一种gsh-乏氧微环境双响应的自组装荧光探针及其制备方法和应用
CN111423497B (zh) 拮抗肽、其共聚物及纳米组装体、及其制备方法和应用
WO2007058630A1 (en) Novel bis(amino)-ortho-dicarbaborane cluster compounds
CN114767884B (zh) 一种可视化的前药激活化合物、前药体系及其制备方法和应用
CN112915217B (zh) 一类前列腺癌靶向的药物前体及其合成方法
CN116262132B (zh) 抗胰腺癌多肽药物偶联物及其无载体自组装纳米药物和制备方法及应用
CN116354970B (zh) 一种卟啉类一氧化碳前药的制备方法及气体-声动力联合治疗应用
CN112704685B (zh) 一种顺铂配位体及其在制备肿瘤纳米诊疗剂中的应用
CN109701040B (zh) 一种用于诊治mtc的纳米pamam靶向多肽放射性核素制剂及制备方法
Jalisatgi Closomers: An Icosahedral Platform for Drug Delivery
JP7440725B2 (ja) 化合物の分解方法及び化合物
CN115645530A (zh) 一种基于半菁和ido抑制剂的双激活光动力免疫前药及其制备方法和应用
CN115353527A (zh) 一种含硼化合物及其应用
CN116284255A (zh) 一种用于早期结直肠肿瘤的靶向多肽化合物与应用
CN117402199A (zh) 一种钆特酸衍生物及其制备方法和应用
CN114848835A (zh) 塞来昔布的聚乙二醇修饰及连接叶酸基团的靶向药物分子及制备方法
CN118078995A (zh) 一种双重靶向高水溶性小分子硼药及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant