CN111419748A - 具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物、制法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物、制法及其应用。所述的海藻寡糖组合物，其包含海藻寡糖、植物多酚、生物硒、稳定剂、增溶剂和水。本发明提供的海藻寡糖组合物对于辐射损伤的细胞具有较强的修复能力，其可以缓解晒伤后的正常细胞的损伤与凋亡。

Description

具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物、制法及其应用
技术领域
本发明涉及人体护理技术领域，尤其涉及一种具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物、制法及其应用。
背景技术
晒后修复是指在皮肤经受有害紫外线损伤后，及时使用具有舒缓、消炎等作用的产品，避免晒伤症状进一步恶化的一种处理。所谓的有害紫外线，包含UVA和UVB，其中UVB为波长在290-320nm的紫外光，UVA为波长在320-400nm的紫外光。临床上，超剂量的UVB照射会引起典型的晒伤，如在幼年时期过度接受UVB照射，有罹患基底细胞癌、黑色素瘤、日光性角化病和鳞状细胞癌的风险。相较于容易产生皮肤红斑的UVB，UVA是一种更为隐蔽的威胁。这是因为UVA比UVB的穿透力更强，且其在大气内含量是UVB的20倍以上，并且由于穿透力强，会轻易透过皮肤的真皮层，引发光老化，进而导致癌变，而UVB不会造成皮肤红斑，但却会直接晒黑皮肤。
防止皮肤遭受紫外辐射损伤的方式最有效的是使用防晒产品，防晒产品中起遮挡紫外线作用的成分被称为防晒剂。一般防晒剂有化学防晒剂和物理防晒剂两种，化学防晒剂又称紫外线吸收剂，是通过吸收有害的紫外线而实现防晒。由于化学防晒剂分子会被皮肤吸收，因此吸收紫外线的过程发生在皮肤内部，并由人体代谢而清除。化学防晒剂对皮肤有一定的刺激性，常见的化学防晒成分有二苯酮、水杨酸乙基己酯等。物理防晒剂是利用反光粒子，使用物理遮盖的方式，阻挡、反射或散射掉紫外线，使到达皮肤的紫外线量得以减少来达到防晒的目的。物理防晒通常停留在皮肤表面，不与皮肤细胞发生化学反应。物理防晒产品的使用体验与防晒剂的粒度及肤感关系密切，颗粒大的防晒剂不能很好留存，且容易发糊；粒度过小的防晒剂，虽然肤感体验好，但也有留存于皮肤角质层，无法清洁干净的问题。
但无论是物理防晒还是化学防晒，其中的有效成分对于皮肤都有不同程度的损伤。并且物理防晒和化学防晒不能完全意义上阻拦紫外线损害，因此皮肤本身仍有受到一定程度的损伤，据此，晒后修复有十分重要的意义。
海藻寡糖是通过降解天然海藻多糖获得的一种低聚糖，是一种生物活性物质，同时具有分子量少，水溶性好等优点，越来越受到人们的关注。CN201910491418.X公开了海藻寡糖在保水、保湿、洗发、护发、杀菌消毒，以及抗菌、活化细胞、抗氧化、抗衰老和防晒等产品的开发和应用中需求量很大，而且在防辐射、止血、耐低温和防冻食品以及解毒食品等方面具有特殊用途。
在已公开技术中，尚未见使用海藻寡糖作为主要成分进行晒后修复产品的开发。海藻寡糖在此领域的应用仍有很大的拓展空间。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供一种具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物、制法以及应用。本发明具体技术方案如下：
本发明提供了一种具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物，其包含海藻寡糖、植物多酚、生物硒、稳定剂、增溶剂和水。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，按重量为100份计，所述海藻寡糖为20-40份，优选为20-35份，较优选为20-30份；所述植物多酚为0.5-4份，优选为0.5-2份，较优选为0.5-1份；所述生物硒为0.1-1份，优选为0.1-0.5份，较优选为0.3-0.5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；所述增溶剂为1-5份，优选为1-3份，较优选为1-1.5份，以及余量的水。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述海藻寡糖为褐藻寡糖或红藻寡糖，优选的，所述红藻寡糖为琼胶寡糖，进一步优选的，所述琼胶寡糖为新琼寡糖。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述新琼寡糖包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖；优选的，以在新琼寡糖中所占的重量计，所述新琼二糖为60-70％，优选为60-65％，所述新琼四糖为10-25％，优选为10-15％以及所述新琼六糖为10-25％，优选为15-25％。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述植物多酚选自迷迭香酸、金丝桃素、鞣花酸、碧萝芷、月见草油、茶多酚和银杏多酚中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述生物硒为酵母硒和/或植物硒。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述稳定剂选自乙醇、丙二醇、异丙醇、甘油、丁二醇和戊二醇中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述增溶剂选自烷基糖苷、甜菜碱、大豆卵磷脂、乙基己基甘油和泛醇中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的海藻寡糖组合物，其中，所述组合物的pH为4.0-6.5。
本发明提供了一种海藻寡糖组合物的制备方法，其包括下述步骤：
将所述海藻寡糖和所述生物硒加入水中得到A相；
将所述植物多酚加入所述稳定剂中得到B相；
将所述B相加入到所述A相中搅拌，然后加入增溶剂，陈化得到所述的组合物。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，在B相加入A相之前，搅拌转速为30-1000rpm，优选为60-300rpm；优选的，搅拌温度为20-70℃，优选为25-40℃。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，按重量为100份计，所述海藻寡糖为20-40份，优选为20-35份，较优选为20-30份；所述植物多酚为0.5-4份，优选为0.5-2份，较优选为0.5-1份；所述生物硒为0.1-1份，优选为0.1-0.5份，较优选为0.3-0.5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；所述增溶剂为1-5份，优选为1-3份，较优选为1-1.5份，以及余量的水。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述海藻寡糖为褐藻寡糖或红藻寡糖，优选的，所述红藻寡糖为琼胶寡糖，进一步优选的，所述琼胶寡糖为新琼寡糖。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述新琼寡糖包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖；优选的，以在新琼寡糖中所占的重量计，所述新琼二糖为60-70％，优选为60-65％，所述新琼四糖为10-25％，优选为10-15％以及所述新琼六糖为10-25％，优选为15-25％。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述植物多酚选自迷迭香酸、金丝桃素、鞣花酸、碧萝芷、月见草油、茶多酚和银杏多酚中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述生物硒为酵母硒和/或植物硒。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述稳定剂选自乙醇、丙二醇、异丙醇、甘油、丁二醇和戊二醇中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述增溶剂选自烷基糖苷、甜菜碱、大豆卵磷脂、乙基己基甘油和泛醇中的一种或两种以上。
优选的，对于上述所述的制备方法，其中，所述组合物的pH为4.0-6.5。
本发明提供了上述所述的海藻寡糖组合物或者上述所述的制备方法制备得到的海藻寡糖组合物在人体护理领域中的应用，优选在化妆品领域中的应用，更优选在晒后修复化妆品领域中的应用。
本发明提供了一种人体护理品组合物，包括上述所述的海藻寡糖组合物或者上述所述的制备方法制备得到的海藻寡糖组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述植物多酚的浓度为0.01-0.5％。
发明的效果
本发明提供的海藻寡糖组合物对于辐射损伤的细胞具有较强的修复能力，其可以缓解晒伤后的正常细胞的损伤与凋亡。
附图说明
图1是实验例1中不同给药组成的细胞存活率示意图。
图2是实验例1中给药组成为D处理后细胞的镜检结果示意图。
图3是实验例3中不同给药组成时紧密连接蛋白的染色结果示意图。
图4是实验例3中不同给药组成时紧密连接蛋白变化趋势示意图。
具体实施方式
下面结合附图所描述的实施方式对本发明做以详细说明，其中所有附图中相同的数字表示相同的特征。虽然附图中显示了本发明的具体实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
需要说明的是，在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可以理解，技术人员可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名词的差异作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异作为区分的准则。如在通篇说明书及权利要求当中所提及的“包含”或“包括”为开放式用语，故应解释成“包含但不限定于”。说明书后续描述为实施本发明的较佳实施方式，然而所述描述乃以说明书的一般原则为目的，并非用以限定本发明的范围。本发明的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。
本发明提供了一种具有晒后修复功能的海藻寡糖组合物，所述组合物包括海藻寡糖、植物多酚、生物硒、稳定剂、增溶剂和水。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，按重量为100份计，所述海藻寡糖为20-40份，优选为20-35份，较优选为20-30份；所述植物多酚为0.5-4份，优选为0.5-2份，较优选为0.5-1份；所述生物硒为0.1-1份，优选为0.1-0.5份，较优选为0.3-0.5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；所述增溶剂为1-5份，优选为1-3份，较优选为1-1.5份，以及余量的水。
优选的，所述海藻寡糖可以为20份、21份、22份、23份、24份、25份、26份、27份、28份、29份、30份、31份、32份、33份、34份、35份、36份、37份、38份、39份、40份或者其之间的任意范围；所述植物多酚可以为0.5份、1份、2份、3份、4份或者其之间的任意范围；所述生物硒可以为0.1份、0.2份、0.3份、0.4份、0.5份、0.6份、0.7份、0.8份、0.9份、1份或者其之间的任意范围；所述稳定剂可以为5份、6份、7份、8份、9份、10份、11份、12份、13份、14份、15份或者其之间的任意范围；所述增溶剂可以为1份、2份、3份、4份、5份或者其之间的任意范围。
所述生物硒是使用生物手段富集的硒元素，常见的形式是硒-氨基酸或硒-蛋白形态，从制备方式上有微生物发酵法和植物富集法。硒是人体必备的一种微量元素，而生物硒更容易被细胞摄取。现代研究认为硒具有广泛的抗氧化功效，并且在抑制一些疾病症状方面也有十分突出的表现。
所述植物多酚又称植物单宁，是分子中具有多个羟基的酚类总称，大部分存在于植物的皮和叶当中，其在植物当中的含量仅次于纤维素、半纤维素和木质素。大量的研究结果表明，植物多酚具有清除人机体内自由基的生物活性功能。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述海藻寡糖为褐藻寡糖或红藻寡糖，所述红藻寡糖优选为琼胶寡糖，所述琼胶寡糖优选为新琼寡糖。
所述海藻寡糖是通过降解天然海藻多糖获得的一类低聚糖，相比于容易获得的海藻多糖，海藻寡糖的优势在于海藻寡糖的聚合度通常较小，分子量通常在3kDa以内，这使得海藻寡糖有非常好的人体利用性，不仅如此，海藻寡糖的成品纯度相对更高，特别是使用生物法或酶法制备的海藻寡糖，其杂质含量更可以大大降低，表现出更加的复配性能和生物活性。而海藻多糖是由成千上万个寡糖单元聚合而成的生物大分子，其分子量约为100～10000kDa数量级。巨大的分子量和庞大的化学结构导致了海藻多糖只能短暂停留在皮肤的角质层，而无法被人体皮肤细胞所利用。而受限于传统海藻提取物的制备技术，海藻中许多小分子化合物都无法被去除，其中包括了许多对人体有刺激性或毒性的酚类、萜类和重金属盐类物质。这极大限制了海藻提取物的安全性和温和性，也限制了海藻来源类化妆品的定位。
褐藻寡糖又称褐藻胶寡糖，是通过采用不同的降解方法(酸降解法、酶降解法或氧化降解法)降解褐藻胶所得到的聚合度在20以下的系列寡糖。
红藻寡糖是红藻多糖通过降解得到，降解方法主要包括物理降解法、化学降解法和酶降解法。
所述红藻寡糖包括卡拉胶寡糖和琼胶寡糖，所述琼胶寡糖是琼胶多糖经水解后聚合度为2～20的新型海洋功能性低聚糖，主要由琼二糖的重复单位连接而成，包括琼寡糖(agaroligo saccharides)和新琼寡糖(neoagarooligo saccharides)两个系列。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述新琼寡糖包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖；优选的，以在新琼寡糖中所占的重量计，所述新琼二糖为60-70％，优选为60-65％，所述新琼四糖为10-25％，优选为10-15％以及所述新琼六糖为10-25％，优选为15-25％。
优选的，所述新琼二糖可以为60％、61％、62％、63％、64％、65％、66％、67％、68％、69％、70％或者其之间的任意范围；所述新琼四糖可以为10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％或者其之间的任意范围；所述新琼六糖可以为10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％或者其之间的任意范围。
在本发明优选的一种具体实施方法中，其中，所述植物多酚选自迷迭香酸、金丝桃素、鞣花酸、碧萝芷、月见草油、茶多酚和银杏多酚中的一种或两种以上。
所述迷迭香酸是从唇形科植物迷迭香中分离得到的一种水溶性的天然酚酸类化合物，分布较为广泛，主要存在于唇形科、紫草科、葫芦科、椴树科、伞形科的多种植物中，尤以唇型科和紫草科植物中含量最高
所述金丝桃素是贯叶连翘的提取物，人类在1957年首次从藤黄科植物贯叶连翘中分离出来，属于二蒽酮类化合物，是贯叶连翘中最具生物活性的物质，外观为灰黄色至棕褐色流动性粉末，味微苦，易溶于水，能散发出特殊的清香，具有抑制中枢神经和镇静的作用。
所述鞣花酸是一种多酚二内酯，是没食子酸的二聚衍生物。鞣花酸广泛存在于各种软果、坚果等植物组织中的一种天然多酚组分，鞣花酸与三氯化铁的显色反应呈蓝色，遇硫酸呈黄色。
所述碧萝芷是法国沿海松树皮提取物，最强的纯天然抗衰老物质，包括生物类黄酮、有机酸及其他有生物活性的成分。
所述月见草油主要是来自月见草种子，经低温压榨或丁烷混合溶剂低温萃取而来，天然的月见草油呈淡黄色，约含有90％的不饱和脂肪酸。
所述茶多酚是茶叶中多酚类物质的总称，为白色不定形粉末，易溶于水，可溶于乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯，不溶于氯仿。茶多酚的主要成分为：黄烷酮类、花色素类、黄酮醇类和花白素类和酚酸及缩酚酸类6类化合物。
所述银杏多酚是从银杏叶、银杏果或银杏外种皮中提取出来的一类植物多酚类物质。银杏提取物发挥生物活性的成分主要是其中的黄酮、萜内酯和多酚，其中银杏多酚见于报道的功能有消炎、杀菌以及抗氧化。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述生物硒为酵母硒和/或植物硒。
所述酵母硒是利用酵母开发出来的一种有机硒源，它是通过硒富集在生长酵母的细胞蛋白结构内生产的。
所述植物硒是硒与植物中有效成分的结合物，是人类营养硒来源的基本渠道。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述稳定剂选自乙醇、丙二醇、异丙醇、甘油、丁二醇和戊二醇中的一种或两种以上。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述增溶剂选自烷基糖苷、甜菜碱、大豆卵磷脂、乙基己基甘油和泛醇中的一种或两种以上。
所述烷基糖苷是用葡萄糖和脂肪醇合成的烷基糖苷，所述的烷基可以为C2-C8烷基，如乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。
所述甜菜碱的学名为三甲基甘氨酸，为白色鳞状或棱状结晶粉末，有轻微特征气味(甜味)，化学式为C5H11NO2，分子量117.15，熔点293℃(分解)，溶解度(20℃)160g/100G水。甜菜碱可从天然植物的根、茎、叶及果实中提取或采用三甲胺和氯乙酸为原料化学合成。
所述大豆卵磷脂指的是精制大豆油过程中的副产品，是通过溶剂萃取然后离心分离后通过醇洗得到。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述组合物的pH为4.0-6.5，优选的，调节所述组合物的pH值的酸碱对为柠檬酸-柠檬酸钠或酒石酸-酒石酸钠。
本发明提供了一种海藻寡糖组合物的制备方法，其包括下述步骤：
将所述海藻寡糖和所述生物硒加入水中得到A相；
将所述植物多酚加入所述稳定剂中得到B相；
将所述B相加入到所述A相中搅拌，然后加入增溶剂，陈化得到所述的组合物。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，在在B相加入A相之前，搅拌转速为30-1000rpm，优选为60-300rpm；优选的，搅拌温度为20-70℃，优选为25-40℃。优选的，在加入增溶剂之前搅拌10-30min，在加入增溶剂之后并调节组合物的pH，继续搅拌30-60min，陈化过夜得到所述的组合物。
本发明所述组合物可以增加晒后受损细胞的紧密连接蛋白Zonula Occludens-1的表达，并使之处于健康细胞水平，所述紧密连接蛋白有细胞屏障和维持细胞表面极性的功能。近年来，很多蛋白被确定为紧密连接蛋白成员，包括紧密连接跨膜蛋白、支架蛋白以及与细胞骨架调整、囊泡运输和信号转导等有关的蛋白。ZO-1是第一个被发现的紧密连接蛋白，位于紧密连接膜的细胞浆面，能与其同源体ZO-2、ZO-3一起，为紧密连接的许多跨膜蛋白和细胞质紧密连接蛋白搭建具有连接作用的脚手架样平台。已有研究证明ZO-1结构及功能的改变与恶性肿瘤的发生、发展相关，维持细胞中ZO-1的表达对于受损细胞的修复以及减少相关病变发生具有十分重要的意义。
本发明提供了上述所述的海藻寡糖组合物或者上述所述的制备方法制备得到的海藻寡糖组合物在人体护理领域中的应用，优选在化妆品领域中的应用，更优选在晒后修复化妆品领域中的应用。
本发明提供了一种人体护理品组合物，其包含上述所述的海藻寡糖组合物，其中，以组合物的总重量计，所述植物多酚的浓度为0.01-0.5％。
所述的人体护理品组合物除了上述所述的海藻寡糖组合物之外，还包括本领域技术人员公知的辅料，所述的人体护理品组合物可以为化妆品、身体乳等，所述植物多酚在所述人体护理品组合物中的浓度为0.01-0.5％。
本发明所述的人体护理品组合物可以增加晒后受损细胞的紧密连接蛋白ZonulaOccludens-1的表达，并使之处于健康细胞水平，所述紧密连接蛋白有细胞屏障和维持细胞表面极性的功能。近年来，很多蛋白被确定为紧密连接蛋白成员，包括紧密连接跨膜蛋白、支架蛋白以及与细胞骨架调整、囊泡运输和信号转导等有关的蛋白。ZO-1是第一个被发现的紧密连接蛋白，位于紧密连接膜的细胞浆面，能与其同源体ZO-2、ZO-3一起，为紧密连接的许多跨膜蛋白和细胞质紧密连接蛋白搭建具有连接作用的脚手架样平台。已有研究证明ZO-1结构及功能的改变与恶性肿瘤的发生、发展相关，维持细胞中ZO-1的表达对于受损细胞的修复以及减少相关病变发生具有十分重要的意义。
本发明对试验中所用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述，在下面的实施例中，如果无其他特别的说明，％表示wt％，即重量百分数。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品或者常规的实验仪器。
表1所使用的实验原料
Figure BDA0002461550900000091
Figure BDA0002461550900000101
实施例1海藻寡糖组合物的制备
(1)将200mg海藻寡糖和5mg生物硒加入720μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将10mg植物多酚加入50μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为60rpm以及温度为25℃下，将B相加入到A相中，搅拌10min，然后加入15μl增溶剂并调节pH为6.5，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为灭活酵母硒。
植物多酚为月见草油。
稳定剂为甘油
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物，
所述海藻寡糖为新琼寡糖，其包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中新琼二糖占63.8％，新琼四糖占11.5％，新琼六糖占24.7％。
实施例2海藻寡糖组合物的制备
(1)将300mg海藻寡糖和3mg生物硒加入602μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将5mg植物多酚加入80μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为300rpm以及温度为40℃下，将B相加入到A相中，搅拌30min，然后加入10μl增溶剂并调节pH为4，继续搅拌60min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为灭活酵母硒。
植物多酚为迷迭香酸。
稳定剂为乙醇。
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物，
所述海藻寡糖为新琼寡糖，其包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中新琼二糖占60％，新琼四糖占15％，新琼六糖占25％。
实施例3海藻寡糖组合物的制备
(1)将250mg海藻寡糖和5mg生物硒加入670μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将10mg植物多酚加入50μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为60rpm以及温度为25℃下，将B相加入到A相中，搅拌10min，然后加入15μl增溶剂并调节pH为6.5，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为植物硒；
植物多酚为月见草油；
稳定剂为甘油；
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物；
所述海藻寡糖为新琼寡糖，其包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中新琼二糖占65％，新琼四糖占20％，新琼六糖占15％。
实施例4海藻寡糖组合物的制备
(1)将200mg海藻寡糖和5mg生物硒加入720μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将10mg植物多酚加入50μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为60rpm以及温度为25℃下，将B相加入到A相中，搅拌10min，然后加入15μl增溶剂并调节pH为6.5，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为灭活酵母硒；
植物多酚为月见草油；
稳定剂为甘油；
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物；
所述海藻寡糖为褐藻寡糖。
实施例5海藻寡糖组合物的制备
(1)将350mg海藻寡糖和1mg生物硒加入519μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将20mg植物多酚加入100μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为300rpm以及温度为40℃下，将B相加入到A相中，搅拌30min，然后加入10μl增溶剂并调节pH为5，继续搅拌40min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为灭活酵母硒；
植物多酚为金丝桃素；
稳定剂为丙二醇；
增溶剂为甜菜碱；
所述海藻寡糖为新琼寡糖，其包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中新琼二糖占70％，新琼四糖占20％，新琼六糖占10％。
实施例6海藻寡糖组合物的制备
(1)将320mg海藻寡糖和2mg生物硒加入528μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将30mg植物多酚加入90μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为100rpm以及温度为30℃下，将B相加入到A相中，搅拌20min，然后加入30μl增溶剂并调节pH为4，继续搅拌40min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为植物硒；
植物多酚为月见草油；
稳定剂为甘油；
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物；
所述海藻寡糖为新琼寡糖，其包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中新琼二糖占65％，新琼四糖占25％，新琼六糖占10％。
实施例7海藻寡糖组合物的制备
(1)将400mg海藻寡糖和1mg生物硒加入459μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将40mg植物多酚加入50μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为500rpm以及温度为60℃下，将B相加入到A相中，搅拌10min，然后加入50μl增溶剂并调节pH为6.5，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为灭活酵母硒；
植物多酚为月见草油；
稳定剂为甘油；
增溶剂为烷基糖苷；
海藻寡糖为褐藻寡糖。
实施例8海藻寡糖组合物的制备
(1)将200mg海藻寡糖和10mg生物硒加入625μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)将5mg植物多酚加入150μl稳定剂中，搅拌溶解得到B相；
(3)在转速为1000rpm以及温度为70℃下，将B相加入到A相中，搅拌10min，然后加入10μl增溶剂并调节pH为6，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为植物硒；
植物多酚为迷迭草酸；
稳定剂为丙二醇；
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物；
海藻寡糖为褐藻寡糖。
对比例1普通组合物的制备
(1)将200mg海藻寡糖加入735μl的水中，搅拌溶解得到A相；
(2)在转速为60rpm以及温度为25℃下，将50μl稳定剂加入到A相中，搅拌10min，然后加入15μl增溶剂并调节pH为6.5，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，稳定剂为甘油
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物，
所述海藻寡糖为新琼寡糖，其包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖，其中新琼二糖占63.8％，新琼四糖占11.5％，新琼六糖占24.7％。
对比例2普通组合物的制备
(1)将10mg植物多酚加入50μl稳定剂中，搅拌溶解得到A相；
(2)在转速为60rpm以及温度为25℃下，加入15μl增溶剂以及925μl水搅拌，并调节pH为6.5，然后继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，植物多酚为月见草油，
稳定剂为甘油，
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物。
对比例3普通组合物的制备
(1)将5mg生物硒加入930μl的水中，搅拌溶解得到A相；
中；
(3)在转速为60rpm以及温度为25℃下，将50μl稳定剂加入到A相中，搅拌10min，然后加入15μl增溶剂并调节pH为6.5，继续搅拌30min，陈化过夜得到所述的组合物。
其中，所述的生物硒为灭活酵母硒。
稳定剂为甘油，
增溶剂为乙基己基甘油和泛醇体积比例为1:1的混合物。
表2实施例1-8以及对比例1-3所添加的不同组分的量
Figure BDA0002461550900000141
Figure BDA0002461550900000151
实验例1采用实施例1以及对比例1-3所述的组合物对辐射处理后成纤维细胞的存活率影响试验
模拟细胞经受UVA辐射的过程，通过检测细胞在用给药组成处理之后的存活率来推测所检测给药组成对细胞的修复作用。
(一)细胞接种
成纤维细胞(NIH/3T3)购自于中国细胞资源库保藏中心。
使用含10％FBS的DMEM培养基接种成纤维细胞，37℃、5％CO2培养箱中常规培养，然后取对数生长期细胞，按每孔6000个细胞的密度接种于2个多孔培养板中，细胞融合度达80％后进行下一步操作。
(二)进行UVB辐照处理与给药组成共培养
给药组成如下表所示，其中，对比例1是A组，对比例2是B组，对比例3是C组，实施例1是D组：
表3给药组成
Figure BDA0002461550900000152
其中，“-”表示不含有相应的成分。
取1个多孔板做辐照处理，在无菌环境下使用UVB辐射处理所接种培养板细胞，设置辐照剂量为10mJ/cm2，UVB灯管的辐照强度为1.316mW/cm2，辐照时间为7秒。每次辐照间隔2h，一共处理3次后弃上清。另1个未经辐照处理的多孔板常规培养6h后弃上清。
上述给药组成用无血清的DMEM培养基稀释100倍，然后取100μl加入到细胞共培养。
其中除BC组给药组成是加到未经辐照处理的多孔板外，其余组都是添加到辐照处理后的多孔板中。
每组设定6个平行孔，常规培养48h后加入10μl/孔的MTT溶液，37℃培养4h后弃上清。之后加入DMSO，添加量为100μl/孔。避光震荡，15min后用酶标仪(SpectraMax，美国MD公司)在570nm(参比波长630nm)测定吸光值。以BC组的平均值(ODBC)为基数，计算各组的细胞存活率。
其中，MTT溶液的制备方法为：
(1)用DPBS配制5mg/mL的MTT储存液，然后将其储存在-20℃(保存时间不超过1个月)；
(2)使用前，将其融化后用MTT稀释液稀释至1mg/mL，4℃下避光备用(备用时间不超过2h)。
本实验例中细胞存活率的计算方法为：
Figure BDA0002461550900000161
各组数据的结果如表4，对所获得的数据绘制成图表，如图1所示。
表4不同给药组成的细胞存活率
Figure BDA0002461550900000162
从表4可以看出，NC组、A组、B组、C组的细胞存活率较低，平均值均在61％以下，说明只有当组合物中含有海藻寡糖、植物多酚和生物硒时，细菌存活率较高，说明了本发明所述的组合物对于辐射晒伤后的细胞有较强的修复作用。
为确认给药组成为实施例1时的细胞形态是否有发生改变，取孔中成纤维细胞进行镜检，镜检结果如图2。
从图2可以看到，视野中的成纤维细胞结构完整，形态均一，未有癌变或其他细胞病变现象。
实验例2使用实施例2-8所述的组合物对辐射后成纤维细胞的存活率影响试验
采用与实验例1相同的方法，使用实施例2-8所述的组合物对辐射后成纤维细胞进行实验，所得到的成纤维细胞的存活率的实验结果如下表所示。
表5实施例2-8所述组合物对成纤维细胞存活率的影响
实施例 成活率的平均值 SD
2 94.48 5.12
3 93.18 5.65
4 89.79 5.47
5 85.49 4.43
6 87.68 4.82
7 79.88 3.33
8 80.40 4.65
从表5可以看出，采用实施例2-8所述的组合物，所测得的细胞存活率较高，均在80％以上，说明了本发明所述组合物对辐射损伤后细胞具有较强的修复能力，可以缓解晒伤后的正常细胞损伤与凋亡。
实验例3采用实施例1所述的组合物进行紧密连接蛋白表达试验
以人角质形成细胞为对象，使用细胞免疫荧光检测，检测细胞中的紧密连接蛋白表达量，目的是以此评估本发明所述的组合物在处理辐射损伤细胞后细胞的健康程度。
本实施例的具体试验步骤如下：
(1)细胞接种与孵育
以2×104个/孔的细胞接种密度将角质形成细胞(购于中国细胞资源库)接种至含有盖玻片的24孔板中，37℃下5％CO2培养箱孵育过夜。
(2)给药组成设置
如实验例1中表3所示设置BC、A、B、C和D的给药组成。
(3)辐射损伤
待24孔板中细胞铺板率达到30-40％时，在无菌环境下使用UVB辐射处理所接种培养板细胞，设置辐照剂量为10mJ/cm2，UVB灯管的辐照强度为1.316mW/cm2，辐照时间为7秒，每次辐照间隔2h，一共处理3次后弃上清。
上述给药组成用无血清的DMEM培养基稀释100倍，然后取100μl加入到细胞共培养。每组设三个平行孔，37℃下5％CO2培养箱继续培养24h。
(4)收样
孵育培养结束后，弃掉24孔板中培养液，采用PBS清洗爬片三次，用4％多聚甲醛室温固定细胞30min，4℃冰箱保存。
(5)细胞免疫荧光检测
对细胞进行通透处理，山羊血清封闭液37℃封闭30min，一抗工作液4℃孵育过夜，二抗工作液(Goat Anti-Rabbit IgG抗体按照1:200，Goat Ant-Mouse IgG FITC抗体按照1:200稀释)在37℃下孵育2h。
(6)衬染
Hochest染液对细胞进行核衬染(被染上的核区可用紫外激发出蓝色荧光)。
(7)拍照
正置荧光显微镜下拍照，在同一视野下用蓝光通道激发目的蛋白的绿色荧光，用紫外激发细胞核区的蓝色荧光，分别拍照。将两张图片组合即为merge图。
(8)处理分析
利用Image-pro Plus(IPP)软件分析细胞在蓝光下激发出绿色荧光的照片中绿色荧光强度，计算单位面积下的荧光强度，用T-Test方法对结果进行统计分析。
(9)试验结果
依本实验例试验步骤处理，得到的不同给药组成的紧密连接蛋白染色结果如图3所示，荧光强度分析结果如表6所示，紧密连接蛋白变化趋势如图4所示。
表6不同给药组成的荧光强度分析结果
Figure BDA0002461550900000181
Figure BDA0002461550900000191
从上述图以及表中可以看出，相较于空白组，海藻寡糖处理组(A组)的紧密连接蛋白有所增加，说明海藻寡糖对于促紧密蛋白表达有一定作用；植物多酚处理组(B组)处理后的紧密连接蛋白也有一定程度的增加，但并不显著；生物硒处理组(C组)处理后的紧密连接蛋白反而降低，初步推测是由于C中所用生物硒为酵母硒，其中的蛋白成分对紧密连接蛋白的表达有抑制作用；本发明所述组合物处理组(D组)的紧密连接蛋白增幅最为明显且显著，说明本发明所述组合物对于辐射损伤后的皮肤细胞具有显著的修复作用。
实施例2-8也具有类似的效果。
综上所述，本发明所述的组合物对于辐射晒伤后的细胞有较强的修复作用，可以缓解晒伤后的正常细胞的损伤与凋亡。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种具有皮肤晒后修复功能的海藻寡糖组合物，其包含海藻寡糖、植物多酚、生物硒、稳定剂、增溶剂和水。
2.根据权利要求1所述的海藻寡糖组合物，其中，按重量为100份计，所述海藻寡糖为20-40份，优选为20-35份，较优选为20-30份；所述植物多酚为0.5-4份，优选为0.5-2份，较优选为0.5-1份；所述生物硒为0.1-1份，优选为0.1-0.5份，较优选为0.3-0.5份；所述稳定剂为5-15份，优选为5-10份，较优选为5-8份；所述增溶剂为1-5份，优选为1-3份，较优选为1-1.5份，以及余量的水。
3.根据权利要求1或2所述的海藻寡糖组合物，其中，所述海藻寡糖为褐藻寡糖或红藻寡糖，优选的，所述红藻寡糖为琼胶寡糖，进一步优选的，所述琼胶寡糖为新琼寡糖。
4.根据权利要求3所述的海藻寡糖组合物，其中，所述新琼寡糖包含新琼二糖、新琼四糖和新琼六糖；优选的，以在新琼寡糖中所占的重量计，所述新琼二糖为60-70％，优选为60-65％，所述新琼四糖为10-25％，优选为10-15％以及所述新琼六糖为10-25％，优选为15-25％。
5.根据权利要求1-4任一项所述的海藻寡糖组合物，其中，所述生物硒为酵母硒和/或植物硒。
6.根据权利要求1-5任一项所述的海藻寡糖组合物，其中，所述稳定剂选自乙醇、丙二醇、异丙醇、甘油、丁二醇和戊二醇中的一种或两种以上。
7.一种海藻寡糖组合物的制备方法，其包括下述步骤：
将所述海藻寡糖和所述生物硒加入水中得到A相；
将所述植物多酚加入所述稳定剂中得到B相；
将所述B相加入到所述A相中搅拌，然后加入增溶剂，陈化得到所述的组合物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其中，在B相加入A相之前，搅拌转速为30-1000rpm，优选为60-300rpm；优选的，搅拌温度为20-70℃，优选为25-40℃。
9.权利要求1-6任一项所述的海藻寡糖组合物或者权利要求7-8任一项所述的制备方法制备得到的海藻寡糖组合物在人体护理领域中的应用，优选在化妆品领域中的应用，更优选在晒后修复化妆品领域中的应用。
10.一种人体护理品组合物，包括权利要求1-6任一项所述的海藻寡糖组合物或者权利要求7-8任一项所述的制备方法制备得到的海藻寡糖组合物，其中，以人体护理品组合物的总重量计，所述植物多酚的浓度为0.01-0.5％。
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