CN111411159A - 一种绵羊chchd7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 - Google Patents
一种绵羊chchd7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111411159A CN111411159A CN202010325230.0A CN202010325230A CN111411159A CN 111411159 A CN111411159 A CN 111411159A CN 202010325230 A CN202010325230 A CN 202010325230A CN 111411159 A CN111411159 A CN 111411159A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sheep
- deletion
- gene
- polymorphism
- genotype
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241001494479 Pecora Species 0.000 title claims abstract description 72
- 238000003780 insertion Methods 0.000 title claims abstract description 60
- 230000037431 insertion Effects 0.000 title claims abstract description 60
- 238000012217 deletion Methods 0.000 title claims abstract description 55
- 230000037430 deletion Effects 0.000 title claims abstract description 55
- 101150101112 7 gene Proteins 0.000 title claims abstract description 38
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title abstract description 14
- 239000003147 molecular marker Substances 0.000 claims abstract description 8
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 10
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 claims description 9
- 238000000137 annealing Methods 0.000 claims description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 7
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 7
- 108020005065 3' Flanking Region Proteins 0.000 claims description 4
- 101150007776 CHCHD7 gene Proteins 0.000 claims description 4
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 claims description 4
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 claims description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 claims description 3
- 238000012257 pre-denaturation Methods 0.000 claims description 3
- 238000009394 selective breeding Methods 0.000 claims description 3
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 11
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 11
- 244000144972 livestock Species 0.000 abstract description 4
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 15
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 10
- 238000011160 research Methods 0.000 description 8
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 5
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 238000010219 correlation analysis Methods 0.000 description 5
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000000634 Cytochrome c oxidase subunit IV Human genes 0.000 description 3
- 108090000365 Cytochrome-c oxidases Proteins 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100023689 Coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing protein 7 Human genes 0.000 description 2
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 2
- 101000906984 Homo sapiens Coiled-coil-helix-coiled-coil-helix domain-containing protein 7 Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 2
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 2
- 238000012098 association analyses Methods 0.000 description 2
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- ZEDPQIJYJCPIRM-UHFFFAOYSA-N dimethyl benzonitrile Natural products CC1=CC=CC(C#N)=C1C ZEDPQIJYJCPIRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 2
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007614 genetic variation Effects 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;2-[2-[bis(carboxymethyl)amino]ethyl-(carboxymethyl)amino]acetic acid;boric acid Chemical compound OB(O)O.OCC(N)(CO)CO.OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O OSBLTNPMIGYQGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IKHKJYWPWWBSFZ-UHFFFAOYSA-N 4-[[4-(diethylamino)phenyl]-(4-diethylazaniumylidenecyclohexa-2,5-dien-1-ylidene)methyl]benzene-1,3-disulfonate;hydron Chemical compound C1=CC(N(CC)CC)=CC=C1C(C=1C(=CC(=CC=1)S([O-])(=O)=O)S(O)(=O)=O)=C1C=CC(=[N+](CC)CC)C=C1 IKHKJYWPWWBSFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102000005720 Glutathione transferase Human genes 0.000 description 1
- 108010070675 Glutathione transferase Proteins 0.000 description 1
- 102100020948 Growth hormone receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 101001012551 Homo sapiens Hippocampus abundant transcript 1 protein Proteins 0.000 description 1
- 101000829171 Hypocrea virens (strain Gv29-8 / FGSC 10586) Effector TSP1 Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 102000004022 Protein-Tyrosine Kinases Human genes 0.000 description 1
- 108090000412 Protein-Tyrosine Kinases Proteins 0.000 description 1
- 108010016634 Seed Storage Proteins Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010068542 Somatotropin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000008051 TBE buffer Substances 0.000 description 1
- -1 Tris saturated phenol Chemical class 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 239000000980 acid dye Substances 0.000 description 1
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000003975 animal breeding Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 210000000085 cashmere Anatomy 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 1
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003777 experimental drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 238000012214 genetic breeding Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 235000020251 goat milk Nutrition 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical class 0.000 description 1
- 230000013632 homeostatic process Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000012160 loading buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000036438 mutation frequency Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 235000013594 poultry meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
- C12Q1/6858—Allele-specific amplification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/124—Animal traits, i.e. production traits, including athletic performance or the like
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及生物技术与家畜育种技术领域，具体是公开了一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用，该方法包括以下步骤，以包含CHCHD7基因的待测绵羊全基因组DNA为模板，利用PCR扩增包含绵羊CHCHD7基因3’侧翼区插入/缺失多态性位点的片段，对PCR扩增产物进行电泳，根据电泳结果鉴定所述插入/缺失多态性位点的基因型。本发明检测的插入/缺失多态性位点能够作为滩羊公羊体长性状、胸深性状的分子标记，有利于快速建立体尺性状优良的滩羊种群，加快良种选育速度。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术与家畜育种技术领域，具体属于一种绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位8-bp插入/缺失多态性(indel)位点的快速、准确分型检测及其在分子标记辅助选择育种中的应用。
背景技术
随着分子遗传学的发展，人们越来越多地关注在DNA分子水平上研究基因之间的关系，迄今为止已经发现了几十个与数量性状遗传密切相关的主基因。标记辅助选择(Marker assistance selection，简称MAS)是利用与数量性状相关的分子标记，以标记信息为辅助信息，可以从分子水平准确快速地分析个体的遗传组成，从而实现对基因型的选择。自1990年MAS的提出到现在，已经有二十多种遗传标记用于MAS研究，包括RFLP，RAPD，SSCP，RAMP，DDRT等。MAS可以用于检测基因多态性，是分子育种中常用的方法，经常与传统育种方法结合使用从而实现对基因型的直接选择，以缩短育种周期，加速动物育种速度。并且，该方法在克服表型鉴定的困难、早期选择、进行无损害的性状评价和选择及提高回交育种效率等方面具有优越性。
插入/缺失多态性(insertion/deletion，indel)是一种分子标记，是DNA或蛋白质序列水平上发生频率仅次于残基替换的改变，表现为基因组中插入或缺失了不同大小的小片段DNA。与SNP相比，indel均是源于单突变事件，其突变频率较低，相对比较稳定，在结构上属于二等位基因多态性，能够通过很小的扩增子(<50bp)进行扩增。
indel大致分成以下5大类：(1)单碱基对的插入/缺失；(2)单一碱基的插入/缺失；(3)重复单元为2～15个碱基的多碱基对插入/缺失；(4)转座子插入/缺失；(5)任意DNA序列的插入/缺失多态性。随着比较基因组学的深入研究，indel为理论研究和遗传育种应用研究提供了大量的生物信息，其作为新一代的遗传学鉴定标记，兼具SNP的优点。indel多集中在人类和各种农作物(如水稻和玉米等)的基因组研究中，在畜禽上则集中在对鸡生长性状的研究，在反刍动物上研究和应用甚少。由此，对反刍家畜的功能性基因的indel标记研究亟待开拓和深入。
随着人们生活水平的提高，社会对绵羊产品的需求不断加强，但近年来羊肉、羊奶、羊绒等羊产品严重短缺。在高产、优质和高效的绵羊育种目标上，通过对在DNA水平上筛查的与绵羊生长发育性状密切相关的DNA标记进行基因多态性的检测，以及基因多态性与体尺性状的关联分析，从而利用MAS加快建立优良体尺性状绵羊种群一直是关注热点。
CHCHD7基因(Coiled-Coil-Helix-Coiled-Coil-Helix Domain Containing7)，也称为COX23(Cytochrome C Oxidase Assembly Homolog)或MGC2217，位于绵羊的9号染色体，具有5个外显子和4个内含子，长度7139bp，其cDNA可以编码91个氨基酸(Westerman etal.，2004；Banci et al.，2012)。CHCHD7蛋白含有保守的双胞胎Cc9C结构基序，是存在于线粒体膜间隙的细胞色素c氧化酶组装所必需的保守因子(Barros et al.，2004；Cavallaro，2010；Banci et al.，2012)，可能与细胞色素c氧化酶生物发生过程中的铜递送，铜稳态以及与血红素转移过程中的Cox1血红素化有关(Dela Cruz et al.，2016；Murtha et al.，2018)。而且，CHCHD7编码的可溶性蛋白在哺乳动物体内普遍表达，其中在成人的组织中具有最高表达水平，特别是在心脏，骨骼肌和胰腺中；但在胎儿的组织中表达水平较低(Aspet al.，2006)。全基因组分析显示，CHCHD7基因多态性与牛和羊的生长性状有关，如身高，体型和肌肉形成(Utsunomiya et al.，2013；Randhawa et al.，2014；Jiao et al.，2014；Zhao et al.，2015；Taye et al.，2018)。近年来，越来越多的研究表明CHCHD7基因对哺乳动物的生长性状产生有重要影响，如Nellore牛的出生体重(Utsunomiya et al.，2013)；杜洛克猪的断奶重(Jiao et al.，2014)；日本和牛的胴体重量(Nishimura et al.，2012)；安格斯牛，泽西岛牛和荷斯坦牛的体高(Lettre et al.，2008；Taye et al.，2018)；德国Fleckvieh牛，安格斯牛和利木赞牛的体型(Lettre et al.，2008；Zhao et al.，2015；Tayeet al.，2018)。但是，目前尚未见到关于CHCHD7基因indel位点及其与生长发育性状存在显著相关的报道。
发明内容
本发明的目的是提供了一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用，克服了现有技术的不足，。
为解决上述问题，本发明所采取的技术方案如下：
一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
以包含CHCHD7基因的待测绵羊全基因组DNA为模板，利用PCR扩增包含绵羊CHCHD7基因3’侧翼区插入/缺失多态性位点的片段，对PCR扩增产物进行电泳，根据电泳结果鉴定所述插入/缺失多态性位点的基因型；
所述PCR采用的引物对(P1)为：
上游引物：5'-TGGCCTTGACAGACACATCC-3'(20nt)；
下游引物：5'-CCTGCAGAGCTTCCCTTTCT-3'(20nt)。
进一步，所述插入/缺失多态性位点选自绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位8-bp插入/缺失多态性位点。
进一步，根据电泳结果，所述插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型表现为156bp一条带纹，插入/缺失基因型表现为156bp和148bp以及异源双链条带共三条带纹，无缺失/缺失基因型。
进一步，所述PCR采用的反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸20s，18个循环，每循环后退火温度减1℃；50℃退火30s，72℃延伸12s，30个循环；72℃延伸10min。
进一步，所述电泳采用质量浓度为3.5％的琼脂糖凝胶。
上述绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法在绵羊分子标记辅助选择育种中的应用。
进一步，所述插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型可以作为提高滩羊公羊体长和胸深性状的DNA标记。
进一步，所述绵羊选自滩羊。
本发明与现有技术相比较，本发明的实施效果如下：
本发明所述一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用，本发明根据绵羊CHCHD7基因3’侧翼区插入/缺失多态性位点(参考序列NC_040260.1:g36219994_3622000delGTTACAAG)设计引物，以绵羊基因组DNA为模板，通过序列扩增、电泳鉴定，能够简单、快速、低成本、精确地检测所述插入/缺失多态性位点的基因型。
本发明对绵羊(例如，滩羊)CHCHD7基因插入/缺失多态性位点(参考序列NC_040260.1:g36219994_3622000delGTTACAAG)进行基因型和基因频率分析，对插入/缺失多态性位点与绵羊公羊多个体尺性状进行关联分析，结果表明本发明检测的插入/缺失多态性位点能够作为滩羊公羊体长性状(P<0.05)、胸深性状(P<0.05)的分子标记，有利于快速建立体尺性状优良的滩羊种群，加快良种选育速度。
附图说明
图1为引物对P1扩增滩羊CHCHD7基因的产物琼脂糖凝胶电泳结果；M表示Marker；A表示异源双链条带。
图2为绵羊CHCHD7基因PCR扩增产物测序图，其中：黑色方框标出的部分表示8-bp插入序列：NC_040260.1:g36219994_3622000delGTTACAAG。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述，但本发明不仅限于这些实例，在为脱离本发明宗旨的前提下，所为任何改进均落在本发明的保护范围之内。
本发明利用PCR方法对绵羊CHCHD7基因第9906-9913位点(参考序列：NC_040260.1)突变可能产生的插入/缺失多态性进行检测，并将其与绵羊相关体尺性状进行关联分析，验证其是否可以作为绵羊分子育种中辅助选择的分子标记。
1.实验药品与试剂
1.1生化试剂与生物学试剂：①Taq DNA聚合酶(购自Fermantas即MBI公司)；②；蛋白酶K(购自华美生物工程公司)③Marker I(购自天根生化科技(北京)有限公司)。
1.2普通试剂：普通试剂从华美生物工程公司购买，为进口分装产品：柠檬酸、柠檬酸钠、葡萄糖、Tris、EDTA、NaCl、NaOH、KCl、Na2HPO4、KH2PO4、Tris饱和酚、氯仿、异戊醇、无水乙醇、醋酸钠、十二烷基磺酸钠(SDS)、溴化乙锭(EB)、溴酚蓝、二甲基苯氰FF、乙酸、蔗糖、硼酸、琼脂糖等。
1.3溶液与缓冲液：所有溶液与缓冲液均采用去离子超纯水配制。高压灭菌条件为15bf/in(1.034×105Pa)、25min。试剂配制方法均参考Sambrook等编著的《分子克隆实验指南》。
1)提取组织样DNA所用溶液：
除了基因组DNA提取时的公用溶液外，还配制以下试剂：①2mol/L NaCl：11.688g溶于水，定容至100mL，高压灭菌。②组织DNA提取液(100mL)：l mol/L Tris-HCl(pH 8.0)lmL，0.5mol/L EDTA(pH 8.0)20mL，2mol/L NaCl 5mL，定容至100mL。
2)琼脂糖凝胶电泳分析所用溶液
①0.5×TBE缓冲液：取10×TBE 50mL定容至1000mL。②上样缓冲液：含0.25％溴酚蓝以及0.25％二甲苯青FF，溶剂为40.0％(w/v)蔗糖水溶液。
2.设计绵羊CHCHD7基因indel引物
在NCBI上检索绵羊HIAT1基因的序列(NC_040260.1)，并利用Primer5.0设计能够扩增CHCHD7基因多个候选indel位点DNA片段的引物，其中能够扩增绵羊CHCHD7基因3’侧翼区第9906-9913位区域indel位点的PCR引物对为P1(引物设计时间为:2019年6月30日)。引物序列见表1：
表1 绵羊CHCHD7基因候选indel位点扩增引物表
参见图2，上述引物对P1对绵羊基因组扩增，能够扩增包含绵羊CHCHD7基因(NC_040260.1:g36219994_3622000delGTTACAAG)的片段。理论上，当9906与9913位之间的GTTACAAG缺失时，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测之后是148bp大小的带纹；当9906与9913位之间的GTTACAAG存在(插入)时，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测之后是156bp大小的一条带纹。当9906与9913位之间的GTTACAAG在一个等位基因上出现插入，在另一个等位基因上出现缺失时，PCR产物经琼脂糖凝胶电泳检测之后是156bp+148bp两条带纹以及一条异源双链条带。为此，根据理论分析结果，引物对P1所扩增的对应插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型(II)表现为156bp一条带纹，插入/缺失基因型(ID)表现为156bp和148bp以及异源双链条带共三条带纹，缺失/缺失基因型(DD)表现为148bp一条带纹。
3.以引物对P1 PCR扩增待测绵羊CHCHD7基因片段
3.1绵羊耳组织样品的采集
实验所用的动物共计458个样本，具体信息见表2。体尺性状数据由保种场或养殖场工作人员测量，采样方式采取个体耳组织样品，这些样品为70％乙醇保存，冰盒低温带回实验室后置于-80℃冻存。
表2 采样信息表
3.2组织样品基因组DNA的提取与分离
参考Sambrook等编著的《分子克隆实验指南》(2002)和参考以下文献：蓝贤勇.山羊重要功能基因遗传变异及其与经济性状的关系[D.]西北农林科技大学博士学位论文，2007，陕西杨凌。
3.3琼脂糖凝胶电泳检测DNA
参考Sambrook等编著的《分子克隆实验指南》(2002)。
3.4DNA的纯化
参考Sambrook等编著的《分子克隆实验指南》(2002)。
3.5分光光度法检测DNA
用紫外光光度计测定DNA样品在260nm、280nm处的OD值。计算DNA含量和OD260/OD280的比值。如OD260/OD280比值小于1.6，说明样品中含有较多的蛋白质或酚，则应进行纯化；若比值大于1.8，则应该考虑去除RNA纯化。
DNA浓度(ng/μL)＝50×OD260值×稀释倍数。
DNA检测完毕后，取出一定的量稀释至50ng/μL，存于-20℃备用，其余的存放于-80℃。
3.6PCR扩增
PCR反应体系采用混合加样法，即根据每一个反应体系所需的各种组分的数量和1次反应所需的PCR反应的个数，算出各种反应组分的总量，加入到1个1.5mL离心管中，充分混匀后瞬时离心，再分装到每个0.2mL Eppendorf PCR管中，然后加入模板DNA，再瞬时离心后进行PCR扩增；PCR反应体系包括2×Taq PCR SuperMix(包括Taq DNA聚合酶、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×)6.5μL；上游引物0.5μL；下游引物0.5μL(上下游引物浓度为10pmol/μL)；基因组DNA(浓度为50ng/μL绵羊基因组DNA)0.6μL；去离子水4.9μL；共13μL体积的PCR扩增体系。
3.7PCR反应的程序
引物对P1 PCR扩增反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸12s，18个循环，每循环后退火温度减1℃；50℃退火30s，72℃延伸12s，25个循环；72℃延伸10min。
4.扩增PCR产物后琼脂糖凝胶电泳检测分析
琼脂糖凝胶电泳检测分3步：1)制作3.5％的琼脂糖凝胶，使用核酸染料染色，点样4.5μL，点样后120V电压电泳1.0-1.2h；2)待分子量不同的DNA片段分离清晰时，在BIO-RADGel Doc 2000凝胶成像系统成像；3)根据琼脂糖凝胶电泳结果分析indel多态性；
用BIO-RAD Gel Doc 2000凝胶成像系统照相分析，判断indel的多态性(参见图1)：
对于绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位存在的8bp插入/缺失多态性(8bp-indel)，II基因型表现为156bp一条带纹，ID基因型表现为156bp+148bp以及异源双链条带共三条带纹，无DD基因型。分析结果经测序进行了验证。
5.绵羊CHCHD7基因indel位点的频率统计分析
1)基因和基因型频率
基因型频率是指一个群体中某一性状的某种基因型个体数占总个体数的比率。PYY＝NYY/N，其中PYY代表某一位点的YY基因型频率；NYY表示群体中具有YY基因型的个体数；N为检测群体的总数量。
基因频率是指一个群体中某一基因数对其等位基因总数的相对比率。计算的公式可以写成：PY＝(2NYY+NYa1+NYa2+NYa3+NYa4+……+NYan)/2N
式中，PY表示等位基因Y频率，NYY表示群体中具有YY基因型的个体数量，NYai表示群体中具有Yai基因型个体数量，a1－an为等位基因Y的n个互不相同的复等位基因。
CHCHD7基因8-bp插入/缺失多态性位点中的基因型频率及等位基因频率如表3所示。
表3.绵羊CHCHD7基因第9906-9913位indel基因频率分布表
6.绵羊CHCHD7基因indel位点基因效应的关联分析
基因型数据：PCR扩增后琼脂糖凝胶电泳识别的基因型；
生产数据：滩羊的体尺性状(体重(kg)、体长(cm)、体高(cm)、胸宽(cm)、胸深(cm)、胸围(cm)、管围(cm)、十字部高(cm)共8个性状)。
关联分析模型：利用SPSS(24.0)软件来分析品种，不同因素与体尺性状相关性。首先要对所得数据描述性的统计分析，来确定是不是存在离群值。然后根据数据的特性，利用方差分析、多元线性模型或者t分析进而来分析基因型的效应。在数据处理的过程中，考虑到个体的效应，基因之间的互作以及基因型的效应，采用固定的模型来进行相关分析。此外，根据实际条件来进行取舍，完整模型如下所示：Y＝μ+G+E，其中，Y：个体表型记录；u：总体均值；G：标记基因型效应；E：随机误差。
由表4可以看出，在对458只滩羊的体尺性状研究中，CHCHD7基因8bp indel多态性对体长和胸深有显著影响(P<0.05)，II基因型个体性状优于ID基因型个体。因此，绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位8-bp插入/缺失多态性位点可作为滩羊体长和胸深性状的DNA分子标记。
表4 绵羊CHCHD7基因P1-8bp indel与滩羊体尺性状关联分析(Mean±SE)
注：平均值肩上字母不同a和b表示差异显著(P<0.05)
结果表明：绵羊CHCHD7基因8bp-indel位点的不同基因型，在滩羊中对体长和胸深都具有显著关联。
总之，本发明利用PCR扩增方法检测绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位8-bp插入/缺失多态性位点，并将其与滩羊的生长性状(体重、体高、体长、胸围、胸深、胸宽、管围、十字部高共8个性状)进行关联分析，发现其可以作为滩羊分子育种中辅助选择的分子标记，从而加快良种选育速度。本发明所建立的绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位8-bp插入/缺失多态性位点的检测方法，为利用indel实现绵羊体长和胸深性状的标记辅助选择(MAS)应用提供理论和实践依据。
以上内容仅仅是对本发明构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
以包含CHCHD7基因的待测绵羊全基因组DNA为模板，利用PCR扩增包含绵羊CHCHD7基因3’侧翼区插入/缺失多态性位点的片段，对PCR扩增产物进行电泳，根据电泳结果鉴定所述插入/缺失多态性位点的基因型；
所述PCR采用的引物对(P1)为：
上游引物：5'-TGGCCTTGACAGACACATCC-3'；
下游引物：5'-CCTGCAGAGCTTCCCTTTCT-3'。
2.根据权利要求1所述的一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法，其特征在于：所述插入/缺失多态性位点选自绵羊CHCHD7基因NC_040260.1:g36219994_3622000位8-bp插入/缺失多态性位点。
3.根据权利要求2所述的一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用，其特征在于：根据电泳结果，所述插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型表现为156bp一条带纹，插入/缺失基因型表现为156bp和148bp以及异源双链条带共三条带纹，无缺失/缺失基因型。
4.根据权利要求1所述的一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法，其特征在于：所述PCR采用的反应程序为：95℃预变性5min；94℃变性30s，68℃退火30s，72℃延伸20s，18个循环，每循环后退火温度减1℃；50℃退火30s，72℃延伸12s，30个循环；72℃延伸10min。
5.根据权利要求1所述的一种绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法，其特征在于：所述电泳采用质量浓度为3.5％的琼脂糖凝胶。
6.根据权利要求1-5任意一项所述的绵羊CHCHD7基因插入/缺失多态性的检测方法在绵羊分子标记辅助选择育种中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述插入/缺失多态性位点的插入/插入基因型可以作为提高滩羊公羊体长和胸深性状的DNA标记。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述绵羊选自滩羊。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010325230.0A CN111411159A (zh) | 2020-04-23 | 2020-04-23 | 一种绵羊chchd7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010325230.0A CN111411159A (zh) | 2020-04-23 | 2020-04-23 | 一种绵羊chchd7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111411159A true CN111411159A (zh) | 2020-07-14 |
Family
ID=71489944
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010325230.0A Pending CN111411159A (zh) | 2020-04-23 | 2020-04-23 | 一种绵羊chchd7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111411159A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011028134A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Livestock Improvement Corporation Limited | Biological markers and uses therefor |
| CN107164482A (zh) * | 2017-06-05 | 2017-09-15 | 西北农林科技大学 | 一种山羊csn1s1基因插入/缺失的检测方法及其应用 |
| CN109880890A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-06-14 | 西北农林科技大学 | 一种山羊hiat1基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 |
-
2020
- 2020-04-23 CN CN202010325230.0A patent/CN111411159A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2011028134A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Livestock Improvement Corporation Limited | Biological markers and uses therefor |
| CN107164482A (zh) * | 2017-06-05 | 2017-09-15 | 西北农林科技大学 | 一种山羊csn1s1基因插入/缺失的检测方法及其应用 |
| CN109880890A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-06-14 | 西北农林科技大学 | 一种山羊hiat1基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| HONGWEI XU等: "rs593501397" * |
| HUI WU等: "Insertion/deletion (InDel) variations in sheep PLAG1 gene locating in growth-related major QTL are associated with adult body weight and morphometric traits" * |
| 魏振宇: "山羊bHLH和PLAG基因家族分析及其与生长相关遗传标记挖掘" * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN109880890B (zh) | 一种山羊hiat1基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 | |
| CN110468218B (zh) | 一种山羊igf2bp1基因插入/缺失标记的检测方法 | |
| CN109957614B (zh) | 一种山羊cmtm2基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 | |
| CN107164482B (zh) | 一种山羊csn1s1基因插入/缺失的检测方法及其应用 | |
| CN110468185B (zh) | 一种山羊dnmt3b基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 | |
| CN108441566B (zh) | 一种山羊atbf1基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 | |
| CN109182539B (zh) | 一种黄牛igf1r基因插入/缺失的检测方法及其应用 | |
| CN110607373B (zh) | 一种山羊dnah1基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 | |
| CN111088369B (zh) | 一种绵羊rora基因插入/缺失多态性的检测方法、引物对和应用 | |
| CN111154892A (zh) | 绵羊bmpr1b基因插入/缺失多态性检测用引物对、试剂盒、方法和应用 | |
| CN112795668B (zh) | 一种山羊cfap43基因插入/缺失标记在性状早期选择中的应用 | |
| CN112941202B (zh) | 一种牛sept7基因插入/缺失突变的检测方法及其应用 | |
| CN112553345B (zh) | 一种绵羊prnp基因插入/缺失在繁殖性状早期选择方面中的应用 | |
| CN111118179B (zh) | 一种检测鲁西黑公羊胸深性状的dna检测方法及其应用 | |
| CN110904247B (zh) | 一种山羊Sox9基因InDel标记的检测方法及其应用 | |
| CN111088373B (zh) | 绵羊prl基因插入/缺失多态性的检测引物对、试剂盒、方法和应用 | |
| CN111411159A (zh) | 一种绵羊chchd7基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 | |
| CN111154895B (zh) | 绵羊ghr基因插入/缺失多态性的检测引物对、试剂盒、方法和应用 | |
| CN112609007B (zh) | 一种绵羊kdm3b基因插入/缺失作为繁殖性状早期选择的应用及方法 | |
| CN112852974B (zh) | 一种绵羊ahr基因插入/缺失作为繁殖性状早期选择的应用方法 | |
| CN113943821B (zh) | Fgf7基因与山羊生长性状关联的插入缺失标记及应用 | |
| CN111733261B (zh) | 一种山羊AKAP12基因InDel标记的检测方法及其应用 | |
| CN112980935B (zh) | 一种山羊prnt基因单核苷酸多态性标记在性状早期选择中的应用 | |
| CN117305422A (zh) | 一种绵羊col27a1基因插入/缺失标记的繁殖性状早期选择应用 | |
| CN117551774A (zh) | 一种绵羊mast4基因插入/缺失多态性的检测方法及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200714 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |