CN111407778A - 一种富含血小板血浆的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种富含血小板血浆的制备方法，包括如下步骤：采集血样并加入抗凝剂，初步离心并收集上层不含血细胞的液体，以在于初步离心力4～7倍的离心力对液体进行再次离心，吸去上层血浆直到留下的底部液体为血样体积的4％～5％制得富含血小板血浆。本发明制备的PRP浓度是全血中血小板浓度的4‑5倍左右、不含红细胞、重悬均匀也无结块现象，计算收率在77％以上。

Description

一种富含血小板血浆的制备方法
技术领域
本发明涉及医药领域，尤其是涉及一种富含血小板血浆的制备方法。
背景技术
富血小板血浆(PRP)是全血经过离心分离得到的血小板浓缩物，其制备原理是利用血液中各种成分沉降速度不同，通过离心将血液分层。全血经低速离心可分为三层，上层是贫血小板血浆层(PPP)、中间为富血小板血浆层 (PRP)、下层为红细胞层，取中间层可得到高度浓缩的含血小板血浆。一般认为，人体全血中血小板浓度为1～3×105/ml，PRP中的血小板浓度应达到全血血小板浓度的4倍以上，含有的生长因子浓度也应在3倍以上。现有的 PRP制备方法分为一次离心法和二次离心法。公认的一次离心法是Anitua 法，是将10～20ml全血加入5ml含抗凝剂的离心管中，以160g离心6分钟，上层是PPP，下层是红细胞，两层交界处可见一很薄的浅黄色层，即PRP 层；弃去上层(PPP)1ml，吸取剩余上层血浆至下层(红细胞层)1～2mm，得到PRP。用Anitua一次离心法每次能从5ml全血中获取约1.2mlPRP。公认的二次离心法有Landesberg法、Petrungaro法和Aghaloo法，三者的区别是离心力和离心时间的不同。如Landesberg法第一次200g离心10分钟，吸管吸取全部上清液(PPP+PRP)至交界面下3mm，移至另一离心管，平衡后第二次200g离心10分钟，吸取约3/4上清液(PPP)废弃，剩余摇匀即为PRP； Petrungaro法第一次1500g离心6分钟，第二次1000g离心6分钟；Aghaloo法第一次215g离心10分钟，第二次863g离心10分钟。上述三种二次离心法的血小板数与血小板回收率比较可知，Aghaloo法获得的血小板数最多，回收率最高。
目前虽然能制备出浓度达标的PRP，但其技术尚未完全成熟。无论一次离心法还是二次离心法都存在诸多缺点，极大地限制其在实验室和临床的应用。主要表现在：1、在实际操作中，会出现PRP黏连结块的现象，难以垂悬均匀；2、PRP收率不高，一般在55％左右。因此，现有的PRP制备方法仍有待改进。
发明内容
有鉴于此，针对上面常用的分离方法存在的结块和收率低的问题，本发明目的在于提供一种我们提出高收率的富含血小板血浆的制备方法。
本发明的目的是采用如下技术方案实现：
一种富含血小板血浆的制备方法，包括如下步骤：
采集血样并加入抗凝剂，初步离心并收集上层不含血细胞的液体，以在于初步离心力4～7倍的离心力对液体进行再次离心，吸去上层血浆直到留下的底部液体为血样体积的4％～5％制得富含血小板血浆。
可选的，所述抗凝剂选自乙二胺四乙酸或其盐、枸橼酸或其盐、枸橼酸葡萄糖溶液、乙二胺四乙酸或其盐中的至少一种。
可选的，所述抗凝剂为枸橼酸，配制体积浓度为0.109mol/L～ 0.129mol/L，所述抗凝剂与血样的体积比为1：9。
可选的，所述初步离心为200g、8min，所述再次离心为1000g、 10min。
可选的，所述抗凝剂为干粉直接涂在抗凝管内壁或配制成3.2～3.8％浓度的溶液涂在抗凝管内壁待干燥后使用。
可选的，所述采集血样使用离心管或采血袋。
可选的，所述富含血小板血浆中包含1～2.5×109/ml浓度的血小板。
可选的，所述抗凝剂通过富氢水调配而成。
可选的，所述富氢水为纯净水中加入锌粒反应而成。
可选的，所述富氢水为矿泉水电解而成。
本发明提供的富含血小板血浆的制备方法制备的PRP浓度是全血中血小板浓度的4-5倍左右，达到使用要求，并且不含红细胞，重悬均匀也无结块现象，计算收率在77％以上。
具体实施方式
应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
一种富含血小板血浆的制备方法，采集血样并加入抗凝剂，其中的抗凝剂可以选自乙二胺四乙酸或其盐、枸橼酸或其盐、枸橼酸葡萄糖溶液、乙二胺四乙酸或其盐中，在本实施例中抗凝剂选用枸橼酸，配制体积浓度为 0.109mol/L～0.129mol/L，所述抗凝剂与血样的体积比为1：9；初步离心并收集上层不含血细胞的液体，以在于初步离心力4～7倍的离心力对液体进行再次离心，在本实施例中，采集血样(带抗凝剂)约40ml-50ml，离心 200g，8min；离心结束后分层，上层为血浆，下层为红细胞，收集上层血浆并计数，可以收集约80％的血小板，注意在收集上层血浆时不要吸到血细胞；收集到的血浆再次离心1000g，10min；离心结束后，吸掉上层血浆直到留下的底部液体为血样体积的4％～5％制得富含血小板血浆，血小板的浓度为1～2.5×109/ml，在实施例中，留管底上2ml左右，重悬均匀并计数，PRP浓度是全血中血小板浓度的4-5倍左右，达到使用要求，并且不含红细胞，重悬均匀也无结块现象。在本实施例中抗凝剂是直接加入采集血样的离心管或采血袋中，在其它实施例中，抗凝剂为干粉直接涂在抗凝管内壁或配制成3.2～3.8％浓度的溶液涂在抗凝管内壁待干燥后使用。本发明制备的 PRP浓度是全血中血小板浓度的4-5倍左右，达到使用要求，并且不含红细胞，重悬均匀也无结块现象，计算收率在77％以上。
发明人在实验中发现当使用富氢水调配抗凝剂能保证更好地避免PRP黏连结块的现象，保证其垂悬的均匀性。其中的富氢水为纯净水中加入锌粒反应而成或矿泉水电解而成。
上面对本发明的实施例进行了描述，但是本发明并不局限于上述的具体实施方式，上述的具体实施方式仅仅是示意性的，而不是限制性的，本领域的普通技术人员在本发明的启示下，在不脱离本发明宗旨和权利要求所保护的范围情况下，还可做出很多形式，这些均属于本发明的保护之内。

Claims (10)

1.一种富含血小板血浆的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
采集血样并加入抗凝剂，初步离心并收集上层不含血细胞的液体，以在于初步离心力4～7倍的离心力对液体进行再次离心，吸去上层血浆直到留下的底部液体为血样体积的4％～5％制得富含血小板血浆。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述抗凝剂选自乙二胺四乙酸或其盐、枸橼酸或其盐、枸橼酸葡萄糖溶液、乙二胺四乙酸或其盐中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于：所述抗凝剂为枸橼酸，配制体积浓度为0.109mol/L～0.129mol/L，所述抗凝剂与血样的体积比为1：9。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述初步离心为200g、8min，所述再次离心为1000g、10min。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述抗凝剂为干粉直接涂在抗凝管内壁或配制成3.2～3.8％浓度的溶液涂在抗凝管内壁待干燥后使用。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述采集血样使用离心管或采血袋。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述富含血小板血浆中包含1～2.5×109/ml浓度的血小板。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于：所述抗凝剂通过富氢水调配而成。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述富氢水为纯净水中加入锌粒反应而成。
10.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：所述富氢水为矿泉水电解而成。
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