CN111394446A - 一种用于检测苯丙酮尿症相关致病基因的试剂盒及其专用捕获探针组 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种用于检测苯丙酮尿症相关致病基因的试剂盒及其专用捕获探针组。本发明提供的捕获探针由序列表中序列1至序列108所示的探针组成。本发明的试剂盒能同时检测PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR这6个苯丙酮尿症的致病基因，对于多种点突变类型的苯丙酮尿症均可检测，且可检测PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR基因的全长，有利于新的致病突变的发现，为苯丙酮尿症的遗传学基础提供新的发现手段。
Description
技术领域
本发明属于基因工程、分子遗传学及基因检测领域，具体涉及一种用于检测苯丙酮尿症相关致病基因的试剂盒及其专用捕获探针组。
背景技术
苯丙酮尿症(PKU)是一种常见的氨基酸代谢病，是由于苯丙氨酸(PA)代谢途径中的酶缺陷，使得苯丙氨酸不能转变成为酪氨酸，导致苯丙氨酸及其酮酸蓄积，并从尿中大量排出。本病在遗传性氨基酸代谢缺陷疾病中比较常见，其遗传方式为常染色体隐性遗传。临床表现不均一，主要临床特征为智力低下、精神神经症状、湿疹、皮肤抓痕征及色素脱失和鼠气味等、脑电图异常。如果能得到早期诊断和早期治疗，则前述临床表现可不发生，智力正常，脑电图异常也可得到恢复。研究表明苯丙酮尿症的主要致病基因有PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR。PKU分为两种类型：经典的PKU和BH4缺乏性PKU，其中经典PKU占99％，是由于染色体基因突变导致肝脏中PAH缺陷而引起的苯丙氨酸代谢障碍所致。BH4缺乏性PKU是四氢生物蝶呤合成或代谢途径中某种酶的先天性缺陷导致一些芳香族氨基酸(苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸及精氨酸)代谢障碍，影响脑内神经递质合成，从而导致严重的神经系统损害症状体征和智能障碍。包括较常见的6-丙酮酰四氢蝶呤合成酶缺乏症(PTPS)、二氢蝶啶还原酶缺乏症(DHPR)、尿苷三磷酸环水解酶缺乏症(GTPCH)、蝶呤-4α-二甲醇氨脱水酶缺乏症(PCD)及墨蝶呤还原酶缺乏症(SR)，分别由PTS、QDPR、GCH1、PCBD1及SPR基因突变致病。
PKU发病率有种族和地区差异，白人发病率较高，黑人和黄种人较低。发病率在欧洲约为1/10000，德国约为1/7000，爱尔兰约为1/4400，日本约为1/120000，我国的发病率约为1/11188，其中北方地区发病高于南方，并且西北地区发病率明显高于国内平均水平，这可能与西北地区独特的地理位置构成有关。而且当地的PKU筛查覆盖率和治疗率均落后于发达城市，大部分患儿得不到及时的治疗，严重影响了人口的素质，增加了婴儿的死亡率，而且给家庭和社会带来了巨大的损失。因此PKU的早期诊断、早期治疗，有效预防患儿的出生，对于控制PKU发生和发展显得尤为重要。
目前苯丙酮尿症常规的临床诊断方法主要有血苯丙氨酸测定、尿液蝶呤谱分析、血红细胞二氢生物喋啶还原酶活性测定、头颅核磁共振检查等，这些传统的方法不仅不能对患者进行早期诊断，而且对于明确鉴别杂合子和正常个体有一定的困难。由于苯丙酮尿症的致病基因都在肝脏和肾脏中表达，基因诊断成为早期诊断的最有效手段，市场上已经有的检测方法有：单连多态性PCR检测、等位基因特异性扩增、短串联重复序列及高压液相色谱定量等，这也为PKU的早期诊断提供检验科学依据和基础。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种用于捕获苯丙酮尿症相关基因的探针组。
本发明提供的用于捕获苯丙酮尿症相关基因的探针组由序列表中序列1至序列108所示的探针组成。
上述探针组中，所述每条探针均标记生物素，具体的，所述每条探针的5’端均标记生物素。
本发明的探针组包含能同时特异性捕获6个致病基因全长的探针，所述致病基因为PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR。其中，捕获PAH基因的探针组包含31个寡核苷酸探针，碱基序列如序列1-序列31所示；捕获PTS基因的探针组包含10个寡核苷酸探针，碱基序列如序列32-序列41所示；捕获GCH1基因的探针组包含28个寡核苷酸探针，碱基序列如序列42-序列69所示；捕获QDPR基因的探针组包含20个寡核苷酸探针，碱基序列如序列70-序列89所示；捕获PCBD1基因的探针组包含11个寡核苷酸探针，碱基序列如序列90-序列100所示。捕获SPR基因的探针组包含8个寡核苷酸探针，碱基序列如序列101-序列108所示。
本发明的另一个目的是提供用于捕获苯丙酮尿症相关基因的试剂盒。
本发明提供的用于捕获苯丙酮尿症相关基因的试剂盒包括组分1)；所述组分1)为上述探针组，具体的，所述组分1)为包含上述探针组的捕获探针溶液；所述捕获探针溶液为上述探针组与水混匀得到的溶液。该捕获探针溶液中的探针总浓度为100ng/μl。
所述试剂盒还包括如下独立包装的各个组分：
2)富集缓冲液，其包括人cot-1DNA、鲑鱼精DNA、引物1和引物2；具体由30-45％(体积百分比)人cot-1DNA(具体可为30％、35％、40％、45％)、5-25％(体积百分比)鲑鱼精DNA(具体可为5％、10％、15％、20％、25％)、0.5nmol/μl引物1、0.5nmol/μl引物2和水组成；所述引物1的核苷酸序列为序列109；所述引物2的核苷酸序列为序列110。
3)杂交缓冲液，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl、柠檬酸钠、BSA和Tween20；具体由溶剂和溶质组成，溶剂为100mM Tris-HCl(pH 7.6)，溶质及各溶质的浓度分别为1.0-1.5M NaCl(具体可为1M、1.25M、1.5M)、0.1-0.3M柠檬酸钠(具体可为0.1M、0.2M、0.3M)、0.08-0.12g/100mL BSA(具体可为0.08、0.1、0.12)和5-9％(体积百分比)Tween20(具体可为5％、6％、7％、8％、9％)。
4)结合缓冲液，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl和EDTA；具体由溶剂和溶质组成，溶剂为10mM Tris-HCl(pH 7.5)，溶质及其浓度分别为1.0-1.5M NaCl(具体可为1M、1.25M、1.5M)，1mM EDTA。
5)漂洗液1，包括SDS和柠檬酸三钠缓冲液；具体由溶剂和溶质组成，溶剂为1×SSC溶液，溶质为SDS，SDS在漂洗液1中的质量百分比浓度为0.1％(g/L)。
6)漂洗液2，包括SDS和10倍稀释的柠檬酸三钠缓冲液；具体由溶剂和溶质组成，溶剂为0.1×SSC溶液，溶质为SDS，SDS在漂洗液2中的质量百分比浓度为0.1％。
7)NaOH水溶液，具体为0.1-0.5M NaOH溶液(具体可为0.1M、0.3M、0.5M)。
8)Tris-HCl缓冲液，具体为浓度为1M、pH值为7.5的Tris-HCl缓冲液。
9)PCR反应液；所述PCR反应液包括引物3和引物4；具体由溶剂和溶质组成，溶剂为1倍浓度的Phusion缓冲液，溶质及其浓度分别为0.2mM dATP、0.2mM dTTP、0.2mM dCTP、0.2mM dGTP、2.5pmol引物3、2.5pmol引物4、0.05U/μl Hotstart Phusion酶、5％(体积百分比)DMSO；所述引物3的核苷酸序列为序列111；所述引物4的核苷酸序列为序列112；所述引物3和所述引物4的最后一位核苷酸为硫代修饰。
10)TE缓冲液，具体由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为Tris、EDTA和用于调节pH的HCl，Tris的浓度为10mM，EDTA的浓度为1mM，pH为8.0。
本发明还有一个目的是提供上述探针组或试剂盒的新用途。
本发明提供了上述探针组或试剂盒在制备捕获待测样本中苯丙酮尿症相关基因的产品中的应用。
本发明还提供了上述探针组或试剂盒在制备检测待测样本中苯丙酮尿症相关基因变异的产品中的应用。
本发明提供了上述探针组或试剂盒在制备检测或预测待测者是否患有苯丙酮尿症的产品中的应用。
上述试剂盒或应用中，所述苯丙酮尿症相关基因为PAH和/或PTS和/或GCH1和/或QDPR和/或PCBD1和/或SPR。
本发明的最后一个目的是提供一种检测待测样本中苯丙酮尿症相关基因变异的方法。
本发明提供的检测待测样本中苯丙酮尿症相关基因变异的方法包括如下步骤：
1)将待测者的基因组DNA进行片段化后，构建gDNA文库；
2)用上述探针组与所述gDNA文库杂交，得到杂交产物；
3)对所述杂交产物进行测序，根据测序结果分析苯丙酮尿症相关基因的变异情况。
上述方法中，所述苯丙酮尿症相关基因为PAH和/或PTS和/或GCH1和/或QDPR和/或PCBD1和/或SPR。
进一步的，所述1)包括如下步骤：将待测者的gDNA片段化至大小为150-250bp后，使用KAPA建库试剂盒进行全基因组文库的构建，得到gDNA文库。
所述2)包括如下步骤：将1μg gDNA文库、13μl上述富集缓冲液和5μl上述捕获探针溶液混匀，得到反应体系；将所述反应体系在如下反应条件下反应：95℃7min，65℃2min，得到反应产物；将23μl上述杂交缓冲液加入到所述反应产物中，65℃杂交22小时，得到杂交产物。
所述3)中，所述测序为高通量测序，所述高通量测序具体可为采用Illumina平台。
所述2)和所述3)之间还包括纯化所述杂交产物的步骤。
本发明的有益效果如下：
1、同时检测PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR这6个苯丙酮尿症的致病基因。
2、对于多种点突变类型的苯丙酮尿症均可检测。
3、检测PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR基因的全长，有利于新的致病突变的发现，为苯丙酮尿症的遗传学基础提供新的发现手段。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、仪器等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。下述实施例中，如无特殊说明，序列表中各核苷酸序列的第1位均为相应DNA的5′末端核苷酸，末位均为相应DNA的3′末端核苷酸。
实施例1、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒及其专用捕获探针的制备
一、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获探针的设计及制备
1、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获探针的设计
以Hg19参考基因组数据库中PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR基因的全长序列为目标序列，参考专利WO2013/003585中的方法：沿着各个序列依次堆叠过去设计捕获检测该基因的探针，该探针能结合该基因。本发明采用的每条探针序列长度均为78bp。具体序列如表1所示。
表1、探针序列
其中，捕获PAH基因的探针组包含31个寡核苷酸探针，碱基序列如序列1-序列31所示；
捕获PTS基因的探针组包含10个寡核苷酸探针，碱基序列如序列32-序列41所示；
捕获GCH1基因的探针组包含28个寡核苷酸探针，碱基序列如序列42-序列69所示；
捕获QDPR基因的探针组包含20个寡核苷酸探针，碱基序列如序列70-序列89所示；
捕获PCBD1基因的探针组包含11个寡核苷酸探针，碱基序列如序列90-序列100所示。
捕获SPR基因的探针组包含8个寡核苷酸探针，碱基序列如序列101-序列108所示。
2、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获探针的制备
利用PCR的方法扩增出大量的带有生物素标记的探针。具体方法如下：合成上述步骤1中设计的探针，然后将合成的探针等摩尔量均匀混合在总体积为1.2ml的dH2O中，取其中5μl利用通用PCR引物(5’端序列为GACTACATGGGACAT和3’端的序列为GGAACCTACGACGTA)，分三管进行PCR扩增，其中引物GACTACATGGGACAT为带有生物素标记的引物。
PCR扩增体系如下：DNA模板5μl；正向引物(25μM)2μl；反向引物(25μM)2μl；MgCl2(50mM)4μl；10x Platinum Taq聚合酶缓冲液(购自Life Technologies)5μl；dNTPs(每种10mM)4μl；Platinum Taq聚合酶(5U/μl，购自Life Technologies)1μl；H2O 27μl；总体积50μl。
PCR扩增条件如下：98℃，30s；(98℃，30s，60℃，25s，72℃，45s)35个循环；72℃，5min。
将PCR产物用MinElute PCR纯化试剂盒(购自Life Technologies)纯化后，取500ng用MyOne链酶亲和素磁珠(购自Invitrogen)将PCR产物结合下来。然后加入碱性NaOH将没有生物素的互补链变性、洗脱下来；再将整个磁珠用100℃的甲酰胺液体洗涤，使探针从磁珠上分离下来。用乙醇沉淀后即得到捕获探针组。该捕获探针组中的每条探针的5’端均标记生物素。
二、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒
本发明提供的苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒由以下试剂组成：捕获探针溶液、富集缓冲液、杂交缓冲液、结合缓冲液、漂洗液1、漂洗液2、NaOH溶液、Tris-HCl缓冲液(1M，pH 7.5)、PCR反应液、TE缓冲液。其中各溶液组成如下：
1、捕获探针溶液
捕获探针溶液是将步骤一获得的捕获探针组与水混匀得到的溶液。该溶液中探针的总浓度为100ng/μl。
2、富集缓冲液
富集缓冲液由35％(体积百分比)人cot-1DNA(Invitrogen货号：15279011)、15％(体积百分比)鲑鱼精DNA(Invitrogen货号：15634017)、0.5nmol/μl引物1、0.5nmol/μl引物2和水组成；
引物1：AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCT(序列109)；
引物2：CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGGTCTCGGCATTCCTGCTGAACCGC(序列110)。
3、杂交缓冲液
杂交缓冲液由溶剂和溶质组成，溶剂为100mM Tris-HCl(pH 7.6)，溶质及各溶质的浓度分别为1.25M NaCl、0.125M柠檬酸钠、0.1g/100mL BSA和7％(体积百分比)Tween20。其中，100mM Tris-HCl(pH 7.6)由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)，Tris的浓度为100mM，HCl用于调节pH为7.6。
4、结合缓冲液
结合缓冲液由溶剂和溶质组成，溶剂为10mM Tris-HCl(pH 7.5)，溶质及其浓度分别为1M NaCl，1mM EDTA。其中，10mM Tris-HCl(pH 7.5)由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)，Tris的浓度为10mM，HCl用于调节pH为7.5。
5、漂洗液1
漂洗液1由溶剂和溶质组成，溶剂为1×SSC溶液，溶质为SDS，SDS在漂洗液1中的质量百分比浓度为0.1％。其中，1×SSC溶液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质及其浓度分别为NaCl 175g/L和柠檬酸三钠88g/L，pH为7.4。
6、漂洗液2
漂洗液2由溶剂和溶质组成，溶剂为0.1×SSC溶液，溶质为SDS，SDS在漂洗液2中的质量百分比浓度为0.1％。其中，0.1×SSC溶液为将1×SSC溶液稀释10倍得到的溶液。
7、0.1M NaOH溶液
0.1M NaOH溶液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质及其浓度为0.1M NaOH。
8、Tris-HCl缓冲液(1M，pH7.5)
Tris-HCl缓冲液(1M，pH7.5)由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl，Tris的浓度为1M，pH为7.5。
9、PCR反应液
PCR反应液由溶剂和溶质组成，溶剂为1倍浓度的Phusion缓冲液(New EnglandBiolabs)，溶质及其浓度分别为0.2mM dATP、0.2mM dTTP、0.2mM dCTP、0.2mM dGTP、2.5pmol引物3、2.5pmol引物4、0.05U/μl Hotstart Phusion酶(New England Biolabs)、5％(体积比)DMSO。其中，1倍浓度的Phusion缓冲液由溶剂和溶质组成，溶剂为50mM Tris-HCl(pH 8.8)，溶质及其浓度分别为4mM MgCl2，500mM KCl，0.8％(v/v)Nonidet P40。50mMTris-HCl(pH8.8)由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为三羟甲基氨基甲烷(Tris)和用于调节pH的HCl，Tris的浓度为50mM，pH为8.8。
其中，引物序列如下：引物3：AATGATACGGCGACCACCGA*G(序列111)；引物4：CAAGCAGAAGACGGCATACG*A(序列112)；*表示硫代修饰。
10、TE缓冲液
TE缓冲液由溶剂和溶质组成，溶剂为水，溶质为Tris、EDTA和用于调节pH的HCl，Tris的浓度为10mM，EDTA的浓度为1mM，pH为8.0。
上述试剂盒可以按照如下表2所列组分制备：
表2为试剂盒组成
三、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒的使用方法
利用步骤二的试剂盒检测待测患者苯丙酮尿症相关致病基因的方法具体如下：
1、全基因组文库制备
将待测者的gDNA片段化至大小为150-250bp后，使用KAPA建库试剂盒(货号为KK8504)按照说明书进行全基因组文库的构建，得到gDNA文库。
2、苯丙酮尿症相关致病基因探针组的捕获文库制备
使用步骤二的捕获试剂盒进行捕获，具体步骤如下：
1)取1μg步骤1的gDNA文库，向其中加入13μl富集缓冲液和5μl捕获探针溶液，将得到的反应体系置于PCR仪上，反应条件为95℃7min，65℃2min，反应结束得到反应产物。
2)将65℃预热的杂交缓冲液23μl加入到上述步骤1)得到的反应产物中，然后于PCR仪上65℃杂交22小时，得到富集体系混合物。
3)将MyOne C1链霉亲和素磁珠(Invitrogen)漩涡震荡使磁珠充分悬浮，取50μlMyOne C1链霉亲和素磁珠到新的1.5ml的离心管。
4)将步骤3)的装有50μl MyOne C1链霉亲和素磁珠的1.5ml离心管漩涡震荡至少5s，使磁珠充分悬浮，短暂离心后放入磁力架上保持静止一分钟(不要旋转离心管)，小心吸弃上清。
5)取下步骤4)的离心管，向其中加入50μl结合缓冲液，旋窝震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟，小心吸弃上清，重复三次。
6)取下步骤5)的离心管，向其中加入100μl的2倍浓度的结合缓冲液(即将步骤二中结合缓冲液的各溶质浓度加倍得到的溶液，即2倍浓度的结合缓冲液中各溶质浓度为步骤二中结合缓冲液相应溶质浓度的2倍)，旋窝震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟。
7)将步骤2)得到的富集体系混合物加入到步骤6)的离心管中，旋窝震荡至少5s，然后置于旋转仪上室温旋转1小时(60转/分钟)。
8)步骤7)完成后，利用漂洗液1室温清洗步骤7)的磁珠一次，15分钟，然后再用漂洗液2于65℃下清洗3次，每次15分钟。
9)步骤8)完成后，将磁珠用NaOH溶液室温下洗脱10分钟，然后将得到的洗脱液漩涡震荡至少5s，短暂离心后放入磁力架上静止一分钟，然后将上清液转移到含有70μlTris-HCl缓冲液(1M，pH 7.5)的干净离心管中，即得到DNA溶液。
10)采用Qiagen MinElute Column(Qiagen产品)对步骤9)得到的DNA溶液进行纯化，将得到DNA利用TE缓冲液溶解，得到纯化DNA溶液。
11)向30μl步骤10)得到的纯化DNA溶液中加入70μl PCR反应液进行PCR扩增，得到PCR产物；PCR反应条件为：98℃30s，1个循环；98℃25s，65℃30s，72℃30s，15个循环；72℃5min，1个循环。
12)利用Agencourt AMPure XP核酸纯化试剂盒(Beckman Coulter)纯化步骤11)的PCR产物，得到纯化产物。
3、上机测序
将步骤2的12)中得到的纯化产物在Illumina NextSeq 500测序仪上进行测序，所用测序引物为测序引物1和测序引物2，序列如下：测序引物1：AATGATACGGCGACCACCGA；测序引物2：CAAGCAGAAGACGGCATACGAGAT。
4、生信分析
高通量测序得到的原始图像数据文件经碱基识别分析转化为原始测序序列，称之为Raw Data，结果以FASTQ文件格式存储，其中包含测序序列的序列信息以及其对应的测序质量信息。
测序结果用GATK软件对SNP和InDel进行变异检测，用ANNOVAR软件同时关联多个数据库(如dbSNP，1000g，ESP6500，HGMD，OMIM等)对变异结果进行注释。变异过滤：在进行后续分析之前需对变异数据集进行必要的过滤。过滤标准如下：
第一步：留下致病性分析(pathogenic_analysis)中的致病性突变(pathogenic)位点。
第二步：筛选突变碱基测序次数大于5，突变频率大于等于30％以及1000g2015apr、ESP6500si、Inhouse、ExAC_ALL、ExAC_EAS五个正常人突变数据库中保留没有出现或小于5％的位点；去除数据集中的同义突变位点，另外有文献报道的突变位点留下。
6个待测者血清全基因样本的基本测序统计结果如下表3和表4所示。从表中可以看出：测序数据平均深度大于400*，平均覆盖20*比例也基本上在90％以上，说明本发明的捕获探针能够很好的覆盖到目的基因区域，可为后续分析提供一个准确度的保证。
表3、测序结果基本统计数据
表4、测序结果基本统计数据
实施例2、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒的应用
利用实施例1的苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒检测6例已确定为苯丙酮尿症携带者/患者样本的PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR基因改变情况，按照实施例1步骤三的方法进行。
测序结果如表3和表4所示。从测序结果中选取苯丙酮尿症携带者/患者样本对应的PAH、PTS、GCH1、QDPR、PCBD1、SPR基因的特定突变位点，如表5所示。与临床检测的结果一致。
表5、苯丙酮尿症相关致病基因的捕获试剂盒对6例苯丙酮尿症样本的检测结果
以上内容是结合具体的实施方式对本发明所作的进一步详细说明，不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干简单推演或替换，都应当视为属于本发明的保护范围。
序列表
<110> 北京迈基诺基因科技股份有限公司
<120> 一种用于检测苯丙酮尿症相关致病基因的试剂盒及其专用捕获探针组
<160> 112
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
gtgaaattgt ttaaactact aatgttttat tactaataca aataaaaatt tcacatttat 60
acagatttgc ttttcaat 78
<210> 2
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
gcctttagtc aacatctgct gcatcataaa tgtcctcaaa gtgtttccca aaacagactt 60
gataattaat tggaaaat 78
<210> 3
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
gtatttatga ttacaataaa acatacaaaa atgtttttat attaatataa tactaaagaa 60
gttcaatgct tgtaacta 78
<210> 4
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
agtaattgga atcatagtta actaaaatag aaaataaact tcataggtta cgatttatat 60
taagcccaat aattcaat 78
<210> 5
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
tctctgcaaa gcatatatga agcttgaatg aagcaggtcc caaattttaa ttaatcttga 60
tgaaatgcga cagattac 78
<210> 6
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
cccaaaagat ttaccattat gctcttgagt atgtactcat atcctgtcat ttcagattat 60
tttgacttat ttgttgtt 78
<210> 7
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 7
tcggactttt tctgatgaaa gaaatagttg gatctccatc aacagattca cagctgacag 60
accacattct gtccatgg 78
<210> 8
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 8
attctgtcca tggctttact ttattttctg gagggcactg caaaggattc caatttcacc 60
tacaaagaaa aacaccat 78
<210> 9
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 9
gcgatggtag ggaaagacag tcttcgatta ctgagaaacc gagtggcctc gtaaggtgta 60
aattacttac tgttaatg 78
<210> 10
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 10
gggtgtatgg gtcgtagcga actgagaagg gccgaggtat tgtggcagca aagttcctaa 60
gaccaaaacc acaggctt 78
<210> 11
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 11
tggctcacct ttgtcaccac ctcaccttac tttctccttg gcatcattaa aactctctgc 60
cacgtaatag aggggctg 78
<210> 12
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 12
agaagctttg gcttctctga taagcagtac tgtaggcccc aagtgaaaag ttattatcac 60
tgttaaatca ggatcagt 78
<210> 13
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 13
gcacaataat ggttttctgt acccaccact tttaaatcta tccttggttc ctgtgaaggt 60
catacctgta attcacca 78
<210> 14
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 14
agagcccaaa ctccacagta aaccagtaaa tctggaatgg aaagtcaatc tgagagcaca 60
ctctatgatg gttaattt 78
<210> 15
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 15
atagcactcc accatccacc cagggagaga agggacttac tgtggcgagc ttttcaatgt 60
attcatcagg tgcaccca 78
<210> 16
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 16
gaaattcagg tcacagacct ataactagaa ggctaaaaaa tccattcctt acctgggaaa 60
actgggcaaa gctgcgat 78
<210> 17
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 17
caaacctcat tcttgcagca ggaaaagatg gcgctcattg tgcctggcaa ctggtagctg 60
gaggacagta ctcacggt 78
<210> 18
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 18
agactcggaa ggccaggcca cccaagaaat cccgagagga aagcaggcca gccacaggtc 60
ggaggcggaa accagtgc 78
<210> 19
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 19
ctgcctcaat cctcccccaa ctttctgcag ggccattgac cctgatgtgg acttactctg 60
caggaactga gaaacgtc 78
<210> 20
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 20
ggaaaaatgt gattgtactc atagcaagca tgggttttat acaaggactt cagagtcttg 60
aacactgtgc cccatgtt 78
<210> 21
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 21
caagcaaggc agacttactg gcggtagttg taggcaatgt cagcaaactg cttccgtctt 60
gcacggtaca caggatct 78
<210> 22
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 22
tctcatccta cgggccatgg actcacaggg tggtcagcat ccagttccgc tccatagctg 60
agaatctgat tggcaaat 78
<210> 23
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 23
aatatgtata ttgctgttat tttatgaaga cagtgtggag ttacttatgt tgcaaaattc 60
ctctaattct tacctgtg 78
<210> 24
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 24
tcaagatctt gatgatgttt gtcagagcag gcaggctacg tttatccaaa tgggtgaaaa 60
attcatactc atctttct 78
<210> 25
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 25
aaaagaacat ggaagtttgc tacgacatta tccaagacaa acatgattgt agcactgacc 60
tcaaataagc gcaatact 78
<210> 26
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 26
cattttgatt gcagttgtct tcaatatagc ttgtttccta caggataaga tgcatttgtt 60
taaaacattt tccacagt 78
<210> 27
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 27
tggaggccca aattccccta actgagcagc tcaggctgcc gtggctcacc tgtccaaagt 60
cagagagttt cctgccca 78
<210> 28
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 28
tctctggctt tttagggcct caggtacagg caggtttgca aacagcacgt ggggctgaag 60
gttttaacct cgcactag 78
<210> 29
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 29
gtaacgcccc tcgtgggcgt tgtcctgacg caggaggcca gggcagcctg ccggatgctc 60
caggtcacct gcccagga 78
<210> 30
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 30
cttcgctgcc cgccctgggt aaagggaaga agccagggag cgacgggcca cccaagcccc 60
gtcgattaga caggttta 78
<210> 31
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 31
taagcctgcg accgtctggt ataacaatta tatgaataat ccgcccccct tacccccagc 60
tgaaacagtc aggattct 78
<210> 32
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 32
gtgccggccg agcaccgcag acagcgccgg gaagatgagc acggaaggtg gtggccgtcg 60
ctgccaggca caagtgtc 78
<210> 33
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 33
acttgtgtca tgctgacttt tttttttttt tttggtcagt aaatttctaa gtgatgaaga 60
aaacttgaaa ctgtttgg 78
<210> 34
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 34
ttggatgttg atctgttgaa agtcatgctg ttttttttgt attttgtttt ctttccatag 60
ttgtggtgac agtacatg 78
<210> 35
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 35
attcaccttt gtttattctt tagattgacc ctgctacggg aatggttatg aatctggctg 60
atctcaaaaa atatatgg 78
<210> 36
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 36
gttttgtctc taggaggcga ttatgcagcc ccttgatcat aagaatctgg atatggatgt 60
gccatacttt gcagatgt 78
<210> 37
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 37
tttttgtttt tttttcttat agcacgactg aaaatgtagc tgtttatatc tgggacaacc 60
tccagaaagt tcttcctg 78
<210> 38
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 38
ttataaagga gaatagctat tggggttagc attgcacaaa gcccagtttc tttctgtgtt 60
tgaaaaagat tttgatcc 78
<210> 39
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 39
aagattttga tccccttgga atattaagag gtcaacacgt gattgttgta cgtacacatt 60
gtgctctgga gtgcctat 78
<210> 40
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 40
acttgtaata tacatcctga aaatcattta gagagtcttt tatttataaa ttaaaaatca 60
cttcattttc acaaaatg 78
<210> 41
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 41
ttacctcatt ttagtattaa tttttacttg gtataatata catggttaaa atgcttatgt 60
gacttcgagt aggtgaat 78
<210> 42
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 42
aagaaacaac tttcacaaga acaaagttac aatagtttaa taatttaaat aggaccacct 60
tcaggaacat acatactc 78
<210> 43
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 43
gactagagta aaacagacaa agtcattact ttgcatttac taataagaca acagcctgtg 60
gatacattag acctttat 78
<210> 44
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 44
atgagttcat aaagataaat gtatagctga caatttcttt ggtcctcgaa gtcacacttg 60
tttttacttt aaaatgcc 78
<210> 45
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 45
aggctaatgt ttatactggg ctagatttaa aaaggtactc aagccaacca tcactgtact 60
taaactccag aaagaaaa 78
<210> 46
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 46
ctctgccatc ttgccccatc ataacccaaa tagcatcaaa gtggcagaga tgggactaaa 60
gttaaagcaa gcatcaaa 78
<210> 47
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 47
atactaaact tcatggaata actgtgtttg tgtttctgtg gaggagttgc ggttttgttt 60
gttttaattt ggcccacg 78
<210> 48
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 48
aggattaaaa tacctatacc atctatacgg agttacaatg aggacaagac ccacatagac 60
cacaaaggaa accgggac 78
<210> 49
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 49
aaacgttgga cacagctcat aatgtcttcc accgtcagtt cattctgtgc tcgttcaggt 60
gcgtggaagc tatggttc 78
<210> 50
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 50
aaatatctta taagattaaa aaaaagaaga agaagaaaca ttttgaggca tctacatgga 60
tcacacaaag gaaactca 78
<210> 51
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 51
taagtctcat aaaataatgg cttttttaaa aaggcaaaag tatctacact ctaaatgata 60
ttcttatcaa ggcacaga 78
<210> 52
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 52
acaccaggaa ctaattccct attcttgaat ttaaaaacaa tagaaggtag aaatgtgcct 60
ttttaactca cagtaaaa 78
<210> 53
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 53
ctaaaaatat atttttaaat gtcactggtg gtttaataaa catgaccaaa gtgaagtctg 60
ttgaacttga attcacag 78
<210> 54
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 54
ggaggaagaa aaaaaacagt atactgggca cagttccctc tcattcccaa tgctcctatg 60
cttatgaggc aaattact 78
<210> 55
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 55
ttatctggca gtggttttgt gcacgtactt acactattag cagttcactt taatattgcc 60
acaaaaaggt ggcaagaa 78
<210> 56
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 56
ttttaaatat aattagtgac aaggaataaa gttcacatct gtaacaattg aaaatggaat 60
gtacaaacaa gaccggac 78
<210> 57
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 57
aacaagaccg gacagacaga caatgctact ggcagtacga tcggcaacca acgcacacac 60
actgaatgaa gctcagct 78
<210> 58
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 58
cccaacattg tgctggtcac agttttgctg ttcattttct gtacacctcg cattaccata 60
cacatgtgtc tacaaaat 78
<210> 59
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 59
cttctagtgc accattatga cgttactaaa ggcagatgca gacttacgtt gcttcaacca 60
ctaccccgac tccagcag 78
<210> 60
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 60
aactgtggat gtgataagga gctcagtttg agagtctgac acaaacagct ggaagctttt 60
tctgtctcta gaacattt 78
<210> 61
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 61
ttttaaagct taccttgtag tcttctacta tagatttcta caatcctaga aaagaaagaa 60
ttgttttagt taatcaca 78
<210> 62
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 62
cagtcacact tacctcgcaa gtttgctgag gccaaggact tgcttgttag gaagataacc 60
aatatggacc ttcagaga 78
<210> 63
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 63
tataattatt ctaattgaaa aactttcact atgttttaaa ttgctgggaa acaacaaaga 60
gaaccttacc tttccaac 78
<210> 64
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 64
atcaccatct catcatgatc ttcatcaaat atagcatcgt ttaggacatc tgaaatcaga 60
ggcttgcttt agtaacat 78
<210> 65
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 65
cctggagccg gcgcgcgttt cctgcaagca ccgcccccgc cgcccgcacg ctctagcagc 60
ccgcgggcgc actgacct 78
<210> 66
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 66
tccagggcgt cttgagcagc ccttgccgct gggggttctc gcccagcgag ctcaggatgg 60
acgagtaggc ggctgcca 78
<210> 67
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 67
ccagccgtcc gcgggctgcg cgctcttggc ctcgggccgc gggggcttct ccgccggcct 60
gctgggcccg ggccgcgg 78
<210> 68
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 68
gccggtgccc gcacagggcc cttctccatg gacccgccgc agccgctgcc gttcgggaag 60
gaccccgggg cgcttcga 78
<210> 69
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 69
cggggcgctt cgaggtctgc ggctaaactc cgccggtggc cgcggacaat gggctgtggc 60
cggagtcacc tgaggaag 78
<210> 70
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 70
aatcaggcct gtgttcttgt gttgaaatat ttatttcagg atttaaatcc acccccttct 60
gagaacatca gattaaaa 78
<210> 71
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 71
cacgagtagt tatcttgcac acttaaccct aggccagagg acacggggca accacacagg 60
aaaaggatac caggacag 78
<210> 72
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 72
aggatgcgaa aactacgtct atgacataaa catgacattc aaaaataact cagcctttaa 60
aatgtcccca ataccaac 78
<210> 73
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 73
cacaaaagcg atccaacatg acaccgctat agcaggtgct atgcagagcc ctccctatgc 60
agttaacaca gatcaacg 78
<210> 74
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 74
ttacactgtc ctaggagagc aaatgcatat tatgtgagag aaaaatagga ctcattatct 60
cgtaccacaa acaggggt 78
<210> 75
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 75
tctggcaggc ccctcatagg cactgagatg aggcctaaaa atatgctggg gtgagttccg 60
tccttccttc tgtggtta 78
<210> 76
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 76
atggaaagtt ctggaacaga aaataaaagt tttttttata ttctcaaagc aaaaatctgg 60
gcacatgctg accttcac 78
<210> 77
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 77
ggcagagaat aggggctgga agctgctcag tcatggacat gtctgtaata ctcactcaac 60
taggaattct aagggtgt 78
<210> 78
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 78
agggtaaccc tgcaatggac acagataagc acgtcattca tgtcgctcct ttctaacaac 60
aggtgcccag tccccctt 78
<210> 79
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 79
gacaaacggt cacctgcagc agtggggcag aggtgggcag cagccaggga accccaagca 60
cttacgggag cacagcga 78
<210> 80
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 80
gagctggtga acagcaccct tggccatgcc gtacccgatc atacctggga aatggggaga 60
agatggctca gtgaccac 78
<210> 81
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 81
aagcaacccc actccacaga tagggaaata aaggcttacc aggagtccca tccagggcag 60
cctttgcgcc agccaagg 78
<210> 82
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 82
cgatgtccat atgctctgct tccacatcag gtcacagttc ttaaagagag ctgagtgaaa 60
aaaacatgtg ggctcagc 78
<210> 83
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 83
gcagaacaaa tgagtgactc aggaaaggac tcacacttgg atttggcatt gcccccggcc 60
catcctccag caacgcaa 78
<210> 84
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 84
ccttcaacac aagaacaaaa aaatgtataa actgtaaggt aagccaacac aggctagcat 60
ctttacggat actcagtt 78
<210> 85
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 85
catacagcca gtggtcacct ctccccaggg ttcccctcac aatgtttggg ggcctttttg 60
aaactacctg gtcagcct 78
<210> 86
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 86
attctccacc acatcaacgc tggcaaccca ctggaaggag aaaacagctt tggttaagag 60
gcagtgagtt gttattcc 78
<210> 87
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 87
cagcccgcag cattacccag ttgcgggccc gaaaagcctg cacgcatcga gaacccagag 60
cgcccctgcc gccgtaca 78
<210> 88
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 88
gccagcccgg ctcccgcagc tccgaatgcc tcgagccgga gcgccgcgcc ccgccccggc 60
cggccaaccc cgccaaga 78
<210> 89
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 89
cgctgccacg ctcggggcgc cccgccaccc ggagggactg taacttcggc caggccctgc 60
ccctgggacg gggacatc 78
<210> 90
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 90
ctagagcctg agaccaagtg atataatagt tttatttgag acataaaaac acatgtgttt 60
ctattacata gtgtgggg 78
<210> 91
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 91
tcctgggaaa tgaattaggg agcaagagac ggcctggcaa gaaaatcatt attgttgctg 60
ggaagttgca aagaaagg 78
<210> 92
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 92
gcagggaaaa ggtctaaatt cctggtgttg gtggggacac tggcacatcc cacagcaagg 60
actcagccct caacggcg 78
<210> 93
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 93
ctccctggac tcccagttca gtcacccctt cccccggaag aattcaaaga ggaagggcag 60
ggtctatgtc atggacac 78
<210> 94
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 94
gcacactcat gggtgctcag cgtgatgtgg acctgaaatg aaaccagaaa ttctgcttcc 60
actgacttca cttaagaa 78
<210> 95
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 95
agcacaacag aggcacacag catcactcac cttgttgtac acgttaaacc attcaggatg 60
gtggtccagt ttctcagc 78
<210> 96
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 96
aactctgtcc caccctggtg ccataccctg ttgaagtctt tgaaatgaaa ctgcttgaag 60
atggcatcac ggccttcc 78
<210> 97
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 97
cagcgctcag cctgtgtgct ttgccagcct agaagaggga aaaaaacaga ggcccaaggg 60
catttctctt tataggtc 78
<210> 98
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 98
cgatcgcggc cgcgcacccc tggactcacc atggcgcggg cggcagcagg tggccagcgg 60
agagggcagg cggcggcc 78
<210> 99
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 99
gcaggcggcg gccgggcgcg caggctgccg tcccggggcg gggccgcgct cgggccgccc 60
tccggtaatg attaacgt 78
<210> 100
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 100
tcagagccat cctccgtgct tgtttcaggg agctagggtg aagcatgagg gctccaaatg 60
cccgcttctg ggttggaa 78
<210> 101
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223>
<400> 101
cgcggccgca ccgcctcctg cctggtctcg ggtgccagcg ccgccggcgg agaacaggag 60
catggagggc gggctggg 78
<210> 102
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 102
gccccgctcc tggcctcgct gctgtcgccc ggctccgtgc ttgtccttag cgcccgcaac 60
gacgaggcac tgcgccag 78
<210> 103
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 103
cccaaggggc tgcagcgact gctgcttatc aacaacgcgg gtaagacccc ggggctggag 60
cggactcccc atgtgagc 78
<210> 104
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 104
acttccagcg tcctgaaggc cttcccggac agtcctggcc tcaacagaac cgtggttaac 60
atctcgtccc tctgtgcc 78
<210> 105
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 105
acataaaaca gggacctgaa accttctgtc cctgccttgg ccatgttccc tcatcgtctc 60
cttttcatcc tctaggtc 78
<210> 106
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 106
tgccctgccc tcaggcacag ccagctgtga gctcccaggt cattggcctt accagttgtc 60
aggagtctgt gctgtgca 78
<210> 107
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 107
ggacccatgt agattcgcag atggcctgga tgggaggaag ggcagacggt acatgtccca 60
gcccacatag atgcccct 78
<210> 108
<211> 78
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 108
cacgccaaag gcagatacaa ataaaataca gattgtcctt tcttcatgct tgctttctcc 60
tctgatacag ggcctatg 78
<210> 109
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 109
aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct 50
<210> 110
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 110
caagcagaag acggcatacg agatcggtct cggcattcct gctgaaccgc 50
<210> 111
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 111
aatgatacgg cgaccaccga g 21
<210> 112
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 112
caagcagaag acggcatacg a 21
Claims (10)
1.用于捕获苯丙酮尿症相关基因的探针组，由序列表中序列1至序列108所示的探针组成。
2.根据权利要求1所述的探针组，其特征在于：所述每条探针均标记生物素。
3.用于捕获苯丙酮尿症相关基因的试剂盒，其包括组分1)；
所述组分1)为权利要求1或2所述的探针组。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括如下独立包装的各个组分：
2)富集缓冲液，其包括人cot-1DNA、鲑鱼精DNA、引物1和引物2；
所述引物1的核苷酸序列为序列109；
所述引物2的核苷酸序列为序列110；
3)杂交缓冲液，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl、柠檬酸钠、BSA和Tween20；
4)结合缓冲液，包括Tris-HCl缓冲液、NaCl和EDTA；
5)漂洗液1，包括SDS和柠檬酸三钠缓冲液；
6)漂洗液2，包括SDS和10倍稀释的柠檬酸三钠缓冲液；
7)NaOH水溶液；
8)Tris-HCl缓冲液；
9)PCR反应液；所述PC反应液包括引物3和引物4；
所述引物3的核苷酸序列为序列111；
所述引物4的核苷酸序列为序列112；
所述引物3和所述引物4的最后一位核苷酸为硫代修饰；
10)TE缓冲液。
5.权利要求1或2所述的探针组或权利要求3或4所述的试剂盒在制备捕获待测样本中苯丙酮尿症相关基因的产品中的应用。
6.权利要求1或2所述的探针组或权利要求3或4所述的试剂盒在制备检测待测样本中苯丙酮尿症相关基因变异的产品中的应用。
7.权利要求1或2所述的探针组或权利要求3或4所述的试剂盒或权利要求5或6所述的应用，其特征在于：所述苯丙酮尿症相关基因为PAH和/或PTS和/或GCH1和/或QDPR和/或PCBD1和/或SPR。
8.权利要求1或2所述的探针组或权利要求3或4所述的试剂盒在制备检测或预测待测者是否患有苯丙酮尿症的产品中的应用。
9.一种检测待测样本中苯丙酮尿症相关基因变异的方法，包括如下步骤：
1)将待测者的基因组DNA进行片段化后，构建gDNA文库；
2)用权利要求1或2所述的探针组与所述gDNA文库杂交，得到杂交产物；
3)对所述杂交产物进行测序，根据测序结果分析苯丙酮尿症相关基因的变异情况。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述苯丙酮尿症相关基因为PAH和/或PTS和/或GCH1和/或QDPR和/或PCBD1和/或SPR。
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|---|---|---|---|---|
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2019
- 2019-01-02 CN CN201910001308.0A patent/CN111394446B/zh active Active
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