CN111393676A - 一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，其特征在于，包括如下步骤：混合：将透明质酸或其盐、热稳定剂、pH值调节剂、渗透压调节剂溶解于水中，混合均匀，得到混合液；灭菌：将所述混合液置于105～121℃的条件中，灭菌8～30min，得到透明质酸或其盐凝胶；其中，所述透明质酸或其盐凝胶包括：质量体积浓度为0.8～4％的透明质酸或其盐和质量体积浓度为0.1～4％的热稳定剂。本申请的阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，在透明质酸或其盐凝胶制备过程的特定阶段添加一定量的热稳定剂，可以显著改善透明质酸或其盐高温灭菌粘度的下降水平。

Description

一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法
技术领域
本申请涉及透明质酸应用领域，更为具体地涉及一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法。
背景技术
透明质酸(HA)是由D-葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖双糖单位反复连接组成的大分子酸性粘多糖，具有保湿性、润滑性、粘弹性和抗炎、修复活性，因此被广泛应用于眼科粘弹剂、关节腔注射剂、美容填充剂、美塑疗法补充剂和化妆品中。
灭菌是无菌医疗器械生产的关键环节，其涉及的参数、环境相互关联。在需要无菌保证的液体产品中，常用方法有过滤除菌法、湿热灭菌法，其中灭菌是无菌保障水平最高的一种方式，而针对透明质酸或其盐凝胶类产品，高温对其粘度具有显著的影响，具体的，会使透明质酸或其盐粘度显著降低。对于高温使透明质酸或其盐粘度显著降低的问题，目前解决的方法主要是通过增加透明质酸或其盐的含量，以维持其表观粘度；或者是尽可能降低灭菌温度，减少灭菌时间。然而，上述两种方法带来的后果是增加生产成本或降低产品的无菌保障水平，不利于产品的应用。
发明内容
基于以上技术缺陷，本申请的发明人发现，在透明质酸或其盐凝胶制备过程的特定阶段添加一定量的热稳定剂，可以显著改善透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度的下降水平，提高透明质酸或其盐凝胶热稳定性。为解决高温灭菌会使透明质酸或其盐凝胶粘度显著降低的问题，本申请提供一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，本申请技术方案如下：
1、一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，其特征在于，包括如下步骤：
混合：将透明质酸或其盐、热稳定剂、pH值调节剂、渗透压调节剂溶解于水中，混合均匀，得到混合液；
灭菌：将所述混合液置于105～121℃的条件中，灭菌8～30min，得到透明质酸或其盐凝胶；
其中，所述透明质酸或其盐凝胶包括：质量体积浓度为0.8～4％的透明质酸或其盐和质量体积浓度为0.1～4％的热稳定剂。
2、根据项1所述的方法，其特征在于，在所述混合步骤中，将所述透明质酸或其盐、pH值调节剂、渗透压调节剂和水，在40～60℃条件下混合均匀，然后加入所述热稳定剂，再次混合均匀，得到混合液。
3、根据项1或2所述的方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐分子量为600kDa～4000kDa。
4、根据项1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐凝胶包括质量体积浓度为0.5～2.5％的热稳定剂。
5、根据项1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述热稳定剂选自甘油、维生素C和海藻酸钠中一种或两种或三种；
优选地，所述热稳定剂包括甘油、维生素C和海藻酸钠，所述甘油在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.05～1.5％，所述维生素C在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.02～0.6％，所述海藻酸钠在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.03～0.9％。
6、根据项1～5中任一项所述的方法，其特征在于，所述透明质酸盐选自透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸锌、透明质酸钾、透明质酸银、透明质酸钙和透明质酸金中的一种或多种。
7、根据项1～6中任一项所述的方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐凝胶的pH值为6.0～7.5。
8、根据项1～7中任一项所述的方法，其特征在于，所述pH值调节剂选自盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸和硼砂中的一种或多种。
9、根据项1～8中任一项所述的方法，其特征在于，所述渗透压调节剂选自氯化钾、氯化钠、硼酸、氨基酸、甘露醇和山梨醇中的一种或多种。
10、根据项1～9中任一项所述的方法，其特征在于，在所述灭菌步骤中，将所述混合液置于105～121℃的脉动真空灭菌柜中灭菌8～30min，得到所述透明质酸或其盐凝胶。
本申请的效果
本申请的阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，通过分别控制透明质酸或其盐凝胶中的透明质酸或其盐和热稳定剂的含量，灭菌条件等，减少了由于高温灭菌导致的透明质酸或其盐运动粘度的降低幅度。并通过进一步控制加入热稳定剂的顺序，以及控制混合步骤中的温度为40～60℃，使得透明质酸或其盐充分伸展，后加入热稳定剂使热稳定剂均匀充分嵌入透明质酸或其盐的网络结构中，从而可以显著改善透明质酸或其盐高温灭菌条件下运动粘度的下降水平。
具体实施方式
下文将对本发明进行更全面地描述。然而，本发明可能通过多种不同的方式进行实施，而不应该被理解为仅限于本发明所述的实施方式；更确切地说，提供这些实施方式使得本发明公开得彻底和完全，并且向本领域技术人员充分地传达了本发明所要保护的范围。
根据本申请的一个方面，提供一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一：混合：将透明质酸或其盐、热稳定剂、pH值调节剂、渗透压调节剂溶解于水中，混合均匀，得到混合液；
步骤二：将所述混合液置于105～121℃的条件中，灭菌8～30min，得到透明质酸或其盐凝胶；
其中，所述透明质酸或其盐凝胶包括：质量体积浓度为0.8～4％的透明质酸或其盐和质量体积浓度为0.1～4％的热稳定剂。
本申请中的“透明质酸”可来自本领域已知的任何来源，例如来自公鸡鸡冠或来自微生物。在优选的实施方案中，透明质酸通过微生物发酵产生，例如通过链球菌属(Streptococcus)的菌株，如兽疫链球菌(S.zooepidemicus)发酵产生；又例如通过巴斯德氏菌属(Pasteurella)的菌株，如多杀巴斯德氏菌(P.multocida)发酵产生。
本申请中的“凝胶”是水凝胶，具体指的是含水的三维亲水性聚合物网状结构或凝胶，其中，水是连续相，例如，含水量大于50％(w/w)。
本申请中的“灭菌”是指“终端灭菌”，即对完成最终密封的产品进行灭菌处理，以使产品中微生物的存活概率(即无菌保证水平)不得高于10-6的生产方式。
在本申请中的“稳定”指的是减少透明质酸或其盐凝胶所观察到的运动粘度随时间损失的程度，例如，当与未加入热稳定剂的相同重量的透明质酸或其盐凝胶相比较时，加入热稳定剂的透明质酸或其盐凝胶更稳定。本申请中，具体使用“在特定时间内，特定温度下，最终的透明质酸或其盐凝胶的粘度相对于初始时下跌的幅度”来表征透明质酸或其盐凝胶的热稳定性。
本申请中“运动粘度”即流体的动力粘度与同温度下该流体密度之比。具体地，由于原始的透明质酸或其盐的粘度无法直接通过品氏粘度计测量，因此本申请的透明质酸或其盐凝胶的运动粘度指的是稀释后的透明质酸或其盐的运动粘度，测定方法为：取制备得到的一定质量的透明质酸或其盐凝胶加入纯化水，纯化水与透明质酸或其盐凝胶的质量比为19:1，充分搅拌均匀，用品氏粘度计测量运动粘度。
本申请的步骤一中，所述透明质酸盐优选为透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸锌、透明质酸钾、透明质酸银、透明质酸钙和透明质酸金中的一种或多种，进一步优选为包括透明质酸钠、透明质酸镁和透明质酸钾中的一种或多种。
本申请的步骤一中，所述透明质酸或其盐的平均分子量为600kDa～4000kDa。例如平均分子量可为600kDa、700kDa、800kDa、900kDa、1000kDa、1100kDa、1200kDa、1300kDa、1400kDa、1500kDa、1600kDa、1700kDa、1800kDa、1900kDa、2000kDa、2100kDa、2200kDa、2300kDa、2400kDa、2500kDa、2600kDa、2700kDa、2800kDa、2900kDa、3000kDa、3100kDa、3200kDa、3300kDa、3400kDa、3500kDa、3600kDa、3700kDa、3800kDa、3900kDa、4000kDa等，优选所述透明质酸或其盐的平均分子量为600kDa～3000kDa。透明质酸或其盐的分子量通常为分子质量的平均值。
本申请的步骤一中，对pH值调节剂没有特别限定，只要能够完成调节pH即可，可选自氢氧化钠、氢氧化钾、醋酸钠、柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、乳酸、乳酸钠、精氨酸、氨甲基丙醇、盐酸、硼酸和硼砂中的一种或几种。pH值调节剂可以维持皮肤酸碱平衡，使皮肤处于健康状态，减少皱纹、斑以及痘痘等症状的出现。
本申请的步骤一中，对渗透压调节剂没有特别限定，只要能够完成调节渗透压即可，可选自氯化钾、氯化钠、氯化钙、氨基酸、山梨醇、甘露醇、硼砂和硼酸中的一种或几种。渗透压调节剂可以调节产品的渗透压，维持皮肤细胞内外的渗透压平衡。
在本申请步骤一的一个优选实施方式中，首先将透明质酸或其盐、pH值调节剂、渗透压调节剂和水，在40～60℃，例如，40℃、41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、46℃、47℃、48℃、49℃、50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃等，优选在40～55℃条件下混合均匀，使透明质酸或其盐充分伸展，然后加入热稳定剂，再次混合均匀，使热稳定剂嵌入透明质酸或其盐的网络结构中，得到混合液。
本申请的步骤二的灭菌操作中，将所述混合液置于105～121℃条件下，例如可为105℃、106℃、107℃、108℃、109℃、110℃、111℃、112℃、113℃、114℃、115℃、116℃、117℃、118℃、119℃、120℃、121℃等，优选为115～120℃条件下，灭菌8～30min，例如可为8min、9min、10min、11min、12min、13min、14min、15min、16min、17min、18min、19min、20min、21min、22min、23min、24min、25min、26min、27min、28min、29min、30min等，优选10～25min，得到透明质酸或其盐凝胶。在一个优选的实施方式中，将所述混合液灌装到注射器中再置于105～121℃条件下进行灭菌。
本申请的步骤二的一个具体的实施方式中，将所述混合液置于118～120℃的脉动真空灭菌柜中进行灭菌14～16min，得到透明质酸或其盐凝胶。
在一个具体实施方式中，本申请的阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，其中，所述透明质酸或其盐凝胶可包括下述任意质量体积浓度的透明质酸或其盐：1％、1.2％、1.4％、1.6％、1.8％、2％、2.2％、2.4％、2.6％、2.8％、3％、3.2％、3.4％、3.6％、3.8％、4％等，优选包括1.2～2％的透明质酸或其盐；所述透明质酸或其盐凝胶可包括下述任意质量体积浓度的热稳定剂：0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4％等。
在一个具体实施方式中，所述热稳定剂选自甘油、维生素C和海藻酸钠中一种或多种。甘油可以增稠，减少液体制剂内部的运动，减少氧气的进入，而起到稳定的作用；维生素C涵盖游离形式的抗坏血酸及抗坏血酸盐，可以通过捕捉加热产生的自由基等，解决加热所产生的不良后果，提高透明质酸对热的稳定性；海藻酸钠是从褐藻类的海带或马尾藻中提取碘和甘露醇之后的副产物，其分子由β-D-甘露糖醛酸(β-D-mannuronic，M)和α-L-古洛糖醛酸(α-L-guluronic，G)按(1→4)键连接而成，是一种天然多糖，具有药物制剂辅料所需的稳定性、溶解性、粘性和安全性。
在一个具体实施方式中，所述热稳定剂包括甘油、维生素C和海藻酸钠，所述甘油在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.05～1.5％，具体可为0.05％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％、0.95％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％等，所述维生素C在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.02～0.6％，具体可为0.02％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％等，所述海藻酸钠在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.03～0.9％，具体可为0.03％、0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％、0.35％、0.4％、0.45％、0.5％、0.55％、0.6％、0.65％、0.7％、0.75％、0.8％、0.85％、0.9％等。在上述具体实施方式中，当所述热稳定剂同时含有甘油、维生素C和海藻酸钠中的两种或三种时，所述甘油、维生素C和海藻酸钠的质量体积浓度分别为甘油、维生素C和海藻酸钠各自在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度。
在一个具体实施方式中，所述热稳定剂由甘油、维生素C和海藻酸钠组成。
在上述具体实施方式中，所述透明质酸或其盐凝胶可包括下述任意质量体积浓度的热稳定剂：0.1％、0.2％、0.3％、0.4％、0.5％、0.6％、0.7％、0.8％、0.9％、1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4％等。此时热稳定剂的质量体积浓度为甘油、维生素C和海藻酸钠的混合物在所述透明质酸或其盐凝胶中的总质量体积浓度。在一个具体实施方式中，最终制得的透明质酸或其盐凝胶的pH值为6.0～7.5，例如可为6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、6.9、7.0、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5等。
本申请中的透明质酸或其盐凝胶中可以添加不影响本发明目的和效果的，在化妆品和医药品中可使用的有效成分。可以添加的有效成分有，如美白成分，抗皱成分，抗炎成分，促进血液循环的成分，抗菌成分，抗瘙痒成分，各种维生素和其衍生物，抗氧化成分，色素，香料等。
本申请的方法，以甘油、维生素C和海藻酸钠中一种或多种作为热稳定剂，优选以甘油、维生素C和海藻酸钠共同作为热稳定剂，在40～60℃条件下，先将本申请所述质量体积浓度的透明质酸或其盐、pH值调节剂、渗透压调节剂和水混合均匀，再加入本申请所述质量体积浓度的热稳定剂，再次混合均匀后进行灭菌，本申请的方法能够以最大限度减少透明质酸或其盐凝胶的运动粘度的下降并且透明质酸或其盐凝胶产品保存2年性能稳定。本申请将灭菌后的透明质酸或其盐凝胶产品放在40℃的恒温箱保存3个月，然后检测产品的运动粘度，结果显示产品在3个月内性能稳定，因此也说明产品可以在2～8℃存放2年性能稳定。
实施例
本申请的以下实施例仅用来说明实现本发明的具体实施方式，这些实施方式不能理解为是对本发明的限制。其他的任何在未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均视为等效的置换方式，落在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊要求，均为常规方法。
下述实施例中所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。如果无特殊说明，下述实施例和对比例中，在灭菌水中加入透明质酸或其盐、热稳定剂、pH值调节剂、渗透压调节剂之后，混合液体积不变。
实施例1-1～实施例1-21与对比例1
在2.2L灭菌水中加入44g平均分子量2000kDa的透明质酸钠，加入氢氧化钠、氯化钠调节pH至6.0，混合均匀，得到混合液一，将混合液一分成22份，取21份100mL混合液一，实施例1-1～1-7中分别加入0.5g、1g、1.5g、2g、2.5g、3g、4g甘油，实施例1-8～1-14中分别加入0.5g、1g、1.5g、2g、2.5g、3g、4g甘油与维生素C的混合物(甘油与维生素的重量比为1:1)，实施例1-15～1-21中分别加入0.5g、1g、1.5g、2g、2.5g、3g、4g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到21份100mL的混合液。然后从21份100mL混合液中各取1mL混合液分别灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，分别得到实施例1-1～实施例1-21的透明质酸钠凝胶。
取余下的100mL混合液一，从中取1mL混合液一灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到对比例1的透明质酸钠凝胶。
运动粘度测量方法：取1g凝胶加纯化水至20g，充分搅拌均匀，用品氏粘度计测量实施例和对比例的透明质酸钠凝胶的运动粘度。(本专利所用到的运动粘度测量方法均是此方法)
实施例2-1～实施例2-6
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量2000kDa的透明质酸钠，加入磷酸氢二钠、磷酸二氢钠调节pH至6.5，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，依次做6组实验，得到实施例2-1～实施例2-6的透明质酸钠凝胶。
实施例3
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量600kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钾调节pH至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
实施例4
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量1000kDa透明质酸钠，加入硼酸、硼砂、甘露醇调节pH值至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
实施例5
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量2000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解。然后取1mL灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
实施例6
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量3000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解。然后取1mL灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
实施例7
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量4000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解。然后取1mL灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
实施例8与对比例2
在200mL灭菌水中加入4g平均分子量2000kDa透明质酸镁，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.0，混合均匀，得到200mL混合液一，取100mL混合液一，向其中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，得到实施例8的透明质酸镁凝胶。
取余下的100mL混合液一，从中取1mL混合液一灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，得到对比例2的透明质酸镁凝胶。
实施例9与对比例3
在200mL灭菌水中加入4g平均分子量2000kDa透明质酸钾，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.5，混合均匀，得到200mL混合液一，取100mL混合液一，向混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，得到实施例9的透明质酸钾凝胶。
取余下的100mL混合液一，从中取1mL混合液一灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，得到对比例3的透明质酸钾凝胶。
实施例10-1～实施例10-3与对比例4～6
在3组200mL灭菌水中分别加入0.8g、2g、4g平均分子量2000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.5，混合均匀，分别得到3组200mL混合液一，在3组混合液一中分别取100mL混合液一，分别加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到3组混合液。然后在3组混合液中分别取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，分别得到实施例10-1～实施例10-3的透明质酸钠凝胶。
取三组各自余下的100mL混合液一，从中分别取1mL混合液一灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中105℃灭菌30min，分别得到对比例4～6的透明质酸钠凝胶。
实施例11
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量2000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钾调节pH至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入0.3g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
实施例12
在100mL灭菌水中加入2g平均分子量2000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钾调节pH至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入1g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物，其中，甘油0.3g，维生素C0.5g，海藻酸钠0.2g，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
对比例7-1～对比例7～6
在100mL灭菌水中加入1g平均分子量2000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氢氧化钠调节pH值至7.0，混合均匀，搅拌溶解，得到混合液一。然后取1mL混合液一灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，依次做5组实验，得到对比例7-1～对比例7～6的透明质酸钠凝胶。
对比例8
在100mL灭菌水中加入1g平均分子量2000kDa透明质酸钠，加入柠檬酸、柠檬酸钠、氯化钾调节pH至7.0，混合均匀，得到混合液一，在混合液一中加入0.05g甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物(甘油、维生素C与海藻酸钠的重量比为5:2:3)，搅拌溶解，得到混合液。然后取1mL混合液灌装到2.5mL注射器中，在脉动真空灭菌柜中121℃灭菌8min，得到透明质酸钠凝胶。
各实施例和对比例的实验参数及效果数据列于下表1中。
表1透明质酸或其盐凝胶的粘度变化及40℃稳定性考察
Figure BDA0002463724630000111
Figure BDA0002463724630000121
Figure BDA0002463724630000131
以透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低百分比表示透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低幅度，透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低百分比＝(灭菌前运动粘度-加热稳定剂灭菌后运动粘度)/灭菌前运动粘度。由上表1中的实施例1-1～实施例1～21以及对比例1可以看出，透明质酸或其盐凝胶加入热稳定剂后(如甘油，或者甘油与维生素C，或者甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物)，与未加入热稳定剂相比，灭菌后透明质酸或其盐凝胶运动粘度降低幅度显著减小，而且随着热稳定剂浓度的增加运动粘度降低幅度也随之减小。尤其是加入甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物后，灭菌后透明质酸或其盐凝胶运动粘度降低显幅度减小尤为显著。
由实施例2-1～2-6可以看出，加入相同浓度的甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物后，6组实验中，灭菌后透明质酸或其盐粘度降低率差别不大，说明灭菌后透明质酸或其盐凝胶运动粘度变化稳定。
由实施例3～7可以看出，透明质酸或其盐的平均分子量在2000kDa～3000kDa时，灭菌后透明质酸或其盐凝胶运动粘度降低显幅度减小尤为显著。
由实施例8～9、实施例10-1～10-3以及对比例2～6可以看出，加入一定质量体积浓度的热稳定剂(甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物)，不同质量体积浓度的透明质酸盐、不同种类的透明质酸盐，灭菌后透明质酸或其盐凝胶运动粘度较不加热稳定剂的情况相比，均能显著减小灭菌后透明质酸或其盐凝胶运动粘度的降低幅度。
由对比例8可以看出，如果热稳定剂的质量体积浓度在本申请所述的范围之外，所制备的透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低幅度增大。
将各实施例和对比例的透明质酸或其盐经过加速实验测试法测试其运动粘度，即将各实施例和对比例的透明质酸或其盐放在40℃的恒温培养箱中，保存3个月后测试其运动粘度，结果如上表1所示，可以看出经过40℃保存3个月，加入一定质量体积浓度的甘油，或者甘油与维生素C，或者甘油、维生素C与海藻酸钠的混合物，灭菌后40℃考察3月后透明质酸或其盐凝胶运动粘度下跌幅度较小，尤其是加入包含甘油、维生素C与海藻酸钠的热稳定剂，效果最优。

Claims (10)

1.一种阻止透明质酸或其盐凝胶灭菌粘度降低的方法，其特征在于，包括如下步骤：
混合：将透明质酸或其盐、热稳定剂、pH值调节剂、渗透压调节剂溶解于水中，混合均匀，得到混合液；
灭菌：将所述混合液置于105～121℃的条件中，灭菌8～30min，得到透明质酸或其盐凝胶；
其中，所述透明质酸或其盐凝胶包括：质量体积浓度为0.8～4％的透明质酸或其盐和质量体积浓度为0.1～4％的热稳定剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述混合步骤中，将所述透明质酸或其盐、pH值调节剂、渗透压调节剂和水，在40～60℃条件下混合均匀，然后加入所述热稳定剂，再次混合均匀，得到混合液。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐分子量为600kDa～4000kDa。
4.根据权利要求1～3中任一项所述的方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐凝胶包括质量体积浓度为0.5～2.5％的热稳定剂。
5.根据权利要求1～4中任一项所述的方法，其特征在于，所述热稳定剂选自甘油、维生素C和海藻酸钠中一种或两种或三种；
优选地，所述热稳定剂包括甘油、维生素C和海藻酸钠，所述甘油在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.05～1.5％，所述维生素C在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.02～0.6％，所述海藻酸钠在所述透明质酸或其盐凝胶中的质量体积浓度为0.03～0.9％。
6.根据权利要求1～5中任一项所述的方法，其特征在于，所述透明质酸盐选自透明质酸钠、透明质酸镁、透明质酸锌、透明质酸钾、透明质酸银、透明质酸钙和透明质酸金中的一种或多种。
7.根据权利要求1～6中任一项所述的方法，其特征在于，所述透明质酸或其盐凝胶的pH值为6.0～7.5。
8.根据权利要求1～7中任一项所述的方法，其特征在于，所述pH值调节剂选自盐酸、氢氧化钠、柠檬酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硼酸和硼砂中的一种或多种。
9.根据权利要求1～8中任一项所述的方法，其特征在于，所述渗透压调节剂选自氯化钾、氯化钠、硼酸、氨基酸、甘露醇和山梨醇中的一种或多种。
10.根据权利要求1～9中任一项所述的方法，其特征在于，在所述灭菌步骤中，将所述混合液置于105～121℃的脉动真空灭菌柜中灭菌8～30min，得到所述透明质酸或其盐凝胶。
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