CN111323529B - 一种液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法 - Google Patents
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Abstract
一种液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法。本发明公开了一种通过高效液相色谱法测定右美沙芬与左美沙芬的方法,所述测定方法采用表面涂敷有纤维素—三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶为填充剂的色谱柱,其检测条件如下:色谱条件:色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),以正己烷‑乙醇‑二乙胺为流动相进行洗脱,正己烷‑乙醇‑二乙胺的具体比例为90:10:0.1,检测波长285nm,柱温30℃,流动相速度0.5mL/min。本发明方法精密度高,重复性好,回收率高,可以广泛用于不同来源的右美沙芬原料药及其对应制剂的质量检测。
Description
技术领域
本发明属于药物分析领域,具体涉及通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法。
背景技术
右美沙芬是吗啡类左吗喃甲基醚的右旋异构体,通过抑制延髓咳嗽中枢而发挥中枢性镇咳作用。其镇咳强度与可待因相等或略强。无镇痛作用,长期应用未见耐受性和成瘾性。治疗剂量不抑制呼吸。口服吸收好,15~30分钟起效,作用可维持3~6小时,血浆中原型药物浓度很低。右美沙芬化学名为3-甲氧基-17-甲基-(9α,13α,14α)吗啡喃(3-methoxy-17-methyl-(9α,13α,14α)-Morphinan)。
右美沙芬的的左旋异构体(左美沙芬)是比吗啡的成瘾性还强3倍的中枢性镇痛剂,因此,出于医学以及法律上的目的,急需一种分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法,目前仅美国药典通过液相方法测定右美沙芬中左美沙芬的含量,但该方法的固定相色谱柱为L88,Astec Chirobiotic-V2(4.6mm×25cm,5μm),在实际中并不常用,该方法缺乏一定普适性。
右美沙芬和左美沙芬结构式和化学式等信息如下表1所示:
表1
Tedesco D等人发表了《Determination of dextromethorphan andlevomethorphan in seized heroin samples by enantioselective HPLC andelectronic CD》,该文献公开了一种使用液相色谱法分离检测右美沙芬与左美沙芬的方法,其在于使用对映选择性HPLC-DAD-CD法,固定相为Chiralcel OJ column(250mm×4.6mmI.D.),以正己烷-2-异丙醇-二乙胺为流动相,具体比例为50∶50∶0.1、70∶30∶0.1、85∶15∶0.1(V/V/V),右美沙芬和左美沙芬的测试浓度均为1mg/mL。但发明人发现,该方法在右美沙芬高浓度的情况下,不能有效分离分析右美沙芬与左美沙芬,线性范围较低,分离度不高。
Kim S C等人发表了《Simultaneous analysis of d-3-methoxy-17-methylmorphinan and l-3-methoxy-17-methy lmorphinan by high pressure liquidchromatography equipped with PDA》,该文献公开了一种使用液相色谱法分离检测右美沙芬与左美沙芬的方法,采用Chiral CD-Ph(3.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈∶甲醇∶0.5M NaClO4(30∶25∶45%);检测波长290nm;流速0.7mL·min-1,右美沙芬和左美沙芬的保留时间分别为17.80±0.81(%R.S.D)和18.99±0.84(%R.S.D)。
Li,Li等人发表了《Direct enantiomer determination of methorphan byHPLC-MS and SFC-MS》,该文献公开了一种使用超液相色谱法分离检测右美沙芬与左美沙芬的方法,采用Chirobiotic V2(2.1×250mm,5μm)色谱柱,流动相:甲醇∶氨水∶醋酸钠(100∶0.02∶0.1,V/V/V)。
随着制药行业的迅速发展,药品中的杂质含量越来越少,如何检测分离出药品中的少量杂质,是目前药品分析领域的关注点之一。本发明从现有技术的不足出发,提供一种分析方法,能在右美沙芬浓度较高的情况下,准确快速分离右美沙芬以及左美沙芬,该方法具有范围广,分离度好的优点,进而在日常生产中控制右美沙芬的质量,提高药品疗效,降低毒副作用。
发明内容
发明的目的在于克服现有技术的不足,提供一种通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬及左美沙芬的方法,该方法较现有技术公开的方法更具有更宽的线性范围及更好的分离度,表现为在右美沙芬浓度较高的条件下,采用高效液相色谱法能较好地将右美沙芬与左美沙芬分离分析测定,进而有利于实现对原料药或制剂中有关物质更准确的定量分析,以及有利于实现对原料药或制剂在制备、贮存过程中潜在可能产生的未知杂质的有效质量控制。
本发明的上述目的通过以下技术方案予以实现:
本发明公开了一种通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法,所述测定方法采用表面涂敷有纤维素—三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶为填充剂的色谱柱,其检测条件如下:
色谱条件:色谱柱为表面涂敷有纤维素—三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶色谱柱,以正己烷-乙醇-二乙胺为流动相进行洗脱,柱温25~35℃,流动相速度0.4~0.6mL/min;
样品溶液配制:加流动相溶解氢溴酸右美沙芬对照品或左美沙芬对照品并定量稀释制成每1ml中含氢溴酸右美沙芬1μg~2.5mg和左美沙芬0.5μg~5μg的混合溶液;
测定:进样,将样品溶液注入高效液相色谱仪,记录色谱图并进行分析。
在本发明中,所述高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法中,所采用的色谱柱、流动相的种类以及浓度、流动相速度以及柱温是影响检测效果的重要因素。
具体的,所述高效液相色谱法采用的流动相为正己烷-乙醇-二乙胺,乙醇的比例过高或者过低都会造成右美沙芬与左美沙芬的峰型重叠,不能完全分离。而正己烷-乙醇处于适当的比例时右美沙芬与左美沙芬的峰型完全分离,且峰型无拖尾现象,二乙胺的加入可以改变拖尾现象,从而改善峰形。具体的,在本发明所述的通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法中,其中,正己烷-乙醇-二乙胺比例优选为88∶12∶0.08~0.5-95∶5∶0.08~0.5,V/V/V,最优选为90∶10∶0.1,V/V/V。
所述高效液相法所采用的表面涂敷有纤维素—三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶色谱柱,本领域的技术人员可以理解,即便是同样填料的色谱柱,其效能也存在区别,并影响检测效果;优选的,本发明所采用的十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱优选为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)。
柱温同样是决定分离效果的重要因素之一,具体的,对于原料药或制剂制备得到的供试溶液,随着柱温降低左美沙芬与右美沙芬的分离度逐渐变大,但当检测样品为破坏实验供试溶液时,随着柱温降低左美沙芬与右美沙芬分离度有逐渐变小的趋势,直至重合;发明人综合得出,柱温优选25~35℃,最优选为30℃,分离效果最好。
综合现有技术公开的信息,所述的通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法,流动相速度优选0.4~0.6mL/min,最优选为0.5mL/min,样品配制溶液浓度优选为每1ml中含氢溴酸右美沙芬1μg~2.5mg和左美沙芬0.5μg~5μg的混合溶液,最优选为每1ml中含氢溴酸右美沙芬1mg和左美沙芬1μg的混合溶液,既可以获得较好的分离效果,又保证了分析效率。
在本发明的一个优选的具体方案中,一种通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法,所述测定方法采用表面涂敷有纤维素—三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶为填充剂的色谱柱,其检测条件如下:
色谱条件:色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),以正己烷-乙醇-二乙胺为流动相进行洗脱,正己烷-乙醇-二乙胺的具体比例为90∶10∶0.1,V/V/V,检测波长285nm,柱温30℃,流动相速度0.5mL/min;
样品溶液配制:加流动相溶解氢溴酸右美沙芬对照品或左美沙芬对照品并定量稀释制成每1ml中含氢溴酸右美沙芬1mg和左美沙芬1μg的混合溶液;
测定:进样,将样品溶液注入高效液相色谱仪,记录色谱图并进行分析。
本发明相对于现有技术具有如下的有益效果:
本发明提供一种通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬及左美沙芬的方法,可实现右美沙芬与左美沙芬的完全分离,两者分离度大于1.5,理论塔板数按右美沙芬峰计算达到7000以上,在信噪比大于3,进样体积为20μL时,左美沙芬检测限浓度约为0.05μg/mL,相当于供试品溶液浓度的0.005%,右美沙芬检测限浓度为0.04μg/mL,相当于供试品溶液浓度的0.004%,左美沙芬线性范围的浓度约为0.0001mg/mL~0.002mg/mL,右美沙芬线性范围浓度约为0.0001mg/mL~1.0mg/mL,精密度高,重复性好,回收率高。利用本发明的方法可以准确地进行原料药右美沙芬及其制剂的有关物质的定量分析,从而保证了右美沙芬及其制剂的质量可控性。
附图说明
图1是实施例1左美沙芬定位溶液的HPLC谱图。
图2是实施例2右美沙芬定位溶液的HPLC谱图。
图3是实施例1所得HPLC谱图。
图4是实施例2所得HPLC谱图。
图5是实施例3所得HPLC谱图。
图6是实施例4所得HPLC谱图。
图7是实施例5所得HPLC谱图。
图8是实施例6所得HPLC谱图。
图9是实施例7所得HPLC谱图。
图10是实施例8所得HPLC谱图。
图11是对比例1所得HPLC谱图。
图12是对比例2所得HPLC谱图。
图13是对比例3所得HPLC谱图。
图14是对比例4所得HPLC谱图。
图15是对比例5所得HPLC谱图。
图16是对比例6所得HPLC谱图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述,但发明的实施方式不限于此。
实施例1
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(90∶10∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.541min、8.139min,如图1和图2所示。取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.525min、7.988min,如图3所示,采用本实施例的色谱条件,不仅可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰,左美沙芬和右美沙芬达到基线分离,且基线平稳,出峰时间较快,不存在峰裂的情况,相邻色谱峰分离度大于1.5,更有利于辨识与定位。
实施例2
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(88∶12∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=88∶12∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=88∶12∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=88∶12∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=88∶12∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=88∶12∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.611min、8.099min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.594min、8.079min,如图4所示,采用本实施例的色谱条件,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
实施例3
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(95∶5∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为9.455min、10.006min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为9.408min、9.981min。如图5所示,采用本实施例的色谱条件,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
实施例4
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(90∶10∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液,取左美沙芬储备液作为左美沙芬定位溶液。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取左美沙芬储备液2mL,右美沙芬定位溶液2mL,混匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.541min、8.139min,取分离度溶液100μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.652min、8.066min。如图6所示,采用本实施例的色谱条件,在左美沙芬及右美沙芬处于相同浓度下,能有效区地分左美沙芬和右美沙芬的出峰,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
实施例5
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(95∶5∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液,取左美沙芬储备液作为左美沙芬定位溶液。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取左美沙芬储备液2mL,右美沙芬定位溶液2mL,混匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为8.209min、9.100min,取分离度溶液100μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为8.281min、9.111min。如图7所示,采用本实施例的色谱条件,在左美沙芬及右美沙芬处于相同浓度下,能有效区地分左美沙芬和右美沙芬的出峰,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
实施例6
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(90∶10∶0.08,V/V/V)
柱温:25℃;
流速:0.4mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺0.8ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺0.8ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.08,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.08,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.08,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.08,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.08,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.752min、8.279min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.705min、8.254min。如图8所示,采用本实施例的色谱条件,在左美沙芬及右美沙芬处于相同浓度下,能有效区地分左美沙芬和右美沙芬的出峰,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
实施例7
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(90∶10∶0.5,V/V/V)
柱温:35℃;
流速:0.6mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺5ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺5ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.5,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.5,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.5,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液,取左美沙芬储备液作为左美沙芬定位溶液。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品50mg,置20ml量瓶中,精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置同一20ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.5,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.541min、8.139min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.376min、7.798min。如图9所示,采用本实施例的色谱条件,能有效区地分左美沙芬和右美沙芬的出峰,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
实施例8
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(90∶10∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液,取左美沙芬储备液作为左美沙芬定位溶液。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品20mg,置20ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一20ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.519min、8.119min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.548min、8.025min。如图10所示,采用本实施例的色谱条件,能有效区地分左美沙芬和右美沙芬的出峰,相邻色谱峰分离度大于1.5,可以有效区分左美沙芬和右美沙芬的出峰。
对比例1
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-乙醇-二乙胺(85∶15∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取乙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.287min、7.787min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.312min、7.722min。如图11所示,左美沙芬及右美沙芬在该流动相(正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)下不能完整分离,峰型存在重叠,可知,当流动相浓度为正己烷∶乙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,或乙醇浓度更低时,左美沙芬及右美沙芬不能有效分离。
对比例2
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-异丙醇-二乙胺(50∶50∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取异丙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=50∶50∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=50∶50∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷-异丙醇-二乙胺=50∶50∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=50∶50∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=50∶50∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.311min、7.604min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.258min、7.585min。如图12所示,左美沙芬及右美沙芬在色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),流动相为(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=50∶50∶0.1,V/V/V)下不能完整分离,峰型存在重叠,可知,当右美沙芬的浓度提升时,该条件无法有效分离左美沙芬及右美沙芬。
对比例3
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-异丙醇-二乙胺(70∶30∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取异丙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=70∶30∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=70∶30∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=70∶30∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=70∶30∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=70∶30∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.511min、7.880min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.416min、7.841min。如图13所示,左美沙芬及右美沙芬在色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),流动相为(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=70∶30∶0.1,V/V/V)下不能完整分离,峰型存在重叠,可知,当右美沙芬的浓度提升时,该条件无法有效分离左美沙芬及右美沙芬。
对比例4
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-异丙醇-二乙胺(85∶15∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取异丙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.545min、7.933min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.469min、7.853min。如图14所示,左美沙芬及右美沙芬在色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),流动相为(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=85∶15∶0.1,V/V/V)下不能完整分离,峰型存在重叠,可知,当右美沙芬的浓度提升时,该条件无法有效分离左美沙芬及右美沙芬。
对比例5
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-异丙醇-二乙胺(90∶10∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取异丙醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.725min、8.015min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.600min、7.998min。如图15所示,左美沙芬及右美沙芬在色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),流动相为(正己烷∶异丙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)下不能完整分离,峰型存在重叠,可知,当右美沙芬的浓度提升时,该条件无法有效分离左美沙芬及右美沙芬。
对比例6
仪器:岛津LC-2030C 3D;
色谱柱:菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm)
流动相:正己烷-甲醇-二乙胺(90∶10∶0.1,V/V/V)
柱温:30℃;
流速:0.5mL/min;
检测波长:285nm;
流动相的配制:
流动相A:量取甲醇1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
流动相B:量取正己烷1000ml,加入二乙胺1ml,混匀,即得;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶甲醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶甲醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液(浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇)1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶甲醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂(正己烷∶甲醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)稀释至刻度,摇匀,即得。
分离度溶液(样品溶液)的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂(正己烷∶甲醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.545min、7.951min,取分离度溶液20μL注入高效液相色谱仪,检出左美沙芬及右美沙芬的保留时间分别为7.454min、7.867min。如图16所示,左美沙芬及右美沙芬在色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ(4.6mm×250mm,5μm),流动相为(正己烷-甲醇-二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V)下不能完整分离,峰型存在重叠,可知,当右美沙芬的浓度提升时,该条件无法有效分离左美沙芬及右美沙芬。发明人在对比例6的液相条件下,只改变流动相的浓度,具体为(正己烷-甲醇-二乙胺=88∶12∶0.1,V/V/V)或者(正己烷-甲醇-二乙胺=95∶5∶0.1,V/V/V),峰型仍存在重叠,无法有效分离左美沙芬及右美沙芬。
发明人在实施例1的实验条件下,降低柱温为20℃以及流速为0.3mL/min的情况下,发现同样左美沙芬以及右美沙芬的出峰时间大大推迟,分离效率降低,同样的,发明人在实施例1的实验条件下,提高柱温为40℃以及流速为0.8mL/min的情况下,发现左美沙芬以及右美沙芬的出峰时间虽然提前,但两者峰型重叠严重,且同时出现其余干扰峰。综上所述,只有在合适的柱温以及流速下,才能更好有效地分离左美沙芬以及右美沙芬。
在后续的分析方法学验证中,采用本实施例的方法,可实现右美沙芬与左美沙芬的完全分离,两者分离度大于1.5,理论塔板数按右美沙芬峰计算达到7000以上,在信噪比大于3,进样体积为20μL时,左美沙芬检测限浓度约为0.05μg/mL,相当于供试品溶液浓度的0.005%,右美沙芬检测限浓度为0.04μg/mL,相当于供试品溶液浓度的0.004%,左美沙芬线性范围的浓度约为0.0001mg/mL~0.002mg/mL,右美沙芬线性范围浓度约为0.0001mg/mL~1.0mg/mL,比《Determination of dextromethorphan and levomethorphan in seizedheroin samples by enantioselective HPLC and electronic CD》所报道的线性范围浓度(10-280μg/L),具有更宽的线性范围,且精密度高,重复性好,回收率高。符合药品质量控制过程中对于分析方法的要求。
综上可知,本发明对比现有技术,提供一种分析方法,能在右美沙芬浓度较高的情况下,准确快速分离右美沙芬以及左美沙芬,该方法具有范围广,分离度好的优点,进而在日常生产中控制右美沙芬的质量、提高药品疗效、降低毒副作用。因此,本方案的检测方法较现有技术公开的检测方法,具有更高的普适性。
上述实施例为本发明较佳的实施方式,但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制,其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种通过高效液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法,测定方法采用表面涂敷有纤维素—三(4-甲基苯甲酸酯)的硅胶为填充剂的色谱柱,其检测条件如下:
色谱条件:色谱柱为菲罗门Chiral MJ(2)5μ 4.6mm×250mm,5μm ,以正己烷-乙醇-二乙胺为流动相进行洗脱,正己烷-乙醇-二乙胺的具体比例为90:10:0.1V/V/V,检测波长285nm,柱温30℃,流动相速度0.5mL/min;
定位溶液的配制:
右美沙芬定位溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置100ml量瓶中,加稀释剂,正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V溶解并稀释至刻度,摇匀,作为右美沙芬储备液;精密量取右美沙芬储备液1ml,置100ml量瓶中,用稀释剂,正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V稀释至刻度,摇匀,即得;
左美沙芬定位溶液的配制:精密量取左美沙芬对照品溶液,浓度:0.1mg/ml,溶剂为甲醇,1ml,置10ml量瓶中,加稀释剂,正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V,稀释至刻度,摇匀,作为左美沙芬储备液;精密量取左美沙芬储备液1ml,置10ml量瓶中,用稀释剂,正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V稀释至刻度,摇匀,即得;
分离度溶液的配制:精密称取氢溴酸右美沙芬对照品10mg,置10ml量瓶中,精密量取左美沙芬储备液1ml,置同一10ml量瓶中,加稀释剂,正己烷∶乙醇∶二乙胺=90∶10∶0.1,V/V/V溶解并稀释至刻度,摇匀,即得,
测定:取左美沙芬及右美沙芬定位溶液各20μL注入高效液相色谱仪。
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Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007122199A1 (en) * | 2006-04-20 | 2007-11-01 | Prodimed, S.A. | Synthesis and uses of pyroglutamic acid derivatives |
CN101636400A (zh) * | 2006-11-22 | 2010-01-27 | 普罗基因制药公司 | 用于合成季4,5-环氧-吗啡烷类似物以及分离出它们的n-立体异构体的方法 |
CN103319406A (zh) * | 2012-03-20 | 2013-09-25 | 迪维斯实验室有限公司 | 1-(4-甲氧苄基)-八氢-异喹啉的拆分 |
CN108956803A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-12-07 | 广东华南药业集团有限公司 | 一种头孢克肟的质量控制方法 |
CN109884195A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-06-14 | 江西省药品检验检测研究院 | 一种门冬氨酸洛美沙星中洛美沙星异构体的分离测定方法 |
CN110007028A (zh) * | 2019-04-26 | 2019-07-12 | 上海葆隆生物科技有限公司 | (s)-1-(4-甲氧苄基)-1,2,3,4,5,6,7,8-八氢异喹啉异构体的检测方法 |
-
2020
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Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007122199A1 (en) * | 2006-04-20 | 2007-11-01 | Prodimed, S.A. | Synthesis and uses of pyroglutamic acid derivatives |
CN101636400A (zh) * | 2006-11-22 | 2010-01-27 | 普罗基因制药公司 | 用于合成季4,5-环氧-吗啡烷类似物以及分离出它们的n-立体异构体的方法 |
CN103319406A (zh) * | 2012-03-20 | 2013-09-25 | 迪维斯实验室有限公司 | 1-(4-甲氧苄基)-八氢-异喹啉的拆分 |
CN108956803A (zh) * | 2018-05-24 | 2018-12-07 | 广东华南药业集团有限公司 | 一种头孢克肟的质量控制方法 |
CN109884195A (zh) * | 2018-12-05 | 2019-06-14 | 江西省药品检验检测研究院 | 一种门冬氨酸洛美沙星中洛美沙星异构体的分离测定方法 |
CN110007028A (zh) * | 2019-04-26 | 2019-07-12 | 上海葆隆生物科技有限公司 | (s)-1-(4-甲氧苄基)-1,2,3,4,5,6,7,8-八氢异喹啉异构体的检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
高效毛细管电泳法在体内药物分析的应用;张慧文等;《中国医院药学杂志》;20070831;第27卷(第08期);1132-1136 * |
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