CN111315395A - 白细胞介素-18变体和使用方法 - Google Patents

白细胞介素-18变体和使用方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供用于在治疗和非治疗性应用中使用的包含IL‑18活性的活化剂的组合物和方法。即使在存在抑制分子如IL‑18BP的情况下，该活化剂仍提供IL‑18信号传导活性。

Description

白细胞介素-18变体和使用方法
交叉引用
本申请要求2017年9月6日提交的美国临时专利申请No.62/554,605和2018年4月3日提交的美国临时专利申请No.62/652,279的权益，前述申请的每一个均通过引用以其整体并入本文。
背景技术
白细胞介素-18(IL-18)是一种促炎性细胞因子，其可以刺激T细胞、NK细胞和骨髓细胞。由于IL-18具有刺激抗肿瘤免疫细胞的能力，因此已被提议作为治疗癌症的免疫治疗剂。但是，IL-18的临床疗效有限。
因此，需要提供有效的IL-18信号传导活性以治疗和预防癌症以及其他疾病和病症的组合物和方法。本发明解决了这种未满足的需求。
发明内容
在一个方面，本公开涉及一种组合物，其包含IL-18变体多肽。在一些实施方式中，IL-18变体多肽特异性结合至IL-18受体(IL-18R)并且其中IL-18变体多肽表现出与IL-18结合蛋白(IL-18BP)的结合大幅降低。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽包含至少一个相对于野生型(WT)IL-18的突变。在一些实施方式中，WT IL-18是包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的人类IL-18。在一些实施方式中，WT IL-18是包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含选自由以下各项组成的组的至少一个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含选自由以下各项组成的组的至少一个突变：Y1H、Y1R、L5H、L5I、L5Y、K8Q、K8R、M51T、M51K、M51D、M51N、M51E、M51R、K53R、K53G、K53S、K53T、S55K、S55R、Q56E、Q56A、Q56R、Q56V、Q56G、Q56K、Q56L、P57L、P57G、P57A、P57K、G59T、G59A、M60K、M60Q、M60R、M60L、E77D、Q103E、Q103K、Q103P、Q103A、Q103R、S105R、S105D、S105K、S105N、S105A、D110H、D110K、D110N、D110Q、D110E、D110S、D110G、N111H、N111Y、N111D、N111R、N111S、N111G、M113V、M113R、M113T、M113K、V153I、V153T、V153A、N155K和N155H。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:34-59、73-91、191-193的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:31，IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、M50X、Y51X、K52X、S54X、E55X、V56X、R57X、G58X、L59X、R104X、N109X和L151X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:31，IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1H、N1Y、M50A、M50S、M50V、M50G、M50T、Y51R、K52V、K52S、K52T、K52G、K52A、S54R、S54K、S54G、S54N、E55R、E55H、E55N、E55D、E55G、V56L、V56M、V56R、V56A、V56S、V56Q、R57G、R57K、G58A、L59K、L59R、L59V、R104K、R104L、R104Q、R104S、N109D和L151V。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:60-72的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
在一个方面，本公开涉及包含编码IL-18变体多肽的核酸。
在一些实施方式中，组合物还包含一种或多种选自以下各项的药剂：(i)免疫检查点抑制剂；(ii)抑制从以下各项组成的组中选择的一种或多种蛋白质的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40和CD40；(iii)癌细胞调理剂；和(iv)靶向一种或多种选自以下各项的抗原的药剂：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(glypican 3)、结合素-4(nectin-4)、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
在一个方面，本公开涉及一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括向受试者施用包含IL-18变体多肽或者编码IL-18变体多肽的核酸的组合物。
在一些实施方式中，疾病或病症是癌症。在一些实施方式中，癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。在一些实施方式中，癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
在一些实施方式中，疾病或病症是代谢性疾病或病症。在一些实施方式中，疾病或病症是传染性疾病。
在一些实施方式中，方法包括向受试者施用IL-18变体多肽和至少一种其他药剂。在一些实施方式中，至少一种其他药剂包含免疫检查点抑制剂。在一些实施方式中，免疫检查点抑制剂是抑制以下各项的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40、或CD40，或它们的任何组合。在一些实施方式中，至少一种其他药剂包含癌细胞调理剂。在一些实施方式中，至少一种其他药剂靶向选自以下各项的一种或多种抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。在一些实施方式中，至少一种其他药剂缀合至IL-18变体多肽。在一些实施方式中，至少一种其他药剂是改变的T细胞或NK细胞。在一些实施方式中，至少一种其他药剂是溶瘤病毒。
在一个方面，本公开涉及一种包含IL-18结合蛋白(IL-18BP)抑制剂或IL-18BP拮抗剂的组合物，其中抑制剂或拮抗剂抑制IL-18BP中和内源性IL-18的能力。在一些实施方式中，抑制剂或拮抗剂包含选自以下各项的至少一种：化学化合物、多肽、肽、拟肽、抗体、核酶、小分子化合物和反义核酸分子。
在一些实施方式中，组合物包含IL-18变体多肽，其中IL-18变体多肽特异性结合至IL-18BP，并且其中IL-18变体多肽表现出与IL-18受体(IL-18R)的结合大幅降低。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽包含至少一个相对于野生型(WT)IL-18的突变。在一些实施方式中，WT IL-18是包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列的人类IL-18。在一些实施方式中，WT IL-18是包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18序列。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1D、Y1F、Y1H、Y1L、L5F、L5H、D17A、D17G、D17R、D17H、E31A、E31T、E31G、E31K、E31R、T34A、T34K、T34E、D35S、D35A、D35Y、S36N、S36K、S36R、D37P、D37A、D37R、D37H、D37L、D37V、D40Y、D40S、D40A、N41K、N41S、N41R、M51F、M51L、M51I、Q56H、M60L、M60F、M60I、Q103L、Q103I、H109A、H109P、H109D、M113L、M113I、M113F和R131S。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:92-125的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含突变D17X、E30X和Q103X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:30，IL-18变体多肽包含突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:31，IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、L5X、D17X、E30X、T33X、D34X、I35X、D36X、M50X、Q102X、R104、H108X、N109X、M111X、D129X和D130X。
在一些实施方式中，相对于SEQ ID NO:31，IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1Y、N1D、N1H、N1L、N1F、N1V、N1I、L5Y、L5H、D17Q、D17G、D17A、D17E、D17S、D17N、E30A、E30R、E30K、E30T、E30G、T33G、T33A、T33E、T33R、T33K、D34Y、D34S、D34A、I35T、I35K、I35R、D36V、D36A、D36G、D36H、D36P、D36R、D36L、M50F、M50L、Q102L、Q102I、R104E、R104A、R104P、R104G、R104Q、R104H、H108D、H108A、N109R、N109S、N109T、N109I、M111L、M111I、D129A、D129F、D129V、D129Y、D129S、D130E、D130T、D130G、D130N、D130R、D130S、D130Q和D130H。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:126-190的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
在一个方面，本公开涉及一种包含编码IL-18变体多肽的核酸的组合物。
在一个方面，组合物还包含选自以下各项的一种或多种药剂：(i)免疫检查点抑制剂；(ii)抑制从以下各项组成的组中选择的一种或多种蛋白质的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40和CD40；(iii)癌细胞调理剂；和(iv)靶向选自以下中一种或多种抗原的药剂：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
在一个方面，本公开涉及一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括向受试者施用一种包含IL-18结合蛋白(IL-18BP)抑制剂或IL-18BP拮抗剂的组合物。
在一些实施方式中，疾病或病症是癌症。在一些实施方式中，癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。在一些实施方式中，癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
在一些实施方式中，疾病或病症是代谢性疾病或病症。在一些实施方式中，疾病或病症是传染性疾病。
在一些实施方式中，方法包括向受试者施用除了IL-18BP抑制剂或IL-18BP拮抗剂之外的至少一种其他药剂。在一些实施方式中，至少一种其他药剂包含免疫检查点抑制剂。在一些实施方式中，所述免疫检查点抑制剂是抑制以下各项的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40、或CD40，或它们的任何组合。在一些实施方式中，至少一种其他药剂包含癌细胞调理剂。在一些实施方式中，至少一种其他药剂靶向选自以下各项的一种或多种抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。在一些实施方式中，抑制剂或拮抗剂是IL-18变体多肽，并且至少一种其他药剂缀合至IL-18变体多肽。在一些实施方式中，至少一种其他药剂是改变的T细胞或NK细胞。在一些实施方式中，至少一种其他药剂是溶瘤病毒。
附图说明
当结合附图阅读时，将更好地理解本发明的实施方式的以下详细描述。应当理解的是，本发明不限于附图所示实施方式的精确布置和手段。
图1A和图1B描述了示例实验的结果，表明IL-18途径是肿瘤免疫疗法的靶标。(图1A)在激活的和功能障碍的肿瘤T细胞程序中，IL-18途径(包括IL-18及其受体亚基)均被上调，如在CD8+TIL中的细胞因子和受体的RNAseq表达分析中所示。与原始T细胞相比，基因被赋予“激活”和“功能障碍”评分。黄色突出显示IL-18细胞因子、IL-18R1(Rα)和IL-18RAP(Rβ)。数据改编自Singer et al.(Singer,M.et al.,2016,Cell,166:1500-1511,e1509)。(图1B)IL-18受体亚基IL-18Rα和IL-18Rβ是与慢性抗原暴露相关的基因表达程序的一部分，如在使用LCMV(左；CD4)或VSV-OVA(右；CD8)感染后所看到的。数据来自ImmGen数据库。
图2A至图2C描绘了示例实验的结果，展示了IL-18BP具有“可溶性免疫检查点”的特征。(图2A)IL-18BP介导干扰素-γ(IFN-γ)驱动的IL-18负反馈，让人联想到免疫检查点PD-L1。描绘了IL-18/IFN-γ/IL-18BP反馈回路的示意图。黑色箭头表示刺激，红色箭头表示抑制。(图2B)如TCGA和Oncomine数据库中的数据所示，IL-18BP在胃癌和乳腺癌中被上调。(图2C)PD-1和IL-18BP的表达与大量乳腺癌和胃癌样品高度相关(来自TCGA数据库)。分别为R＝0.78和0.65。
图3A至图3C描述了示例实验的结果，展示了利用酵母展示技术工程化人类IL-18变体以独立于IL-18BP。(图3A)设计了一种结构指导的文库，用于随机化IL-18:IL-18BP接口上的残基，并将该文库引入酵母展示系统。使用磁性和荧光细胞分选方法，选择结合IL-18Rα的酵母克隆，并针对IL-18BP进行反选择。(图3B)定向进化以产生IL-18BP耐性IL-18变体的概要。蓝色文本表示正选择条件，红色文本表示反选择。(图3C)酵母展示的WT IL-18(左)或定向进化后的变体(右)的流式细胞仪分析。Y轴显示IL-18BP结合，x轴显示IL-18Rα结合。经过5轮定向进化后，与IL-18BP相比，其余克隆更偏好IL-18Rα。
图4描绘了示例实验的结果，展示了耐诱饵型人类IL-18(“DR-IL-18”，也称为“DR-18”)变体的序列的汇总。表格顶部显示了成熟形式的野生型人类IL-18中每个突变位置的位置和相应的残基。hC4至hE12代表经过定向进化选择后获得的序列。hCS1-hCS4是衍生自所选序列的共有序列。带阴影的残基代表观察到的五个最保守的突变。
图5A和图5B描给了示例实验的结果，展示了人类DR-IL-18变体的生物物理特征。(图5A)酵母展示的DR-IL-18变体hCS1-hCS4和A8能够以与WT人类IL-18相当的结合等温线结合hIL-18Rα(左)。相比之下，使用相同的变体和hIL-18BP观察到很少的结合(右)。(图5B)固定化生物素化的hIL-18BP与DR-IL-18变体之间的代表性表面等离子体共振传感图。重组hIL-18(左)以极高的亲和力结合IL-18BP，KD＝2.0pM，而hCS1(右)显示了极的衰减结合，具有更快得多的解离速率并且KD＝15.2nM。这些数据汇总于表6和表7中。
图6A和图6B描述了示例实验的结果，表明人类DR-IL-18变体不被IL-18BP抑制。(图6A)重组IL-18BP抑制生物素化的IL-18Rα与酵母展示的WT IL-18结合，但不影响DR-IL-18变体hCS1-4和A8(左)。相反，IL-18BP有效中和了先前所述的IL-18E42A、K89A和E42A/K89A(Kim et al.,2001,Proc.Natl.Acad.Sci.,98(6):3304-3309)(右)[Kim et al.的E42和K89分别是SEQ ID NO:30的E6和K53]。对于所有样品，生物素化的IL-18Rα保持固定浓度为100nM。(图6B)WT IL-18与hCS1、hCS3和hCS4以相当效价和功效刺激IL-18HEK-Blue报告子细胞(左)。野生型IL-18对重组IL-18BP在该测定法中的应用高度敏感(IC50＝3nM)，则至少在1μM的IL-18BP浓度下，重组IL-18BP也不能抑制hCS1和hCS3(右)。hIL-18保持在固定浓度5nM，并且hCS1和hCS3保持固定浓度2.5nM。
图7A至图7C描述了示例实验的结果，展示了使用酵母展示技术工程化额外的人类IL-18变体(第2版变体)以独立于IL-18BP。(图7A)版本2.0文库中随机化的人类IL-18中的位置的汇总。给出了每个位置的简并密码子和一组编码的氨基酸。(图7B)定向进化的概要，以产生2.0版IL-18BP耐性IL-18变体。蓝色文本表示正选择条件，红色文本表示反选择。(图7C)创建2.0版DR-IL-18变体的进展的流式细胞仪分析。同时使用250nM IL-18BP链霉亲和素-PE四聚体或100nM直接用Alexa Fluor 647标记的IL-18Rα对经过第1、4和6轮获得的酵母进行染色。Y轴显示IL-18BP结合，x轴显示IL-18Rα结合。经过6轮定向进化后，与IL-18BP相比，其余的克隆更偏好IL-18Rα。
图8描述了示例实验的结果，展示了2.0版耐诱饵型人类IL-18(DR-IL-18)变体的序列汇总。在表格的顶部示出了成熟形式的野生型人类IL-18中每个突变位置的位置以及相应的残基。带阴影的行表示在第5轮和第6轮中获得的循环序列变体。
图9描述了示例实验的结果，展示了2.0版人类DR-IL-18变体的生物物理特征。(图9A)酵母展示的2.0版DR-IL-18变体能够以与WT人类IL-18相当的结合等温线结合hIL-18Rα。(图9B)相比之下，使用相同的变体和hIL-18BP观察到很少的结合。(图9C)通过在一定温度范围内将酵母展示的变体加热15分钟，然后用hIL-18Rα染色来评估2.0版DR-IL-18变体的热稳定性。2.0版DR-IL-18变体比WT IL-18(Tm＝47.6C)和第一代共有序列(hCS1和hCS2分别为Tm＝50.9和40.2)更热稳定。(图9D)第二代DR-IL-18变体的受体结合特性及热稳定性的汇总。NBD＝未检测到结合。N.D.＝值未确定。
图10A至图10C描述了示例实验的结果，展示了使用酵母展示技术工程化鼠类IL-18变体以独立于IL-18BP。(图10A)定向进化的概要，以产生IL-18BP耐性鼠类IL-18变体。蓝色文本表示正选择条件，红色文本表示反选择。(图10B)在5轮定向进化后，酵母展示的鼠类IL-18变体的流式细胞仪分析。Y轴显示IL-18BP结合，x轴显示IL-18Rα结合。(图10C)耐诱饵型鼠类IL-18(DR-IL-18)变体的汇总。表格的顶部示出了成熟形式的野生型鼠类IL-18中每个突变位置的位置和相应的残基。mC1至mH3代表经过定向进化选择后获得的序列。mCS1至mCS2是衍生自所选序列的共有序列。带阴影的残基代表观察到的五个最保守的突变。
图11A和图11B描述了示例实验的结果，展示了鼠类DR-IL-18变体的生物物理特征。(图11A)酵母展示的DR-IL-18变体mA7、mB1、mC1、mE8、mCS1和mCS2能够以与WT鼠类IL-18相当的结合等温线结合mIL-18Rα(左)。相比之下，使用相同的变体和mIL-18BP观察到很少的结合(右)。(图11B)固定化生物素化的mIL-18BP和鼠类DR-IL-18变体之间的代表性表面等离子体共振传感图。重组mIL-18(左)以高亲和力结合mIL-18BP，KD＝0.8pM，而mCS2(右)显示结合力大幅降低，KD值大于10μM。表8和表9汇总了这些数据。
图12A至图12D描述了示例实验的结果，展示了施用到小鼠中的DR-IL-18的药效学。(图12A)研究设计示意图。向小鼠施用媒介物(PBS)、mIL-18(1mg/kg)或DR-IL-18变体mCS2(1mg/kg)，每天一次，共七剂(描绘为注射器)。在注射5小时后，在实验前两天以及注射后第0、3和6天，采集血样。(图12B)在第0天、第3天和第6天，对CD4、CD8、NK细胞和单核细胞进行外周血细胞计数。到第3天，IL-18和mCS2都将NK细胞和单核细胞扩增到相似的程度。对于每个时间点(天)，左柱是PBS，中柱是IL-18，并且右柱为mCS2。(图12C)CD69在外周CD4、CD8和NK细胞上的表达。CD4和CD8细胞上是mCS2而非IL-18刺激的CD69表达。IL-18和mCS2均增加了NK细胞上的CD69，但是在第6天很明显，与恢复为基线CD69水平的IL-18相比，mCS2处理导致持续的CD69表达。对于每个时间点(天)，左柱是PBS，中柱是IL-18，并且右柱是mCS2。(图12D)干扰素-γ(IFN-γ)、MIP-1b和G-CSF的血清细胞因子水平。与mIL-18处理相比，mCS2处理产生了更高水平的IFN-γ、MIP-1b和G-CSF。
图13描述了示例实验的结果，表明DR-IL-18治疗可降低小鼠身体脂肪成分。每三天测量一次接受0.01、0.1或1mg/kg DR-IL-18变体mCS2或1mg/kg WT mIL-18治疗的小鼠的身体脂肪和瘦体重成分。mCS2治疗使身体脂肪占总体重的百分比显着降低(顶图)。这表现为脂肪量减少或稳定(左图)，瘦体重的一致增加(右图)。媒介物治疗和mIL-18治疗的小鼠在相同的治疗期内表现出身体脂肪量增加和稳定的瘦体重。
图14A至14B描述了示例实验的结果，表明DR-IL-18在黑色素瘤模型中是一种有效的免疫治疗剂。(图14A)使用盐水(对照)、WT IL-18(0.32mg/kg)、DR-IL-18变体mCS2(0.32mg/kg)、抗PD1(8mg/kg)、IL-18+抗PD1或mCS2+抗PD-1每周两次治疗的携带Yummer1.7黑色素瘤肿瘤的小鼠的肿瘤生长蜘蛛图。(图14B)来自与(图11A)中同一组的生存曲线。在该模型中，mCS2作为单一疗法有效，并与抗PD1具有协同作用。
图15A和图15B描述了示例实验的结果，表明DR-IL-18在图14的黑色素瘤模型中的有效性取决于CD4和CD8淋巴细胞以及干扰素γ。(图15A)使用盐水(对照)、或单独的DR-IL-18变体mCS2(0.32mg/kg)、或DR-IL-18变体mCS2(0.32mg/kg)与针对CD8、CD4、干扰素γ或NK1.1的消耗抗体的组合治疗的携带Yummer1.7黑色素瘤肿瘤的肿瘤生长蜘蛛图。(图15B)来自与(图15A)中同一组的生存曲线。
图16描述了示例实验的结果，展示了DR-IL-18在MC38肿瘤模型中的剂量依赖性疗效。每三天使用PBS(对照)、1.0mg/kg WT IL-18、1.0mg/kg mCS2、0.1mg/kg mCS2或0.01mg/kg mCS2治疗的携带MC38结肠癌肿瘤的小鼠的肿瘤生长蜘蛛图。WT IL-18在1mg/kg时无效，而mCS2在0.1mg/kg时显示出部分疗效，并且在1.0mg/kg时显示出最大疗效。
图17描述了示例实验的结果，展示了MC38肿瘤模型中单独的DR-IL-18或其与免疫检查点抑制剂抗PD1的组合的疗效。显示了使用PBS(对照)、0.32mg/kg WT IL-18、0.32mg/kg DR-IL-18变体mCS2、5mg/kg抗PD1、抗PD1与WT IL-18的组合、或抗PD1与mCS2的组合治疗的携带MC38结肠癌肿瘤的小鼠的肿瘤生长蜘蛛图。所有药剂每周两次腹膜内施用，共6剂。
图18A和图18B描述了示例实验的结果，研究了DR-IL-18在携带MC38肿瘤的小鼠中的抗肿瘤机制。(图18A)每周两次共四剂，用盐水、WT IL-18或DR-IL-18变体mCS2治疗的小鼠的肿瘤免疫表型实验。DR-IL-18治疗导致每mg肿瘤的CD8和NK细胞数量增加(左上两图)，并且CD8和NK细胞上激活标记粒酶B和KLRG1的表达增加(右上两图)。与盐水治疗相比，DR-IL-18治疗并未改善CD8:Treg比率，而WT IL-18使该比率降低(less favorable)。然而，DR-IL-18治疗增加了CD8细胞与包括肿瘤相关巨噬细胞(TAM)以及单核细胞和粒细胞髓样来源的抑制细胞(mMDSC和gMDSC)在内的抑制性骨髓群的比率。(图18B)在第4剂治疗24小时后进行的与(图18A)的相同小鼠的血清Luminex细胞因子测量。与WT IL-18治疗相比，DR-IL-18显示出次级细胞因子释放曲线发生了巨大变化，将干扰素-γ、IL-7和IL-15水平显著地提高了超过100倍。
图19A至图19C描述了示例实验的结果，展示了DR-IL-18有效于治疗通过丧失I类表面MHC表达使免疫检查点抑制剂难治的肿瘤的能力。(图19A)使用盐水、抗PD1+抗CTLA4、DR-IL-18变体mCS2、或mCS2与用抗NK1.1抗体耗尽NK细胞治疗的携带B2m缺陷型Yummer1.7肿瘤的小鼠的肿瘤生长蜘蛛图。DR-IL-18在肿瘤生长和存活方面显示出强大的功效(图19B)，在甚至完全耐受抗CTLA4+抗PD1的联合治疗的这一模型中，治疗了接受治疗的小鼠的60％。由于抗NK1.1的施用消除了mCS2的治疗作用，因此该功效是NK细胞依赖性的。(图19C)从B2m缺陷型Yummer1.7中分离出的NK细胞功能异常并且显示增殖减少(Ki67染色)和功能减弱(干扰素-γ分泌)。然而，DR-IL-18治疗逆转了此表型，从而实现强劲的增殖和细胞因子分泌。
图20A至图20C描述了示例实验，使用酵母展示技术展示了人类IL-18变体作为IL-18BP拮抗剂(或“诱饵到诱饵”，D2D)的工程化。这些变体结合IL-18BP但不发信号，从而拮抗IL-18BP对内源性IL-18的作用。(图20A)D2D文库中随机化的人类IL-18的位置汇总。给出了每个位置的简并密码子和一组编码的氨基酸。(图20B)定向进化的概要，以产生结合并中和IL-18BP，但不通过IL-18R发信号的D2D IL-18变体。蓝色文本表示肯定的选择条件，红色文本表示反选择。(图20C)创建D2D hIL-18变体的进展的流式细胞仪分析。使用1nM小鼠IL-18BP(左图)、1nM人类IL-18BP(中图)或1μM IL18Rα加1μM IL18Rβ对1-4轮后获得的酵母进行染色。在选择的各轮中，选择的变体显示出增强的IL-18BP结合而没有增加IL18Rα或IL18Rβ结合。
图21描述了示例实验的结果，展示了D2D人类IL-18变体的序列的汇总。表格顶部显示了成熟形式的野生型人类IL-18中每个突变位置的位置和相应的残基。
图22A至图22C描述了示例实验的结果，展示了人类诱饵到诱饵(D2D)IL-28变体的生物物理特性。(图22A)酵母展示的D2D IL-8变体5-B02、5-E08、5-F10、5-F02、5-F01、hD2D-CS1、hD2D-CS2和hD2D-CS3能够以与WT人类IL-18相当的结合等温线结合hIL-18RBP。(图22b)相比之下，使用相同的变体和hIL-18Rα观察到很少的结合。(图11C)D2D IL-18变体的受体结合特性的汇总。NBD＝未检测到结合。
图23描述了示例实验的结果，展示了D2D鼠类IL-18变体的序列的汇总。表格顶部示出了成熟形式的野生型鼠类IL-18中每个突变位置的位置和相应的残基。
图24描述了使用表面等离子体共振(SPR)对第二代DR-IL-18变体与IL-18Ra和IL-18BP结合的生物物理亲和力测量(传感图)的结果。顶行：所示IL-18变体(可溶性分析物)对hIL-18Ra(固定配体)的代表性传感图。底行：所示IL-18变体对人类(hIL-18BP)的代表性传感图。X轴是时间(秒)，并且y轴是响单位(RU)。曲线是不同浓度(从1nM开始的2倍稀释度)随时间变化的观察数据，叠加了假设1:1朗缪尔结合模型的最佳拟合曲线。
图25A和图25B描述了展示DR-IL-18对CT26结直肠肿瘤模型的疗效的数据。皮下植入250,000个CT26细胞并且在第7天一旦肿瘤平均达到～60mm3即开始治疗。WT IL-18和mCS2以0.32mg/kg进行施用，每周两次，总共5剂。以相同的时间表以10mg/kg给予抗PD1。(A)蜘蛛图的叠加，盐水(PBS)治疗的动物的肿瘤生长显示为黑线(圆圈)，WT IL-18为蓝线(方形)且DR-IL-18(mCS2)为粉线(三角形)。在动物子集中，仅是用DR-IL-18而非WT IL-18进行的治疗导致了肿瘤生长抑制和肿瘤清除。(B)使用抗PD-1、WT IL-18和DR-IL-18(mCS2)治疗的小鼠的存活曲线。完全响应的数字显示在括号中。DR-IL-18而非WT IL-18在40％小鼠中导致了延长的生存期和肿瘤清除，相对于检查点抑制剂抗PD-1，得到了改善。
图26A和图26B描述了展示DR-IL-18在4T1乳腺癌模型和B16-F10黑色素瘤模型中的功效的数据。(A)移植到BALB/C小鼠中的4T1肿瘤在用盐水(PBS；黑色)、WT IL-18(蓝色)或DR-IL-18变体CS2(粉色)治疗后的肿瘤生长曲线。(B)移植到C57BL/6小鼠中的B16-F10肿瘤在用盐水(PBS；黑色)、WT IL-18(蓝色)或DR-IL-18变体CS2(粉色)治疗后的肿瘤生长曲线。在这两种模型中，只有DR-IL-18而非WT IL-18导致了肿瘤生长抑制。在肿瘤超过平均体积50mm3之后开始治疗，如标有“t”的方框所示。
图27A和图27B描述了扩展图19A至图19C的数据的数据。描述了展示DR-IL-18在治疗对免疫检查点抑制剂耐受的另外的MHC I类缺陷型肿瘤模型中的疗效的数据。(A)如为B2m缺陷型YUMMER细胞所描述的，使用CRISPR/Cas9介导的缺失制备B2m缺陷型MC38细胞。皮下植入B2m-/-MC38细胞并且在第7天一旦肿瘤达到平均～65mm3，即开始治疗。mCS2以0.32mg/kg施用，一周两次，共5剂。以相同的时间表，以8mg/kg施用抗PD1和抗CTLA4。(B)RMA/S是RMA淋巴瘤系的变体，其在Tapasin中包含自发突变。其结果是抗原加载缺陷，并因此降低了MHC I类表面表达。其与C57BL/6同系并且是免疫检查点抑制剂难治的。小鼠皮下植入1,000,000个RMA/S细胞并且在第7天开始治疗。mCS2以0.32mg/kg施用，每周两次。以相同的时间表，以8mg/kg施用抗PD1。在两项研究中，仅使用DR-18变体mCS2的治疗以瘤生长抑制(B2m-/-MC38)或肿瘤清除(RMA/S)表现出抗肿瘤功效。
图28描述了展示DR-IL-18增强抗肿瘤抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的功效的数据。离体细胞毒性研究使用CFSE标记的Raji(B细胞淋巴瘤)细胞和分离的人类外周血单核细胞(PBMC)。在1:10的效应物:靶(E:T)比率下将PBMC和标记的Raji细胞一起温育25小时。如所示的，将人类DR-IL-18变体hCS-1(1uM)、利妥昔单抗(10ug/mL)或者两药剂的组合施用于所述样品。通过流式细胞仪测量细胞毒性，并计算为变为DAPI阳性的CFSE细胞的比例。DR-18作为单一药剂可刺激明显的肿瘤细胞杀伤，并且显著增强了治疗性抗体利妥昔单抗的杀伤力。通过双向ANOVA与Tukey校正进行多次比较，*p<0.05。
图29A和图29B描述了展示DR-18变体mCS2用于治疗病毒感染的抗病毒功效的数据(例如在这种情况下，治疗全身性牛痘病毒感染)。(A)实验设计方案。使C57BL/6小鼠腹腔内(IP)感染106PFU牛痘病毒(VACV)并且施用1mg/kg WT mIL-18或mCS2 IP。感染后第3天，处死小鼠并通过RT-PCR测定血液和卵巢中的病毒滴度。(B)感染后第3天，对治疗的小鼠的卵巢和血液中的VACV病毒拷贝进行定量。使用CS2的治疗显示病毒滴度显著降低，而WT IL-18无效。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
图30A描述了展示第二代人类DR-IL-18变体具有活性的数据。(图30A)WT IL-18以及h6-12、h6-27、h6-29和h6-31刺激IL-18HEK-Blue报告子细胞。与WT hIL-18相比，h6-12、h6-27和h6-29显示出增强的效力，而h6-31与WT hIL-18具有同等效力。因此，所述数据表明，所有测试的第二代人类DR-IL-18变体均通过IL-18R活跃地进行信号传导。
具体实施方式
本发明涉及诱导或增强IL-18信号传导的IL-18的变体。在一方面，本发明涉及IL-18的变体，其可以结合至IL-18受体(IL-18R)，但不会结合至IL-18结合蛋白(IL-18BP)，从而提供IL-18信号传导活性，而不能被IL-18BP抑制。在一方面，本发明涉及IL-18的变体，其结合至IL-18BP，由此减少或阻止IL-18BP结合并抑制内源性IL-18，并由此提供IL-18信号传导活性。因此，本发明提供了即使在IL-18BP存在下仍提供IL-18信号传导活性的组合物和方法。
在多个实施方式中，本发明是一种IL-18变体多肽或其片段，其特异性结合至IL-18R并且显示出与IL-18BP的结合大幅降低。在一些实施方式中，一种IL-18变体多肽或其片段，其与IL-18R结合，但基本不与IL-18BP结合，可用于提供不受的IL-18BP存在和活性抑制的IL-18信号传导活性。在多个实施方式中，本发明涉及IL-18变体多肽或其片段，其特异性结合至IL-18BP并减少或防止IL-18BP抑制内源性IL-18。在一些实施方式中，一种IL-18变体多肽或其片段，其结合至IL-18BP，有用于抑制IL-18BP活性，由此诱导、增强或促进IL-18信号传导活性。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽可用于治疗和预防疾病或病症。在多个实施方式中，疾病或病症是癌症或传染性疾病，如编码IL-18BP直系同源物的痘病毒、代谢性疾病或病症(包括肥胖与糖尿病)、或黄斑变性(例如，湿性黄斑变性，例如，与年龄相关的湿性黄斑变性，例如，IL-18变体可用作抗血管生成剂–作为示例，在某些情况下，受试者IL-18变体多肽可以减弱脉络膜新生血管形成)。因此，在一些实施方式中，本发明是一种包含至少一种IL-18变体多肽或其片段的组合物。在其他实施方式中，本发明是一种施用至少一种IL-18变体多肽或其片段以治疗或预防疾病或病症的方法，疾病或病症如但不限于癌症、或传染性疾病、代谢性疾病或病症、或黄斑变性(例如湿性黄斑变性，如与年龄有关的湿性黄斑变性)。
在多个实施方式中，IL-18变体多肽包含相对于野生型(WT)IL-18多肽的突变。在一些实施方式中，WT IL-18多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在其他实施方式中，WTIL-18多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，本发明的IL-18变体多肽表现出降低的对IL-18BP的结合亲和力。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，本发明的IL-18变体多肽表现出提高的对IL-18BP的结合亲和力。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，本发明的IL-18变体多肽表现出相似的对IL-18BP的结合亲和力。
在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，IL-18变体多肽表现出提高的对IL-18R的结合亲和力。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，IL-18变体多肽表现出相似的对IL-18R的结合亲和力。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，IL-18变体多肽表现出降低的对IL-18R的结合亲和力。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽是哺乳动物IL-18变体多肽。在一些实施方式中，IL-18变体多肽是人类IL-18变体多肽。在一些实施方式中，IL-18变体多肽是鼠类IL-18变体多肽。
在多个实施方式中，本发明的组合物和方法包括用于治疗和预防疾病和病症的组合物和方法，疾病和病症如为癌症、传染性疾病以及代谢性疾病和病症。在一些实施方式中，一种方法包括向有需求的受试者施用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物。在一些实施方式中，一种方法包括向有需要的受试者施用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物，和向受试者施用一种包含另外的药剂的组合物。
在一个此种实施方式中，另外的药剂包含免疫治疗剂，该免疫治疗剂包含从包括但不限于以下各项的组中选择的至少一种：改变的T细胞、嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)、装甲的(armored)CAR-T细胞、病毒、抗原、疫苗、抗体、免疫检查点抑制剂、小分子、化学治疗剂和干细胞。在一些实施方式中，在被细菌、病毒或其他病原体感染之前、期间或之后，在方法中使用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物以增加免疫系统活性。在一些实施方式中，在方法中使用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物，以在体外、体内或离体增加免疫细胞的数量和/或活性，如T细胞、NK细胞和/或骨髓细胞的数量和/或活性。
定义
除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同含义。在描述和要求保护本发明时，将使用以下术语。
还应理解的是，本文使用的术语仅出于描述特定实施方式的目的，而无意于限制。
冠词“一(a)”和“一(an)”在本文中用来指代该冠词的语法对象的一个或多个(即，至少一个)。举例来说，“一个元素”是指一个元素或多于一个元素。
当涉及如量、持续时间之类的可测量值时，本文所使用的“约”意指包括指定值±40％或±20％或±10％、±5％、±1％或±0.1％的非限制性变化，因为此种变化是适当的。
在生物、组织、细胞或其组成部分的背景下使用术语“异常”时，是指在至少一种可观察或可检测的特性(例如年龄、治疗、一天中的时间等)方面与表现出“正常”(预期)相应特性的生物、组织、细胞或其组成部分不同的那些生物、组织、细胞或其组成部分。对于一种细胞或组织类型正常或预期的特征，对于另一种细胞或组织类型而言可能异常。
如本文所用，术语“抗体”是指能够与抗原上的特定表位特异性结合的免疫球蛋白分子。抗体可以是天然来源或重组来源的完整免疫球蛋白，并且可以是完整免疫球蛋白的免疫反应性部分。本发明中的抗体可以以多种形式存在，包括例如多克隆抗体、单克隆抗体、细胞内抗体(“胞内抗体”)、Fv、Fab和F(ab)2以及单链抗体(scFv)、重链抗体(例如骆驼科抗体)、合成抗体、嵌合抗体和人源化抗体(Harlow et al.,1999,Using Antibodies:ALaboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory Press,NY；Harlow et al.,1989,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor,New York；Houston et al.,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；Bird et al.,1988,Science 242:423-426)。
如本文所用，“抗体重链”是指在天然存在构象的所有抗体分子中存在的两类多肽链中的较大者。
如本文所用，“抗体轻链”是指在天然存在构象的所有抗体分子中存在的两在多肽链中的较小者。κ和λ轻链是指两种主要抗体轻链同种型。
本文所用的术语“合成抗体”，是指使用重组DNA技术产生的抗体，例如由本文所描述的噬菌体表达的抗体。该术语还应解释为是指已通过合成编码抗体的DNA分子并且该DNA分子表达抗体蛋白而产生的抗体、或指定该抗体的氨基酸序列，其中DNA或氨基酸序列是使用可获得的且是本领域众所周知的合成DNA或氨基酸技术获得的。
如本文所用，“免疫测定”是指使用能够特异性结合靶分子的抗体以检测和定量该靶分子的任何结合测定。
如本文关于IL-18变体多肽所用的术语“特异性结合”是指识别并结合特定受体(例如IL-18R或IL-18BP)的IL-18变体多肽。在一些情况下，IL-18变体多肽与IL-18BP的结合大幅降低。例如，特异性结合来自一个物种的受体的IL-18变体多肽一定要可以结合至来自一个或多个物种的所述受体。但是，这种跨物种反应性本身并不会改变IL-18变体多肽的特异性分类。在另一示例中，特异性地结合受体的IL-18变体多肽也可以结合受体的不同等位基因形式。但是，这种交叉反应性本身并不会改变IL-18变体多肽的特异性分类。在一些情况下，术语“特异性结合”或“特异性地结合”可用于指抗体、蛋白质或肽与第二化学物种的相互作用，表示该相互作用取决于化学物种上存在的特定结构(例如，抗原决定簇或表位)；例如，IL-18变体多肽识别并结合特定的蛋白质结构，而不是结合一般的蛋白质。
如本文所用，术语“施用器”是指用于向受试者施用本发明的组合物的任何装置，包括但不限于皮下注射器、移液器、离子电渗疗法装置、贴片等。
如本文所用，“癌症”是指细胞的异常生长或分裂。通常，癌细胞的生长和/或寿命超过其周围正常细胞和组织的生长和/或寿命，并且与之不协调。癌症可以是良性、恶性前或恶性。癌症发生在各种细胞和组织中，包括口腔(例如嘴、舌头、咽等)、消化系统(例如食道、胃、小肠、结肠、直肠、肝脏、胆管、胆囊、胰腺等)、呼吸系统(例如喉、肺、支气管等)、骨头、关节、皮肤(例如基底细胞、鳞状细胞、脑膜瘤等)、乳腺、生殖系统(例如子宫、卵巢、前列腺、睾丸等)、泌尿系统(例如膀胱、肾脏、输尿管等)、眼睛、神经系统(例如脑等)、内分泌系统(例如甲状腺等)和造血系统(例如淋巴瘤、骨髓瘤、白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、急性髓细胞性白血病、慢性髓细胞性白血病等)。
如本文所用，术语“编码序列”是指核酸或其补体或它们的一部分的序列，其可以被转录和/或翻译以产生mRNA和/或多肽或其片段。编码序列包括基因组DNA或未成熟的初级RNA转录本中的外显子，它们通过细胞的生化机制连接在一起以提供成熟的mRNA。反义链是这种核酸的互补序列，并且可以从中推导出编码序列。相反，如本文所用，术语“非编码序列”是指在体内不翻译成氨基酸或其中tRNA不相互作用以放置或试图放置氨基酸的核酸或其被体或其一部分的序列。非编码序列包括基因组DNA或未成熟的初级RNA转录物中的内含子序列，以及与基因相关的序列，例如启动子、增强子、沉默子等。
如本文所用，术语“互补的”或“互补性”用于指通过碱基配对规则相关的多核苷酸(即核苷酸序列)。例如，序列“A-G-T”与序列“T-C-A”互补。互补性可以是“部分的”，其中仅一些核酸的碱基根据碱基配对规则匹配。或者，核酸之间可以存在“完整”或“完全”互补性。核酸链之间的互补程度对核酸链之间的杂交效率和强度有重要影响。这在扩增反应以及依赖于核酸之间结合的检测方法中特别重要。
“疾病”是动物的健康状态，其中动物无法维持体内稳态，并且如果疾病没有得到改善，则动物的健康状况将继续恶化。相反，动物中的“病症”是一种健康状态，其中动物能够维持体内稳态，但与没有该病症的情况相比，动物的健康状态较差。如果不治疗，病症不一定会导致动物健康状态进一步下降。
如本文所用，“有效量”是指提供治疗、预防或其他所需益处的量。
“编码”是指多核苷酸(如基因、cDNA或mRNA)中的特定核苷酸序列在生物过程中用作合成具有确定的核苷酸序列(即rRNA、tRNA和mRNA)或确定的氨基酸序列的其他聚合物和大分子的模板的固有性质以及由此产生的生物学性质。因此，如果对应于基因的mRNA的转录和翻译在细胞或其他生物系统中产生蛋白质，则该基因编码所述蛋白质。用作基因或cDNA的转录模板的编码链(其核苷酸序列与mRNA序列相同并且通常提供在序列表中)和非编码链均可以称为编码该基因或cDNA的蛋白质或其他产物。
如本文所用，应用于核酸时的“片段”是指较大核酸的子序列。核酸的“片段”的长度可以是至少约15个核苷酸；例如，至少约50个核苷酸至约100个核苷酸；至少约100至约500个核苷酸；至少约500至约1000个核苷酸；至少约1000个核苷酸至约1500个核苷酸；约1500个核苷酸至约2500个核苷酸；或约2500个核苷酸(以及它们之间的任何整数值)。如本文所用，应用于蛋白质、多肽或肽的术语“片段”是指较大蛋白质、多肽或肽的子序列。蛋白质、多肽或肽的“片段”的长度可以为至少约5个氨基酸；例如，长度为至少约10个氨基酸；长度为至少约20个氨基酸；长度为至少约50个氨基酸；长度为至少约100个氨基酸；长度为至少约200个氨基酸；或长度为至少约300个氨基酸(及它们之间的任何整数值)。
术语“基因”是指包括生产多肽、前体或RNA(例如mRNA)所需的编码序列在内的核酸(例如DNA)序列。多肽可以由全长编码序列或所述编码序列的任何部分编码，只要保留了所述全长或片段的所需活性或功能性质(例如酶活性、受体结合、信号传导、免疫原性等)即可。该术语还涵盖结构基因的编码区、以及位于5'和3'末端的任一端与所述编码区相邻距离为约2kb或更长以便该基因对应于全长mRNA长度的序列、和影响基因的转录特性的5'调控序列。位于编码区5'并存在于mRNA上的序列称为5'-非翻译序列。5'-非翻译序列通常包含调控序列。位于编码区3'或下游并存在于mRNA上的序列称为3'-非翻译序列。术语“基因”涵盖cDNA和基因的基因组形式。基因的基因组形式或克隆包含被非编码序列打断的编码区，这些非编码序列称为“内含子”或“间插区”或“间插序列”。内含子是转录成核RNA(hnRNA)的基因片段；内含子可能包含调控元件，例如增强子。内含子被从核转录本或初级转录本中去除或“剪接”；因此，信使RNA(mRNA)转录本中没有内含子。在翻译过程中，mRNA的功能是确定新生多肽的氨基酸的序列或顺序。
如本文在两个或更多个核酸或多肽序列的背景下使用的“同源”、“相同”或“同一性”，是指所述序列在指定区域上具有指定百分比的相同残基。所述百分比可以通过以下方式计算：优化比对两个序列，在指定区域上比较所述两个序列，确定两个序列中出现相同残基的位置数，以产生匹配位置的数量，将匹配位置的数量除以指定区域中的总位置数量，并且将所得结果乘以100，得到序列同一性百分比。在两个序列的长度不同或者比对产生了一个或多个交错末端并且所指定的比较区域仅包括总单个序列的情况下，所述单个序列的残基包括计算的在分母中而不包括在分子中。比较DNA和RNA时，胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)可以认为是等效的。可以手动或者通过使用埏机序列算法(如BLAST或BLAST 2.0)来执行同一性计算。
如本文所用，术语“指导材料”包括出版物、记录、图表或任何其他表达介质，可用于传达试剂盒中本发明的核酸、肽、多肽和/或化合物用于识别或减轻或治疗本文所描述的各种疾病或病症的有用性。可选地或可替代地，指导材料可以描述一种或多种识别或减轻受试者细胞或组织中的疾病或病症的方法。试剂盒的指导材料可以例如贴于在装有本发明的核酸、多肽和/或化合物的容器上，或者与含有所述核酸、多肽和/或化合物的容器一起运输。或者，可以将指导材料与容器分开运输，以使接收者协同使用指导材料和化合物。
“分离的”是指改变了自然状态或从自然状态中取出。例如，活体动物中天然存在的核酸或多肽不是“分离的”，但与自然状态的共存物质部分或完全分离的同一核酸或多肽是“分离的”。分离的核酸或蛋白质可以以基本上纯化的形式存在，或者可以存在于非原生环境中，例如存在于宿主细胞中。
“分离的核酸”是指已经从在天然存在状态下将其侧翼于侧面的序列中分离出来的核酸节段或片段，例如，已经从通常与DNA片段相邻的序列(例如，天然存在该片段的基因组中与该片段相邻的序列)中取出的该DNA片段。该术语也适用于基本上已经从天然伴随核酸的其他成分(在细胞中自然伴随的RNA或DNA或蛋白质)中纯化得到的核酸。因此，该术语包括例如并入到载体、自主复制的质粒或病毒、原核生物或真核生物的基因组DNA中的重组DNA，或者作为独立于其他序列的单独分子(例如作为cDNA或者通过PCR或限制酶消化产生的基因组或cDNA片段)存在的重组DNA。其还包括作为编码另外的多肽序列的杂交基因的一部分的重组DNA。
当在本文中使用时，术语“标记”是指可检测的化合物或组成，其直接或间接缀合至探针以产生“标记的”探针。标记本身可以是可检测的(例如放射性同位素标记或荧光标记)，或者在酶标记的情况下，可以催化可检测的底物化合物或组成的化学变化(例如亲和素-生物素)。在某些情况下，可以标记引物以检测PCR产物。
如本文所用，术语“调节”是指与在没有治疗或化合物的情况下受试者中的mRNA、多肽或响应的活性和/或水平相比，和/或与因其他方式相同但未经治疗受试者中的mRNA、多肽或响应的活性和/或水平相比，介导受试者中mRNA、多肽或响应的活性和/或水平的提高或下降。该术语涵盖激活、抑制和/或以其他方式影响天然信号或响应，由此在受试者(例如人类)中介导有益的治疗、预防或其他所需的向应。
如本文中使用的“突变”、“突变体”或“变体”是指相对于参考序列的核酸或多肽序列的改变(参考序列可以是天然存在的正常或“野生型”序列)，并且包括易位、缺失、插入和取代/点突变。本文中使用的“突变体”或“变体”是指包含突变的核酸或蛋白质。
“核酸”是指多核苷酸并且包括多核糖核苷酸和多脱氧核糖核苷酸。根据本发明的核酸可以包括嘧啶和嘌呤碱基的任何聚合物或低聚物，所述嘧啶和嘌呤碱基优选分别为胞嘧啶、胸腺嘧啶和尿嘧啶以及腺嘌呤和鸟嘌呤。(参见Albert L.Lehninger,Principles ofBiochemistry,at 793-800(Worth Pub.1982)，出于所有目的，其全部内容并入本文)。事实上，本发明考虑了任何脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸或肽核酸成分以及它们的任何化学变体，如这些碱基的甲基化、羟甲基化或糖基化形式等。聚合物或低聚物的组成可以是异质的或均质的，并且可以分离自天然来源，或者可以人工或合成地生产。另外，核酸可以是DNA或RNA或其混合物，并且可以以单链或双链形式永久或过渡存在，包括同双链、异双链和杂交态。
“寡核苷酸”或“多核苷酸”是指核酸或与多核苷酸特异性杂交的化合物，所述核酸的长度为至少2，优选至少8、15或25个核苷酸，但可以长达50、100、1000或5000个核苷酸。多核苷酸包括可以从天然来源分离、重组生产或人工合成的脱氧核糖核酸(DNA)或核糖核酸(RNA)或其模拟物的序列。本发明的多核苷酸的另一个实例可以是肽核酸(PNA)。(参见美国专利No.6,156,501，通过引用将其全部内容并入本文)。本发明还包括其中存在非传统碱基配对的情况，例如Hoogsteen碱基配对，其已经在某些tRNA分子中被识别并假定以三螺旋存在。在本公开中，“多核苷酸”和“寡核苷酸”可互换使用。应当理解的是，当核苷酸序列在本文中由DNA序列(例如A、T、G和C)表示时，这也包括相应的RNA序列(例如A、U、G、C)，其中“U”替换“T”。
术语“患者”、“受试者”、“个体”等在本文中可互换使用并且是指适于本文方法的任何动物或其细胞，所述细胞无论是体内、体外还是原位。在某些非限制性实施方式中，所述患者、受试者、或个体是人类。
如本文所用，术语“肽”、“多肽”和“蛋白质”可互换使用，并且是指由通过肽键共价连接的氨基酸残基组成的化合物。蛋白质或肽必须至少包含两个氨基酸，对可以构成蛋白质或肽序列的氨基酸的最大数量没有限制。多肽包括包含通过肽键相互连接的两个或多个氨基酸的任何肽或蛋白质。如本文所用，该术语指代了短链和更长链，例如，短链在本领域中也称为肽、寡肽和低聚物，而更长链在本领域中通常称为蛋白质，其类型很多。“多肽”包括例如生物活性片段、基本上同源的多肽、寡肽、同二聚体、异二聚体、多肽的变体、修饰的多肽、衍生物、类似物、融合蛋白等。多肽包括天然肽、重组肽、合成肽、突变体多肽、变体多肽或它们的组合。
如本文所用，“多核苷酸”包括cDNA、RNA、DNA/RNA杂交物、反义RNA、核酶、基因组DNA、合成形式、和混合聚合物、有义链和反义链，并且可以进行化学或生物化学修饰以显示出非天然或衍生的、合成的或半合成的核苷酸碱基。另外，考虑了野生型或合成基因的改变，包括但不限于一个或多个核苷酸的缺失、插入、取代，或者融合到其他多核苷酸序列。
如本文使用的术语“预防”疾病或病症是指减少要由受试者经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的严重程度或频率。
如本文所用，“样品”或“生物样品”是指从受试者分离的生物材料。生物样品可以含有适合于检测受试者的生理或病理过程的mRNA、多肽或其他标志物的任何生物材料，并且可以包括从个体获得的流体、组织、细胞和/或非细胞材料。
如本文所用，“基本上纯化”是指基本上不含其他组分。例如，基本上纯化的多肽是已从其天然存在的状态通常与其相关的其他成分中分离出来的多肽。
如本文使用，术语“治疗”或“治疗方案”是指为预防、治疗或改变疾病或病症而采取的那些活动，例如使用药理、外科、饮食和/或其他技术来减少或消除疾病或病症的至少一种体征或症状的治疗过程。治疗方案可包括处方剂量的一种或多种化合物或手术。治疗通常是有益的，可以减少或消除疾病或病症状态的至少一种体征或症状，但是在某些情况下，治疗的效果会具有不良或副作用。治疗的效果也会受到受试者的生理状态的影响，例如年龄、性别、遗传、体重、其他疾病状况等。
术语“治疗有效量”是指会引起研究人员、兽医、医生或其他临床医生正在寻求的细胞、组织、器官、系统或受试者的生物学、生理学、临床或医学响应的主题化合物或组合物的量。术语“治疗有效量”包括在施用时足以预防或在某种程度上治疗正被治疗的疾病或瘂的一种或多种体征或症状的化合物或组合物的量。治疗有效量可根据化合物或组合物、疾病及其严重程度和待治疗受试者的年龄、体重等而变化。
如本文使用的术语“治疗”疾病或病症是指降低受试者经历的疾病或病症的至少一种体征或症状的频率或严重性。本文所用的术语“治疗(treatment)”、“治疗(treating)”、“治疗(treat)”等通常是指获得所需的药理和/或生理效果。就完全或部分预防疾病或其症状而言，该效果可以是预防性的，和/或就疾病和/或可归因于疾病的不良影响的部分或完全稳定或治愈而言，该效果可以是治疗性的。术语“治疗”涵盖哺乳动物(特别是人类)中疾病的任何治疗，并且包括：(a)预防疾病和/或症状在可能易患该疾病或症状但尚未被诊断为患有该疾病或症状的受试者中发生；(b)抑制疾病和/或症状，例如减慢或阻止其发展(例如阻止肿瘤的生长，减慢肿瘤的生长速度，阻止癌细胞的增殖速度等)；或(c)减轻疾病症状，即引起疾病和/或症状消退(例如引起肿瘤大小的减小，减少存在的癌细胞的数量等)。需要治疗的患者包括已经遭受的那些(例如患有癌症的患者，患有感染的患者，代谢异常的患者，黄斑变性的患者等)以及需要预防的那些(例如对癌症易感性增加的患者，感染可能性增加的患者，怀疑患有癌症的患者，怀疑有感染的患者，对代谢性疾病的易感性增加的患者，黄斑变性易感性增加的患者等)。
如本文所用，术语“野生型”是指从天然来源分离的基因或基因产物。野生型基因是在人群中最常观察到的基因，因此被任意指定为该基因的“正常”或“野生型”形式。相反，术语“修饰的”、“变体”或“突变体”是指与野生型基因或基因产物相比，具有序列和/或功能特性修饰(即改变的特性)的基因或基因产物。
范围：在整个本公开中，可以以范围格式来呈现本发明的各个方面。应该理解的是，范围格式的描述仅是为了方便和简洁，而不应被解释为对本发明范围的硬性限制。因此，应该将范围的描述视为已明确公开了该范围内的所有可能的子范围以及各个数值。例如，如1至6范围的描述应当视为已经具体地公开了如1至3、1至4、1至5、2至4、2至6、3至6等子范围以及该范围内的各个数字，例如1、2、2.7、3、4、5、5.3和6。无论范围的广度如何，这都适用。
描述
在一些实施方式中，本发明的组合物和方法包括IL-18活性的活化剂，例如通过IL-18R的信号传导活性。在一些实施方式中，所述活化剂是IL-18变体多肽。在一些实施方式中，所述活化剂是能够结合并通过IL-18R信号传导的分子。在一些实施方式中，所述活化剂是抑制IL-18BP从而促进IL-18信号传导的分子。
在一些实施方式中，本发明是一种IL-18变体多肽或其片段，其特异性结合至IL-18R并且表现出大幅降低的结合IL-18BP。在一些实施方式中，结合IL-18R但基本上不结合IL-18BP的IL-18变体多肽或其片段有用于提供不受IL-18BP的存在和活性抑制的IL-18信号传导活性。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽耐受或独立于IL-18BP多肽的负调控。在一些实施方式中，IL-18BP多肽基本上不能与IL-18变体多肽结合。与WT IL-18多肽相比，本发明的IL-18变体多肽对IL-18BP的结合亲和力降低。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，IL-18变体多肽对IL-18R的结合亲和力提高。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，IL-18变体多肽表现出类似的对IL-18R的结合亲和力。在一些实施方式中，与WT IL-18多肽相比，IL-18变体多肽对IL-18R的结合亲和力降低。
在一些实施方式中，本发明提供了一种包含IL-18BP的抑制剂的组合物，其中抑制剂抑制或降低IL-18BP表达、活性或两者。IL-18BP的示例性抵制剂包括但不限于化学化合物、蛋白质、拟肽、抗体、核酶和反义核酸分子。在某些实施方式中，IL-18BP的抑制剂包括结合IL-18BP从而减少或阻止IL-18BP抑制IL-18和IL-18信号传导的IL-18变体。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽有用于治疗或预防疾病或病症。在多个实施方式中，疾病或病症是癌症或者代谢性疾病或病症，包括肥胖与糖尿病(例如主题方法会导致身体脂肪减少)。因此，在一些实施方式中，本发明是一种包含至少一种IL-18变体多肽或其片段的组合物。在其他实施方式中，本发明是一种施用至少一种IL-18变体多肽或其片段以治疗或预防疾病或病症(如但不限于癌症或者代谢性疾病或病症)的方法。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.000000000001％至约95％。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约95％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约90％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约85％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约80％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约75％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约70％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约65％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约60％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约55％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约50％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约45％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约40％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约35％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约30％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约25％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约20％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约15％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约10％。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约5％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约4％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约3％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约2％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约1％。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.1％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.01％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.0001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.00001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.000001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.0000001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.00000001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.000000001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.0000000001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.00000000001％。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18BP的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18BP的结合亲和力的约0.000000000001％。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的主题IL-18变体多肽(DR-IL-18)对IL-18BP的KD为10nM或更大(较高的KD意味着较低的结合亲和力)。在一些实施方式中，主题DR-IL-18变体多肽具有的对IL-18BP的KD为20nM或更大(例如50nM或更大，100nM或更大，500nM或更大，或1μM或更大)。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有的IL-18BP/IL-18R解离常数比(dissociation constant ratio)比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少2倍(需要注意的是，增加的解离常数比意味着相对于IL-18R结合，IL-18BP结合相对降低)。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少20倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少200倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少2,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少20,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少200,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少2,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少20,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少3倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少30倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少300倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少3,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少30,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少300,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少3,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少30,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少5倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少50倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少500倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少5,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少50,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少500,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少5,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少50,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少10倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少100倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少1000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少10,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少100,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少1,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少10,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的变体多肽具有比野生型IL-18的IL-18BP/IL-18R解离常数比高约至少100,000,000倍的IL-18BP/IL-18R解离常数比。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的主题IL-18变体多肽(DR-IL-18)具有的对IL-18BP的抑制剂常数(Ki)大于3nM(例如5nM或更高，10nM或更高，50nM或更高，100nM或更高，500nM或更高，750nM或更高，或1μM或更高)。在一些实施方式中，主题DR-IL-18变体多肽具有500nM或更高的对IL-18BP的Ki。在一些实施方式中，主题DR-IL-18变体多肽具有1μM或更高的对IL-18BP的Ki。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的主题IL-18变体多肽(DR-IL-18)具有的对IL-18BP的Ki大于200nM(例如500nM或更高，750nM或更高，或1μM或更高)。在一些实施方式中，主题DR-IL-18变体多肽具有1μM或更高的对IL-18BP的Ki。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的主题IL-18变体多肽(DR-IL-18)具有的对IL-18BP的抑制剂常数(inhibitor constant，Ki)比野生型IL-18对IL-18BP的Ki高至少2倍(即相对于WT IL-18对IL-18BP的Ki，主题IL-18变体多肽对IL-18BP的Ki为至少2-倍)。例如，在某些情况下，主题DR-IL-18变体多肽具有的对IL-18BP的Ki比野生型IL-18对IL-18BP的Ki高至少5倍(例如高至少10倍，至少50倍，至少100倍，至少200倍，至少500倍，或至少1000倍)。
在一些实施方式中，结合IL-18R并且表现出与IL-18BP的结合大幅降低的主题IL-18变体多肽(DR-IL-18)具有的对IL-18BP的EC50比野生型IL-18对IL-18BP的EC50高至少2倍(即相对于WT IL-18对IL-18BP的EC50，主题IL-18变体多肽对IL-18BP的EC50为至少2倍)。例如，在某些情况下，主题DR-IL-18变体多肽具有的对IL-18BP的EC50比野生型IL-18对IL-18BP的EC50高至少5倍(例如高至少10倍，至少50倍，至少100倍，至少200倍，至少500倍，或至少1000倍)。
在多个实施方式中，IL-18变体多肽包含相对于野生型(WT)IL-18多肽的突变。在一些实施方式中，WT IL-18多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在其他实施方式中，WTIL-18多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。除非另有规定，以下使用术语“X”来表示任何氨基酸。
在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X，其中X表示任何氨基酸。在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少4个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少6个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6突变)：Y1X、L5X、K8X、S55X、Q56X、P57X、G59X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在一些实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1H、Y1R、L5H、L5I、L5Y、K8Q、K8R、M51T、M51K、M51D、M51N、M51E、M51R、K53R、K53G、K53S、K53T、S55K、S55R、Q56E、Q56A、Q56R、Q56V、Q56G、Q56K、Q56L、P57L、P57G、P57A、P57K、G59T、G59A、M60K、M60Q、M60R、M60L、E77D、Q103E、Q103K、Q103P、Q103A、Q103R、S105R、S105D、S105K、S105N、S105A、D110H、D110K、D110N、D110Q、D110E、D110S、D110G、N111H、N111Y、N111D、N111R、N111S、N111G、M113V、M113R、M113T、M113K、V153I、V153T、V153A、N155K和N155H。在一些实施方式中，人类IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一种IL-18变体多肽或其片段：hCS1(SEQ ID NO:34)、hCS2(SEQ ID NO:35)、hCS3(SEQ ID NO:36)、hCS4(SEQ ID NO:37)、hC4(SEQ ID NO:38)、hA8(SEQ ID NO:39)、hD6(SEQ ID NO:40)、hH12(SEQ ID NO:41)、hB11(SEQ ID NO:42)、hC3(SEQ ID NO:43)、hC2(SEQ ID NO:44)、hG10(SEQ ID NO:45)、hG1(SEQ ID NO:46)、hF1(SEQID NO:47)、hD2(SEQ ID NO:48)、hA1(SEQ ID NO:49)、hB3(SEQ ID NO:50)、hB4(SEQ IDNO:51)、hH3(SEQ ID NO:52)、hH5(SEQ ID NO:53)、hH4(SEQ ID NO:54)、hE1(SEQ ID NO:55)、hG2(SEQ ID NO:56)、hB9(SEQ ID NO:57)、hE12(SEQ ID NO:58)、hC5(SEQ ID NO:59)、5-18(SEQ ID NO:73)、5-29(SEQ ID NO:74)、5-8(SEQ ID NO:75)、5-6(SEQ ID NO:76)、5-27(SEQ ID NO:77)、5-20(SEQ ID NO:78)、5-2(SEQ ID NO:79)、5-9(SEQ ID NO:80)、5-42(SEQ ID NO:81)、5-13(SEQ ID NO:82)、5-12(SEQ ID NO:83)、5-1(SEQ ID NO:84)、5-33(SEQ ID NO:85)、5-21(SEQ ID NO:86)、6-31(SEQ ID NO:87)、6-20(SEQ ID NO:88)、6-12(SEQ ID NO:89)、6-27(SEQ ID NO:90)、6-29(SEQ ID NO:91)、5-26(SEQ ID NO:191)、5-17(SEQ ID NO:192)、5-41(SEQ ID NO:193)，或它们的片段。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)：M51X、M60X、S105X,D110X和N111X。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)：M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少3个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)：M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)：M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。例如，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。换言之，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变{M51T或M51K}；{M60K或M60L}；{S105D、S105N、S105A}；{D110K、D110N、D110S或D110G}；和{N111H、N111Y、N111R或N111G}。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)：M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)：M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。例如，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。换言之，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变{M51K}；{K53G或K53S}；{Q56G、Q56R或Q56L}；{D110S、D110N或D110G}；和{N111R或N111G}。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)。因此，在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于野生型IL-18(例如人类IL-18)，包括至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列与如SEQ ID NO:34-59、73-91和191-193的任一项中所列出的氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)。如此，在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与SEQ ID NO:34-59、73-91和191-193的任一项中所列出的氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于野生型IL-18(例如人类IL-18)，包括至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少4个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少6个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、S55X、Q56X、P57X、G59X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少3个突变：M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；和(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；和(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。
在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽包含从N1X、M50X、Y51X、K52X、S54X、E55X、V56X、R57X、G58X、L59X、R104X、N109X和L151X中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)，其中X表示任何氨基酸。在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1H、N1Y、M50A、M50S、M50V、M50G、M50T、Y51R、K52V、K52S、K52T、K52G、K52A、S54R、S54K、S54G、S54N、E55R、E55H、E55N、E55D、E55G、V56L、V56M、V56R、V56A、V56S、V56Q、R57G、R57K、G58A、L59K、L59R、L59V、R104K、R104L、R104Q、R104S、N109D和L151V。在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一种变体：mCS1(SEQ ID NO:60)、mCS2(SEQ ID NO:61)、mC1(SEQ ID NO:62)、mA12(SEQID NO:63)、mE8(SEQ ID NO:64)、mC10(SEQ ID NO:65)、mB7(SEQ ID NO:66)、mB1(SEQ IDNO:67)、mD1(SEQ ID NO:68)、mH7(SEQ ID NO:69)、mA7(SEQ ID NO:70)、mE1(SEQ ID NO:71)和mH3(SEQ ID NO:72)，或它们的片段。
在一些实施方式中，本发明是一种核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)，其编码至少一种IL-18变体多肽。
治疗性抑制剂组合物和方法
在多个实施方式中，本发明包括治疗或预防需要降低IL-18BP的活性或水平的疾病或病症的IL-18BP抑制剂组合物和方法。上文针对DR-IL-18变体详述的适应症涵盖了此类药剂的适应症。可以使用本发明的组合物和方法治疗或预防的需要需要降低IL-18BP的活性或水平的疾病或病症的非限制性实例包括：癌症、传染性疾病、代谢性疾病或病症以及黄斑变性。在多个实施方式中，本发明的治疗或预防的IL-18BP抑制剂组合物和方法减少IL-18BP多肽的量、IL-18BP mRNA的量、IL-18BP酶活性的量、IL-18BP底物结合活性的量或它们的组合。
基于本文提供的公开，本领域技术人员会理解，IL-18BP水平的降低包括IL-18BP表达的降低，包括转录、翻译或两者的降低。一旦掌握了本发明的教导，本领域技术人员还会意识到IL-18BP水平的降低包括IL-18BP活性(例如酶活性、底物结合活性等)的降低。因此，降低IL-18BP的水平或活性包括但不限于降低编码IL-18BP的核酸的转录、翻译或两者；并且其还包括降低IL-18BP多肽的任何活性。本发明的IL-18BP抑制剂组合物和方法可以选择性地抑制IL-18BP，或者可以抑制IL-18BP和另一种分子。
可以使用多种方法来评估IL-18BP的抑制，多种方法包括本文公开的方法/以及本领域众所周知的或将来要开发的方法。就是说，基于本文提供的公开内容，常规人员会意识到，使用评估编码IL-18BP的核酸(例如mRNA)的水平、生物样品中存在的IL-18BP多肽的水平、IL-18BP活性(例如酶活性、底物结合活性等)水平或它们的组合的方法，可以容易地评估IL-18BP的水平或活性。
基于本文提供的公开，本领域技术人员会理解，本发明可用于在有此需要的受试者中治疗或预防疾病或病症，而不论该受试者是否正在接受另一种药物或疗法的治疗。另外，基于本文提供的教导，本领域技术人员会理解，可以通过本文所描述的组合物和方法治疗的疾病或病症涵盖其中IL-18BP发挥作用并且IL-18BP水平或活性降低可促进积极的治疗结果的任何疾病或病症。
降低IL-18BP的水平或活性(例如酶活性、配体结合活性等)的本发明的IL-18BP抑制剂组合物和方法包括但不应解释为限于化学化合物、多肽、肽、拟肽、抗体、核酶、小分子化合物、反义核酸分子(例如siRNA、miRNA等)或它们的组合。基于本文提供的公开内容，本领域技术人员将容易理解，IL-18BP抑制剂组合物包含降低IL-18BP水平或活性的化学化合物。另外，如化学领域技术人员众所周知的，IL-18BP抑制剂组合物包含化学修饰的化合物和衍生物。
降低IL-18BP的水平或活性(例如酶活性、配体结合活性等)的本发明的IL-18BP抑制剂组合物和方法包括抗体。本发明的抗体包括多种形式的抗体，包括例如多克隆抗体、单克隆抗体、细胞内抗体(“胞内抗体”)、Fv、Fab和F(ab)2、单链抗体(scFv)、重链抗体(如骆驼科抗体)、合成抗体、嵌合抗体和人源化抗体。在一些实施方式中，本发明的抗体是t特异性地结合IL-18BP的抗体。
在一些实施方式中，IL-18BP抑制剂包括工程化的IL-18变体，其经设计以结合IL-18BP，但基本不结合或与IL-18R(例如IL-18Rα和IL-18Rβ)相互作用。这种变体，“诱饵至诱饵”(D2D)用于结合IL-18BP并因此防止IL-18BP抑制内源性或治疗性引入的IL-18。可以使用与本文其他地方所述的几乎相同的酵母展示选择策略来设计“诱饵到诱饵”，但不同的是积极选择IL-18BP结合，然后针对基本上不与IL-18Rα结合进行反选择。
在多个实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽相对于野生型(WT)IL-18多肽包含突变。在一些实施方式中，WT IL-18多肽包含SEQ ID NO:30的氨基酸序列。在其他实施方式中，WT IL-18多肽包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列。
在多个实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含人类IL-18变体多肽或其片段，该人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X，其中X表示任何氨基酸。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含人类IL-18变体多肽或其片段，该人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1D、Y1F、Y1H、Y1L、L5F、L5H、D17A、D17G、D17R、D17H、E31A、E31T、E31G、E31K、E31R、T34A、T34K、T34E、D35S、D35A、D35Y、S36N、S36K、S36R、D37P、D37A、D37R、D37H、D37L、D37V、D40Y、D40S、D40A、N41K、N41S、N41R、M51F、M51L、M51I、Q56H、M60L、M60F、M60I、Q103L、Q103I、H109A、H109P、H109D、M113L、M113I、M113F和R131S。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含人类IL-18变体多肽或其片段，该人类IL-18变体多肽或其片段选自：hD2D-5F12(SEQ ID NO:92)、hD2D-5F11(SEQ ID NO:93)、hD2D-5F10(SEQ ID NO:94)、hD2D-5F08(SEQ ID NO:95)、hD2D-5F06(SEQID NO:96)、hD2D-5F04(SEQ ID NO:97)、hD2D-5F02(SEQ ID NO:98)、hD2D-5F01(SEQ IDNO:99)、hD2D-5E10(SEQ ID NO:100)、hD2D-5E08(SEQ ID NO:101)、hD2D-5E03(SEQ ID NO:102)、hD2D-5E02(SEQ ID NO:103)、hD2D-5D10(SEQ ID NO:104)、hD2D-5D08(SEQ ID NO:105)、hD2D-5D06(SEQ ID NO:106)、hD2D-5D05(SEQ ID NO:107)、hD2D-5D03(SEQ ID NO:108)、hD2D-5D02(SEQ ID NO:109)、hD2D-5C10(SEQ ID NO:110)、hD2D-5C09(SEQ ID NO:111)、hD2D-5C08(SEQ ID NO:112)、hD2D-5C05(SEQ ID NO:113)、hD2D-5C04(SEQ ID NO:114)、hD2D-5C03(SEQ ID NO:115)、hD2D-5B11(SEQ ID NO:116)、hD2D-5B10(SEQ ID NO:117)、hD2D-5B06(SEQ ID NO:118)、hD2D-5B05(SEQ ID NO:119)、hD2D-5B02(SEQ ID NO:120)、hD2D-5A09(SEQ ID NO:121)、hD2D-5A02(SEQ ID NO:122)、hD2D-CS1(SEQ ID NO:123)、hD2D-CS2(SEQ ID NO:124)、hD2D-CS3(SEQ ID NO:125)或它们的片段。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17X、E30X和Q103X中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17X1、E30X2和Q103X3中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；并且X3为I或L。在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17G、E30A和(Q103L或Q103I)中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X、E30X和Q103X。例如，在某些情况下，相对于SEQ IDNO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X1、E30X2和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；并且X3为I或L。在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17G、E30A和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)：D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。例如，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)。如此，在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于野生型IL-18(例如人类IL-18)，包括至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)。
在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列与如SEQ ID NO:126-190中任一个所述的氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)。如此，在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:126-190中任一个所述的氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于野生型IL-18(例如人类IL-18)，包括至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：D17X、E30X和Q103X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；和并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：D17X1、E30X2和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：D17G、E30A和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X、E30X和Q103X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X1、E30X2和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)包括突变D17G、E30A和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所示的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2、至少3、至少4、至少5或至少6个突变)：D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)。
在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含鼠类IL-18变体多肽，该鼠类IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1X、L5X、D17X、E30X、T33X、D34X、I35X、D36X、M50X、Q102X、R104、H108X、N109X、M111X、D129X和D130X，其中X表示任何氨基酸。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含鼠类IL-18变体多肽或其片段，该鼠类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1Y、N1D、N1H、N1L、N1F、N1V、N1I、L5Y、L5H、D17Q、D17G、D17A、D17E、D17S、D17N、E30A、E30R、E30K、E30T、E30G、T33G、T33A、T33E、T33R、T33K、D34Y、D34S、D34A、I35T、I35K、I35R、D36V、D36A、D36G、D36H、D36P、D36R、D36L、M50F、M50L、Q102L、Q102I、R104E、R104A、R104P、R104G、R104Q、R104H、H108D、H108A、N109R、N109S、N109T、N109I、M111L、M111I、D129A、D129F、D129V、D129Y、D129S、D130E、D130T、D130G、D130N、D130R、D130S、D130Q和D130H。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含鼠类IL-18变体多肽或其片段，该鼠类IL-18变体多肽或其片段选自由以下各项组成的组：mD2D-A5(SEQ ID NO:126)、mD2D-A6(SEQ ID NO:127)、mD2D-A7(SEQ ID NO:128)、mD2D-A8(SEQ ID NO:129)、mD2D-A9(SEQ ID NO:130)、mD2D-A11(SEQ ID NO:131)、mD2D-A12(SEQ ID NO:132)、mD2D-B4(SEQ ID NO:133)、mD2D-B7(SEQ ID NO:134)、mD2D-B11(SEQID NO:135)、mD2D-B12(SEQ ID NO:136)、mD2D-C1(SEQ ID NO:137)、mD2D-C3(SEQ ID NO:138)、mD2D-C5(SEQ ID NO:139)、mD2D-C6(SEQ ID NO:140)、mD2D-C9(SEQ ID NO:141)、mD2D-C10(SEQ ID NO:142)、mD2D-C11(SEQ ID NO:143)、mD2D-D1(SEQ ID NO:144)、mD2D-D9(SEQ ID NO:145)、mD2D-D12(SEQ ID NO:146)、mD2D-E3(SEQ ID NO:147)、mD2D-E4(SEQID NO:148)、mD2D-E5(SEQ ID NO:149)、mD2D-E7(SEQ ID NO:150)、mD2D-E8(SEQ ID NO:151)、mD2D-E9(SEQ ID NO:152)、mD2D-E10(SEQ ID NO:153)、mD2D-E11(SEQ ID NO:154)、mD2D-E12(SEQ ID NO:155)、mD2D-F3(SEQ ID NO:156)、mD2D-F4(SEQ ID NO:157)、mD2D-F5(SEQ ID NO:158)、mD2D-F7(SEQ ID NO:159)、mD2D-F8(SEQ ID NO:160)、mD2D-F9(SEQ IDNO:161)、mD2D-G1(SEQ ID NO:162)、mD2D-G7(SEQ ID NO:163)、mD2D-G9(SEQ ID NO:164)、mD2D-H7(SEQ ID NO:165)、mD2D-E1(SEQ ID NO:166)、mD2D-G8(SEQ ID NO:167)、mD2D-H3(SEQ ID NO:168)、mD2D-A10(SEQ ID NO:169)、mD2D-H1(SEQ ID NO:170)、mD2D-F12(SEQID NO:171)、mD2D-G10(SEQ ID NO:172)、mD2D-G12(SEQ ID NO:173)、mD2D-E2(SEQ ID NO:174)、mD2D-G11(SEQ ID NO:175)、mD2D-C4(SEQ ID NO:176)、mD2D-F11(SEQ ID NO:177)、mD2D-C2(SEQ ID NO:178)、mD2D-F10(SEQ ID NO:179)、mD2D-A2(SEQ ID NO:180)、mD2D-F6(SEQ ID NO:181)、mD2D-A1(SEQ ID NO:182)、mD2D-E6(SEQ ID NO:183)、mD2D-D4(SEQ IDNO:184)、mD2D-D6(SEQ ID NO:185)、mD2D-A3(SEQ ID NO:186)、mD2D-A4(SEQ ID NO:187)、mD2D-B10(SEQ ID NO:188)、mD2D-B8(SEQ ID NO:189)、mD2D-B9(SEQ ID NO:190)，或它们的片段。
在一些实施方式中，本发明是一种核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)，其编码至少一种IL-18变体多肽。
在一些实施方式中，IL-18BP抑制剂是一种结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18BP抑制剂，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.000000000001％至约95％。
在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约95％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约90％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约85％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约80％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约75％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约70％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约65％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约60％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约55％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约50％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约45％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约40％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约35％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约30％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约25％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约20％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约15％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约10％。
在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约5％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约4％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约3％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约2％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约1％。
在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.1％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.01％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.0001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.00001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.000001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.0000001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.00000001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.000000001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.0000000001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.00000000001％。在一些实施方式中，结合IL-18BP并且表现出与IL-18R的结合大幅降低的IL-18变体多肽，结合IL-18R的结合亲和力为野生型IL-18与IL-18R的结合亲和力的约0.000000000001％。
此外，本领域的技术人员在配备了本公开内容和本文举例说明的方法时会意识到，IL-18BP抑制剂组合物包括未来发现的这类抑制剂，如可以通过药理学领域的众所周知的标准进行识别，如本文详述和/或本领域已知的抑制IL-18BP的生理结果。因此，本发明不以任何方式限于本文举例说明或公开的任何特定IL-18BP抑制剂组合物；相反，本发明包括常规人员理解为有用的如本领域众所周知的和将来发现的那些抑制剂组合物的。
识别和生产IL-18BP抑制剂组合物的其他方法是本领域普通技术人员众所周知的，包括但不限于从天然来源(例如链霉菌(Streptomyces sp.)、假单胞菌(Pseudomonassp.)、金色链球菌(Stylotella aurantium)等)获得抑制剂。或者，可以化学合成IL-18BP抑制剂。此外，基于本文提供的教导，常规人员会理解，IL-18BP抑制剂组合物可获自重组生物。用于化学合成IL-18BP抑制剂和用于从天然来源获得它们的组合物和方法在本领域中是众所周知的，并且在本领域中已有描述。
本领域技术人员会理解，抑制剂可以作为小分子化学药品、蛋白质、抗体、编码蛋白质的核酸构建体、反义核酸、编码反义核酸的核酸构建体、或它们的组合进行施用。用于将蛋白质或编码蛋白质的核酸构建体施用于细胞或组织的众多载体和其他组合物和方法是众所周知的。因此，本发明包括一种施用作为IL-18BP的抑制挤的蛋白质或编码蛋白质的核酸的方法。(Sambrook et al.,2012,Molecular Cloning:A Laboratory Manual,ColdSpring Harbor Laboratory,New York；Ausubel et al.,1997,Current Protocols inMolecular Biology,John Wiley&Sons,New York)。
本领域技术人员会认识到，减少本身增加IL-18BP的量或活性的分子的量或活性可以在本发明的组合物和方法中用于降低IL-18BP的量或活性。
反义寡核苷酸是与RNA分子的某些部分互补的DNA或RNA分子。当存在于细胞中时，反义寡核苷酸会与现有的RNA分子杂交并抑制翻译成基因产物。使用反义寡核苷酸抑制基因的表达是本领域众所周知的(Marcus-Sekura,1988,Anal.Biochem.172:289)，在细胞中表达反义寡核苷酸的方法也是众所周知的(Inoue,美国专利No.5,190,931)。本发明的方法包括使用反义寡核苷酸以减少IL-18BP的量，或减少引起IL-18BP的量或活性增加的分子的量，从而降低IL-18BP的量或活性。
本发明考虑了通过本领域普通技术人员众所周知的方法合成并提供给细胞的反义寡核苷酸。例如，可以合成反义寡核苷酸，其长度为约10至约100核苷酸，更示例性地为约15至约50个核苷酸。核酸分子的合成是本领域众所周知的，与未修饰的反义寡核苷酸相比，提高生物活性的修饰的反义寡核苷酸的合成也是本领域众所周知的(Tullis,1991,美国专利No.5,023,243)。
类似地，反义分子与基因的启动子或其他调控元件的杂交可抑制基因的表达，从而影响基因的转录。识别与目的基因相互作用的启动子或其他调控元件的方法是本领域众所周知的，并且包括酵母双杂交系统等方法(Bartel and Fields,eds.,In:The Yeast TwoHybrid System,Oxford University Press,Cary,N.C.)。
替代地，通过使用核酶可以实现表达IL-18BP的基因或者表达增加IL-18BP水平或活性的蛋白质的基因的抑制。使用核酶抑制基因表达是本领域技术人员众所周知的(参见例如Cech et al.,1992,J.Biol.Chem.267:17479；Hampel et al.,1989,Biochemistry28:4929；Altman et al.,美国专利No.5,168,053)。核酶是具有催化能力的RNA分子，能够切割其他单链RNA分子。已知核酶是序列特异性的，因此可以被修饰以识别特定的核苷酸序列(Cech,1988,J.Amer.Med.Assn.260:3030)，允许选择性切割特定的mRNA分子。给定分子的核苷酸序列，提供本公开内容和并入本文的参考文献，本领域普通技术人员可以在不进行过度实验的情况下合成反义寡核苷酸或核酶。
本领域技术人员会认识到，IL-18BP的抑制剂可以急性施用(例如在短时间内，例如一天、一周或一个月)或长期施用(例如在很长一段时间内，例如煺月或一年或更长)。本领域技术人员会认识到，IL-18BP的抑制剂可以单独施用或与其他药剂组合施用。此外，在时间意义上，IL-18BP抑制剂可以单独或以任何组合施用，因为它们可以彼此同时、和/或彼此之前、和/或彼此之后施用。基于本文提供的公开内容，本领域普通技术人员会理解，IL-18BP抑制剂组合物可用于在有此需要的受试者中治疗或预防疾病或病症，并且抑制剂组合物可以单独使用或与另一种药剂组合使用以影响治疗结果。
在多个实施方式中，任何本文描述的本发明的IL-18BP的抑制剂可以单独施用，或者可以与本公开中公开的或本领域众所周知的与疾病或病症相关的其他分子的其他抑制剂组合施用。
当掌握包括本文详述的方法的本公开时，本领域技术人员会理解，本发明不限于已经确定的疾病或病症的治疗。特别地，疾病或病症不必表现为对受试者有害的点；实际上，在施用治疗之前不需要在受试者中检测到疾病或病症。即，在本发明可以提供益处之前不必发生重大疾病或病症。因此，本发明包括一种在受试者中预防疾病或病症的方法，因为可以在疾病或病症发作之前向受试者施用如本文之前其他地方所讨论的IL-18BP抑制剂组合物，从而预防疾病或病症的发展。本文所描述的预防方法还包括治疗处于缓解期的受试者，以预防疾病或病症的复发。
当掌握本文的公开内容时，本领域技术人员可以意识到，疾病或病症的预防包括向受试者施用IL-18BP抑制剂组合物作为对疾病或病症的预防措施。如本文其他地方更全面地讨论的，降低IL-18BP的水平或活性的方法包括大量的技术，这些技术不仅用于降低IL-18BP的活性，而且用于降低编码IL-18BP的核酸的表达，包括降低转录、降低翻译或两者。
此外，如本文其他地方所公开的，一旦掌握了本文提供的教导，本领域技术人员可以理解，本发明包括预防多种疾病、病症和病理的方法，其中IL-18BP的表达和/或活性的降低介导、治疗或预防该疾病、病症或病理。用于评估疾病是否与IL-18BP的水平或活性有关的方法是本领域已知的。此外，本发明涵盖治疗或预防将来发现的此类疾病。
本发明包括施用IL-18BP的抑制剂以实施本发明的方法；基于本文提供的公开，本领域技术人员会理解如何向受试者配制和施用合适的IL-18BP抑制剂。但是，本发明不限于任何特定的施用方法或治疗方案。
细胞因子抑制剂
在一些实施方式中，本发明的组合物包含一种或多种细胞因子的抑制剂。在一些实施方式中，一种或多种细胞因子的抑制剂包括化学化合物、蛋白质、肽、拟肽、抗体、核酶、小分子化学化合物或反义核酸分子(例如siRNA、miRNA等)，它们抑制一种或多种细胞因子的表达、活性或两者。在一些实施方式中，该抑制剂抑制IL-17、IL-5或IL-3的表达、活性或两者。在一些实施方式中，细胞因子抑制剂降低毒性。在一些实施方式中，所述细胞因子抑制剂提高施用的IL-18变体多肽或IL-18BP抑制剂的功效。
治疗和预防的组合物和方法
在多个实施方式中，本发明包括包含IL-18活性(例如通过至少一种IL-18R信号传导活性)的活化剂，和在细胞、组织、器官、系统或有需要的受试者中增加IL-18活性的方法，如通过至少一种IL-18R的信号传导。在多个实施方式中，IL-18活性的活化剂组合物和本发明的治疗方法增加IL-18R信号传导的量、免疫细胞活性的量、或两者。在多个实施方式中，IL-18R信号传导增强可以改善治疗效果的疾病和病症包括但不限癌症、传染性疾病、黄斑变性、和代谢性疾病或疾病。
以下是可以通过本发明的方法和组合物治疗或预防的癌症的非限制性实例：急性淋巴细胞白血病，急性髓细胞性白血病，肾上腺皮质癌，阑尾癌，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，骨癌，脑和脊髓肿瘤，脑干神经胶质瘤，脑瘤，乳腺癌，支气管肿瘤，伯基特淋巴瘤，类癌肿瘤，中枢神经系统非典型类畸形/类瘤状肿瘤，中枢神经系统胚胎肿瘤，中枢神经系统淋巴瘤，小脑星形细胞瘤，脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤，脑星形细胞瘤/恶性神经胶质瘤，子宫颈癌，儿童视觉通路肿瘤，脊索瘤，慢性淋巴细胞性白血病，慢性骨髓性白血病，慢性骨髓增生性病症，结肠癌，大肠癌，颅咽管瘤，皮肤癌，皮肤T细胞淋巴瘤，子宫内膜癌，上皮细胞母细胞瘤，室管膜瘤，食道癌，尤因家族肿瘤，颅外癌，性腺外生殖细胞肿瘤，肝外胆管癌，肝外癌，眼癌，真菌病(fungoides)，胆囊癌，胃癌(胃癌)，胃肠道癌，胃肠道类癌，胃肠道间质瘤(gist)，生殖细胞瘤，妊娠癌，滋养细胞肿瘤，胶质母细胞瘤，神经胶质瘤，毛细胞白血病，头颈癌，肝细胞(肝)癌，组织细胞增多症，霍奇金淋巴瘤，下咽癌，下丘脑和视神经胶质瘤，下丘脑肿瘤，眼内(眼)癌，眼内黑素瘤，胰岛细胞瘤，卡波济肉瘤，肾(肾细胞)癌，朗格汉斯细胞癌，朗格汉斯细胞组织细胞增生症，喉癌，白血病，嘴唇和口腔癌，肝癌，肺癌，淋巴瘤，巨球蛋白血症，骨和骨肉瘤的恶性纤维组织细胞瘤，髓母细胞瘤，髓上皮瘤，黑素瘤，默克尔细胞癌，间皮瘤，隐匿性原发性鳞状转移性颈癌，口腔癌，多发性内分泌肿瘤综合征，多发性骨髓瘤，霉菌病，骨髓增生异常综合症，骨髓增生异常/骨髓增生性疾病，骨髓性白血病，髓细胞性白血病，骨髓瘤，骨髓增生性疾病，鼻腔和鼻旁窦癌，鼻咽癌，神经母细胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，非小细胞肺癌，口癌，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤和恶性纤维组织细胞瘤，骨肉瘤和骨恶性纤维组织细胞瘤，卵巢，卵巢癌，卵巢上皮癌，卵巢生殖细胞肿瘤，卵巢低恶性潜能肿瘤，胰腺癌，乳头状瘤病，副神经节瘤，甲状旁腺癌，阴茎癌，咽癌，嗜铬细胞瘤，中间分化的松果体实质性肿瘤，皮母细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤，垂体瘤，浆细胞瘤，浆细胞肿瘤/多发性骨髓瘤，胸膜肺母细胞瘤，原发性中枢神经系统癌症，原发性中枢神经系统淋巴瘤，前列腺癌，直肠癌，肾细胞(肾)癌，肾盂和输尿管癌，涉及15号染色体上的nut基因的呼吸道癌，视网膜母细胞瘤，横纹肌肉瘤，唾液腺癌，肉瘤，sezary综合征，皮肤癌(黑色素瘤)，皮肤癌(非黑色素瘤)，皮肤癌，小细胞肺癌，小肠癌，软组织癌，软组织肉瘤，鳞状细胞癌，鳞状上皮癌，胃癌(胃癌)，幕上原始神经外胚层肿瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤和成胚细胞瘤，T细胞淋巴瘤，睾丸癌，喉癌，胸腺瘤和胸腺癌，甲状腺癌，移行细胞癌，肾盂和输尿管的移行细胞癌，滋养细胞肿瘤，尿道癌，子宫癌，子宫肉瘤，阴道癌，视觉通路和下丘脑神经胶质瘤，外阴癌，瓦尔德斯特伦巨球蛋白血症和威尔姆斯肿瘤。
因此，可以通过本公开的方法和组合物治疗或预防的癌症的非限制性实例包括实体肿瘤癌、液体癌、血液癌、畸胎瘤、肉瘤和癌。
在一些实施方式中，本发明的方法可用于治疗或预防对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的肿瘤或癌症。示例性的免疫检查点抑制剂包括但不限于抗PD1(例如尼武单抗)、抗CTLA4(例如伊匹单抗)、抗TIM3、抗TIGIT、抗LAG3、抗B7H3、抗B7H4、抗VISTA、抗ICOS、抗GITR、抗41BB、抗OX40和抗CD40。免疫检查点抑制剂的靶的实例包括但不限于：PD-L1，PD1，CTLA4，TIM3，TIGIT，LAG3，B7H3，B7H4，VISTA，ICOS，GITR，41BB，OX40和CD40。因此，免疫检查点抑制剂的实例包括抑制蛋白质的药剂，所述蛋白质如：PD-L1，PD1，CTLA4，TIM3，TIGIT，LAG3，B7H3，B7H4，VISTA，ICOS，GITR，41BB，OX40或CD40。在一些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与免疫检查点抑制剂(例如抑制PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40、或CD40，或它们的任何组合的药剂)联合施用。
融合/缀合
在一些实施方式中，本发明的IL-18变体多肽整合到另一蛋白质，即IL-18变体多肽或其片段可以与第二多肽(融合伴侣)在框内融合。在一些实施方式中，第二多肽(融合伴侣)能够增加融合蛋白的整体大小，例如因此融合蛋白不会被迅速从循环中清除。在一些情况下，IL-18变体多肽或其片段不与第二多肽融合。
在一些实施方式中，第二多肽(用于IL-18变体多肽或其片段的融合伴侣)是免疫球蛋白Fc区(即抗体Fc序列)的一部分或整体。在其他实施方式中，第二多肽是与Fc基本相似的任何合适的多肽，例如提供增加的大小、多聚结构域和/或与Ig分子的额外结合或相互作用。在一些实施方式中，第二多肽是人类血清白蛋白(HSA)的一部分或整体。在一些实施方式中，第二多肽是抗体、抗体片段、骆驼科抗体或“纳米抗体”或与HSA结合或相互作用的其他亲和试剂的一部分或整体。这些融合蛋白可以促进纯化、多聚化，并显示出更长的体内半衰期。在某些情况下，具有二硫键连接的多聚体结构的融合蛋白也可以更有效地结合和中和其他分子。
当与异源多肽融合时，对应于IL-18变体多肽或其片段的部分可以称为主题IL-18变体多肽的“IL-18变体多肽部分”。在某些情况下，“IL-18变体多肽部分”的长度可以为100个氨基酸或更长(例如110个氨基酸或更长，125个氨基酸或更长，150个氨基酸或更长，90个氨基酸或更长，95个氨基酸或更长，100个氨基酸或更长，105个氨基酸或更长，110个氨基酸或更长，115个氨基酸或更长，120个氨基酸或更长，125个氨基酸或更长，130个氨基酸或更长，140个氨基酸或更长，或150个氨基酸或更长)，直至全长IL-18，并且可以进一步融合至异源多肽。
在某些情况下，IL-18变体多肽的IL-18变体多肽部分具有的长度为100个氨基酸至157个氨基酸(例如100个氨基酸至150个氨基酸，100个氨基酸至140个氨基酸，140个氨基酸至157个氨基酸，140个氨基酸至150个氨基酸，145个氨基酸至157个氨基酸，或150个氨基酸至157个氨基酸)。
在某些情况下，第二多肽是标志序列(例如亲和标签)，例如有助于纯化融合多肽的肽。例如，标志氨基酸序列可以是六组氨酸肽，例如pQE载体中提供的标签(QIAGEN,Inc.,9259Eton Avenue,Chatsworth,Calif.,91311)等等，其中许多是可商购的。例如，如Gentzet al.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:821-824,1989中所述，六组氨酸提供了融合蛋白的方便纯化。另一种可用于纯化的肽标签，“HA”标签，对应于源自流感血凝素蛋白的表位(Wilson et al.,Cell 37:767,1984)。添加肽部分以促进多肽的处理是本领域熟知和常规的技术。
主题IL-18变体多肽可以被修饰，例如为了多种目的，与多种其他寡肽、蛋白质和/或非蛋白质部分连接/缀合。例如，翻译后修饰，例如通过异戊烯基化、乙酰化、酰胺化、羧化、糖基化、PEG化(聚乙二醇(PEG)聚合物链的共价连接)等。这样的修饰还可以包括糖基化的修饰，例如通过在多肽的合成和加工过程中或进一步加工步骤中修饰多肽的糖基化模式而制成的那些；例如通过使多肽暴露于影响糖基化的酶，例如哺乳动物糖基化或去糖基化酶。在一些实施方式中，主题IL-18变体多肽具有一个或多个磷酸化氨基酸残基，例如磷酸酪氨酸、磷酸丝氨酸或磷酸酪氨酸。
在一些其他实施方式中，本公开的IL-18变体多肽包括进一步修饰的试剂，以提高其对蛋白水解降解的抵抗力或优化溶解性或使其更适合用作治疗剂。例如，本公开的变体还包括类似物，其含有除天然存在的L-氨基酸以外的残基，例如D-氨基酸或非天然存在的合成氨基酸。D-氨基酸可以取代一些或所有氨基酸残基。
共同施用和多特异性IL-18变体多肽
如本公开中其他地方所述，在某些情况下，主题IL-18变体多肽与另外的药剂一起施用。术语“共同施用(co-administration)”、“共同施用(co-administer)”和“与……组合”包括同时、并行或没有特定时间限制的顺序施用两种或更多种治疗剂(例如主题IL-18变体(如DR-IL-18或D2D)与另外的药剂组合)。在一些实施方式中，所述药剂同时存在于细胞或受试者体内，或同时发挥其生物学或治疗作用。在一些实施方式中，所述治疗剂在同一组合物中或在单位剂型中。在其他实施方式中，治疗剂在单独的组合物或单位剂型中。在某些实施方式中，第一药剂可以在施用第二治疗剂之前(例如在数分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时s、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之前)、并行或之后(例如5分钟、15分钟、30分钟、45分钟、1小时、2小时、4小时、6小时、12小时、24小时、48小时、72小时、96小时、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)进行施用。
在某些情况下，主题IL-18变体(例如DR-IL-18变体或D2D变体)(例如配制成药物组合物)与癌症治疗药物、治疗感染的治疗药物或癌标抗体共同施用。相对于本公开内容的一种或多种药剂的施用，这种施用可涉及药物/抗体的并行(即同时)、之前或之后的施用。对于本公开的特定药物和组合物，本领域普通技术人员将不难确定合适的施用时间、顺序和剂量。
在一些实施方式中，通过主题IL-18变体(例如DR-IL-18变体或D2D变体)与另一药剂(例如免疫刺激剂、治疗慢性感染的药剂、细胞毒性药剂、抗癌药剂等)的组合(共同施用)来完成治疗。可以使用的一类示例的细胞毒性剂是化学治疗剂。示例性化学治疗剂包括但不限于：阿地白介素(aldesleukin)，六甲蜜胺(altretamine)，氨磷汀，天冬酰胺酶，博来霉素，卡培他滨，卡铂，卡马汀，克拉屈滨，西沙必利，顺铂，环磷酰胺，阿糖胞苷，达卡巴嗪(DTIC)，放线菌素，多西他赛，多柔比星，屈大麻酚，杜卡霉素，依托泊苷，非格司亭，氟达拉滨，氟尿嘧啶，吉西他滨，格拉司琼，羟基脲，伊达比星，异环磷酰胺，干扰素α，伊立替康，兰索拉唑，左旋咪唑，亚叶酸，孕甾酮，美司钠，甲氨蝶呤，甲氧氯普胺，丝裂霉素，米托坦，米托蒽醌，奥美拉唑，恩丹西酮，紫杉醇(TaxolTM)，毛果芸香碱，氯丙嗪，利妥昔单抗，萨普林，他莫昔芬，紫杉酚，盐酸托泊替康，曲妥珠单抗，长春碱，长春新碱和酒石酸长春瑞滨。
主题IL-18变体(例如DR-IL-18变体或D2D变体)不必但任选地与增强活性或以其他方式增强治疗效果的一种或多种药剂一起配制。在一些实施方式中，通过主题IL-18变体(例如DR-IL-18变体)和调理靶细胞的药剂的组合施用(共同施用)来完成治疗。因此，本文还设想了包括以下成分的组合物(和使用该组合物的方法)：(a)主题IL-18变体(例如DR-IL-18变体)；和(b)调理靶细胞的药剂。在某些情况下，调理靶细胞的药剂是利妥昔单抗。在某些情况下，调理靶细胞的药物是西妥昔单抗。
“调理靶细胞的药物”(“调理剂”)是可经结合至靶细胞(例如癌细胞、带有细胞内病原体的细胞等)并且调理靶细胞(例如标记靶细胞的吞噬作用和/或抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC))的任何药剂。例如，可以结合至靶细胞(例如癌细胞，例如肿瘤细胞)的任何抗体(其中该抗体具有FC区)均被认为是调理靶细胞的药剂。在某些情况下，调理靶细胞的试剂是与靶细胞结合的抗体(例如抗肿瘤抗体、抗癌抗体、抗感染抗体等)。
例如，对肿瘤细胞标志物、放射线、手术和/或激素剥夺具有选择性的抗体，参见Kwon et al.,Proc.Natl.Acad.Sci U.S.A.,96:15074-9,1999。血管生成抑制剂也可以与本发明的方法组合。目前有许多抗体在临床上用于治疗癌症，其他抗体则处于临床开发的不同阶段。例如，有许多抗原和相应的单克隆抗体可用于治疗B细胞恶性肿瘤。一种靶抗原是CD20。利妥昔单抗是针对CD20抗原的嵌合非缀合单克隆抗体。CD20在B细胞活化、增殖和分化中具有重要的功能作用。CD52抗原被单克隆抗体阿仑单抗靶向，其可用于治疗慢性淋巴细胞性白血病。CD22被多种抗体靶向，并且最近表明在化疗耐药的毛细胞白血病中与毒素组合具有疗效。已经向食品药品监督管理局(FDA)提交了靶向CD20的两种新型单克隆抗体，托西莫单抗和替伊莫单抗。这些抗体与放射性同位素缀合。阿仑单抗(Campath)用于治疗慢性淋巴细胞性白血病；吉妥单抗(Mylotarg)可用于治疗急性骨髓性白血病；替伊莫单抗(Zevalin)可用于治疗非霍奇金淋巴瘤；帕尼单抗(Vectibix)可用于治疗结肠癌。
已用于实体瘤的可用于本公开方法的单克隆抗体包括但不限于埃德可洛单抗和曲妥珠单抗(Herceptin)。埃德可洛单抗靶向结肠癌和直肠癌中可见的17-1A抗原，并已获准在欧洲用于这些适应症。曲妥珠单抗靶向HER-2/neu抗原。西妥昔单抗(Erbitux)也可用于本公开的方法中。所述抗体结合EGF受体(EGFR)并且已用于治疗实体瘤，包括结肠癌和头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)。
主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)可以与上述药剂(例如调理靶细胞的抗体等药剂)的任何一种组合。因此，在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与对癌细胞(例如肿瘤细胞)具有选择性的一种或多种调理剂在联合疗法中一起使用(共同施用)。在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与下列中的一种或多种在联合疗法中一起使用(共同施用)：西妥昔单抗(结合EGFR)、帕尼单抗(结合EGFR)、利妥昔单抗(结合CD20)、曲妥珠单抗(结合HER2)、帕妥珠单抗(结合HER2)、阿仑单抗(结合CD52)、布伦妥昔单抗(结合CD30)、托西单抗、替伊莫单抗、吉妥单抗、替伊莫单抗、和埃德可洛单抗(结合17-1A)或它们的组合。
在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与癌细胞调理剂(例如包含靶向以下各项的的抗原结合区的癌细胞调理剂：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1或NRP1，或它们的任何组合)共同施用。
在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与靶向选自以下各项的一种或多种抗原的药剂共同施用：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD38、CD44、CD47、SIRPA、CD52、CD56、CD70、CD96、CD97、CD99、CD123、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、EGFR、17-1A、HER2、CD117、C-Met、PTHR2和HAVCR2(TIM3)。
在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与以下各项在联合疗法中一起使用(共同施用)：任何方便的免疫调节剂(例如抗CTLA4抗体、抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体、TIGIT抗体、TIM3抗体、LAG3抗体、VISTA抗体、B7H3抗体、B7H4抗体、CD40激动剂、4-1BB调节剂(例如41BB-激动剂)、OX-40调节剂(例如OX-40激动剂)、GITR调节剂(例如GITR激动剂)、CD47结合剂如抗CD47抗体或高亲和力CD47结合剂、SIRPA结合剂如抗SIRPA抗体或高亲和力SIRPA结合剂等)、TGFβ拮抗剂如抗TGFβ抗体、细胞因子或细胞因子变体(包括IL-1、IL-2、IL-10、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、IL-33、干扰素α、干扰素β、干扰素γ、TNF、TRAIL、淋巴毒素、LIGHT/TNSF14)、或Toll样受体的激动剂(包括TLR2、TLR4、TLR5、TLR7、TLR9)、炎性体的激动剂、STING/cGAS途径的激动剂、或RIG-I途径的激动剂、腺苷受体A2aR/A2bR的拮抗剂、芳烃受体的拮抗剂、IDO和/或TDO的拮抗剂或溶瘤病毒。
在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与BTLA和/或CD160的抑制剂在联合疗法中一起使用(共同施用)。在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与抗CD47/SIRPA药剂(例如抗CD47、抗SIRPA、高亲和力CD47结合剂、高亲和力SIRPA结合剂等)在联合疗法中一起使用(共同施用)。在某些情况下，主题IL-18变体多肽(例如DR-IL-18变体、D2D-IL-18变体)与TIM3和/或CEACAM1的抑制剂在联合疗法中一起使用(共同施用)。
如上所述，在某些情况下，主题IL-18变体多肽与另一蛋白质(即“融合伴侣”、“第二多肽”)融合。在一些实施方式中，第二多肽(用于主题IL-18变体多肽的融合伴侣)特异性结合至除融合蛋白的IL-18变体多肽部分结合的靶分子以外的靶分子(例如IL-18R以外的与IL-18R结合的变体；或IL-18BP以外的结合IL-18BP的变体)。
因此，在一些实施方式中，主题IL-18变体多肽是多特异性的(例如双特异性的)。在提及凭借具有对第一靶标特异的至少一个区(例如枫林残忆体或第一抗体的Fab)和对第二靶标特异的至少第二区(例如配体或第二抗体的Fab)而识别两种或更多种不同抗原的药剂(例如配体或抗体)时，术语“多特异性”或“双特异性”是常用的。双特异性药剂特异性结合至两个靶并因此是一种多特异性药剂。
在一些实施方式中，主题IL-18变体多肽是多特异性的(例如双特异性的)，使得所述多肽的第一区包括主题IL-18变体多肽序列(即第一区包括IL-18变体多肽)，并且第二区特异性结合至另一靶分子(例如抗原)。例如，在某些情况下，IL-18变体多肽融合到第二多肽，该第二多肽特异性地结合除由IL-18变体多肽结合的靶分子之外的靶分子。
以上在共同施用背景下讨论的任何一种药剂均可以缀合至主题IL-18变体多肽。如本文所用，术语“共同施用”意在涵盖此类缀合化合物。例如，当药剂1与药剂2共同施用时，该术语意指涵盖其中药剂2和药剂2未彼此缀合的实施方式，并且还意指涵盖其中药剂1和药剂2彼此缀合的实施方式(例如其中药剂1和药剂2均为蛋白质并且药剂1融合到药剂2)。
在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区是检查点抑制剂。在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区抑制选自以下各项的一种或多种蛋白质：PD-L1，PD1，CTLA4，TIM3，TIGIT，LAG3，B7H3，B7H4，VISTA，ICOS，GITR，41BB，OX40和CD40。
在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区是癌细胞调理剂。在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区靶向选自以下各项的一种或多种蛋白质：CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD38，CD44，CD47，SIRPA，CD52，CD56，CD70，CD96，CD97，CD99，CD123，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，EGFR，17-1A，HER2，CD117，C-Met，PTHR2和HAVCR2(TIM3)。在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区是调理剂，该调理剂靶向选自以下各项的一种或多种蛋白质：CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD38，CD44，CD47，SIRPA，CD52，CD56，CD70，CD96，CD97，CD99，CD123，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，EGFR，17-1A，HER2，CD117，C-Met，PTHR2和HAVCR2(TIM3)。
例如，在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区包括胞外域，例如来自PD-1、PD-L1、CD47(例如高亲和力CD47变体/多肽)或SIRPA(例如高亲和力SIRPA变体/多肽)的胞外域。在某些情况下，多特异性IL-18变体多肽的第二区特异性地结合选自以下各项的抗原：CTLA-4，Lag-3，BTLA，Tim-3，CD244，CD40，CD40L，CD47，SIRPA，PD-1和PD-L1。
在一些实施方式中，主题IL-18变体多肽包括接头(例如接头多肽)。例如，在一些实施方式中，主题IL-18变体多肽和融合伴侣由接头(例如接头多肽)间隔开。接头多肽可具有多种氨基酸序列中的任何一种。蛋白质可以通过具有柔性性质的接头多肽(例如柔性接头多肽)连接，但不排除其他化学连接。合适的接头包括长度为约6个氨基酸与约40个氨基酸，或长度为约6个氨基酸与约25个氨基酸的多肽。这些接头可以使用用以偶联蛋白质的合成的、接头编码寡核苷酸生产。可以使用具有一定程度柔性的肽接头。连接肽实际上可以具有任何氨基酸序列，需要记住的是，在某些情况下，接头可以具有产生一般柔性肽的序列。使用小氨基酸(例如甘氨酸和丙氨酸)可创建柔性肽。此类序列的创建对于本领域技术人员而言是常规的。各种不同的接头是可商购的并且被认为适合使用。
在一些实施方式中，IL-18变体多肽与工程化免疫细胞(如用工程T细胞受体转导的CAR-T或CAR-NK细胞或T或NK细胞)共同施用。在其他实施方式中，IL-18变体多肽与溶瘤病毒共同施用。
在一些实施方式中，在工程化的(“改变的”)免疫细胞(如用工程T细胞受体转导的CAR-T或CAR-NK细胞或T或NK细胞)内包括编码IL-18变体多肽的核酸。在这种情况下，该工程化细胞(例如改变的T细胞，改变的NK细胞)可以分泌IL-18变体多肽。可以根据环境调节分泌IL-18变体肽的能力(例如在肿瘤微环境中开启)，例如通过合成的NOTCH受体。
在一些实施方式中，在溶瘤病毒内包括编码IL-18变体多肽的核酸。在这种情况下，被溶瘤病毒感染的细胞会分泌IL-18变体多肽。
在一些实施方式中，本发明的方法可用于治疗或预防已丧失MHC I类表面表达的肿瘤或癌性肿瘤；如丧失了B2m、MHC基因座或在抗原呈递和/或抗原加载复合体的其他成员(例如tapasin)中具有突变的肿瘤。
代谢性疾病和病症包括各种与代谢和内分泌相关的疾病和病症。以下是可通过本发明的方法和组合物治疗或预防的与代谢和内分泌相关的疾病和病症的非限制性实例：肥胖，糖尿病，糖尿病前期，II型糖尿病，年轻的成熟发病型糖尿病(MODY)，高血糖，代谢综合征，血脂异常，高甘油三酯血症和高胆固醇血症。
可以使用本发明的组合物和方法治疗或预防的其他疾病和病症的非限制性实例包括病毒感染、细菌感染、寄生虫感染和免疫活性低。在一些实施方式中，病毒感染是痘病毒、天花病毒、传染性软疣、HPV感染以及由病毒引起的疣中的至少一种。在一些实施方式中，感染是全身性感染。在一些实施方式中，病毒感染是牛痘病毒感染。在一些实施方式中，病毒感染是全身性牛痘病毒感染。在一些实施方式中，细菌感染是败血症。在一些实施方式中，免疫活性低是中性粒细胞减少症，例如化学疗法可能发生的中性粒细胞减少症。
可以使用本发明的组合物和方法治疗或预防的其他疾病和病症的非限制性实例包括黄斑变性。例如，在某些情况下，该疾病或病症是湿性黄斑变性，并且在某些情况下，该疾病或病症是与年龄相关的湿性黄斑变性。在一些此种情况中，IL-18变体可用作抗血管生成剂。例如，在某些情况下，主题IL-18变体多肽可以减轻脉络膜新生血管的形成。
因此，本发明涉及疾病或病症的预防或治疗，其通过向有此需要的细胞、组织或受试者施用治疗有效量的IL-18变体多肽、重组IL-18变体多肽、活性IL-18变体多肽片段(例如IL-18变体肽等)、IL-18变体表达或活性的活化剂、或编码至少一种IL-18变体多肽的核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)，以治疗或预防疾病或病症，或其相关性体征、症状或病理。
在一些实施方式中，向细胞、组织、器官、系统或受试者施用本发明的组合物以治疗或预防疾病或病症。在一些实施方式中，向细胞、组织、器官、系统或受试者施用人类IL-18变体多肽。在一些实施方式中，向细胞、组织、器官、系统或受试者施用编码至少一种人类IL-18变体多肽的核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)。
在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X，其中X表示任何氨基酸。在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少4个突变，其中X表示任何氨基酸：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少6个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在多个实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、S55X、Q56X、P57X、G59X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
在一些实施方式中，人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，至少4，至少5，或至少6个突变)：Y1H、Y1R、L5H、L5I、L5Y、K8Q、K8R、M51T、M51K、M51D、M51N、M51E、M51R、K53R、K53G、K53S、K53T、S55K、S55R、Q56E、Q56A、Q56R、Q56V、Q56G、Q56K、Q56L、P57L、P57G、P57A、P57K、G59T、G59A、M60K、M60Q、M60R、M60L、E77D、Q103E、Q103K、Q103P、Q103A、Q103R、S105R、S105D、S105K、S105N、S105A、D110H、D110K、D110N、D110Q、D110E、D110S、D110G、N111H、N111Y、N111D、N111R、N111S、N111G、M113V、M113R、M113T、M113K、V153I、V153T、V153A、N155K和N155H。在一些实施方式中，人类IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一种IL-18变体多肽或其片段：hCS1(SEQ ID NO:34)，hCS2(SEQ ID NO:35)，hCS3(SEQ ID NO:36)，hCS4(SEQ ID NO:37)，hC4(SEQ ID NO:38)，hA8(SEQ ID NO:39)，hD6(SEQ ID NO:40)，hH12(SEQ ID NO:41)，hB11(SEQ ID NO:42)，hC3(SEQ ID NO:43)，hC2(SEQ ID NO:44)，hG10(SEQ ID NO:45)，hG1(SEQID NO:46)，hF1(SEQ ID NO:47)，hD2(SEQ ID NO:48)，hA1(SEQ ID NO:49)，hB3(SEQ IDNO:50)，hB4(SEQ ID NO:51)，hH3(SEQ ID NO:52)，hH5(SEQ ID NO:53)，hH4(SEQ ID NO:54)，hE1(SEQ ID NO:55)，hG2(SEQ ID NO:56)，hB9(SEQ ID NO:57)，hE12(SEQ ID NO:58)，hC5(SEQ ID NO:59)，5-18(SEQ ID NO:73)，5-29(SEQ ID NO:74)，5-8(SEQ ID NO:75)，5-6(SEQ ID NO:76)，5-27(SEQ ID NO:77)，5-20(SEQ ID NO:78)，5-2(SEQ ID NO:79)，5-9(SEQ ID NO:80)，5-42(SEQ ID NO:81)，5-13(SEQ ID NO:82)，5-12(SEQ ID NO:83)，5-1(SEQ ID NO:84)，5-33(SEQ ID NO:85)，5-21(SEQ ID NO:86)，6-31(SEQ ID NO:87)，6-20(SEQ ID NO:88)，6-12(SEQ ID NO:89)，6-27(SEQ ID NO:90)，6-29(SEQ ID NO:91)，5-26(SEQ ID NO:191)，5-17(SEQ ID NO:192)，5-41(SEQ ID NO:193)，或它们的片段。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X、M60X、S105X、D110X和N111X中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X、M60X、S105X、D110X和N111X中选择的至少3个突变。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5中选择的至少3个突变，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。例如，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5,其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。换言之，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变{M51T或M51K}；{M60K或M60L}；{S105D、S105N、S105A}；{D110K、D110N、D110S或D110G}；和{N111H、N111Y、N111R或N111G}。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括至从M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X中选择的少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X中选择的至少3个突变。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3，或至少4个突变)，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5中选择的至少3个突变，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，相对于SEQID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括从M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。例如，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。换言之，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题DR-IL-18变体或其片段包括突变{M51K}；{K53G或K53S}；{Q56G、Q56R或Q56L}；{D110S、D110N或D110G}；和{N111R或N111G}。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)的氨基酸序列。如此，在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于野生型IL-18(例如人类IL-18)，包括至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少4个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少6个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：Y1X、L5X、K8X、S55X、Q56X、P57X、G59X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高或，99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X、M60X、S105X、D110X和N111X中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X、M60X、S105X、D110X和N111X中选择的至少3个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5中选择的至少3个突，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T、K、D、E、R或N；X2为K、Q、L或R；X3为R、D、K、A或N；X4为H、K、N、Q、E、N、S或G；并且X5为H、D、Y、R、S或G。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、M60X2、S105X3、D110X4和N111X5，其中X1为T或K；X2为K或L；X3为D、N或A；X4为K、N、S或G；并且X5为H、Y、G或R。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X中选择的至少3个突变。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5中选择的至少3个突变，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为E、R或K；X2为G、S或T；X3为E、A、R、V、G、K或L；X4为N、S、K或G；并且X5为R、S、G或D。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变M51X1、K53X2、Q56X3、S105X4和N111X5，其中X1为K；X2为G或S；X3为G、R或L；X4为S、N或G；并且X5为G或R。
在多个实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含人类IL-18变体多肽或其片段，该人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X，其中X表示任何氨基酸。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含人类IL-18变体多肽或其片段，该人类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：Y1D、Y1F、Y1H、Y1L、L5F、L5H、D17A、D17G、D17R、D17H、E31A、E31T、E31G、E31K、E31R、T34A、T34K、T34E、D35S、D35A、D35Y、S36N、S36K、S36R、D37P、D37A、D37R、D37H、D37L、D37V、D40Y、D40S、D40A、N41K、N41S、N41R、M51F、M51L、M51I、Q56H、M60L、M60F、M60I、Q103L、Q103I、H109A、H109P、H109D、M113L、M113I、M113F和R131S。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含人类IL-18变体多肽或其片段，该人类IL-18变体多肽或其片段选自由以下各项组成的组：hD2D-5F12(SEQ ID NO:92)，hD2D-5F11(SEQ ID NO:93)，hD2D-5F10(SEQ ID NO:94)，hD2D-5F08(SEQ ID NO:95)，hD2D-5F06(SEQ ID NO:96)，hD2D-5F04(SEQ ID NO:97)，hD2D-5F02(SEQ ID NO:98)，hD2D-5F01(SEQ ID NO:99)，hD2D-5E10(SEQ ID NO:100)，hD2D-5E08(SEQ ID NO:101)，hD2D-5E03(SEQ ID NO:102)，hD2D-5E02(SEQ ID NO:103)，hD2D-5D10(SEQ ID NO:104)，hD2D-5D08(SEQ ID NO:105)，hD2D-5D06(SEQ ID NO:106)，hD2D-5D05(SEQ ID NO:107)，hD2D-5D03(SEQ ID NO:108)，hD2D-5D02(SEQ ID NO:109)，hD2D-5C10(SEQ ID NO:110)，hD2D-5C09(SEQ ID NO:111)，hD2D-5C08(SEQ ID NO:112)，hD2D-5C05(SEQ ID NO:113)，hD2D-5C04(SEQ ID NO:114)，hD2D-5C03(SEQ ID NO:115)，hD2D-5B11(SEQ ID NO:116)，hD2D-5B10(SEQ ID NO:117)，hD2D-5B06(SEQ ID NO:118)，hD2D-5B05(SEQ ID NO:119)，hD2D-5B02(SEQ ID NO:120)，hD2D-5A09(SEQ ID NO:121)，hD2D-5A02(SEQ ID NO:122)，hD2D-CS1(SEQ ID NO:123)，hD2D-CS2(SEQ ID NO:124)，hD2D-CS3(SEQID NO:125)，或它们的片段。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17X、E30X和Q103X中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17X1、E30X2和Q103X3中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；并且X3为I或L。在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17G、E30A和(Q103L或Q103I)中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X、E30X和Q103X。例如，在某些情况下，相对于SEQ IDNO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X1、E30X2和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；并且X3为I或L。在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17G、E30A和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，相对于SEQID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括从D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)中选择的至少一个突变(例如至少2，至少3或至少4个突变)。
在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。例如，在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，相对于SEQ ID NO:30，主题D2D-IL-18变体或其片段包括突变D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包含与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)的氨酸酸序列。如此，在某些情况下，主题D2D-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于野生型IL-18(例如人类IL-18)，包括至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)包括从Y1X,L5X,D17X,E31X,T34X,D35X,S36X,D37X,D40X,N41X,M51X,Q56X,M60X,Q103X,H109X,M113X和R131X中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从D17X、E30X和Q103X中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从D17X1、E30X2和Q103X3中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)包括从D17G、E30A和(Q103L或Q103I)中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X、E30X和Q103X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X1、E30X2和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)包括突变D17G、E30A和(Q103L或Q103I)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括从D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)。
在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ IDNO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17X1、E30X2、D35X3、M51X4和Q103X3，其中X1为G、H、R或A；X2为A、T、G、K或R；X3为S、A或Y；X4为F、I或L；并且X5为I或L。在某些情况下，主题DR-IL-18变体或其片段包含的氨基酸序列，(i)与如SEQ ID NO:30所列出的野生型人类IL-18氨基酸序列具有85％或更高的序列同一性(例如90％或更高，92％或更高，93％或更高，94％或更高，95％或更高，96％或更高，97％或更高，98％或更高，或99％或更高的序列同一性)；并且(ii)相对于SEQ ID NO:30，包括突变D17G、E30A、D35S、M51F和(Q103L或Q103I)。
在一些实施方式中，将本发明的组合物施用到鼠类细胞、组织、器官、系统或受试者，以治疗或预防疾病或病症。在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽或其片段施用到细胞、组织、器官、系统或受试者(例如人类细胞、组织、器官、系统或受试者)。在一些实施方式中，将编码至少一种鼠类IL-18变体多肽的核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)施用到细胞、组织、器官、系统或受试者。
在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1X、M50X、Y51X、K52X、S54X、E55X、V56X、R57X、G58X、L59X、R104X、N109X和L151X，其中X表示任何氨基酸。在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1H、N1Y、M50A、M50S、M50V、M50G、M50T、Y51R、K52V、K52S、K52T、K52G、K52A、S54R、S54K、S54G、S54N、E55R、E55H、E55N、E55D、E55G、V56L、V56M、V56R、V56A、V56S、V56Q、R57G、R57K、G58A、L59K、L59R、L59V、R104K、R104L、R104Q、R104S、N109D和L151V。在一些实施方式中，鼠类IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一种变体：mCS1(SEQ ID NO:60)、mCS2(SEQ ID NO:61)、mC1(SEQ ID NO:62)、mA12(SEQ ID NO:63)、mE8(SEQ ID NO:64)、mC10(SEQ ID NO:65)、mB7(SEQ ID NO:66)、mB1(SEQ ID NO:67)、mD1(SEQ ID NO:68)、mH7(SEQ ID NO:69)、mA7(SEQ ID NO:70)、mE1(SEQ ID NO:71)和mH3(SEQ ID NO:72)，或它们的片段。
在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含鼠类IL-18变体多肽，该鼠类IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1X、L5X、D17X、E30X、T33X、D34X、I35X、D36X、M50X、Q102X、R104、H108X、N109X、M111X、D129X和D130X，其中X表示任何氨基酸。在一些实施方式中，结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含鼠类IL-18变体多肽或其片段，该鼠类IL-18变体多肽或其片段包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变(例如至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个突变)：N1Y、N1D、N1H、N1L、N1F、N1V、N1I、L5Y、L5H、D17Q、D17G、D17A、D17E、D17S、D17N、E30A、E30R、E30K、E30T、E30G、T33G、T33A、T33E、T33R、T33K、D34Y、D34S、D34A、I35T、I35K、I35R、D36V、D36A、D36G、D36H、D36P、D36R、D36L、M50F、M50L、Q102L、Q102I、R104E、R104A、R104P、R104G、R104Q、R104H、H108D、H108A、N109R、N109S、N109T、N109I、M111L、M111I、D129A、D129F、D129V、D129Y、D129S、D130E、D130T、D130G、D130N、D130R、D130S、D130Q和D130H。结合并抑制IL-18BP的IL-18变体多肽包含鼠类IL-18变体多肽或其片段，该鼠类IL-18变体多肽或其片段选自由以下各项组成的组：mD2D-A5(SEQ ID NO:126)，mD2D-A6(SEQ ID NO:127)，mD2D-A7(SEQ ID NO:128)，mD2D-A8(SEQ IDNO:129)，mD2D-A9(SEQ ID NO:130)，mD2D-A11(SEQ ID NO:131)，mD2D-A12(SEQ ID NO:132)，mD2D-B4(SEQ ID NO:133)，mD2D-B7(SEQ ID NO:134)，mD2D-B11(SEQ ID NO:135)，mD2D-B12(SEQ ID NO:136)，mD2D-C1(SEQ ID NO:137)，mD2D-C3(SEQ ID NO:138)，mD2D-C5(SEQ ID NO:139)，mD2D-C6(SEQ ID NO:140)，mD2D-C9(SEQ ID NO:141)，mD2D-C10(SEQ IDNO:142)，mD2D-C11(SEQ ID NO:143)，mD2D-D1(SEQ ID NO:144)，mD2D-D9(SEQ ID NO:145)，mD2D-D12(SEQ ID NO:146)，mD2D-E3(SEQ ID NO:147)，mD2D-E4(SEQ ID NO:148)，mD2D-E5(SEQ ID NO:149)，mD2D-E7(SEQ ID NO:150)，mD2D-E8(SEQ ID NO:151)，mD2D-E9(SEQ ID NO:152)，mD2D-E10(SEQ ID NO:153)，mD2D-E11(SEQ ID NO:154)，mD2D-E12(SEQID NO:155)，mD2D-F3(SEQ ID NO:156)，mD2D-F4(SEQ ID NO:157)，mD2D-F5(SEQ ID NO:158)，mD2D-F7(SEQ ID NO:159)，mD2D-F8(SEQ ID NO:160)，mD2D-F9(SEQ ID NO:161)，mD2D-G1(SEQ ID NO:162)，mD2D-G7(SEQ ID NO:163)，mD2D-G9(SEQ ID NO:164)，mD2D-H7(SEQ ID NO:165)，mD2D-E1(SEQ ID NO:166)，mD2D-G8(SEQ ID NO:167)，mD2D-H3(SEQ IDNO:168)，mD2D-A10(SEQ ID NO:169)，mD2D-H1(SEQ ID NO:170)，mD2D-F12(SEQ ID NO:171)，mD2D-G10(SEQ ID NO:172)，mD2D-G12(SEQ ID NO:173)，mD2D-E2(SEQ ID NO:174)，mD2D-G11(SEQ ID NO:175)，mD2D-C4(SEQ ID NO:176)，mD2D-F11(SEQ ID NO:177)，mD2D-C2(SEQ ID NO:178)，mD2D-F10(SEQ ID NO:179)，mD2D-A2(SEQ ID NO:180)，mD2D-F6(SEQID NO:181)，mD2D-A1(SEQ ID NO:182)，mD2D-E6(SEQ ID NO:183)，mD2D-D4(SEQ ID NO:184)，mD2D-D6(SEQ ID NO:185)，mD2D-A3(SEQ ID NO:186)，mD2D-A4(SEQ ID NO:187)，mD2D-B10(SEQ ID NO:188)，mD2D-B8(SEQ ID NO:189)，mD2D-B9(SEQ ID NO:190)，或它们的片段。
在一些实施方式中，方法包括向受试者、细胞或组织施用编码本文所描述的一种或多种IL-18变体肽的分离的核酸分子。
本领域技术人员会理解的是，通过IL-18R的IL-18信号传导水平的增加包括可用于结合并激活IL-18R的IL-18或IL-18变体多肽的量的增加。这可以通过增加IL-18的水平或活性(这包括但不限于IL-18的直接或间接施用、IL-18变体多肽的直接或间接施用、和IL-18BP的抑制剂的直接或间接施用)以及增强编码IL-18或IL-18变体多肽的核酸的转录、翻译或两者来实现；并且其还包括增加IL-18或IL-18变体多肽的任何活性。
IL-18信号传导水平的提高(包括通过使用IL-18变体多肽)可以使用多种方法进行评估，包括本文公开的那些方法以及本领域已知的方法或将来要开发的方法。也就是说，基于本文提供的公开，常规人员会理解，使用评估从受试者获得的生物样品中编码IL-18或IL-18变体多肽或其片段的核酸(例如mRNA)的水平、IL-18或IL-18变体多肽或片段多肽的水平、和/或IL-18或IL-18变体多肽或片段活性的水平的方法，可以容易地评估增加IL-18信号传导的水平或活性。
基于本文提供的公开，本领域技术人员会理解，在受试者整体上(例如全身性)或部分上(例如局部、细胞、组织、器官)正在或将要接受治疗的疾病或病症中，如果IL-18信号传导活性的增加将是有益的，则本发明对该受试者有用。基于本文提供的教导，本领域技术人员会意识到，可通过本文描述的组合物和方法治疗的疾病和病症涵盖其中增加IL-18信号传导将促进积极的生物学、生理学、临床或治疗结果的任何疾病或病症。
本领域技术人员会意识到，除了直接增加IL-18信号传导外，降低本身减少IL-18信号传导的量或活性的分子的量或活性，也可以用来增加IL-18信号传导的量或活性。因此，IL-18活性的活化剂可以包括但不应解释为仅限于化学化合物、蛋白质、拟肽、抗体、核酶和反义核酸分子。基于本文提供的公开内容，本领域技术人员将容易理解，IL-18活性的活化剂包括增加IL-18信号传导水平的化合物。此外，IL-18活性的活化剂包括抑制特定分子的水平或活性的化合物，该特定分子本身降低IL-18信号传导的量或活性(即IL-18BP)。本发明考虑了IL-18BP拮抗剂，其包括(但不限于)单克隆抗体、中和IL-18BP的小分子治疗剂、和与IL-18BP结合但基本不与IL-18R结合或相互作用的工程化IL-18变体，通过以这种方式抑制IL-18BP，通过去抑制而增强了内源产生的IL-18的活性。
一旦掌握了本发明的教导，本领域技术人员还会意识到，IL-18信号传导水平的增加，包括IL-18水平或IL-18活性的增加(例如受体结合活性、受体信号传导活性等)。因此，增加IL-18信号传导的水平或活性包括但不限于增加可用的IL-18多肽或IL-18变体多肽的量，增加编码IL-18多肽或IL-18变体多肽的核酸的转录、翻译或两者；并且其还包括增加IL-18多肽或IL-18变体多肽的任何活性。本发明的IL-18活性组合物和方法的活化剂可以选择性地激活IL-18信号传导或者可以激活IL-18信号传导和另一种分子或途径。因此，本发明涉及施用IL-18活性的活化剂、IL-18活性多肽的重组活化剂、IL-18活性多肽片段的活性活化剂、或IL-18信号通路成分表达或活性的活化剂。
另外，当配备有本公开内容和本文示例的方法时，本领域技术人员会意识到，IL-18活性的活化剂包括将来发现的活化剂、通过药理学领域的众所周知的标准(如本文详细描述的和/或如本领域已知的激活IL-18信号传导的生理结果)识别的活化剂。因此，本发明不以任何方式限于本文举例说明或公开的IL-18活性的任何特定活化剂；相反，本发明涵盖如本领域已知和在将来发现的被常规人员理解为有用的那些活化剂。
识别和产生IL-18活性的活化剂的其他方法是本领域普通技术人员众所周知的，包括但不限于从天然来源(例如链霉菌、假单胞菌、金色链球菌(Stylotella aurantium)等)获得活化剂。或者，可以化学合成IL-18活性的活化剂。此外，基于本文提供的教导，常规人员会理解，IL-18活性的活化剂可获自重组生物。用于化学合成IL-18活性的活化剂和用于从天然来源获得它们的组合物和方法在本领域中是众所周知的，并且在本领域中已有描述。
本领域技术人员会认识到，活化剂可以施用为小分子化学品、多肽、编码多肽的核酸结构或其组合。用于将多肽或编码多肽的核酸施用于细胞或组织的众多载体和其他组合物及方法是众所周知的。因此，本发明包括一种施用多肽或编码作为IL-18信号传导的活化剂的多肽的核酸的方法。(Sambrook et al.,2012,Molecular Cloning:A LaboratoryManual,Cold Spring Harbor Laboratory,New York；Ausubel et al.,1997,CurrentProtocols in Molecular Biology,John Wiley&Sons,New York)。
本领域技术人员会意识到，降低本身减少IL-18信号传导的量或活性的分子的量或活性，可以用于增加IL-18信号传导的数量或活性(例如IL-18BP)。反义寡核苷酸是与mRNA分子的某些部分互补的DNA或RNA分子。当存在于细胞中时，反义寡核苷酸会与现有的mRNA分子杂交并抑制翻译成基因产物。使用反义寡核苷酸抑制基因的表达是本领域众所周知的(Marcus-Sekura,1988,Anal.Biochem.172:289)，在细胞中表达反义寡核苷酸的方法在本领域中也是众所周知的(Inoue,美国专利No.5,190,931)。本发明的方法包括使用反义寡核苷酸减少导致IL-18信号传导的量或活性降低的分子的量，由此增加IL-18信号传导的数量或活性。本发明考虑了通过本领域普通技术人员众所周知的方法合成并提供给细胞的反义寡核苷酸。例如，可以合成反义寡核苷酸，其长度为约10至约100，更优选约15至约50个核苷酸。核酸分子的合成是本领域众所周知的，修饰的反应寡核苷酸的合成也是众所周知的，从而改善相对于未修饰的反义寡核苷酸的生物活性(Tullis,1991,美国专利No.5,023,243)。
类似地，可通过反义分子与基因的启动子或其他调控元件的杂交来抑制基因的表达，从而影响基因的转录。识别与目的基因相互作用的启动子或其他调控元件的方法是本领域众所周知的，并且包括如酵母双杂交系统等方法(Bartel and Fields,eds.,In:TheYeast Two Hybrid System,Oxford University Press,Cary,N.C.)。
替代地，可通过使用核酶来实现表达减少IL-18信号水平或活性的蛋白质的基因的抑制。使用核酶抑制基因表达是本领域技术人员众所周知的(参见例如Cech et al.,1992,J.Biol.Chem.267:17479；Hampel et al.,1989,Biochemistry 28:4929；Altman etal.,美国专利No.5,168,053)。核酶是具有切割其他单链RNA分子的能力的催化RNA分子。已知核酶是序列特异性的，并因此可以被修饰以识别特定的核苷酸序列(Cech,1988,J.Amer.Med.Assn.260:3030)，允许选择性切割特定的mRNA分子。给定分子的核苷酸序列，提供本公开内容和本文并入的参考文献，本领域普通技术人员可以在不进行过度实验的情况下合成反义寡核苷酸或核酶。
本领域技术人员会意识到，IL-18活性的活化剂，如IL-18变体多肽或其片段或者编码IL-18变体多肽或其片段的核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)，可以单独或以其任何组合形式施用。
本领域技术人员还会意识到，施用可以是急性的(例如在较短的时间内，例如一天、一周或一月)或慢性的(例如在较长的时间内，如数月或一年或更长)。此外，在时间意义上，IL-18活性的活化剂，如IL-18变体多肽或其片段或者编码IL-18变体多肽或其片段的核酸(例如DNA、cDNA、mRNA等)，可以单独或以任何组合形式施用，因为它们可以彼此同时、彼此之前和/或彼此之后施用。基于本文提供的公开内容，本领域普通技术人员会意识到，IL-18活性的活化剂、IL-18活性多肽的活化剂、IL-18活性多肽的重组活化剂或IL-18活性多肽片段的活性活化剂可以单独使用或者可以与另一种IL-18活性的活化剂、IL-18活性多肽的活化剂、IL-18活性多肽的重组活化剂或IL-18活性多肽片段的活性活化剂组合使用，以达到治疗结果。
当掌握包括本文详述方法的本公开内容时，本领域技术人员会认识到，本发明不限于治疗一旦确定的疾病或病症。特别地，疾病或病症的症状不必表现为对受试者有害的点；实际上，在施用治疗之前不需要在受试者中检测到疾病或病症。即，在本发明可以提供益处之前，不必发生来自疾病或病症的重大病理学。因此，如本文更全面描述的，本发明包括一种在受试者中预防疾病和病症的方法，因为如本文其他位置讨论的，IL-18活性分子(例如多肽、肽等)的活化剂或IL-18活性的活化剂可以在疾病或病症发作之前施用于受试者，从而预防疾病或疾病的发展。
本发明涵盖施用IL-18活性的活化剂、IL-18活性多肽的活化剂、重组IL-18信号多肽或IL-18信号活性多肽片段来实践本发明的方法；基于本文提供的公开内容，本领域技术人员会理解如何配制和向受试者施用合适的IL-18活性的活化剂、IL-18活性多肽的活化剂、重组IL-18信号多肽或活性IL-18信号多肽片段。然而，本发明不限于任何特定的施用方案或治疗方案。这是特别真实的，在配备本文提供的公开内容，包括使用本领域公认的疾病模型付诸实践，本领域技术人员理解，药理学领域的技术人员可以确定施用IL-18活性的活化剂、IL-18信号多肽、重组IL-18信号多肽或活性IL-18信号多肽片段的方法。
在一些实施方式中，一种方法包括向有需要的受试者施用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物，和向受试者施用包含另外的药剂的组合物。在一个此种实施方式中，所述另外的药剂包含免疫治疗剂，该免疫治疗剂包含从包括但不限于改变的T细胞、嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)、装甲的CAR-T细胞、病毒、抗原、疫苗、抗体、免疫检查点抑制剂、小分子、化学治疗剂和干细胞中选择的至少一种。在一些实施方式中，在一种方法中使用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物以在被细菌、病毒或其他病原体感染之前、期间或之后增加免疫系统活性。在一些实施方式中，在一种方法中使用包含至少一种IL-18变体多肽的组合物以在体外、体内或离体增加免疫细胞的数量和/或活性，例如T细胞、NK细胞和/或髓样细胞的数量和/或活性。
在一些实施方式中，另外的药剂包含一种或多种细胞因子的抑制剂。在一些实施方式中，一种或多种细胞因子的抑制剂包括化学化合物、蛋白质、肽、拟肽、抗体、核酶、小分子化学化合物或者抑制一种或多种细胞因子的表达、活性或两者的反义核酸分子(例如siRNA、miRNA等)。在一些实施方式中，抑制剂抑制IL-17、IL-5或IL-3的表达、活性或两者。在一些实施方式中，施用细胞因子抑制剂可降低毒性。在一些实施方式中，施用细胞因子抑制剂可提高所施用的IL-18变体多肽或IL-18BP抑制剂的功效。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指可以与适当的IL-18信号传导调节剂组合并且在组合后可用于向受试者施用所述适当IL-18信号传导调节剂的化学成分。
试剂盒
本发明还涉及可用于本发明方法的试剂盒。这样的试剂盒包含可用于本文其他地方描述的任何方法的组分的各种组合，包括例如IL-18活性的活化剂(如IL-18变体多肽和/或IL-18BP抑制剂)，和/或用于定量分析IL-18变体多肽或IL-18变体核酸的材料，和/或用于评估IL-18变体多肽或IL-18变体核酸的活性的材料，和/或指导材料。例如，在一些实施方式中，该试剂盒包含可用于定量生物样品中IL-18变体核酸的组分。在另一实施方式中，该试剂盒包含可用于定量生物样品中IL-18变体多肽的组分。在又一实施方式中，该试剂盒包含可用于评估生物样品中IL-18变体多肽的活性(例如酶活性、配体结合活性等)的组分。
在进一步的实施方式中，该试剂盒包括用于监测施用于有此需要受试者的治疗的有效性的测定组分，含有指导材料和用于确定在施用治疗期间或之后从受试者获得的生物样品中IL-18信号传导水平是否被调节的组分。在多个实施方式中，为了确定在从受试者获得的生物学样品中IL-18信号传导的水平是否被调节，将IL-18信号传导水平与试剂盒中包含的至少一种比较器对照水平进行比较，如阳性对照、阴性对照、历史对照、历史常态或生物样品中另一参考分子的水平。在某些实施方式中，确定IL-18信号传导与参考分子的比例以帮助监测治疗。
药物成分与施用
如本文其他位置所述的包含多肽、多肽片段、IL-18信号水平或活性的活化剂或都跟IL-18BP水平或活性的抑制剂的组合物可以如现在所述配制并施用于受试者。如现在所述，通过非限制性示例，用于治疗和/或预防疾病或病症的被识别为IL-18活性的活化剂的组合物，包括IL-18变体多肽、重组IL-18变体多肽和活性IL-18变体多肽片段，可以被配制并施用于受试者。如现在所述，通过非限制性示例，用于治疗和/或预防疾病或病症的被识别为有用的IL-18BP抑制剂的组合物，包括化学化合物、蛋白质、肽、拟肽、抗体、核酶、小分子化学化合物、反义核酸分子(例如siRNA、miRNA等)，可以被配制并施用于受试者。
本发明涵盖药物组合物的制备和用途，所述药物组合物包含本文公开的用于治疗或预防疾病或病症的给物作为活性成分。这样的药物组合物可以为适合于向受试者施用的形式仅由活性成分组成，或者所述药物组合物可以包含活性成分以及一种或多种药学上可接受的载体、一种或多种另外的成分或这些的一些组合。如本领域众所周知，活性成分可以以生理上可接受的酯或盐的形式存在于药物组合物中，如结合生理上可接受的阳离子或阴离子。在多个实施方式中，活性成分是多肽、多肽片段、IL-18信号水平或活性的活化剂、IL-18BP水平或活性的抑制剂或它们的组合，如本文其他位置所述的。
如本文所用，术语“药学上可接受的载体”是指一种化学成分，其可以组合与其合适的IL-18信号传导调节剂，并且在组合后，可以向受试者施用所述其适合的调节剂(例如活化剂、抑制剂等)。
在一些实施方式中，药物组合物可包括大的缓慢代谢的大分子，例如蛋白质、多糖(例如壳聚糖)、聚乳酸、聚乙醇酸和共聚物(如胶乳功能化的SepharoseTM、琼脂糖、纤维素等)、聚合氨基酸、氨基酸共聚物和脂质聚集体(如油滴或脂质体)。
可以施用有用于实践本发明的药物组合物以递送约0.1ng/kg/天至100mg/kg/到或更高的剂量。
在多个实施方式中，在本发明的方法中有用的药物组合物可以例如全身、肠胃外或局部施用，如以口服制剂、吸入制剂(包括固体或气雾剂)以及局部或其他类似制剂。除了合适的治疗性组合物之外，此类药物组合物还可包含药学上可接受的载体和已知能增强和促进药物施用的其他成分。根据本发明的方法，也可以使用其他可能的制剂，例如纳米颗粒、脂质体、含有活性成分的其他制剂以及基于免疫学的系统，来施用其合适的调节剂。
载体可以各种方式携带主题药剂(例如IL-18变体多肽)，包括直接或通过接头基团共价键合以及非共价关联。合适的共价键载体包括蛋白质，例如白蛋白、肽和多糖，例如氨基葡聚糖，它们各自具有多个用于连接部分的位点。载体也可以通过非共价关联来携带IL-18变体多肽，如非共价键合或通过封装。为了本发明的目的，载体的性质可以是可溶的或不溶的。
可接受的载体、赋形剂或稳定剂在使用的剂量和浓度下对接受者无毒，并且包括缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲铵；苯扎氯铵，苄索氯铵；苯酚，丁醇或苯甲醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其他糖类，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐的抗衡离子，例如钠；金属复合物(例如锌蛋白复合物)；和/或非离子表面活性剂，例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。用于体内施用的制剂必须是无菌的。这可以通过无菌滤膜过滤轻松实现。
活性成分也可以包埋在例如通过凝聚技术或界面聚合制备的微胶囊中(例如分别为羟甲基纤维素或明胶微胶囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊)、或胶体药物递送系统中(例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊)或大乳液中。Remington'sPharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)中公开了此类技术。
组合物可以制备成注射剂，可以是液体溶液或悬浮液；也可以制备适合于在注射之前溶解或悬浮在液体媒介物中的固体形式。如上所述，该制剂还可以被乳化或包封在脂质体或微粒中，例如聚丙交酯、聚乙交酯或共聚物，以增强佐剂作用。Langer,Science 249:1527,1990和Hanes,Advanced Drug Delivery Reviews 28:97-119,1997。本发明的药剂可以以贮库注射剂或植入物制剂的形式施用，可以以允许活性成分持续或脉冲释放的方式配制所述贮库注射剂或植入物制剂。药物组合物通常被配制为无菌的，基本等渗的，并且完全符合美国食品药品管理局的Good Manufacturing Practice(GMP)规定。
如本文所用，术语“生理上可接受的”酯或盐是指与药物组合物的任何其他成分相容的活性成分的酯或盐形式，其对要施用该组合物的受试者无害。
本文所述药物组合物的制剂可以通过药理学领域已知的或以后开发的任何方法制备。通常，此类制备方法包括步骤：使活性成分与载体或一种或多种其他辅助成分结合，然后(如果必要或需要)，将产品成型或包装成所需的单剂量或多剂量单位。
尽管本文提供的药物组合物的描述主要针对适合于向人类进行伦理施用的药物组合物，但是技术人员可以理解，这样的组合物通常适合于向各种动物施用。对适合于向人类施用的药物组合物进行修改以使得组合物适合于向各种动物施用是众所周知的，并且普通技术兽药师仅需进行普通(如果有)实验即可设计和进行此类修改。
在本发明的方法中有用的药物组合物可以以适合于口服、直肠、阴道、肠胃外、局部、肺、鼻内、颊、静脉、透皮、病灶内、皮下、肌内、眼科、鞘内和其他已知施用途径的制剂制备、包装或销售。其他预期的制剂包括预计的纳米颗粒、脂质体制剂、含有活性成分的其他制剂以及基于免疫学的制剂。
本发明的药物组合物可以作为单个单位剂量或作为多个单个单位剂量制备、包装或散装出售。如本文所用，“单位剂量”是包含预定量活性成分的药物组合物的离散量。活性成分的量通常等于要被施用于受试者的活性成分的剂量或该剂量的方便分数，例如该剂量的二分之一或三分之一。
根据所治疗受试者的身份、大小和状况，并进一步根据组合物的施用途径，本发明药物组合物中活性成分、药学上可接受的载体和任何另外的成分的相对量可以变化。例如，组合物可以包含0.1％至100％(w/w)的活性成分。
除了活性成分之外，本发明的药物组合物可以还包含一种或多种另外的药物活性剂。
本发明药物组合物的控释制剂或缓释制剂可以使用常规技术制备。
适用于口服施用的本发明药物组合物的制剂可以以离散固体剂量单位的形式制备、包装或出售，其包括但不限于片剂、硬或软胶囊、扁囊剂、含片或锭剂，每一个均包含预定量的活性成分。适合口服施用的其他制剂包括但不限于粉末或颗粒制剂、水性或油性悬浮液、水性或油性溶液或乳液。
在药物组合物的制造中使用的药学上可接受的赋形剂包括但不限于惰性稀释剂、粒化剂和崩解剂、粘合剂、和润滑剂。已知的分散剂包括但不限于马铃薯淀粉和淀粉羟乙酸钠。已知的表面活性剂包括但不限于月桂基硫酸钠。已知的稀释剂包括但不限于碳酸钙、碳酸钠、乳糖、微晶纤维素、磷酸钙、磷酸氢钙和磷酸钠。已知的粒化剂和崩解剂包括但不限于玉米淀粉和藻酸。已知的粘合剂包括但不限于明胶、阿拉伯胶、预胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮和羟丙基甲基纤维素。已知的润滑剂包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、二氧化硅和滑石粉。
本发明药物组合物的液体制剂可以以液体形式或干燥产品的形式制备、包装和销售，所述干燥产品旨在在使用前与水或另一合适媒介物重构。
可以使用常规方法制备液体悬浮液，以使活性成分悬浮在水性或油性媒介物中。水性媒介物包括例如水和等渗盐水。油性媒介物包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油(如花生、橄榄、芝麻或椰子油)、分馏植物油和矿物油，例如液体石蜡。液体悬浮液可还包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮剂、分散剂或湿润剂、乳化剂、缓和剂、防腐剂、缓冲剂、盐、调味剂、着色剂和甜味剂。油性悬浮液可还包含增稠剂。
已知的悬浮剂包括但不限于山梨糖醇糖浆、氢化食用脂肪、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶、阿拉伯胶和纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素钠、甲基纤维素和羟丙基甲基纤维素。已知的分散剂或湿润剂包括但不限于天然存在的磷脂例如卵磷脂，环氧烷与脂肪酸、与长链脂肪醇、与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯、或与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物(例如分别为聚氧乙烯硬脂酸酯、十七碳亚乙基氧基鲸蜡醇、聚氧乙烯山梨醇单油酸酯和聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)。已知的乳化剂包括但不限于卵磷脂和阿拉伯树胶(acacia)。已知的防腐剂包括但不限于对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯、抗坏血酸和山梨酸。已知的甜味剂包括例如甘油、丙二醇、山梨糖醇、蔗糖和糖精。用于油性悬浮液的已知增稠剂包括例如蜂蜡、硬石蜡和鲸蜡醇。
可以以与液体悬浮液基本相同的方式制备活性成分在水性或油性溶剂中的液体溶液，主要区别在于活性成分溶解于而非悬浮于溶剂中。本发明药物组合物的液体溶液可以包含关于液体悬浮液描述的每种组分，应当理解的是，悬浮剂不一定会有助于活性成分溶解在溶剂中。水性溶剂包括例如水和等渗盐水。油性溶剂包括例如杏仁油、油性酯、乙醇、植物油(例如花生油、橄榄油、芝麻油或椰子油)、分馏的植物油和矿物油，例如液体石蜡。
可以使用已知方法制备本发明药物制剂的粉状和粒状制剂。此类制剂可以直接施用于受试者，用于例如形成片剂、填充胶囊或通过向其中添加水性或油性媒介物来制备水性或油性悬浮液或溶液。这些制剂中的每一种可还包含一种或多种分散剂或湿润剂、悬浮剂和防腐剂。这些制剂中还可以包含另外的赋形剂，例如填充剂和甜味剂、调味剂或着色剂。
本发明的药物组合物也可以以水包油乳液或油包水乳液的形式制备、包装或出售。油相可以是植物油例如橄榄油或花生油、矿物油例如液体石蜡或这些的组合。这样的组合物可以还包含一种或多种乳化剂，例如天然存在的树胶(例如阿拉伯树胶或黄蓍胶)、天然存在的磷脂(例如大豆或卵磷脂)、衍生自脂肪酸和己糖醇酐的组合的酯或偏酯(如脱水山梨糖醇单油酸酯)、和此种偏酯与环氧乙烷的缩合产物，如聚氧乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯。这些乳液还可能包含其他成分，例如甜味剂或调味剂。
用化学成分浸渍或涂覆材料的方法是本领域已知的，并且包括但不限于在表面上沉积或结合化学成分的方法，在材料合成过程中将化学成分掺入材料结构的方法(即如使用可生理降解的材料)，和将水溶液或油溶液或悬浮液吸收到吸收材料中的方法(有或没有后续干燥)。
如本文所用，药物组合物的“肠胃外施用”包括特征在于对受试者的组织进行物理破坏并且通过组织中的破坏进行药物组合物的施用的任何施用途径。因此，肠胃外施用包括但不限于通过注射组合物、通过手术切口施用组合物、通过组织穿透性非手术伤口施用组合物等来施用药物组合物。特别地，肠胃外施用被认为包括但不限于皮肤、皮下、腹膜内、静脉内、肌肉内、颅内注射以及肾脏透析输注技术。
适于肠胃外施用的药物组合物的制剂包含与药学上可接受的载体例如无菌水或无菌等渗盐水组合的活性成分。此种制剂可以以适于推注施用或连续施用的形式制备、包装或出售。可注射制剂可以单位剂型制备、包装或出售，例如在安瓿中或在含有防腐剂的多剂量容器中。用于肠胃外施用的制剂包括但不限于油性或水性媒介物中的悬浮液、溶液、乳液，糊剂和可植入的缓释或可生物降解的制剂。此种制剂可以还包含一种或多种另外的成分，包括但不限于悬浮剂、稳定剂或分散剂。在用于肠胃外施用的制剂的一些实施方式中，活性成分提供为干燥形式(即粉末或颗粒)，其用于在肠胃外施用重构组合物之前与适合的媒介物(例如无菌无热原水)重构。
药物组合物可以以无菌可注射的水性或油性悬浮液或溶液的形式制备、包装或出售。该悬浮液或溶液可以根据已知技术进行配制，并且除了活性成分外，还可以包含另外的成分，例如本文所描述的分散剂、润湿剂或悬浮剂。可以使用无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂，例如水或1,3-丁二醇，来制备这种无菌可注射制剂。其他可接受的稀释剂和溶剂包括但不限于林格氏溶液、等渗氯化钠溶液和固定油，例如合成的甘油单酯或甘油二酯。其他有用的可胃肠外施用的制剂包括包含微晶形式、脂质体制剂形式或作为可生物降解的聚合物体系的组分的活性成分的那些制剂。用于缓释或植入的组合物可以包含药学上可接受的聚合物或疏水材料，例如乳液、离子交换树脂、微溶聚合物或微溶盐。
适用于局部施用的制剂包括但不限于液体或半液体制剂，例如擦剂、乳液剂、水包油或油包水乳液(如霜剂、软膏或糊剂)、和溶液或悬浮液。例如，用于局部施用的制剂可以包含约1％至约10％(w/w)的活性成分，但是活性成分的浓度可以与活性成分在溶剂中的溶解度极限一样高。用于局部施用的制剂可以还包含一种或多种本文所描述的另外的成分。
本发明的药物组合物可以制备、包装或出售为适于通过颊腔经肺施用的制剂。此种制剂可以包含干燥颗粒，干燥颗粒包含活性成分并且直径为约0.5至约7纳米，并且优选地为约1至约6纳米。此类组合物方便地为干粉形式，用于使用包括干粉贮存器的装置来施用，该装置可将推进剂流引导至该干粉贮存器中以分散粉末，或使用自驱动溶剂/粉末分配容器，例如在密封容器中包含溶解或悬浮于低沸点推进剂中的活性成分的装置。优选地，此类粉末包含以下颗粒，其中按重量计至少98％的颗粒直径大于0.5纳米并且按数量计至少95％的颗粒直径小于7纳米。更优选地，按重量计至少95％的颗粒的直径大于1纳米并且按数量计至少90％的颗粒直径小于6纳米。干粉组合物优选包含固体细粉稀释剂(例如糖)并且方便地提供为单位剂型。
低沸点推进剂通常包括在大气压下沸点低于65°F的液体推进剂。通常，所述推进剂可以构成组合物的50至99.9％(w/w)并且活性成分可以构成组合物的0.1至20％(w/w)。推进剂可还包含另外的成分，例如液体非离子或固体阴离子表面活性剂或固体稀释剂(优选具有与包含活性成分的颗粒相同数量级的颗粒大小)。
配制用于肺部递送的本发明的药物组合物还可以以溶液或悬浮液的小滴形式提供活性成分。此种制剂可以制备、包装或出售为水性或稀醇性溶液或悬浮液(任选无菌的)，其包含活性成分并且可以方便地使用任何喷雾或雾化装置进行施用。此种制剂可以还包含一种或多种另外的成分，包括但不限于调味剂如糖精钠、挥发油、缓冲剂、表面活性剂或防腐剂如羟基苯甲酸甲酯。通过该施用途径提供的液滴优选具有约0.1至约200纳米范围内的平均直径。本文描述的可用于肺部递送的制剂也可用于鼻内递送本发明的药物组合物。适于鼻内施用的另一种制剂是包含活性成分并且具有约0.2至500微米平均颗粒的粗粉。
此种制剂以采用鼻吸的方法施用，即从靠近鼻孔的容器中通过鼻道快速吸入所述粉末。例如，适合鼻腔施用的制剂可以例如包含低至约0.1％(w/w)至高达100％(w/w)的活性成分，并且可以还包含一种或多种本文描述的另外的成分。
本发明的药物组合物可以适合于颊施用的制剂的形式制备、包装或出售。此类制剂可以例如为采用常规方法制成的片剂或锭剂形式，并且例如可以含有0.1至20％(w/w)的活性成分，余量包含口腔可溶或可降解的组合物和任选地一种或多种本文描述的另外的成分。或者，适合经颊施用的制剂可包含含有活性成分的粉末或气雾化或雾化的溶液或悬浮液。此种粉末状、气雾化或气雾化的制剂，在分散时，优选具有约0.1至约200纳米范围内的平均颗粒或液滴尺寸，并且可以还包含一种或多种本文所描述的另外的成分。
本发明的药物组合物可以适于眼科施用的制剂的形式制备、包装或出售。此种制剂可以例如为滴眼液的形式，其例如包括在水性或油性液体载体中的0.1-1.0％(w/w)活性成分的溶液或悬浮液。此类滴剂可以还包含缓冲剂、盐或者一种或多种本文所描述的其他另外的成分。其他有用的眼科施用制剂包括那些包含微晶形式或在脂质体制剂中的活性成分的制剂。
如本文所用，“另外的成分”包括但不限于下列中的一种或多种：赋形剂；表面活性剂；分散剂；惰性稀释剂；粒化剂和崩解剂；粘合剂；润滑剂；甜味剂；调味剂；着色剂；防腐剂；可生物降解的成分，例如明胶；水性媒介物和溶剂；油性媒介物和溶剂；悬浮剂；分散剂或润湿剂；乳化剂，缓和剂；缓冲剂；盐；增稠剂；填充剂；乳化剂；抗氧化剂；抗生素；抗真菌剂；稳定剂；以及药学上可接受的聚合物或疏水材料。可以包括在本发明的药物组合物中的其他“另外的成分”是本领域众所周知的并且描述于例如Genaro,ed.,1985,Remington'sPharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.中，其通过引用并入本文。
通常可施用于动物(优选人类)的本发明化合物的剂量范围为每千克动物体重约0.001mg至约1000mg。施用的精确剂量将取决于许多因素，包括但不限于动物类型和所治疗疾病或病症的类型、动物的年龄和施用途径。优选地，所述化合物的剂量为每千克动物体重约约0.1mg至约10mg。所述化合物向动物施用的频率可以频繁至每天数次，或者可以更低的频率施用，如每天一次、每周一次、每两周一次、每月一次，或者甚至频率更低，如每数个月一次或甚至每年一次或甚至更低。用药的频率对于本领域技术人员来说是显而易见的并且将取决于许多因素，如但不限于所治疗的疾病或病症的类型和严重程度、动物的类型和年龄等。
实验例
参考以下实验例进一步详细描述本发明。提供这些实施例仅出于说明目的，除非另有说明，否则它们不意图构成限制。因此，本发明决不应解释为限于以下实施例，而应解释为涵盖由于本文提供的教导而变得显而易见的任何和所有变型。
无需进一步描述，可以相信的是，本领域普通技术人员可以使用前面的描述和以下示例性实施例来制造和利用本发明并实践所要求保护的方法。因此，以下工作例不应解释为以任何方式限制本公开的其余部分。
实施例1：IL-18变体多肽
IL-18是一种促炎性细胞因子，可以刺激T、NK和骨髓细胞。由于具有刺激抗肿瘤免疫细胞的能力，因此已被提议作为治疗癌症的免疫治疗剂。如本文所证明，重组IL-18治疗的治疗功效由于其天然内源可溶性抑制剂IL-18BP的上调而受到极大限制。本发明部分地基于人类和小鼠IL-18的变体的开发，它们几乎完全独立于IL-18BP。细胞因子变体对受体(IL-18Rα和IL-18BP)的相对偏好改变了数十万至超过一百万倍。这些变体在临床前肿瘤模型中具有强大的抗肿瘤活性，既可以作为单一疗法，也可以与免疫检查点抑制剂(例如抗PD-1)组合使用。作为另外的应用，IL-18还具有公认的抗肥胖作用，并且在本文中证明，与WT IL-18治疗相比，施用所述变体大幅降低了身体脂肪成分。因此，这种新型变体除具有肿瘤免疫疗法外，还具有内分泌/代谢/肥胖症的适应症。
本文还描述了另一组IL-18变体，其通过仅与IL-18BP结合且不存在或极大地减少与IL-18Rα的结合而充当IL-18BP拮抗剂。可以设想，这些蛋白可通过中和IL-18BP来增强内源性IL-18的活性。
现在描述这些实验中使用的材料和方法。
蛋白质表达和纯化
将人类IL-18、小鼠IL-18(氨基酸1–157)及其变体组装为gBlocks(IntegratedDNA Technologies,IDT)并且克隆到pET28a-smt载体中，以在大肠杆菌BL21(DE3)Rosetta菌株中表达N-末端sumo-标记的且C末端六组氨酸标记的蛋白质。在16℃下使用0.5mM IPTG历经20小时以诱导蛋白质表达。首先使用Ni-螯合树脂纯化融合蛋白，然后用sumo蛋白酶切割sumo标签。然后通过连续的硫酸铵切割，在20％硫酸铵下沉淀体和在70％硫酸铵下尝尝目标蛋白而从聚集体中分离出蛋白质。将蛋白质团粒重新悬浮并且再次应用于Ni-螯合树脂以除去sumo标签，进行使用0.1％Triton X-114的洗涤以去除内毒素。最后，用PD-10柱(GE Healthcare)将洗脱的蛋白质缓冲液交换为PBS。通过尺寸排阻色谱使用FPLC(Bio-Rad)和SEC650柱(Bio-Rad)测试蛋白质样品的单分散性。
通过杆状病毒表达系统分泌和纯化人类IL-18Rα胞外域(氨基酸19–329)、IL-18Rβ胞外域(氨基酸15–356)和IL-18BP(氨基酸31–194)。简言之，将所有构建体序列克隆到具有N-末端gp67信号肽以及C末端AviTagTM和六组氨酸标签的pAcBN-BH3载体(BDBiosciences)中。使用质粒构建体墨染在SF900 II SFM培养基(Invitrogen)中在27℃下培养的草地夜蛾(Sf9)昆虫细胞，以建立高滴度重组病毒，随后将其扩增。使用病毒感染在27℃下在Insect Xpress培养基(Lonza)中生长的Trichopulsia ni(High-Five)昆虫细胞(Invitrogen)，以表达重组蛋白。感染后三天，通过Ni-NTA(QIAGEN)亲和色谱提取蛋白质，浓缩，并且使用在10mM HEPES(pH 7.5)和150mM NaCl平衡的SEC650上浆柱(Bio-Rad)纯化至>98％的同质性。
使用Expi293表达系统(Thermo Fisher)将小鼠IL-18Rα胞外域(氨基酸19–329)和IL-18BP(氨基酸31–194)生产为分泌蛋白。简言之，将所有构建体克隆到具有N-末端H7信号肽以及C末端AviTagTM和六组氨酸标签的BacMam表达载体pEZT_D_Lux中。使用ExpiFectamine 293转染试剂盒(Thermo Fisher)根据制造商的说明，用质粒转染在Expi293表达培养基(Thermo Fisher)中在37℃下培养的Expi293细胞。转染后3-5天收获细胞。蛋白质纯化程序与人类蛋白质的相同。
对于蛋白质生物素化，将C末端的生物素受体肽(AviTag)-GLNDIFEAQKIEWHE融合到所有IL-18受体构建体。使用可溶性BirA连接酶在0.1mM Bicine(pH 8.3)、10mM ATP、10mM乙酸镁和0.5mM生物素(Sigma)中进行蛋白质的生物素化。如上所述，在SEC650柱上通过尺寸排阻纯化蛋白质。
IL-18的酵母展示
合成人类和小鼠IL-18基因块(IDT)，克隆到载体pYAL中并且在酿酒酵母菌株EBY100上进行展示。使IL-18酵母的单个菌落在SDCAA液体培养基中在30℃下生长过夜，并且在20℃下在SGCAA液体培养基中诱导1天。通过流式细胞仪使用抗cMyc标签抗体(抗myc-PE；Cell Signaling Technologies)验证酵母上的IL-18展示水平。在冰上，在补充有0.5％BSA和2 mM EDTA(PBE)的PBS中进行使用生物素化的IL-18Rα(有或没有IL-18Rβ)或生物素化的IL-18BP的受体染色。所有分析均在Sony SA3800流式细胞仪上进行。
人类IL-18文库的构建和选择
对于第一人类耐诱饵型IL-18文库，通过将hIL-18/hIL-18Rα/hIL-18Rβ复合物(蛋白质数据库(PDB ID)码3OW4)的结构与IL-18/IL-18BP(PDB ID3F62)的结构进行对比，从同源位置识别出hIL-18(表1)中有14个hIL-18Rα和hIL-18BP接触残基。使用组装PCR和表2中列出的简并引物构建随机化这些残基的文库。该文库在理论上具有～1.96×1011个独特蛋白质序列的多样性。用与pYAL载体具有同源性的引物进一步扩增PCR产物，并与线性化的pYAL一起共电穿孔到EBY100酵母中。所得的文库包含2.5×108个转化子。
对于第二V2.0人类耐诱饵型IL-18文库，选择hIL-18中的11个hIL-18Rα和hIL-18BP接触残基进行随机化，理论多样性为3.44x109个变体(示于图7A中)。使用组装PCR用简并引物构建随机化这些残基的文库，并与pYAL一起共电穿孔到EBY100酵母中。所得文库具有6×108个转化子的多样性。
表1：第一人类IL-18文库设计
残基 密码子 潜在残基
1Y YNT Y、F、S、C、L、P、H、R
L5 NWT L、F、I、Y、H、N、V、D
8K MRA K、R、R、Q
51M RNS M、I、T、N、K、S、R、V、A、D、E、G
53K ARA K、R
55S RRW S、R、G、G、N、K、D、E
59G RNA G、E、A、V、I、T、K、R
60M VDG M、K、R、L、Q、R、V、E、G
103Q VAW Q、K、E、D、N、H
105S RRW S、K、R、N、D、E、G、G
110D VAW D、E、K、N、Q、H
111N NAT N、D、H、Y
153V RHT V、A、D、I、T、N
155N VAW N、K、D、E、Q、H
表2：第一人类IL-18文库组装引物
Figure BDA0002478671530001141
Figure BDA0002478671530001151
对于两个文库，回收转化的酵母，在具有酪蛋白氨基酸(SDCAA)培养基的液体合成葡萄糖培养基中在30℃下进行扩增，通过1:10稀释到具有酪蛋白氨基酸(SGCAA)培养基的液体合成半乳糖培养基中并且在20℃下培养24小时进行诱导。在每一轮中使用适当数量的诱导酵母，以在每个步骤中确保至少10倍覆盖预期的文库多样性，并且不少于108个细胞。所有选择步骤均使用PBE缓冲液(PBS具有0.5％BSA和2mM EDTA)在4℃下进行。对于第一代文库，每轮的选择试剂列于表3中。对于第1轮，用抗Cy5/AlexaFluor 647微珠(Miltenyi)和LS MACS柱(Miltenyi)反选择酵母，以去除非特异性珠结合剂。通过在4℃下用1μM生物素化的hIL-18Rα标记酵母1小时，然后用SA/AlexaFluor 647微珠和LS MACS柱进行磁选，进行正选择。对于第2轮，使用1μM生物素化的IL-18BP进行反选择，正选择与第1轮相同。对于第3-5轮，通过将酵母与100nM(第3-4轮)或10nM(第5轮)生物素化的IL-18Rα和250nM预先形成的生物素封端的hIL-18BP/SA-PE四聚体一起温育来进行选择。竞争结合后，洗涤酵母并用SAMAlexa Fluor 647标记以检测IL-18Rα。使用AlexaFluor 488-缀合的抗cMyc(CellSignaling Technologies)染色来确定展示水平，并且使用Sony SA3800细胞分选仪使用FACS分离出展示归一化的IL-18Rα结合剂的前1％(从IL-18BP非结合剂中)。每轮选择后，将回收的酵母在SDCAA培养基中在30℃下过夜扩增，然后通过1:10稀释在SGCAA培养基中在20℃下诱导24小时。
以类似的方式选择V2.0人类DR-IL-18文库，图7B中详细说明了具体的选择步骤。
小鼠IL-18文库的构建和选择
构建和选择程序与人类IL-18类似，但有以下更改。通过计算机(in-silico)模拟的小鼠IL-18/受体复合物结构来告知文库的构建(由Phyer2.0预测)。选择13个位置使用表4所述的引物进行随机化(表3)。与pYAL一起共电穿孔，产生4×108个转化子的文库。表5列出了每一轮使用的选择试剂。
表3：小鼠IL-18文库设计
残基 密码子 潜在残基
1N NWT F、Y、L、H、I、N、V、D
50M RNS M、I、T、N、K、S、R、V、A、D、E、G
51Y NRN Y、K、R、D、E
52K VNS L、P、H、Q、R、I、M、T、N、K、S、V、A、D、E、G
54S RRW S、R、G、G、N、K、D、E
55E VRN E、K、N、R、S、R、H
56V VNV V、S、P、T、A、K、R
57R RVW R、D、E、S、T
58G RNA G、E、A、V、I、T、K、R
59L VDR L、K、R、Q、R、V、E、G
104R NDH R、D、E、N、Y、F、I、L、V
109N NAT N、D、H、Y
151L VHY L、V、A、D、I、T、N
表4：小鼠IL-18文库组装引物
Figure BDA0002478671530001161
Figure BDA0002478671530001171
表5：文库选择试剂汇总
Figure BDA0002478671530001172
表面等离子体共振
使用Biacore T100进行实验并在25℃下进行。将生物素化的IL-18Rα或IL-18BP固定在Biacore生物素捕获芯片上(S CAP系列传感器芯片,GE Healthcare)，以产生～50RU(IL-18Rα)或～10RU(IL-18BP)的Rmax。使用IL-18变体在HEPES缓冲的盐水-P+缓冲液(10mMHEPES pH 7.4,150mM NaCl,0.005％表面活性剂P20)中的系列稀释液进行测量。通过三次60秒注入的再生缓冲液(3/4(v/v)8M盐酸胍与1/4(v/v)1M氢氧化钠)进行表面再生。同时在多个通道中进行实验以增加观察。使用2.0版Biacore T100评估软件使用1:1朗缪尔结合模型分析所有数据。
细胞系
将HEK-Blue IL-18传感细胞(InvivoGen)保持在补充有100μg/mL诺莫霉素、30μg/mL灭瘟素(Blasticidin)、180μg/mL Zeocin和200μg/mL潮霉素的完全培养基(含有10％热灭活的FBS、2mM L-谷氨酰胺、50U/mL青霉素和50μg/mL链霉素的DMEM)中。如先前所述培养和准备YUMMER1.7黑色素瘤细胞(Wang et al.,2017,Pigment Cell Melanoma Res.,30(4):428-435)。
HEK-Blue细胞因子活性测定
为了细胞因子活性测量，在平底96孔板的每孔中，在总体积为200μL的完全培养基中，用浓度连续降低的重组人类IL-18温育50,000个HEK-Blue IL-18传感细胞。在37℃和5％CO2下温育20-24小时后，将30μL细胞培养上清液与170μL QUANTI-Blue检测培养基(InvivoGen)混合并且在37℃和5％CO2下温育直到可以检测到从粉红色到蓝色的颜色变化(0.5-4小时)。使用分光光度计在655nm波长处定量碱性磷酸酶的水平。通过计算测定中每种细胞因子的相对吸光度值(在655nm下测得的最大吸光度值的百分比)来确定细胞因子活性。
对于IL-18BP阻断实验，在4℃下将固定浓度的重组人类IL-18与连续降低浓度的重组人类IL-18BP预温育1小时。随后，将蛋白质混合物添加到HEK-Blue IL-18传感细胞中，并按所述进行测定。
小鼠
将来自Jackson Laboratory的C57BL/6野生型小鼠(6-9周龄)用于体内小鼠实验。实验组按体重、性别和年龄进行匹配。所有动物实验均按照Yale Institutional AnimalCare and Use Committee(耶鲁大学动物护理和使用委员会)的批准进行。
体内药效学和药代动力学研究
小鼠(n＝9/组)每日接受腹膜内(i.p.)注射1mg/kg重组IL-18(WT或变体mCS2)或作对媒介物对照的PBS。在实验的第1天、第4天和第7天，在注射后5小时处死每组3只小鼠以通过心脏穿刺收集血液，随后进行血浆或白细胞分析(见小鼠IL-18BP ELISA，用于小鼠细胞因子分析的基于Luminex的多重免疫分析，以及通过流式细胞仪进行免疫表型分析)。在整个实验的7天中，使用啮齿动物温度计BIO-TK8851(Bioseb)和用于小鼠的RET 3直肠探针(Braintree Scientific Inc.)每天监测体温。每天监测体重。
从全血的血浆制备
使用EDTA涂覆的微容器血浆分离管(BD)根据制造商的指示从全血中进行血浆制备。将血浆样品在-20℃下冷冻一次，然后用于分析测定。
IFN-γ和IL-18BP ELISA
为了测量细胞培养上清液中人类IFN-γ的水平，根据制造商的说明使用具有灵敏度为4pg/mL且检测范围为7.8–500pg/mL的人类IFN-γELISA MAX Deluxe Set(BioLegend)。为了定量细胞培养上清液中的人类IL-18BP，使用灵敏度为7.52pg/mL且检测范围为26.6–1,700pg/mL的Quantikine人类IL-18BP免疫测定(R&D Systems)。使用灵敏度为0.156ng/mL且检测范围为0.156–10ng/mL的小鼠IL-18BP ELISA试剂盒(R&D systems)定量血浆中小鼠IL-18BP的水平。包括样品制备在内的所有测定均按照制造商的说明进行。
用于小鼠细胞因子分析的基于Luminex的多重免疫测定
为了量化血浆中各种小鼠细胞因子(包括IFN-γ和IL-12)的水平，使用Bio-Plex200系统(Bio-Rad)进行基于luminex的Bio-Plex Pro多重免疫测定(Bio-Rad)。按照制造商的说明，使用在DEME中重构的Bio-Plex Pro小鼠细胞因子标准23-Plex(组I)分析目标细胞因子。
通过流式细胞仪进行免疫分型
对于白细胞分析，将100μL全血收集到额外含50μL肝素溶液的EDTA包被的Microtainer血浆分离管(BD)中，并颠倒数次进行混合。添加ACK裂解缓冲液(VWR)并在室温下温育3-5分钟进行红细胞溶裂解。在添加MACS缓冲液(2mM EDTA,2％FBS,在PBS中)后，离心(5分钟,400×g,4℃)收集白细胞并且抽吸出上清液。用冷MACS缓冲液洗涤白细胞一次，然后按照所述再次收集。将细胞团粒再次悬浮于含有10％(v/v)大鼠血清(STEMCELLTechnologies Inc.)和特异性荧光标记抗体的200μL MACS缓冲液中进行染色，以用于后续流式细胞仪分析。使用以下抗体在4℃下染色30分钟：αCD4-AF700(BioLegend)、αCD8-APC(BioLegend)、B220-APC-Cy7(BioLegend)、CD11b-PB(BioLegend)、NK1.1-PE(BioLegend)、NKp46-PE(BioLegend)和CD69-FITC(BioLegend)。之后，如前所述，用MACS缓冲液洗涤白细胞两次。最后，将细胞重悬于100μL MACS缓冲液中，并使用流式细胞仪(Sony SA3800)采集样品。取等份的10μL使用Invitrogen Countess II自动细胞计数器(Thermo FisherScientific)进行细胞计数。使用FlowJo v10.3软件进行数据分析，并使用前向散射和侧面散射对细胞进行白细胞和单事件门控。
肿瘤治疗实验
将0.5×106个YUMMER1.7细胞皮下植入到C57BL/6J小鼠中。植入后7天，当肿瘤约50mg时，开始治疗。将小鼠分为治疗组，其中包括：1)媒介物(盐水)，2)抗PD1(大鼠克隆RMP1-14,Bio X细胞,West Lebanon,New Hampshire,US)，3)野生型IL-18，4)mCS2，5)野生型IL-18+抗PD-1，和6)CS2 IL-18+抗PD1。分别以8mg/kg、0.32mg/kg和0.32mg/kg，每周两次腹腔注射施用抗PD-1、野生型IL-18和mCS2 IL-18。监测小鼠的临床毒性体征，并每周两次使用卡尺测量追踪肿瘤的生长。当肿瘤直径达到或超过最大尺寸1.5cm时，对小鼠实施安乐死；这被认为是生存分析的终点。
以类似的方式进行B2m缺陷型YUMMER1.7研究，但有细微的变化。因为肿瘤的生长速度比亲代菌株慢，所以移植了1.0x106个细胞。以与上述研究相同的时间表和剂量给予由生理盐水、抗PD1加抗CTLA4、和mCS2组成的治疗。
现在描述实验结果。
IL-18轴作为癌症免疫疗法的靶标
为了识别用于免疫治疗干预的潜在信号传导节点，分析来自肿瘤浸润淋巴细胞的单细胞RNAseq数据以分析细胞因子途径成分的表达,(Singer et al.,2016,Cell,166:1500-1511,e1509)。如图1A所示，IL-18—IL-18Rα(即IL-18R1)和IL-18Rβ(即IL-18RAP)的受体亚基—以及IL-18本身在活化和功能异常的淋巴细胞程序中均被上调。免疫基因组(ImmGen)数据库的进一步分析显示，两个IL-18受体亚基的表达的表达均与慢性抗原暴露后CD4和CD8细胞中T细胞“耗竭”标志物(包括PD-1、Tim3、Lag3和TIGIT)的表达相关(图1B)。这些表达特征表明，IL-18途径可作为免疫治疗范式，用于选择性地刺激肿瘤内活化的和功能异常/耗竭的T细胞。
IL-18是一种Th1细胞因子，因其能够强烈刺激T细胞和NK细胞释放干扰素γ(IFN-γ)的能力而最初称为“干扰素-γ-诱导因子”(IGIF)。IL-18的反馈抑制是通过IFN-γ驱动的IL-18BP诱导实现的，IL-18BP是IL-18的高亲和力分泌诱饵受体，在空间上阻碍了IL-18结合并激活其受体的能力(图2A)。不希望受到任何特定理论的束缚，该机制让人想起IFN-γ对PD-L1的诱导，表明IL-18BP可能充当“可溶性免疫检查点”。与此假设相符，发现，在TCGA和Oncomine数据库中，IL-18BP在几种类型的癌症中被上调，最明显的是乳腺癌、胃癌和脑癌(图2B)。另外，IL-18BP的表达与肿瘤中关键免疫检查点PD-1的表达密切相关(在胃癌和乳腺癌中分别为r＝0.65和0.78，图2C)，表明IL-18BP也可能有助于肿瘤的免疫逃逸和淋巴细胞耗竭。
在多项临床试验中已向癌症患者施用重组IL-18。发现即使在2mg/kg的高剂量下仍具有良好的耐受性，并具有强大的药效学输出，包括活化的CD69+自然杀伤(NK)细胞扩增和血清IFN-γ水平的急剧增加。然而，由于缺乏疗效，中止了黑色素瘤患者的II期临床试验。对这些临床试验报告的药效学结果的检查表明，重复施用会减弱rIL-18的有效性，并在周围NK细胞激活/扩增和细胞因子释放(包括IFN-γ和GM-CSF)方面出现快速耐受(tachyphylaxis)。rIL-18的有效性减弱与IL-18BP的血清水平大幅增加相吻合，比治疗前水平高两个数量级，并且经常超过100ng/mL。不希望受任何特定理论的束缚，可以推测的是，IL-18BP限制了rIL-18疗法的有效性，并且不受IL-18BP抑制作用的IL-18变体可能是有效的肿瘤免疫疗法。另外，IL-18BP的抑制剂可能对肿瘤免疫疗法有效。
工程化对IL-18BP抑制耐受的IL-18变体(人类DR-IL-18变体)
为了获得可以通过IL-18Rα/IL-18Rβ信号传导但不受IL-18BP抑制的IL-18变体，利用了具有酵母表面展示的定向进化。首先分析了人类IL-18:IL-18Rα:IL-18Rβ(PDB＝3OW4)的三元信号传导复合物的结构，并识别了与信号传导复合物和IL-18BP具有共享接口的IL-18残基(图3A)。由于尚未确定hIL-18:hIL-18BP的结构，因此利用了IL-18与IL-18BP的病毒(念珠菌病毒)直系同源物之间的相关复合物(PDB＝3F62)。使用简并的寡核苷酸引物和组装PCR，创建了一个组合库，可将这组残基随机为一组定义的替代物(参见表1)。将该文库与N-末端酵母展示载体pYAL一起电穿孔到酵母中，获得具有2.5×108个转化子的文库。使用该文库，通过使用重组hIL-18Rα的磁性和荧光细胞分选(FACS)进行连续轮选择以及使用hIL-18BP的反选择来进行定向进化，如图3B所示。经过五轮选择后，与野生型hIL-18相比，明显大多数文库克隆已完全交换了对hIL-18BP和hIL-18Rα的相对偏好(图3C)。这些克隆被称为“DR-hIL-18”变体，其中“DR”代表“耐诱饵型”。
来自后五轮池的96个克隆的测序揭示了21个独特的序列，这些序列经分析产生了四个“共有序列”hCS1-4(图4)。为了估计这些变体对hIL-18Rα和hIL-18BP的结合亲和力，使用酵母展示的细胞因子变体和流式细胞仪建立了对hIL-18Rα和IL-18BP结合的结合等温线。如图5A所示，DR-hIL-18变体以与WT IL-18相似的亲和力结合了hIL-18Rα，但与hIL-18BP的结合显著减弱，表观结合EC50值明显大于1μM。为了进一步表征DR-IL-18变体的受体结合活性，重组表达细胞因子，并对IL-18Rα和IL-18BP进行表面等离子体共振(有关代表性迹线，参见图5B)。这些结果汇总在表6和表7中，并证明与IL-18Rα相比，DR-hIL-18变体对IL-18BP的偏好显着降低了几个数量级。
表6：酵母结合等温线上显示的人类IL-18变体的IL-18Rα和IL-18BP结合亲和力
Figure BDA0002478671530001231
NBD，未检测到结合(20μM用于比率计算)
------，值未确定
表7：SPR显示的人类IL-18变体的IL-18Rα和IL-18BP结合亲和力
Figure BDA0002478671530001241
------，值未确定
人类DR-IL-18变体的功能表征
Kim et al(Kim et al.,2001,Proc Natl Acad Sci U S A,98(6):3304-9)的先前报道描述了具有增强活性并据说降低了受IL-18BP:E42A、K89A和E42A/K89A抑制的3hIL-18变体。将这些细胞因子变体展示在酵母上，并通过流式细胞仪评估IL-18BP对IL-18Rα结合的抑制作用。如图6A所示，虽然DR-hIL-18变体无法抑制hIL-18BP抑制hIL-18Rα的结合，但Kim et al的变体显示出与WT hIL-18相当的hIL-18BP中和作用。这些结果表明，DR-hIL-18变体是独立于IL-18BP的，而Kim et al的变体对IL-18BP的抑制高度敏感，类似于WThIL-18。
为了证实DR-hIL-18可以在细胞环境中通过IL-18受体产生有效的信号传导，使用HEK-blue IL-18报告子细胞系进行了浓度响应实验。在这个系统中，通过表达NFκb/AP1启动子下游的分泌性碱性磷酸酶(SEAP)来读出IL-18R信号传导。在没有IL-18BP的情况下，DR-hIL-18变体产生的信号传导EC50值与WT hIL-18相当。然而，DR-hIL-18变体几乎没有受到hIL-18BP的抑制，在1μM IL-18BP下没有检测到抑制(图6B)。综上所述，这些研究确定，DR-hIL-18变体具有生物活性，并且在细胞信号传导环境中不受IL-18BP中和的影响。
对IL-18BP抑制耐受的第二代人类IL-18变体的工程化和表征(人类v2.0DR-IL-18 变体)
为了获得其他可能增强的人类DR-IL-18变体，设计了在11个位置随机化的人类IL-18的第二个文库(图7A)，并如上所述对酵母进行转化。如(图7B)所述，对得到的6x108个转化子的文库进行选择，通过连续的选择步骤，产生与IL-18BP相比，对IL-18Rα具有强烈的偏好(图7C)。经过5至6轮选择，共回收到17个独特序列(图8)。(图9A)如通过用生物素化的IL18Rα进行酵母结合等温线所测定的，与WT IL-18相比，克隆6-12、6-27、6-29和6-31对IL18Rα的结合相同或稍强。(图9B)但是，这些克隆与IL-18BP没有任何明显的结合。(图9C)通过对酵母展示的克隆施加一定温度范围的热稳定性测量，结果表明，它们比WT IL-18的热稳定性温度高7-13℃。这些结果汇总于(图9D)。
工程化对IL-18BP抑制的IL-18变体(鼠类DR-IL-18变体)
由于人类和小鼠的物种间IL-18对IL-18Rα的交叉反应性较差，因此创建了可用于在小鼠中研究的鼠类等效DR-IL-18变体。与上述用于hIL-18的方法类似，创建了一个mIL-18变体组合文库，该文库随机化了一相似组的mIL-18Rα/mIL-18BP接触残基(表3)，产生了一个4×108个转化子的文库。与使用人类IL-18文库进行的定向进化类似，在该文库上进行了定向进化；选择策略总结在图10A中。在完成六轮选择后，与mIL-18BP相比，其余克隆对mIL-18Rα的偏好接近完全(图10B)。对96个克隆的分析揭示了11个独特的序列，从中得出两个共有序列mCS1和mCS2(图10C)。酵母结合等温线和表面等离子体共振实验确认，与本文所描述的人类IL-18变体相比，这些DR-IL-18克隆甚至对IL-18BP具有更大的独立性，其mIL-18BP结合KD远高于1μM，并且mIL-18Rα结合仍大致等于WT mIL-18(图11A、图11B、表8和表9)。
表8：酵母结合等温线上显示的小鼠IL-18变体的IL-18Rα和IL-18BP结合亲和力
Figure BDA0002478671530001261
NBD，未检测到结合(10M用于比率计算)
表9：SPR显示的小鼠IL-18变体的IL-18Rα和IL-18BP结合亲和力
Figure BDA0002478671530001262
NBD，未检测到结合(30μM用于比率计算)
DR-IL-18变体的体内药效学研究
为了体内评估施用的DR-IL-18变体的生物学效应，在小鼠中进行了药效学研究，将WT mIL-18与mCS2进行了比较。在第一项研究中，使用媒介物(PBS)、mIL-18(1mg/kg/天)或mCS2(1mg/kg/天)治疗小鼠，总共注射七次(图12A)。通过流式细胞仪分析外周血表型表明，与媒介物治疗相比，WT mIL-18和mCS2均使外周NK细胞数目增加了超过十倍，并且外周单核细胞计数增加了超过五倍；总CD4和CD8细胞计数未受到明显影响(图12B)。通过CD69诱导检测细胞活化状态表明，与mIL-18或媒介物治疗相比，mCS2处理显著地增加了CD4和CD8细胞上的CD69的水平；CD4和CD8子集分别达到超过30％和50％的阳性(图12C)。尽管第3天，mIL-18和mCS2都将外周NK细胞上的CD69表达刺激至超过20％阳性，但到第6天，对于mIL-18，CD69水平下降至非显著水平，而使用mCS2的治疗仍显著升高(图12C)。还使用多重Luminex面板测量了外周血细胞因子水平。如图12D所示，与媒介物治疗相比，mIL-18和mCS2均增加了血清IFN-g、MIP1b和G-CSF，但是对于每一种这些细胞因子，第6天mCS2实现的水平都比mIL-18要高得多，因为mIL-18表现出快速耐受，后续施用导致细胞因子水平趋于稳定或降低。
mCS2对身体脂肪成分的影响
为了评估DR-IL-18变体对身体脂肪成分的影响，我们每三天通过腹膜内注射方式向C57BL/6小鼠施用1mg/kg WT IL-18或0.01、0.1或1mg/kg mCS2。通过echoMRI监测身体脂肪和瘦体重成分。到第12天，所有测试剂量的mCS2(1mg/kg、0.1mg/kg和0.01mg/kg)均导致身体脂肪的总百分比显著下降，而接受媒介物和mIL-18治疗的小鼠的总身体脂肪成分没有显著变化(图13，顶图)。具体来说，在实验期间，mCS2治疗的小鼠的总脂肪量水平降低或稳定(图13，左下图)，但大幅增加了他们的瘦体重(图13，右下图)。这些结果表明，本文公开的mCS2和其他变体可用于治疗性降低身体脂肪成分(例如用于治疗肥胖、糖尿病和/或代谢综合征)。
DR-IL-18变体的抗肿瘤功效
使用可移植的同基因YUMMER1.7恶性黑色素瘤模型评估DR-IL-18(mCS2)的抗肿瘤功效。以0.32mg/kg的剂量每两周一次将WT mIL-18和mCS2施用于带有YUMMER1.7肿瘤的小鼠，同时或不同时施用抗PD1抗体(8mg/kg/q3d)。与先前在小鼠和人类中使用该药剂的报道一致，与媒介物(盐水)相比，WT IL-18不影响肿瘤的生长或存活，并且在联合使用时仅轻微改善了抗PD1的功效。然而，mCS2作为单药疗法治愈了27％的受治疗小鼠，并且在另外27％的小鼠中产生了部分响应，这一效果与抗PD1治疗相当。mCS2与抗PD1的组合治愈了80％的受治疗小鼠(图14A和图14B)。
为了确定DR-IL-18对YUMMER1.7肿瘤的作用机制，使用了针对CD8、CD4、NK1.1和干扰素-γ的抗体进行了细胞耗竭研究。如图15A和图15B中所示，CD8细胞的耗竭或干扰素-γ的中和完全废除了DR-IL-18的有效性。CD4细胞的耗竭并不影响在肿瘤生长方面的DR-IL-18的初始活性，但是，在CD4治疗的小鼠中，治疗响应无法持续，这表明了CD4细胞在支持和维持抗肿瘤免疫力中的作用。NK细胞的耗竭并未影响YUMMER1.7细胞的肿瘤生长或存活。
还在免疫原性MC38结直肠肿瘤模型中评估DR-IL-18的活性。首先进行了剂量调查研究，施用盐水、WT IL-18(1mg/kg，每周两次)或每周两次施用剂量范围为0.01mg/kg、0.1mg/kg或1mg/kg的DR-IL-18。如图16所示，WT IL-18对肿瘤生长无影响，而DR-IL-18(mCS2)显示出剂量依赖性功效，在0.1mg/kg下减慢肿瘤生长并且在1mg/kg下导致肿瘤消退。然后扩增各组并且评估与免疫检查点抑制的潜在协同作用。再次，WT IL-18作为单一疗法无效，并且没有增强抗PD1的功效。相比之下，DR-IL-18表现出与抗PD1相当或优于抗PD1的强大的单一治疗活性，并且两种疗法一起给予时显示出出众的协同作用，在所有治疗小鼠中产生了完全消退(图17)。
为了进一步表征DR-IL-18的机制，对用盐水、WT IL-18或DR-IL-18(mCS2)治疗的小鼠的MC38肿瘤的免疫浸润进行了流式细胞术研究。相对于盐水或WT IL-18，DR-IL-18治疗增加了每mg肿瘤的CD8和NK细胞浸润，并额外导致效应细胞的激活标志物(如颗粒酶B和KLRG1)上调(图18A，顶行)。与如IL-2或IL-15等其他细胞因子疗法不同，与盐水疗法相比，DR-IL-18未增加肿瘤内CD8:Treg的比率。然而，DR-IL-18治疗可通过增加CD8细胞与肿瘤相关巨噬细胞(TAM)以及单核细胞和粒细胞髓样来源的抑制细胞(MDSC)的比例来提供更有利的肿瘤免疫微环境。还使用Luminex分析从相同小鼠的血清中测量了次级细胞因子释放曲线。如图18B所示，相对于WT IL-18治疗，DR-IL-18治疗将干扰素-γ、IL-7和IL-15的全身水平提高超过100倍。总而言之，这些结果表明，DR-IL-18通过不同于IL-2、IL-15或WT IL-18治疗的独特作用机制产生抗肿瘤功效。
据预测，DR-IL-18疗法诱导的某些次级细胞因子可能会潜在地导致毒性和/或效力降低。例如，被DR-IL-18上调>100倍的IL-17导致结肠炎和牛皮癣，并另外刺激粒细胞，这些粒细胞可以变成免疫抑制的髓样来源的抑制细胞。IL-5和IL-13是2型细胞因子，也被DR-IL-18上调，可能导致过敏、哮喘加重或过敏反应加重。Th2 T细胞无助于免疫治疗响应，并可能促进免疫抑制性Treg的发展。因此，在某些情况下，DR-IL-18的有效性和安全性可以通过选择性抑制不希望的次级细胞因子(例如IL-17、IL-5和IL-13)来增强，例如通过中和抗体。
许多肿瘤对免疫检查点抑制均具有耐性，无论是初次出现时(原发性耐药)还是在最初对治疗产生响应后(继发性耐药)。检查点抑制剂耐药的最普遍原因是丧失通过MHC I类的抗原呈递。表面MHC I类的丧失通常与NK-细胞介导的细胞溶解有关，但是，NK细胞可能会在MHC I缺陷型肿瘤中耗竭。由于NK细胞表达IL-18R，而我们先前在MC38中的结果表明NK细胞被DR-IL-18扩增并激活，因此我们测试了DR-IL-18是否可以刺激NK细胞攻击MHC I缺陷型肿瘤。我们使用CRISPR/cas9敲除Yummer1.7细胞系中的B2m，发现甚至抗CTLA4和抗PD1的组合治疗也难治植入的B2m缺陷型YUMMER1.7肿瘤(图19A和图19B)，而所述组合常规治愈近100％的亲本型Yummer1.7肿瘤。然而，使用DR-IL-18(mCS2)的单药治疗以NK-细胞依赖性方式治愈了60％的B2m缺陷型Yummer1.7肿瘤，因为抗NK1.1的耗竭消除了这种效果(图19A和图19B)。进行实验以了解DR-IL-18在MHC I类缺陷型肿瘤设置中对肿瘤内NK细胞的影响。用流式细胞仪对来自用盐水或DR-IL-18治疗的小鼠的B2m缺陷型Yummer.17肿瘤进行了免疫分型研究。第三次施用24小时后，处死小鼠，分离肿瘤，并将细胞悬浮液用PMA/离子霉素处理4小时。然后用Ki67和干扰素-γ通过细胞内流式细胞术分析NK细胞的增殖指数和功能能力。如图19C所示，来自盐水治疗的B2m缺陷型Yummer1.7肿瘤的NK细胞的干扰素-γ生产和Ki67水平很少，表明其表型耗竭。相比之下，来自用DR-IL-18治疗的肿瘤的NK细胞具有较强的干扰素-γ生产和Ki67水平，大多数NK细胞对这两种标志物均呈阳性。因此，这些结果证明，DR-IL-18可以以NK细胞依赖性方式有效治疗免疫检查点阻滞难治的MHC I类缺陷型肿瘤。
这些结果将DR-IL-18确立为一种高度有前景的肿瘤免疫治疗剂，并提供有力证据表明，鉴于mCS2 DR-IL-18变体的活性大幅提高，IL-18BP极大地限制了IL-18疗法的有效性。根据这些结果，可以预测其他策略，例如用抗体、小蛋白和/或小分子阻断IL-18BP，可能会增强IL-18治疗和其他免疫治疗方案。
已经努力通过创建特异性结合IL-18BP但不结合IL-18Rα并由此不发出信号的“诱饵至诱饵”(D2D)或IL-18变体来工程化设计IL-18BP拮抗剂。与系统性地驱动IL-18R信号传导相反，这种药剂的潜在优势在于它将起到中和IL-18BP并增强内源性IL-18活性的作用。因此，将IL-18在用于IL-18Rα的接触位置随机化(图20A)，并按照先前对人类和小鼠DR-IL-18的描述制备了酵母展示的文库。如(图20B)所示，对3.9x 108个转化子的所得文库进行3轮筛选，选择保留的IL-18BP结合，同时针对IL-18Rα进行反选择。如(图20C)所示，每轮选择都赋予了与IL-18BP(人和小鼠)结合的富集作用，但没有获得IL-18Rα结合。测序了96个克隆，产生了31个独特序列，从中得到三个共有序列hD2D-CS1、hD2D-CS2和hD2D-CS3(图21)。所得克隆的生物物理表征表明，它们显示的与IL-18BP的结合等温线与WT IL-18类似(图22A)，但与IL-18Rα的结合大幅减少/缺失(图22B)。这些数据汇总于(图22C)中。对鼠类IL-18进行了相同的选择过程，创建了2.0x108个转化子的文库，我们对该文库进行了选择，获得51个独特序列(汇总于图23)。
实施例2：第二代变体的结合亲和力测量
使用表面等离子体共振(SPR)来进行第二代DR-IL-18变体的生物物理亲和力测量(相对于IL-18BP，结合IL-18R)。生成的传感图见图24。表10是测量的动力学的汇总，表11是亲和力测量的汇总，并且表12是常规汇总，包括第二代DR-IL-18变体的解离常数比的结果。
表10：第二代hDR-IL-18变体的SPR数据汇总(动力学)
Figure BDA0002478671530001311
表11：第二代hDR-IL-18变体的SPR数据汇总(亲和力)
样品 KD<sub>表观</sub>hIL-18Ra(nM) KD<sub>表观</sub>hIL-18BP(nM)
hIL-18 5.4,5.4 <0.1
6-12 1.8,2.2 太弱
6-27 3.9,3.5 太弱
6-29 2.1,2.7 太弱
6-31 15.2,19.4 太弱
表12：SPR亲和力测量的汇总。第二代hDR-IL-18变体对IL-18Ra和IL-18BP的SPR亲和力测量的汇总。IL-18BP:Ra解离常数比是IL-18BP的KD与IL-18Ra的KD之比，已归一化为WT IL-18的相同比。与WT IL-18相比，该比率的较高数字表示，IL-18变体对IL-18Ra的结合偏好高于对IL-18BP的结合偏好。*2项研究的平均值。k是乘以1,000。m是乘以1,000,000。
Figure BDA0002478671530001321
实施例3：癌症治疗功效
使用多种不同的癌症模型测试了DR-IL-18变体的功效，这些模型包括对免疫检查点抑制剂耐受的结直肠肿瘤、乳腺癌、黑色素瘤和MHC I类缺陷型肿瘤模型。结果表明，偏向于结合IL-18R而非IL-18BP的DR-IL-18变体可用于治疗多种癌症(不仅限于已测试的癌症)。
图25A和图25B：展示DR-IL-18对CT26结直肠肿瘤模型的功效的数据。皮下植入250,000个CT26细胞，并在第7天一旦肿瘤达到平均约60mm3即开始治疗。WT IL-18和mCS2每周两次以0.32mg/kg的剂量施用，共5剂。以相同的时间表以10mg/kg给予抗PD1。(A)蜘蛛图的叠加，盐水(PBS)治疗的动物的肿瘤生长显示为黑线(圆圈)，WT IL-18为蓝线(方形)且DR-IL-18(mCS2)为粉线(三角形)。在动物子集中，仅是用DR-IL-18而非WT IL-18进行的治疗导致了肿瘤生长抑制和肿瘤清除。(B)使用抗PD-1、WT IL-18和DR-IL-18(mCS2)治疗的小鼠的存活曲线。完全响应的数字显示在括号中。DR-IL-18而非WT IL-18在40％小鼠中导致了延长的生存期和肿瘤清除，相对于检查点抑制剂抗PD-1，得到了改善。
图26A和图26B：展示DR-IL-18在4T1乳腺癌模型和B16-F10黑色素瘤模型中的功效的数据。(A)移植到BALB/C小鼠中的4T1肿瘤在用盐水(PBS；黑色)、WT IL-18(蓝色)或DR-IL-18变体CS2(粉色)治疗后的肿瘤生长曲线。(B)移植到C57BL/6小鼠中的B16-F10肿瘤在用盐水(PBS；黑色)、WT IL-18(蓝色)或DR-IL-18变体CS2(粉色)治疗后的肿瘤生长曲线。在这两种模型中，只有DR-IL-18而非WT IL-18导致了肿瘤生长抑制。在肿瘤超过平均体积50mm3之后开始治疗，如标有“t”的方框所示。
图27A和图27B：这些数据扩展了图19A至图19C的数据。描述了展示DR-IL-18在治疗对免疫检查点抑制剂耐受的另外的MHC I类缺陷型肿瘤模型中的功效的数据。(A)如为B2m缺陷型YUMMER细胞所描述的，使用CRISPR/Cas9介导的缺失制备B2m缺陷型MC38细胞。皮下植入B2m-/-MC38细胞并且在第7天一旦肿瘤达到平均～65mm3，即开始治疗。mCS2以0.32mg/kg施用，一周两次，共5剂。以相同的时间表，以8mg/kg施用抗PD1和抗CTLA4。(B)RMA/S是RMA淋巴瘤系的变体，其在Tapasin中包含自发突变。其结果是抗原加载有缺陷，并因此降低了MHC I类表面表达。其与C57BL/6同系并且是免疫检查点抑制剂难治的。小鼠皮下植入1,000,000个RMA/S细胞并且在第7天开始治疗。mCS2以0.32mg/kg施用，每周两次。以相同的时间表，以8mg/kg给予抗PD1。
实施例4：联合疗法
图28：展示DR-IL-18增强抗肿瘤抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的功效的数据(支持与如肿瘤靶向抗体等调理剂的联合疗法)。离体细胞毒性研究使用CFSE标记的Raji(B细胞淋巴瘤)细胞和分离的人类外周血单核细胞(PBMC)。在1:10的效应物:靶(E:T)比率下将PBMC和标记的Raji细胞一起温育25小时。如所示的，将人类DR-IL-18变体hCS-1(1uM)、利妥昔单抗(10ug/mL)或者两药剂的组合施用于所述样品。通过流式细胞仪测量细胞毒性，并计算为变为DAPI阳性的CFSE细胞的比例。通过双向ANOVA与Tukey校正进行多次比较，*p<0.05。
实施例5：对抗病毒感染的功效
图29A和图29B：展示DR-18变体用于治疗感染疾病(例如对于病毒感染，例如在本说明性实例中，mCS2用于治疗全身性牛痘病毒感染)的抗病毒功效的数据。(A)实验设计方案。使C57BL/6小鼠腹腔内(IP)感染106PFU牛痘病毒(VACV)并且施用1mg/kg WT mIL-18或mCS2 IP。感染后第3天，处死小鼠并通过RT-PCR测定血液和卵巢中的病毒滴度。(B)感染后第3天，对治疗的小鼠的卵巢和血液中的VACV病毒拷贝进行定量。使用CS2的治疗显示病毒滴度显著降低，而WT IL-18无效。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。
实施例6：第二代人类DR-IL-18变体
图30A描述了展示第二代人类DR-IL-18变体具有活性的数据。(图30A)WT IL-18以及h6-12、h6-27、h6-29和h6-31刺激IL-18HEK-Blue报告子细胞。与WT hIL-18相比，h6-12、h6-27和h6-29显示出增强的效力，而h6-31具有与WT hIL-18同等的效力。因此，所述数据表明，所有测试的第二代人类DR-IL-18变体均通过IL-18R活跃地进行信号传导。
野生型IL-18氨基酸序列
人类白细胞介素-18(成熟形式)
YFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:30)
小鼠白细胞介素-18(成熟形式)
NFGRLHCTTAVIRNINDQVLFVDKRQPVFEDMTDIDQSASEPQTRLIIYMYKDSEVRGLAVTLSVKDSKMSTLSCKNKIISFEEMDPPENIDDIQSDLIFFQKRVPGHNKMEFESSLYEGHFLACQKEDDAFKLILKKKDENGDKSVMFTLTNLHQS(SEQ ID NO:31)
Q14116|IL18_人类白细胞介素-18(未切割的前体)
MAAEPVEDNCINFVAMKFIDNTLYFIAEDDENLESDYFGKLESKLSVIRNLNDQVLFIDQGNRPLFEDMTDSDCRDNAPRTIFIISMYKDSQPRGMAVTISVKCEKISTLSCENKIISFKEMNPPDNIKDTKSDIIFFQRSVPGHDNKMQFESSSYEGYFLACEKERDLFKLILKKEDELGDRSIMFTVQNED(SEQ ID NO:32)
P70380|IL18_小鼠白细胞介素-18(未切割的前体)
MAAMSEDSCVNFKEMMFIDNTLYFIPEENGDLESDNFGRLHCTTAVIRNINDQVLFVDKRQPVFEDMTDIDQSASEPQTRLIIYMYKDSEVRGLAVTLSVKDSKMSTLSCKNKIISFEEMDPPENIDDIQSDLIFFQKRVPGHNKMEFESSLYEGHFLACQKEDDAFKLILKKKDENGDKSVMFTLTNLHQS(SEQ ID NO:33)
第1代人类白细胞介素-18耐诱饵型变体氨基酸序列
Figure BDA0002478671530001351
Figure BDA0002478671530001361
Figure BDA0002478671530001371
第2代人类白细胞介素-18耐诱饵型变体氨基酸序列
Figure BDA0002478671530001372
Figure BDA0002478671530001381
Figure BDA0002478671530001391
小鼠白细胞介素-18耐诱饵型变体氨基酸序列
Figure BDA0002478671530001392
Figure BDA0002478671530001401
人类诱饵到诱饵(D2D)变体氨基酸序列
Figure BDA0002478671530001402
Figure BDA0002478671530001411
Figure BDA0002478671530001421
Figure BDA0002478671530001431
小鼠诱饵到诱饵(D2D)变体氨基酸序列
Figure BDA0002478671530001432
Figure BDA0002478671530001441
Figure BDA0002478671530001451
Figure BDA0002478671530001461
Figure BDA0002478671530001471
Figure BDA0002478671530001481
Figure BDA0002478671530001491
本公开的示例性非限制性方面
上述本主题的各方面(包括实施方式)可以单独或者与一个或多个其他方面或实施方式组合提供益处。不受限于前述描述，下面在组A和组B中提供了本公开的某些非限制性方面。对于本领域普通技术人员而言，在阅读本公开后将显而易见的是，每个单独编号的方面可以单独使用或与任何先前的或随后单独编号的方面一起组合使用。这旨在为各方面的所有此类组合提供支持，并且不限于以下明确提供的方面的组合。对于本领域的普通技术人员将显而易见的是，在不脱离本发明的精神或范围的情况下，可以进行各种改变和修改。
组A
1.一种包含IL-18变体多肽的组合物，其中IL-18变体多肽特异性地结合IL-18受体(IL-18R)并且其中IL-18变体多肽表现出与IL-18结合蛋白(IL-18BP)的结合大幅降低。
2.根据条目1所述的组合物，其中相对于野生型(WT)IL-18，所述IL-18变体多肽包含至少一个突变。
3.根据条目2所述的组合物，其中所述WT IL-18是包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的人类IL-18。
4.根据条目2所述的组合物，其中所述WT IL-18是包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18。
5.根据条目3所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
6.根据条目3所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1H、Y1R、L5H、L5I、L5Y、K8Q、K8R、M51T、M51K、M51D、M51N、M51E、M51R、K53R、K53G、K53S、K53T、S55K、S55R、Q56E、Q56A、Q56R、Q56V、Q56G、Q56K、Q56L、P57L、P57G、P57A、P57K、G59T、G59A、M60K、M60Q、M60R、M60L、E77D、Q103E、Q103K、Q103P、Q103A、Q103R、S105R、S105D、S105K、S105N、S105A、D110H、D110K、D110N、D110Q、D110E、D110S、D110G、N111H、N111Y、N111D、N111R、N111S、N111G、M113V、M113R、M113T、M113K、V153I、V153T、V153A、N155K和N155H。
7.根据条目2所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含选自由以下各项组成的组的至少一种IL-18变体多肽：SEQ ID NO:34，SEQ ID NO:35，SEQ ID NO:36，SEQ ID NO:37，SEQ ID NO:38，SEQ ID NO:39，SEQ ID NO:40，SEQ ID NO:41，SEQ ID NO:42，SEQ IDNO:43，SEQ ID NO:44，SEQ ID NO:45，SEQ ID NO:46，SEQ ID NO:47，SEQ ID NO:48，SEQ IDNO:49，SEQ ID NO:50，SEQ ID NO:51，SEQ ID NO:52，SEQ ID NO:53，SEQ ID NO:54，SEQ IDNO:55，SEQ ID NO:56，SEQ ID NO:57，SEQ ID NO:58，SEQ ID NO:59，SEQ ID NO:73，SEQ IDNO:74，SEQ ID NO:75，SEQ ID NO:76，SEQ ID NO:77，SEQ ID NO:78，SEQ ID NO:79，SEQ IDNO:80，SEQ ID NO:81，SEQ ID NO:82，SEQ ID NO:83，SEQ ID NO:84，SEQ ID NO:85，SEQ IDNO:86，SEQ ID NO:87，SEQ ID NO:88，SEQ ID NO:89，SEQ ID NO:90，SEQ ID NO:91，或它们的片段。
8.根据条目4所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、M50X、Y51X、K52X、S54X、E55X、V56X、R57X、G58X、L59X、R104X、N109X和L151X。
9.根据条目4所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含以下各项组成的组中选择的至少一个突变：从N1H、N1Y、M50A、M50S、M50V、M50G、M50T、Y51R、K52V、K52S、K52T、K52G、K52A、S54R、S54K、S54G、S54N、E55R、E55H、E55N、E55D、E55G、V56L、V56M、V56R、V56A、V56S、V56Q、R57G、R57K、G58A、L59K、L59R、L59V、R104K、R104L、R104Q、R104S、N109D和L151V。
10.根据条目2所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含选自由以下各项组成的组中的至少一种IL-18变体多肽：SEQ ID NO:60，SEQ ID NO:61，SEQ ID NO:62，SEQ IDNO:63，SEQ ID NO:64，SEQ ID NO:65，SEQ ID NO:66，SEQ ID NO:67，SEQ ID NO:68，SEQ IDNO:69，SEQ ID NO:70，SEQ ID NO:71，SEQ ID NO:72，或它们的片段。
11.一种组合物，其包含编码条目1-10所述IL-18变体多肽中的至少一种的核酸。
12.一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括受试者施用条目1-11所述的至少一种组合物。
13.根据条目12所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
14.根据条目13所述的方法，其中所述癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。
15.根据条目13所述的方法，其中所述癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
16.根据条目13所述的方法，其中所述疾病或病症是代谢性疾病或病症。
17.根据条目12所述的方法，其中所述疾病或病症是传染性疾病。
18.根据条目12所述的方法，还包括向受试者施用至少一种其他药剂。
19.根据条目18所述的方法，其中所述至少一种其他药剂包含一种或多种次级细胞因子的抑制剂。
20.根据条目19所述的方法，其中所述一种或多种次级细胞因子是从IL-17、IL-5和IL-13组成的组中选择的至少一种。
21.根据条目19所述的方法，其中所述至少一种或多种次级细胞因子的抑制剂包括选自由以下各项组成的组中的至少一种：化学化合物，多肽，肽，拟肽，抗体，核酶，小分子化学化合物和反义核酸分子。
22.一种包含IL-18BP抑制剂或IL-18BP拮抗剂的组合物，其中抑制剂或拮抗剂抑制IL18BP中和内源性IL-18的能力。
23.根据条目22所述的组合物，其中抑制剂或拮抗剂包含选自由以下各项组成的组中的至少一种：化学化合物，多肽，肽，拟肽，抗体，核酶，小分子化学化合物和反义核酸分子。
24.根据条目22所述的组合物，包含IL-18变体多肽，其中所述IL-18变体多肽特异性结合至IL-18结合蛋白(IL-18BP)并且其中所述IL-18变体多肽表现出与IL-18受体(IL-18R)的结合大幅降低。
25.根据条目24所述的组合物，其中相对于野生型(WT)IL-18，所述IL-18变体多肽包含至少一个突变。
26.根据条目24所述的组合物，其中所述WT IL-18是包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的人类IL-18。
27.根据条目24所述的组合物，其中所述WT IL-18是包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18。
28.根据条目26所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X。
29.根据条目26所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1D、Y1F、Y1H、Y1L、L5F、L5H、D17A、D17G、D17R、D17H、E31A、E31T、E31G、E31K、E31R、T34A、T34K、T34E、D35S、D35A、D35Y、S36N、S36K、S36R、D37P、D37A、D37R、D37H、D37L、D37V、D40Y、D40S、D40A、N41K、N41S、N41R、M51F、M51L、M51I、Q56H、M60L、M60F、M60I、Q103L、Q103I、H109A、H109P、H109D、M113L、M113I、M113F和R131S。
30.根据条目24所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含选自由以下各项组成的组中的至少一种IL-18变体多肽：SEQ ID NO:92，SEQ ID NO:93，SEQ ID NO:94，SEQ IDNO:95，SEQ ID NO:96，SEQ ID NO:97，SEQ ID NO:98，SEQ ID NO:99，SEQ ID NO:100，SEQID NO:101，SEQ ID NO:102，SEQ ID NO:103，SEQ ID NO:104，SEQ ID NO:105，SEQ ID NO:106，SEQ ID NO:107，SEQ ID NO:108，SEQ ID NO:109，SEQ ID NO:110，SEQ ID NO:111，SEQID NO:112，SEQ ID NO:113，SEQ ID NO:114，SEQ ID NO:115，SEQ ID NO:116，SEQ ID NO:117，SEQ ID NO:118，SEQ ID NO:119，SEQ ID NO:120，SEQ ID NO:121，SEQ ID NO:122，SEQID NO:123，SEQ ID NO:124，SEQ ID NO:125，或它们的片段。
31.根据条目27所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、L5X、D17X、E30X、T33X、D34X、I35X、D36X、M50X、Q102X、R104、H108X、N109X、M111X、D129X和D130X。
32.根据条目4所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1Y、N1D、N1H、N1L、N1F、N1V、N1I、L5Y、L5H、D17Q、D17G、D17A、D17E、D17S、D17N、E30A、E30R、E30K、E30T、E30G、T33G、T33A、T33E、T33R、T33K、D34Y、D34S、D34A、I35T、I35K、I35R、D36V、D36A、D36G、D36H、D36P、D36R、D36L、M50F、M50L、Q102L、Q102I、R104E、R104A、R104P、R104G、R104Q、R104H、H108D、H108A、N109R、N109S、N109T、N109I、M111L、M111I、D129A、D129F、D129V、D129Y、D129S、D130E、D130T、D130G、D130N、D130R、D130S、D130Q和D130H。
33.根据条目2所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含选自由以下各项组成的组中的至少一种IL-18变体多肽：SEQ ID NO:126，SEQ ID NO:127，SEQ ID NO:128，SEQID NO:129，SEQ ID NO:130，SEQ ID NO:131，SEQ ID NO:132，SEQ ID NO:133，SEQ ID NO:134，SEQ ID NO:135，SEQ ID NO:136，SEQ ID NO:137，SEQ ID NO:138，SEQ ID NO:139，SEQID NO:140，SEQ ID NO:141，SEQ ID NO:142，SEQ ID NO:143，SEQ ID NO:144，SEQ ID NO:145，SEQ ID NO:146，SEQ ID NO:147，SEQ ID NO:148，SEQ ID NO:149，SEQ ID NO:150，SEQID NO:151，SEQ ID NO:152，SEQ ID NO:153，SEQ ID NO:154，SEQ ID NO:155，SEQ ID NO:156，SEQ ID NO:157，SEQ ID NO:158，SEQ ID NO:159，SEQ ID NO:160，SEQ ID NO:161，SEQID NO:162，SEQ ID NO:163，SEQ ID NO:164，SEQ ID NO:165，SEQ ID NO:166，SEQ ID NO:167，SEQ ID NO:168，SEQ ID NO:169，SEQ ID NO:170，SEQ ID NO:171，SEQ ID NO:172，SEQID NO:173，SEQ ID NO:174，SEQ ID NO:175，SEQ ID NO:176，SEQ ID NO:177，SEQ ID NO:178，SEQ ID NO:179，SEQ ID NO:180，SEQ ID NO:181，SEQ ID NO:182，SEQ ID NO:183，SEQID NO:184，SEQ ID NO:185，SEQ ID NO:186，SEQ ID NO:187，SEQ ID NO:188，SEQ ID NO:189，SEQ ID NO:190，或它们的片段。
34.一种组合物，包含编码条目24-33所述的IL-18变体多肽中的至少一种的核酸。
35.一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括向受试者施用条目22-34所述的至少一种组合物。
36.根据条目35所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
37.根据条目36所述的方法，其中所述癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。
38.根据条目36所述的方法，其中所述癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
39.根据条目35所述的方法，其中所述疾病或病症是代谢性疾病或病症。
40.根据条目35所述的方法，其中所述疾病或病症是传染性疾病。
41.根据条目35所述的方法，还包括向受试者施用至少一种其他药剂。
42.根据条目41所述的方法，其中所述至少一种其他药剂包含一种或多种次级细胞因子的抑制剂。
43.根据条目42所述的方法，其中一种或多种次级细胞因子是从IL-17、IL-5和IL-13组成的组中选择的至少一种。
44.根据条目42所述的方法，其中一种或多种次级细胞因子的抑制剂包括选自由以下各项组成的组中的至少一种：化学化合物，多肽，肽，拟肽，抗体，核酶，小分子化学化合物和反义核酸分子。
组B
1.一种包含IL-18变体多肽的组合物，其中所述IL-18变体多肽特异性地结合IL-18受体(IL-18R)并且其中所述IL-18变体多肽表现出与IL-18结合蛋白(IL-18BP)的结合大幅降低。
2.根据条目1所述的组合物，其中相对于野生型(WT)IL-18，所述IL-18变体多肽包含至少一个突变。
3.根据条目2所述的组合物，其中所述WT IL-18是包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的人类IL-18。
4.根据条目2所述的组合物，其中所述WT IL-18是鼠类IL-1，包含氨基酸序列SEQID NO:31。
5.根据条目3所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
6.根据条目3所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1H、Y1R、L5H、L5I、L5Y、K8Q、K8R、M51T、M51K、M51D、M51N、M51E、M51R、K53R、K53G、K53S、K53T、S55K、S55R、Q56E、Q56A、Q56R、Q56V、Q56G、Q56K、Q56L、P57L、P57G、P57A、P57K、G59T、G59A、M60K、M60Q、M60R、M60L、E77D、Q103E、Q103K、Q103P、Q103A、Q103R、S105R、S105D、S105K、S105N、S105A、D110H、D110K、D110N、D110Q、D110E、D110S、D110G、N111H、N111Y、N111D、N111R、N111S、N111G、M113V、M113R、M113T、M113K、V153I、V153T、V153A、N155K和N155H。
7.根据条目3所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。
8.根据条目3所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。
9.根据条目2所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:34-59、73-91和191-193或其片段的任一项中列出的氨基酸序列。
10.根据条目4所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、M50X、Y51X、K52X、S54X、E55X、V56X、R57X、G58X、L59X、R104X、N109X和L151X。
11.根据条目4所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从由以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1H、N1Y、M50A、M50S、M50V、M50G、M50T、Y51R、K52V、K52S、K52T、K52G、K52A、S54R、S54K、S54G、S54N、E55R、E55H、E55N、E55D、E55G、V56L、V56M、V56R、V56A、V56S、V56Q、R57G、R57K、G58A、L59K、L59R、L59V、R104K、R104L、R104Q、R104S、N109D和L151V。
12.根据条目2所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:60-72或其片段的任一项中列出的氨基酸序列。
13.一种组合物，包含编码条目1-12任一项中组合物的所述IL-18变体多肽的核酸。
14.根据条目1-13任一项中所述的组合物，还包括选自以下各项的一种或多种药剂：(i)免疫检查点抑制剂；(ii)抑制选自以下各项的一种或多种蛋白质的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40和CD40；(iii)癌细胞调理剂；和(iv)靶向选自以下各项的一种或多种抗原的药剂：CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD37，CD38，CD44，CD45，CD47，CD51，CD52，CD56，CD62L，CD70，CD74，CD79，CD80，CD96，CD97，CD99，CD123，CD134，CD138，CD152(CTLA-4)，CD200，CD213A2，CD221，CD248，CD276(B7-H3)，B7-H4，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，CD319，EGFR，EPCAM，17-1A，HER1，HER2，HER3，CD117，C-Met，HGFR，PDGFRA，AXL，TWEAKR，PTHR2，HAVCR2(TIM3)，GD2神经节苷脂，MUC1，粘蛋白CanAg，间皮素，内皮糖蛋白，路易斯-Y抗原，CEA，CEACAM1，CEACAM5，CA-125，PSMA，BAFF，FGFR2，TAG-72，明胶酶B，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3，结合素-4，BCMA，CSF1R，SLAMF7，整合素αvβ3，TYRP1，GPNMB，CLDN18.2，FOLR1，CCR4，CXCR4，MICA，C242抗原，DLL3，DLL4，EGFL7，波形蛋白，纤连蛋白额外结构域-B，TROP-2，LRRC15，FAP，SLITRK6，NOTCH2，NOTCH3，肌腱蛋白-3，STEAP1和NRP1。
15.一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括向受试者施用条目1-14的任一项所述的组合物。
16.根据条目15所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
17.根据条目16所述的方法，其中所述癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。
18.根据条目16所述的方法，其中所述癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
19.根据条目15所述的方法，其中所述疾病或病症是代谢性疾病或病症。
20.根据条目15所述的方法，其中所述疾病或病症是传染性疾病。
21.根据条目15-20的任一项所述的方法，其中方法包括向所述受试者施用所述IL-18变体多肽和至少一种其他药剂。
22.根据条目21所述的方法，其中所述至少一种其他药剂包含免疫检查点抑制剂。
23.根据条目22所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抑制以下各项的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40或CD40，或它们的任何组合。
24.根据条目21所述的方法，其中所述至少一种其他药剂包含癌细胞调理剂。
25.根据条目24所述的方法，其中所述至少一种其他药剂靶向选自以下各项的一种或多种抗原：CD19，CD20，CD22，CD24，CD25，CD30，CD33，CD37，CD38，CD44，CD45，CD47，CD51，CD52，CD56，CD62L，CD70，CD74，CD79，CD80，CD96，CD97，CD99，CD123，CD134，CD138，CD152(CTLA-4)，CD200，CD213A2，CD221，CD248，CD276(B7-H3)，B7-H4，CD279(PD-1)，CD274(PD-L1)，CD319，EGFR，EPCAM，17-1A，HER1，HER2，HER3，CD117，C-Met，HGFR，PDGFRA，AXL，TWEAKR，PTHR2，HAVCR2(TIM3)，GD2神经节苷脂，MUC1，粘蛋白CanAg，间皮素，内皮糖蛋白，路易斯-Y抗原，CEA，CEACAM1，CEACAM5，CA-125，PSMA，BAFF，FGFR2，TAG-72，明胶酶B，磷脂酰肌醇蛋白聚糖3，结合素-4，BCMA，CSF1R，SLAMF7，整合素αvβ3，TYRP1，GPNMB，CLDN18.2，FOLR1，CCR4，CXCR4，MICA，C242抗原，DLL3，DLL4，EGFL7，波形蛋白，纤连蛋白额外结构域-B，TROP-2，LRRC15，FAP，SLITRK6，NOTCH2，NOTCH3，肌腱蛋白-3，STEAP1和NRP1。
26.根据条目21-25的任一项所述的方法，其中所述至少一种其他药剂缀合至所述IL-18变体多肽。
27.根据条目21所述的方法，其中所述至少一种其他药剂是改变的T细胞或NK细胞。
28.根据条目21所述的方法，其中所述至少一种其他药剂是溶瘤病毒。
29.一种包含IL-18BP抑制剂或IL-18BP拮抗剂的组合物，其中所述抑制剂或拮抗剂抑制IL18BP中和内源性IL-18的能力。
30.根据条目29所述的组合物，其中所述抑制剂或拮抗剂包含选自由以下各项组成的组中的至少一种：化学化合物，多肽，肽，拟肽，抗体，核酶，小分子化学化合物和反义核酸分子。
31.根据条目30所述的组合物，包含所述IL-18变体多肽，其中所述IL-18变体多肽特异性结合至IL-18结合蛋白(IL-18BP)并且其中所述IL-18变体多肽表现出与IL-18受体(IL-18R)的结合大幅降低。
32.根据条目31所述的组合物，其中所述相对于野生型(WT)IL-18，所述IL-18变体多肽包含至少一个突变。
33.根据条目32所述的组合物，其中所述WT IL-18是包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的人类IL-18。
34.根据条目32所述的组合物，其中所述是包含SEQ ID NO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18。
35.根据条目33所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X。
36.根据条目33所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1D、Y1F、Y1H、Y1L、L5F、L5H、D17A、D17G、D17R、D17H、E31A、E31T、E31G、E31K、E31R、T34A、T34K、T34E、D35S、D35A、D35Y、S36N、S36K、S36R、D37P、D37A、D37R、D37H、D37L、D37V、D40Y、D40S、D40A、N41K、N41S、N41R、M51F、M51L、M51I、Q56H、M60L、M60F、M60I、Q103L、Q103I、H109A、H109P、H109D、M113L、M113I、M113F和R131S。
37.根据条目33所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:92-125的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
38.根据条目33所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变D17X、E30X和Q103X。
39.根据条目33所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。
40.根据条目34所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、L5X、D17X、E30X、T33X、D34X、I35X、D36X、M50X、Q102X、R104、H108X、N109X、M111X、D129X和D130X。
41.根据条目34所述的组合物，其中相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1Y、N1D、N1H、N1L、N1F、N1V、N1I、L5Y、L5H、D17Q、D17G、D17A、D17E、D17S、D17N、E30A、E30R、E30K、E30T、E30G、T33G、T33A、T33E、T33R、T33K、D34Y、D34S、D34A、I35T、I35K、I35R、D36V、D36A、D36G、D36H、D36P、D36R、D36L、M50F、M50L、Q102L、Q102I、R104E、R104A、R104P、R104G、R104Q、R104H、H108D、H108A、N109R、N109S、N109T、N109I、M111L、M111I、D129A、D129F、D129V、D129Y、D129S、D130E、D130T、D130G、D130N、D130R、D130S、D130Q和D130H。
42.根据条目34所述的组合物，其中所述IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:126-190的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
43.一种组合物，包含编码条目31-42任一项的组合物的所述IL-18变体多肽的核酸。
44.根据条目19-43的任一项所述的组合物，还包括选自以下各项的一种或多种药剂：(i)免疫检查点抑制剂；(ii)抑制从PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40和CD40中选择的一种或多种蛋白质的药剂；(iii)癌细胞调理剂；和(iv)靶向选自以下各项的一种或多种抗原的药剂：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
45.一种在有需要的受试者治疗或预防疾病或病症的方法，包括向受试者施用条目29-44的任一项的组合物。
46.根据条目45所述的方法，其中所述疾病或病症是癌症。
47.根据条目46所述的方法，其中所述癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。
48.根据条目46所述的方法，其中所述癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
49.根据条目45所述的方法，其中所述疾病或病症是代谢性疾病或病症。
50.根据条目45所述的方法，其中所述疾病或病症是传染性疾病。
51.根据条目45-50的任一项所述的方法，其中方法包括向受试者施用所述IL-18变体多肽和至少一种其他药剂。
52.根据条目51所述的方法，其中所述至少一种其他药剂包含免疫检查点抑制剂。
53.根据条目52所述的方法，其中所述免疫检查点抑制剂是抑制以下各项的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40或CD40，或它们的任何组合。
54.根据条目51所述的方法，其中所述至少一种其他药剂包含癌细胞调理剂。
55.根据条目51所述的方法，其中所述至少一种其他药剂靶中选自以下各项的一种或多种抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
56.根据条目51-55的任一项所述的方法，其中所述至少一种其他药剂缀合至所述IL-18变体多肽。
57.根据条目51所述的方法，其中所述至少一种其他药剂是改变的T细胞或NK细胞。
58.根据条目51所述的方法，其中所述至少一种其他药剂是溶瘤病毒。
本文引用的每件专利、专利申请和出版物的公开内容均通过引用以其全文并入本文。尽管已经参考特定实施方式公开了本发明，但显然，在不脱离本发明的真实精神和范围的情况下，本领域的其他技术人员可以设计出本发明的其他实施方式和变型。所附权利要求旨在被解释为包括所有这样的实施方式和等同变型。
序列表(SEQUENCE LISTING)
<110> 阿龙·林(Ring, Aaron)
周挺(Zhou, Ting)
苏珊娜·菲舍尔(Fischer, Suzanne)
<120> 白细胞介素-18变体和使用方法（INTERLEUKIN-18 VARIANTS AND METHODS OFUSE）
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<151> 2018-04-03
<160> 193
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 1
cattttcatt aagatgcagt tacttcgctg tttttcaata ttttctgtta ttgctagc 58
<210> 2
<211> 80
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (31)..(31)
<223> n是a, c, g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (42)..(42)
<223> n是a, c, g或t
<400> 2
aattacggat gaccgaaagt ykggattcaw ncttgccgaa anrtgctaaa acgctagcaa 60
taacagaaaa tattgaaaaa 80
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<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 3
actttcggtc atccgtaatt tgaacgacca agtccttttt attgaccagg g 51
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 4
actatccgtc atatcctcga ataagggacg attgccctgg tcaataaaaa ggact 55
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 5
cttattcgag gatatgacgg atagtgattg ccgtgacaac gccc 44
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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<221> misc_feature
<222> (22)..(22)
<223> n是a, c, g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (46)..(46)
<223> n是a, c, g或t
<400> 6
actgagattg ttaccgcchb tnyacggggt tgwyyatcty tatasnyaga gatgatgaaa 60
attgtacgag gggcgttgtc acgg 84
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 7
ggcggtaaca atctcagtta agtgcgaaaa aatctcgaca ctttcttgtg aa 52
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ggttcatttc cttgaacgaa atgatcttgt tttcacaaga aagtgtcgag att 53
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catttcgttc aaggaaatga acccgccgga taatatcaag gatacaaaat cagatattat 60
tt 62
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<221> misc_feature
<222> (27)..(27)
<223> n是a, c, g或t
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tgatgagctc tcgaattgca tcttatnwtb gtgtccaggc acwyyacgwt bgaagaaaat 60
aatatctgat tttgtatcct tgatatta 88
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<212> DNA
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<223> 合成序列
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ataagatgca attcgagagc tcatcatacg aaggttactt tttagcctgc g 51
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<223> 合成序列
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aattaactta aacaggtcgc gctccttctc gcaggctaaa aagtaacctt 50
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<212> DNA
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gcgacctgtt taagttaatt cttaagaaag aagatgagtt gggggatcg 49
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<212> DNA
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<223> 合成序列
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ccagaaccac cgtcctcwtb ctgadyggta aacatgatgc tacgatcccc caactcatct 60
t 61
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成序列
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<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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ccaccagatc caccaccacc caagtcttct tcggagataa g 41
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 合成序列
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cattttcatt aagatgcagt tacttcgctg tttttcaata ttttctgtta ttgctagcgt 60
tt 62
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (25)..(25)
<223> n是a, c, g或t
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ttgtacagtg aagtcggcca aaawntgcta aaacgctagc aataacagaa aatat 55
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 19
gccgacttca ctgtacaacc gcagtaatac ggaatataaa tgaccaagtt ctcttcgtt 59
<210> 20
<211> 67
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 20
ttgatcaata tcagtcatat cctcgaacac aggctgtctt ttgtcaacga agagaacttg 60
gtcattt 67
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<211> 54
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 21
gtgttcgagg atatgactga tattgatcaa agtgccagtg aaccccagac caga 54
<210> 22
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
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<222> (48)..(48)
<223> n是a, c, g或t
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tcacagagag ggtcacagcy hbtnywbybn bnybwyygtc snbnynsnyg tatattatca 60
gtctggtctg gggttcac 78
<210> 23
<211> 58
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 23
gctgtgaccc tctctgtgaa ggatagtaaa atgtctaccc tctcctgtaa gaacaaga 58
<210> 24
<211> 69
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 24
gtatatcatc aatattttca ggtggatcca tttcctcaaa ggaaatgatc ttgttcttac 60
aggagaggg 69
<210> 25
<211> 99
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (59)..(59)
<223> n是a, c, g或t
<220>
<221> misc_feature
<222> (74)..(74)
<223> n是a, c, g或t
<400> 25
aatggatcca cctgaaaata ttgatgatat acaaagtgat ctcatattct ttcagaaand 60
hgttccagga cacnataaga tggagtttga atcttcact 99
<210> 26
<211> 57
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 26
ccttttggca agcaagaaag tgtccttcat acagtgaaga ttcaaactcc atcttat 57
<210> 27
<211> 60
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 27
ctttcttgct tgccaaaagg aagatgatgc tttcaaactc attctgaaaa aaaaggatga 60
<210> 28
<211> 77
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 28
ccaccacttt gatgtaagtt agtrdbagtg aacattacag atttatcccc attttcatcc 60
ttttttttca gaatgag 77
<210> 29
<211> 59
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 29
actaacttac atcaaagtgg tggttctgga tccgaacaaa agcttatctc cgaagaaga 59
<210> 30
<211> 157
<212> PRT
<213> 人类
<400> 30
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 31
<211> 157
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 31
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 32
<211> 193
<212> PRT
<213> 人类
<400> 32
Met Ala Ala Glu Pro Val Glu Asp Asn Cys Ile Asn Phe Val Ala Met
1 5 10 15
Lys Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Ala Glu Asp Asp Glu Asn
20 25 30
Leu Glu Ser Asp Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile
35 40 45
Arg Asn Leu Asn Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro
50 55 60
Leu Phe Glu Asp Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg
65 70 75 80
Thr Ile Phe Ile Ile Ser Met Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Met
85 90 95
Ala Val Thr Ile Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys
100 105 110
Glu Asn Lys Ile Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile
115 120 125
Lys Asp Thr Lys Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Ser Val Pro Gly
130 135 140
His Asp Asn Lys Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe
145 150 155 160
Leu Ala Cys Glu Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys
165 170 175
Glu Asp Glu Leu Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu
180 185 190
Asp
<210> 33
<211> 192
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 33
Met Ala Ala Met Ser Glu Asp Ser Cys Val Asn Phe Lys Glu Met Met
1 5 10 15
Phe Ile Asp Asn Thr Leu Tyr Phe Ile Pro Glu Glu Asn Gly Asp Leu
20 25 30
Glu Ser Asp Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg
35 40 45
Asn Ile Asn Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe
50 55 60
Glu Asp Met Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg
65 70 75 80
Leu Ile Ile Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val
85 90 95
Thr Leu Ser Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn
100 105 110
Lys Ile Ile Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp
115 120 125
Ile Gln Ser Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn
130 135 140
Lys Met Glu Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys
145 150 155 160
Gln Lys Glu Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu
165 170 175
Asn Gly Asp Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
180 185 190
<210> 34
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 34
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 35
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 35
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Ala Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 36
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 36
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 37
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 37
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asn Val Pro Gly His Lys Tyr Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 38
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 38
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Gln Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Thr Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Arg Val Pro Gly His His Asn Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 39
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 39
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Ala Gln Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
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Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 40
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (60)..(60)
<223> Xaa可以是任何天然氨基酸
<400> 40
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Asp Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Ala Xaa Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 41
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 41
Tyr Phe Gly Lys His Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
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Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Asn Asn Lys
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Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Thr Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 42
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 42
Tyr Phe Gly Lys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Ala Gln Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Lys Val Pro Gly His Gln His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 43
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 43
Tyr Phe Gly Lys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Arg Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Glu Arg Asp Val Pro Gly His His His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 44
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 44
Tyr Phe Gly Lys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Thr Gln His Glu Asp
145 150 155
<210> 45
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 45
Tyr Phe Gly Lys Ile Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Ala Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Arg Val Pro Gly His His His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 46
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 46
Tyr Phe Gly Lys Ile Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Lys Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Asp Tyr Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 47
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 47
Tyr Phe Gly Lys Tyr Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Glu His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 48
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 48
His Phe Gly Lys Tyr Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His His Asn Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 49
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 49
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Ala Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Gln His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ala Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 50
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 50
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Asp Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Arg Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Lys Arg Asn Val Pro Gly His Lys Tyr Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln His Glu Asp
145 150 155
<210> 51
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 51
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Asn Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Gln Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Lys Arg Arg Val Pro Gly His Asn His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 52
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 52
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 53
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 53
Arg Phe Gly Lys His Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Glu Arg Asn Val Pro Gly His Lys Tyr Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 54
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (155)..(155)
<223> Xaa可以是任何天然氨基酸
<400> 54
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Ala Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Glu Arg Asp Val Pro Gly His Gln His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Xaa Glu Asp
145 150 155
<210> 55
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 55
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Thr Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asn Val Pro Gly His His Asp Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln His Glu Asp
145 150 155
<210> 56
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 56
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Ala Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Glu Arg Asp Val Pro Gly His Gln His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Ile Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 57
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 57
Arg Phe Gly Lys His Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Gly Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Glu Arg Asn Val Pro Gly His Lys Tyr Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 58
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 58
Arg Phe Gly Lys Tyr Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Thr Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Asp Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Asp Val Pro Gly His Lys His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 59
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 59
Arg Phe Gly Lys Leu Glu Ser Arg Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Thr Tyr Arg Asp Ser Gln Pro Arg Thr Lys Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Gln Arg Lys Val Pro Gly His Asn His Lys
100 105 110
Met Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Lys Glu Asp
145 150 155
<210> 60
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 60
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Gly Tyr Ala Asp Ser Arg Val Arg Gly Lys Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 61
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 61
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Ala Tyr Gly Asp Ser Arg Ala Arg Gly Lys Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Arg Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 62
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 62
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Ala Tyr Val Asp Arg Arg Leu Arg Gly Lys Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Lys Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 63
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 63
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Ser Tyr Ser Asp Lys His Met Arg Gly Lys Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Leu Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 64
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 64
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Val Tyr Thr Asp Gly Arg Arg Arg Gly Lys Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Lys Val Pro Gly His Asp Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 65
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 65
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Asp Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Ala Tyr Gly Asp Ser His Met Arg Gly Lys Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Gln Lys Gln Val Pro Gly His Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Val Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 66
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Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
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145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<220>
<223> 合成序列
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<220>
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145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 70
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 73
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 74
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 75
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
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Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 76
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 77
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 78
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 79
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 80
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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<210> 81
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 81
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130 135 140
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145 150 155
<210> 82
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 82
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
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50 55 60
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65 70 75 80
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130 135 140
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145 150 155
<210> 83
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 83
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
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130 135 140
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145 150 155
<210> 84
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 84
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
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20 25 30
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115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 85
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 85
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
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50 55 60
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85 90 95
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100 105 110
Arg Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 86
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 86
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Arg Tyr Lys Asp Ser Gly Lys Arg Gly Leu Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Arg Arg Ser Val Pro Gly His Ser Arg Lys
100 105 110
Val Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 87
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 87
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Gly Asp Ser Gly Ala Arg Gly Leu Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Glu Arg Asp Val Pro Gly His Ser Gly Lys
100 105 110
Val Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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35 40 45
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65 70 75 80
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 94
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 95
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 96
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 98
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 99
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145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 100
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130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 101
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 102
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 103
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145 150 155
<210> 104
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 104
His Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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145 150 155
<210> 105
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 105
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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145 150 155
<210> 106
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 106
His Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 107
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 107
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Thr Asp
20 25 30
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Ser Asp Ile Ile Phe Phe Ile Arg Ser Val Pro Gly Asp Asp Asn Lys
100 105 110
Ile Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 108
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 108
His Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Arg Asp
20 25 30
Met Ala Ala Ser His Cys Arg Asp Ser Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Ile Tyr Lys Asp Ser Gln Pro Arg Gly Phe Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Leu Arg Ser Val Pro Gly His Asp Asn Lys
100 105 110
Ile Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 109
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 109
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1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Ala Asp
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Met Ala Ser Asn Pro Cys Arg Tyr Lys Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Leu Arg Ser Val Pro Gly Ala Asp Asn Lys
100 105 110
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115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 110
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 110
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1 5 10 15
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35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
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130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 111
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 114
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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<210> 115
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 115
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 116
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130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 117
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 117
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 118
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130 135 140
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145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 119
Phe Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 120
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 120
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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Gly Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Ala Asp
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 121
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<210> 122
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 122
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115 120 125
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130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 123
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 123
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 124
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 125
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<210> 126
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 126
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145 150 155
<210> 127
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 127
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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145 150 155
<210> 128
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 128
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145 150 155
<210> 129
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 129
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
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20 25 30
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Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Ala Val Pro Gly Asp Arg Lys Ile Glu
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Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 130
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 130
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ala Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Ala Asp Lys Gly Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Pro Val Pro Gly Asp Thr Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Phe Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 131
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 131
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Gly Asp Arg His Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly Ala Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 132
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 132
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
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20 25 30
Gly Ala Ile Gly Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly Asp Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Val Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 133
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 133
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50 55 60
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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50 55 60
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130 135 140
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145 150 155
<210> 135
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 135
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100 105 110
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130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 136
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 137
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<211> 157
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 138
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Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
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130 135 140
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145 150 155
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 139
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130 135 140
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<210> 140
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 140
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Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
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130 135 140
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145 150 155
<210> 141
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 141
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1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
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50 55 60
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65 70 75 80
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Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Gly Val Pro Gly Asp Ser Lys Met Glu
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115 120 125
Tyr Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 142
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 142
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Lys Asp Met
20 25 30
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Ala Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
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145 150 155
<210> 143
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 143
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1 5 10 15
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Gly Asp Lys Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 144
Tyr Phe Gly Arg His His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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Gln Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Arg Asp Met
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 146
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<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 147
Val Phe Gly Arg His His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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145 150 155
<210> 148
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 148
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
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130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 149
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 149
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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145 150 155
<210> 150
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 150
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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130 135 140
Asn Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 151
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 151
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
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Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Gly Val Pro Gly Asp Arg Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 152
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 152
Phe Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asn Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Glu Tyr Arg Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Pro Val Pro Gly Ala Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ser Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 153
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 153
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asn Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Glu Asp Arg Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp His Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 154
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 154
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ala Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Arg Asp Met
20 25 30
Gly Tyr Ile Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Leu Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Glu Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Pro Val Pro Gly Asp Thr Lys Ile Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 155
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 155
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Ala Asp Thr Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
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Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly Asp Ser Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ala Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 156
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 156
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
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Ala Tyr Ile Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
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Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly Asp Ser Lys Ile Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ala Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 157
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 157
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Ser Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Arg Asp Met
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Lys Tyr Ile Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
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Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Tyr Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 158
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 158
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
Ala Tyr Ile Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
Asp Thr Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 159
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 159
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asn Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Lys Asp Met
20 25 30
Glu Ser Thr Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Ala Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ala Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 160
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 160
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Glu Ala Ile Gly Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Glu Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Gly Val Pro Gly Asp Thr Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Ala Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 161
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 161
Ile Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Lys Asp Met
20 25 30
Arg Tyr Ile Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Glu Val Pro Gly Ala Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Glu Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 162
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 162
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ala Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
Gly Tyr Thr Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Leu Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly His Asn Lys Ile Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Arg Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 163
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 163
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Asn Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Arg Asp Met
20 25 30
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35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
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65 70 75 80
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100 105 110
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Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 164
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 164
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Lys Asp Arg Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
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Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
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Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Ala Val Pro Gly His Ser Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Glu Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 165
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 165
Asn Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Thr Asp Ile Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Met Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Pro Val Pro Gly Asp Ile Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Tyr Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Asn Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 166
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 166
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Thr Asp Thr Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Asn Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Thr Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 167
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 167
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
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100 105 110
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Asp Thr Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
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145 150 155
<210> 168
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 168
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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130 135 140
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145 150 155
<210> 169
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 169
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
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130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 170
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 170
His Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Lys Asp Met
20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Ala Val Pro Gly His Ser Lys Ile Glu
100 105 110
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115 120 125
Asp Ser Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 171
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 171
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Lys Ala Lys Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
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130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 172
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 172
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly Ala Ser Lys Met Glu
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115 120 125
Asp Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
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145 150 155
<210> 173
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 173
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Glu Asp Met
20 25 30
Lys Ala Lys Ala Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
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65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Pro Val Pro Gly Ala Ser Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 174
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 174
Leu Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Gly Ser Ile Pro Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys His Val Pro Gly Ala Thr Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 175
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 175
Leu Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Gly Ser Ile Pro Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys His Val Pro Gly Ala Thr Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 176
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 176
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
Ala Tyr Thr Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Ala Val Pro Gly Asp Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 177
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 177
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
Ala Tyr Thr Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Ala Val Pro Gly Asp Ser Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asn Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 178
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 178
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
Gly Ala Arg Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Tyr Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Pro Val Pro Gly Asp Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ser Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 179
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 179
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Thr Asp Met
20 25 30
Gly Ala Arg Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Tyr Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Pro Val Pro Gly Asp Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ser Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 180
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 180
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Lys Ala Thr Gly Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Ala Val Pro Gly Ala Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ala Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 181
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 181
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Lys Ala Thr Gly Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Ile Lys Ala Val Pro Gly Ala Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ala Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 182
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 182
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Arg Asp Met
20 25 30
Gly Ser Ile His Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Ala Val Pro Gly Ala Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 183
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 183
Asp Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Arg Asp Met
20 25 30
Gly Ser Ile His Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Ala Val Pro Gly Ala Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 184
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 184
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Lys Asp Met
20 25 30
Lys Asp Lys Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Phe Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 185
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 185
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Glu Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Lys Asp Met
20 25 30
Lys Asp Lys Leu Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Asn Lys Leu Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Phe Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 186
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 186
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Ala Ser Thr His Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
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Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Ala Asn Lys Ile Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 187
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 187
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Ala Ser Thr His Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Ala Asn Lys Ile Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 188
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 188
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Gly Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Ala Asp Met
20 25 30
Ala Ser Thr His Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Ala Asn Lys Ile Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Asp Asp Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 189
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 189
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Lys Tyr Ile Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
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85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Thr Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ser Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 190
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 190
Tyr Phe Gly Arg Leu His Cys Thr Thr Ala Val Ile Arg Asn Ile Asn
1 5 10 15
Ser Gln Val Leu Phe Val Asp Lys Arg Gln Pro Val Phe Gly Asp Met
20 25 30
Lys Tyr Ile Val Gln Ser Ala Ser Glu Pro Gln Thr Arg Leu Ile Ile
35 40 45
Tyr Phe Tyr Lys Asp Ser Glu Val Arg Gly Leu Ala Val Thr Leu Ser
50 55 60
Val Lys Asp Ser Lys Met Ser Thr Leu Ser Cys Lys Asn Lys Ile Ile
65 70 75 80
Ser Phe Glu Glu Met Asp Pro Pro Glu Asn Ile Asp Asp Ile Gln Ser
85 90 95
Asp Leu Ile Phe Phe Leu Lys Gly Val Pro Gly Asp Thr Lys Met Glu
100 105 110
Phe Glu Ser Ser Leu Tyr Glu Gly His Phe Leu Ala Cys Gln Lys Glu
115 120 125
Ser Gly Ala Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Lys Asp Glu Asn Gly Asp
130 135 140
Lys Ser Val Met Phe Thr Leu Thr Asn Leu His Gln Ser
145 150 155
<210> 191
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 191
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Gly Asp Ser Val Pro Arg Gly Leu Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Ala Arg Ala Val Pro Gly His Ser Arg Lys
100 105 110
Thr Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 192
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 192
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Ser Asp Ser Arg Ala Arg Gly Leu Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Ala Arg Ser Val Pro Gly His Gly Arg Lys
100 105 110
Thr Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155
<210> 193
<211> 157
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成序列
<400> 193
Tyr Phe Gly Lys Leu Glu Ser Lys Leu Ser Val Ile Arg Asn Leu Asn
1 5 10 15
Asp Gln Val Leu Phe Ile Asp Gln Gly Asn Arg Pro Leu Phe Glu Asp
20 25 30
Met Thr Asp Ser Asp Cys Arg Asp Asn Ala Pro Arg Thr Ile Phe Ile
35 40 45
Ile Ser Lys Tyr Ser Asp Ser Arg Ala Arg Gly Leu Ala Val Thr Ile
50 55 60
Ser Val Lys Cys Glu Lys Ile Ser Thr Leu Ser Cys Glu Asn Lys Ile
65 70 75 80
Ile Ser Phe Lys Glu Met Asn Pro Pro Asp Asn Ile Lys Asp Thr Lys
85 90 95
Ser Asp Ile Ile Phe Phe Ala Arg Asp Val Pro Gly His Ser Gly Lys
100 105 110
Arg Gln Phe Glu Ser Ser Ser Tyr Glu Gly Tyr Phe Leu Ala Cys Glu
115 120 125
Lys Glu Arg Asp Leu Phe Lys Leu Ile Leu Lys Lys Glu Asp Glu Leu
130 135 140
Gly Asp Arg Ser Ile Met Phe Thr Val Gln Asn Glu Asp
145 150 155

Claims (58)

1.一种包含IL-18变体多肽的组合物，其中，所述IL-18变体多肽特异性地结合IL-18受体(IL-18R)并且其中所述IL-18变体多肽表现出与IL-18结合蛋白(IL-18BP)的结合大幅降低。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中，相对于野生型(WT)IL-18，所述IL-18变体多肽包含至少一个突变。
3.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述WT IL-18是包含氨基酸序列SEQ ID NO:30的人类IL-18。
4.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述WT IL-18是包含SEQ IDNO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18。
5.根据权利要求3所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、K8X、M51X、K53X、S55X、Q56X、P57X、G59X、M60X、E77X、Q103X、S105X、D110X、N111X、M113X、V153X和N155X。
6.根据权利要求3所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1H、Y1R、L5H、L5I、L5Y、K8Q、K8R、M51T、M51K、M51D、M51N、M51E、M51R、K53R、K53G、K53S、K53T、S55K、S55R、Q56E、Q56A、Q56R、Q56V、Q56G、Q56K、Q56L、P57L、P57G、P57A、P57K、G59T、G59A、M60K、M60Q、M60R、M60L、E77D、Q103E、Q103K、Q103P、Q103A、Q103R、S105R、S105D、S105K、S105N、S105A、D110H、D110K、D110N、D110Q、D110E、D110S、D110G、N111H、N111Y、N111D、N111R、N111S、N111G、M113V、M113R、M113T、M113K、V153I、V153T、V153A、N155K和N155H。
7.根据权利要求3所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变M51X、M60X、S105X、D110X和N111X。
8.根据权利要求3所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变M51X、K53X、Q56X、S105X和N111X。
9.根据权利要求2所述的组合物，其中，所述IL-18变体多肽包含SEQID NO:34-59、73-91、191-193的任一项所列出的氨基酸序列，或其片段。
10.根据权利要求4所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、M50X、Y51X、K52X、S54X、E55X、V56X、R57X、G58X、L59X、R104X、N109X和L151X。
11.根据权利要求4所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1H、N1Y、M50A、M50S、M50V、M50G、M50T、Y51R、K52V、K52S、K52T、K52G、K52A、S54R、S54K、S54G、S54N、E55R、E55H、E55N、E55D、E55G、V56L、V56M、V56R、V56A、V56S、V56Q、R57G、R57K、G58A、L59K、L59R、L59V、R104K、R104L、R104Q、R104S、N109D和L151V。
12.根据权利要求2所述的组合物，其中，IL-18变体多肽包含SEQ ID NO:60-72的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
13.一种组合物，包含编码权利要求1至12的任一项所述的组合物的IL-18变体多肽的核酸。
14.根据权利要求1至13的任一项所述的组合物，还包含选自以下各项的一种或多种药剂：(i)免疫检查点抑制剂；(ii)抑制从PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40和CD40中选择的一种或多种蛋白质的药剂；
(iii)癌细胞调理剂；和(iv)靶向选自以下各项的一种或多种抗原的药剂：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
15.一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括向所述受试者施用权利要求1至14的任一项所述的组合物。
16.根据权利要求15所述的方法，其中，所述疾病或病症是癌症。
17.根据权利要求16所述的方法，其中，所述癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。
18.根据权利要求16所述的方法，其中，所述癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
19.根据权利要求15所述的方法，其中，所述疾病或病症是代谢性疾病或病症。
20.根据权利要求15所述的方法，其中，所述疾病或病症是传染性疾病。
21.根据权利要求15至20的任一项所述的方法，其中，所述方法包括向所述受试者施用所述IL-18变体多肽和至少一种其他药剂。
22.根据权利要求21所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂包含免疫检查点抑制剂。
23.根据权利要求22所述的方法，其中，所述免疫检查点抑制剂是抑制以下各项的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40或CD40，或它们的任何组合。
24.根据权利要求21所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂包含癌细胞调理剂。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂靶向选自以下各项的一种或多种抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
26.根据权利要求21至25的任一项所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂缀合至所述IL-18变体多肽。
27.根据权利要求21所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂是改变的T细胞或NK细胞。
28.根据权利要求21所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂是溶瘤病毒。
29.一种包含IL-18BP抑制剂或IL-18BP拮抗剂的组合物，其中，所述抑制剂或拮抗剂抑制IL18BP中和内源性IL-18的能力。
30.根据权利要求29所述的组合物，其中，所述抑制剂或拮抗剂包含选自由以下各项组成的组中的至少一种：化学化合物、多肽、肽、拟肽、抗体、核酶、小分子化学化合物和反义核酸分子。
31.根据权利要求30所述的组合物，包含IL-18变体多肽，其中所述IL-18变体多肽特异性结合至IL-18结合蛋白(IL-18BP)并且其中所述IL-18变体多肽表现出与IL-18受体(IL-18R)的结合大幅降低。
32.根据权利要求31所述的组合物，其中，相对于野生型(WT)IL-18，所述IL-18变体多肽包含至少一个突变。
33.根据权利要求32所述的组合物，其中，所述WT IL-18是包含SEQID NO:30的氨基酸序列的人类IL-18。
34.根据权利要求32所述的组合物，其中，所述WT IL-18是包含SEQID NO:31的氨基酸序列的鼠类IL-18。
35.根据权利要求33所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1X、L5X、D17X、E31X、T34X、D35X、S36X、D37X、D40X、N41X、M51X、Q56X、M60X、Q103X、H109X、M113X和R131X。
36.根据权利要求33所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：Y1D、Y1F、Y1H、Y1L、L5F、L5H、D17A、D17G、D17R、D17H、E31A、E31T、E31G、E31K、E31R、T34A、T34K、T34E、D35S、D35A、D35Y、S36N、S36K、S36R、D37P、D37A、D37R、D37H、D37L、D37V、D40Y、D40S、D40A、N41K、N41S、N41R、M51F、M51L、M51I、Q56H、M60L、M60F、M60I、Q103L、Q103I、H109A、H109P、H109D、M113L、M113I、M113F和R131S。
37.根据权利要求33所述的组合物，其中，所述IL-18变体多肽包含SEQID NO:92-125的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
38.根据权利要求33所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变D17X、E30X和Q103X。
39.根据权利要求33所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:30，所述IL-18变体多肽包含突变D17X、E30X、D35X、M51X和Q103X。
40.根据权利要求34所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1X、L5X、D17X、E30X、T33X、D34X、I35X、D36X、M50X、Q102X、R104、H108X、N109X、M111X、D129X和D130X。
41.根据权利要求34所述的组合物，其中，相对于SEQ ID NO:31，所述IL-18变体多肽包含从以下各项组成的组中选择的至少一个突变：N1Y、N1D、N1H、N1L、N1F、N1V、N1I、L5Y、L5H、D17Q、D17G、D17A、D17E、D17S、D17N、E30A、E30R、E30K、E30T、E30G、T33G、T33A、T33E、T33R、T33K、D34Y、D34S、D34A、I35T、I35K、I35R、D36V、D36A、D36G、D36H、D36P、D36R、D36L、M50F、M50L、Q102L、Q102I、R104E、R104A、R104P、R104G、R104Q、R104H、H108D、H108A、N109R、N109S、N109T、N109I、M111L、M111I、D129A、D129F、D129V、D129Y、D129S、D130E、D130T、D130G、D130N、D130R、D130S、D130Q和D130H。
42.根据权利要求34所述的组合物，其中，所述IL-18变体多肽包含SEQID NO:126-190的任一项中列出的氨基酸序列，或其片段。
43.一种组合物，包含编码权利要求31至42的任一项所述的组合物的IL-18变体多肽的核酸。
44.根据权利要求19至43的任一项所述的组合物，还包含选自以下各项的一种或多种药剂：(i)免疫检查点抑制剂；(ii)抑制从PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40和CD40中选择的一种或多种蛋白质的药剂；
(iii)癌细胞调理剂；和(iv)靶向选自以下各项的一种或多种抗原的药剂：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
45.一种在有需要的受试者中治疗或预防疾病或病症的方法，包括向所述受试者施用权利要求29至44的任一项所述的组合物。
46.根据权利要求45所述的方法，其中，所述疾病或病症是癌症。
47.根据权利要求46所述的方法，其中，所述癌症是对免疫检查点抑制剂(ICI)耐受的癌症。
48.根据权利要求46所述的方法，其中，所述癌症与已失去MHC I类表达的肿瘤有关。
49.根据权利要求45所述的方法，其中，所述疾病或病症是代谢性疾病或病症。
50.根据权利要求45所述的方法，其中，所述疾病或病症是传染性疾病。
51.根据权利要求45至50的任一项所述的方法，其中，除了所述IL-18BP抑制剂或IL-18BP拮抗剂之外，所述方法还包括向所述受试者施用至少一种其他药剂。
52.根据权利要求51所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂包含免疫检查点抑制剂。
53.根据权利要求52所述的方法，其中，所述免疫检查点抑制剂是抑制以下各项的药剂：PD-L1、PD1、CTLA4、TIM3、TIGIT、LAG3、B7H3、B7H4、VISTA、ICOS、GITR、41BB、OX40或CD40，或它们的任何组合。
54.根据权利要求51所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂包含癌细胞调理剂。
55.根据权利要求51所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂靶向选自以下各项的一种或多种抗原：CD19、CD20、CD22、CD24、CD25、CD30、CD33、CD37、CD38、CD44、CD45、CD47、CD51、CD52、CD56、CD62L、CD70、CD74、CD79、CD80、CD96、CD97、CD99、CD123、CD134、CD138、CD152(CTLA-4)、CD200、CD213A2、CD221、CD248、CD276(B7-H3)、B7-H4、CD279(PD-1)、CD274(PD-L1)、CD319、EGFR、EPCAM、17-1A、HER1、HER2、HER3、CD117、C-Met、HGFR、PDGFRA、AXL、TWEAKR、PTHR2、HAVCR2(TIM3)、GD2神经节苷脂、MUC1、粘蛋白CanAg、间皮素、内皮糖蛋白、路易斯-Y抗原、CEA、CEACAM1、CEACAM5、CA-125、PSMA、BAFF、FGFR2、TAG-72、明胶酶B、磷脂酰肌醇蛋白聚糖3、结合素-4、BCMA、CSF1R、SLAMF7、整合素αvβ3、TYRP1、GPNMB、CLDN18.2、FOLR1、CCR4、CXCR4、MICA、C242抗原、DLL3、DLL4、EGFL7、波形蛋白、纤连蛋白额外结构域-B、TROP-2、LRRC15、FAP、SLITRK6、NOTCH2、NOTCH3、肌腱蛋白-3、STEAP1和NRP1。
56.根据权利要求51至55的任一项所述的方法，其中，所述抑制剂或拮抗剂是IL-18变体多肽，并且所述至少一种其他药剂缀合至所述IL-18变体多肽。
57.根据权利要求51所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂是改变的T细胞或NK细胞。
58.根据权利要求51所述的方法，其中，所述至少一种其他药剂是溶瘤病毒。
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