CN111298035A - 一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物及其制备方法和应用。所述中药组合物由以下重量份的各原料组成：粟米80‑120重量份、生龙骨15‑20重量份、旱莲草25‑35重量份、落得打10‑15重量份、马鞭草20‑25重量份、瓦楞子10‑15重量份、急性子2‑5重量份、凌霄花5‑10重量份。实验结果表明，该中药组合物可改善老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠的学习记忆能力，还可改善老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马β‑淀粉样蛋白前体蛋白相关蛋白、海马炎症介质、海马抗氧化能力，更可改善老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脑组织海马乙酰胆碱代谢酶及β‑淀粉样蛋白转运酶基因和蛋白表达，同时对小鼠脏器指数和体重无影响，说明该中药组合物治疗老年痴呆症肾虚质有效且无副作用。

Description

一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物及其制备方法 和应用

技术领域

本发明涉及一种中药组合物及其制备方法和应用，特别涉及一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物及其制备方法和应用。本发明属于中药技术领域。

背景技术

目前，老年痴呆症是一种老年人常见疾病，其包括阿尔茨海默病、血管性痴呆、路易体痴呆及额颞叶痴呆等，主要发病机制为机体脑组织β-淀粉样蛋白(amyloid beda，Aβ)沉积形成老年斑(Sochocka M，Ochnik M，Sobczyński M，et al.New therapeutictargeting of Alzheimer's disease with the potential use of proline-richpolypeptide complex to modulate an innate immune response preli minary study[J].J Neuroinflammation，2019，16(1)：137.；Mizuta K，Saneyoshi T.Amyloid-βDependent Neuronal Circuit Rearrangement in Presymptomatic Alzheimer'sDisease[J].Biol Psychiatry，2019，86(3)：167-168.)，脑血管结构异常引起脑组织小胶质细胞及星形胶质细胞活化产生炎症介质，脑组织自由基产生增加伴有机体抗氧化能力减弱，脑组织乙酰胆碱系统和抗乙酰胆碱系统失衡(Muramatsu，Uwada J，Yoshiki H，etal.Novel regulatory systems for acetylcholine release in rat striatum andanti-Alzheimer's diseasedrugs[J].J Neurochem，2019，149(5)：605-623.)，脑组织海马β-淀粉样蛋白转运酶基因和蛋白表达异常，导致老年痴呆症患者脑组织结构及功能损伤，出现学习记忆能力减退，海马炎症介质含量增加，海马β-淀粉样蛋白前体蛋白(Amyloid-βprecursor protein，APP)相关蛋白沉积(Wang ZH，Xiang J，Liu X，et al.Deficiency inBDNF/TrkB Neurotrophic Activity Stimulatesδ-Secretase by Upregulating C/EBPβin Alzheimer's Disease[J].Cell Rep，2019，28(3)：655-669.)，海马抗氧化能力减弱，海马乙酰胆碱代谢酶及β-淀粉样蛋白转运酶基因和蛋白表达异常，最终诱发老年痴呆症。

中医理论认为，肾主骨、生髓，脑为髓之海，肾气充沛则髓海充盈(Kuo LC，SongYQ，Yao CA，et al.Ginkgolide A Prevents the Amyloid-β-Induced Depolarization ofCortical Neurons[J].J Agric Food Chem，2019，67(1)：81-89.；李青，王潆彬，于洋.从“肾、脑、络脉”论慢性肾性脑病的诊疗[J].天津中医药大学学报，2019，38(2)：133-135.)，机体脑组织营养供应充足，会不断增强机体学习能力、记忆能力、推理能力及分析能力，思维敏捷，行动轻盈，反应迅速(武峻艳.中医肾脑相关学说的理论研究[D].山东中医药大学，2016.；李赵龙，王旭，任路.基于“肾脑相济”理论的电针疗法对SAMP8小鼠海马内线粒体自噬相关蛋白LC3-Ⅱ及Bnip3表达的影响[J].辽宁中医杂志，2019，46(2)：407-409.)；而肾气亏耗则髓海空虚，机体脑组织营养供应匮乏，会出现学习记忆能力减退、意识模糊，甚至精神障碍，痴顽呆滞，行作笨拙，反应迟钝，诱发机体会出现肾虚质。

研究表明，肾虚质不能完成精气上达、化髓冲脑、灌髓海为阳，肾虚质导致髓海不足、学习记忆能力减退(Savarino E，Marabotto E，Zentilin P，et al.A safety reviewof proton pump inhibitors to treat acid-related digestive diseases[J].ExpertOpin Drug Saf，2018，17(8)：785-794.；孙瑜嬬，孙耀光，张琪，等.肾虚质大鼠学习记忆能力与海马N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的实验研究[J].中国中西医结合杂志，2016，36(5)：597-601.；孙理军，姜梅，孙瑜嬬，等.肾虚质大鼠学习记忆能力与海马Caveolin-1蛋白表达的实验研究[J].陕西中医药大学学报，2018，41(6)：91-96.)是老年痴呆症的主要病机。

一般认为，由于年老体衰、久病伤肾、情志失调、房劳过度及先天不足等可诱发机体阴阳失衡，机体阴阳平衡被打破，脑组织自由基产生增加且清除减少，脑组织异常蛋白质产生增加且无法被降解或降解较少，异常蛋白质在脑组织内形成病理性产物积聚(Lu X，Yang B，Yu H，et al.Epigenetic mechanisms underlying the effects of triptolideand tripchlorolide on the expression of neuroligin-1in the hippocampus ofAPP/PS1transgenic mice[J].Pharm Biol，2019，57(1)：453-459.)，异常病理性产物会促进脑组织小胶质细胞及星形胶质细胞活化，产生大量炎症介质如白介素-1β(Interleukin-1β，IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)及白介素-6(Interleukin-6，IL-6)(Lin J，Gao S，Wang T，et al.Ginsenoside Rb1improveslearning and memory ability through its anti-inflammatory effect in Aβ_{1- 40}induced Alzheimer's disease of rats[J].Am J Transl Res，2019，11(5)：2955-2968.)积聚于脑组织海马区域，减少脑组织神经干细胞增殖且促进脑组织神经元细胞凋亡，最终促使机体诱发老年痴呆症肾虚质。

现代医学显示，老年痴呆症肾虚质的发病机制极其复杂，其多与Aβ蛋白学说、炎症介质学说、自由基学说、胆碱能学说及神经血管假说有关。Aβ蛋白学说指出，机体脑组织可正常产生APP(Li L，Roh JH，Kim HJ，et al.The First Generation of iPSC Line from aKorean Alzheimer's Disease Patient Carrying APP-V715M Mutation Exhibits aDistinct Mitochondrial Dysfunction.Exp Neurobiol[J].2019，28(3)：329-336.)，APP在β分泌酶、γ-分泌酶作用下水解产生Aβ蛋白，Aβ蛋白分为Aβ_1-40蛋白、Aβ_1-42蛋白，Aβ_1-40蛋白含量较多，Aβ_1-42蛋白含量较少，但是Aβ_1-42蛋白毒性较大，Aβ_1-42蛋白可在脑组织神经元外侧形成老年斑(Lee JS，Lee Y，Andre EA，et al.Inhibition of Polo-like kinase2ameliorates pathogenesis in Alzheimer's disease model mice[J].PLoS One，2019，14(7)：e0219691.)，老年斑促进Aβ_1-42蛋白继续积聚，可引起脑神经元毒性损伤，还可引起脑组织神经元细胞凋亡和细胞焦亡，更可激活脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞且促使脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞产生大量炎症介质。研究表明，脑组织海马与学习记忆密切相关(Zhou X，Wang L，Xiao W，et al.Memantine Improves Cognitive Function andAlters Hippocampal and Cortical Proteome in Triple Transgenic Mouse Model ofAlzheimer's Disease[J].Exp Neurobiol，2019，28(3)：390-403.)，Aβ蛋白主要影响机体脑组织海马区，促使海马结构及功能损伤，使用改善乙酰胆碱含量药物如多奈哌齐(JiangJ，Liu G，Shi S，et al.Effects of manual acupuncture combined with donepezil ina mouse model of Alzheimer's disease[J].Acupunct Med，2019，37(1)：64-71.)可以有效治疗老年痴呆症肾虚质。

炎症介质学说指出，脑组织存在异常Aβ蛋白沉积后形成老年斑，老年斑促使脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞产生炎症介质如IL-1β、TNF-α(Khalil MNA，Choucry MA，ElSenousy AS，et al.Ambrosin,a potent NF-κβinhibitor ameliorateslipopolysaccharide induced memory impairment,comparison to curcumin[J].PLoSOne，2019，14(7)：e0219378.)、IL-6等，而脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6产生后又可以促使脑组织小胶质细胞和星形胶质细胞进一步活化，形成瀑布式效应，引起脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6含量继续增加，一方面脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6对脑组织海马神经元结构及功能进行干扰(Ma WW，Li CQ，Zhao L，et al.NF-κB-mediated inflammatory damage isdifferentially affected in SH-SY5Y and C6cells treated with 27-hydroxycholesterol[J].Food Sci Nutr，2019，7(5)：1685-1694.)，另一方面脑组织IL-1β、TNF-α、IL-6促使脑组织海马神经元出现细胞凋亡及细胞焦亡，致使脑组织神经元数量减少，脑组织神经元不能发挥信息整合、信息传递功能，引起机体出现学习记忆能力减退及认知功能障碍。

自由基学说指出，脑组织Aβ蛋白异常沉积后，不仅会影响线粒体功能及脂质代谢异常而产生大量自由基，还可影响机体抗氧化能力，干扰机体清除自由基，诱导脑组织氧化应激及细胞损伤(Mairuae N，Connor JR，Buranrat B，et al.Oroxylum indicum extractprotects human neuro blastoma SH-SY5Y cells againstβ-amyloid-induced cellinjury[J].Mol Med Rep，2019，20(2)：1933-1942.)。研究表明，参与清除自由基的主要酶类包括谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase，GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase，CAT)(Kumar S，Srivastav S，Fatima M，et al.A Synthetic Pro-Drug Peptide ReversesAmyloid-β-Induced Toxicity in the Rat Model of Alzheimer's Disease[J].JAlzheimers Dis，2019，69(2)：499-512.)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase，SOD)，一旦GSH-PX、CAT、SOD清除自由基能力减弱(Sieteiglesias V，Gonzalez-Burgos E，Bermejo-Bescos P，et al.Lichens of Parmelioid Clade as Promising MultitargetNeuroprotective Agents[J].Chem Res Toxicol，2019，32(6)：1165-1177.)，会导致脑组织总抗氧化能力(Total antioxidant capacity，T-AOC)降低，自由基氧化产物丙二醛(Malondialdehyde，MDA)增加，会干扰机体脑组织海马神经元基本结构及功能，促使机体出现学习记忆能力下降。

胆碱能学说指出，脑组织Aβ蛋白异常沉积后，Aβ蛋白参与形成老年斑，会干预脑组织海马胆碱乙酰化酶(Choline acetylase，CHAc)和乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase，AChE)代谢(Hacohen-Kleiman G，Yizhar-Barnea O，Touloumi O，et al.Atypical Auditory Brainstem Response and Protein Expression AberrationsRelated to ASD and Hearing Loss in the Adnp Haploinsufficient Mouse Brain[J].Neurochem Res，2019，44(6)：1494-1507.)，一旦CHAc和AChE失去平衡，会引起脑组织乙酰胆碱含量异常，诱发机体出现学习记忆能力减退。研究表明，脑组织CHAc和AChE参与乙酰胆碱代谢(Dai SJ，Zhang JY，Bao YT，et al.Intracerebroventricular injection of Aβ_1-42combined with two-vessel occlusion accelerate Alzheimer's diseasedevelopment in rats[J].Pathol Res Pract，2018，214(10)：1583-1595.)，其中，神经元由CHAc将胆碱和乙酰辅酶A合成乙酰胆碱，乙酰胆碱在AChE作用下降解。一旦AChE活性降低或被抑制，伴有CHAc活性增强或者被激活，会引起脑组织乙酰胆碱含量增加，乙酰胆碱含量增加有助于老年痴呆症肾虚质的症状改善，反之，乙酰胆碱含量降低则会促进老年痴呆症肾虚质的发生发展。

神经血管假说指出，脑组织存在神经血管单元，神经血管单元包括神经元、毛细血管内皮细胞、星形胶质细胞、毛细血管内皮细胞间紧密连接、周细胞及基膜等。Aβ蛋白异常积累会干扰毛细血管内皮细胞基本结构及功能，影响Aβ蛋白转运体包括晚期糖基化终产物受体(Receptor for advanced glycation end products，RAGE)(Liu M，Huang Y，Qin J，et al.Inhibition of MAPKs Signaling Pathways Prevents Acrolein-InducedNeurotoxicity in HT22Mouse Hippocampal Cells[J].Biol Pharm Bull，2019，42(4)：617-622.)表达异常及低密度脂蛋白相关蛋白1(Lipoprotein receptor-relatedprotein1，LRP1)表达异常(Zhao B，Liu P，Wei M，et al.Chronic Sleep RestrictionInduces AβAccumulation by Disrupting the Balance of AβProduction andClearance in Rats[J].Neurochem Res，2019，44(4)：859-873.)，同时还会干扰脑组织载脂蛋白J(Apolipoprotein J，Apo J)、核转录因子-κBp65(Nuclear transcriptionfactor-κBp65，NF-κB p65)表达，其结果是Aβ蛋白转运体表达失衡。一旦RAGE和NF-κB p65表达增加，伴有LRP1和Apo J表达下调，会引起脑组织毛细血管内Aβ蛋白通过RAGE/LRP1转运体进入脑组织(Yamagishi SI，Matsui T.Therapeutic Potential of DNA-aptamersRaised Against AGE-RAGE Axis in Diabetes-related Complications[J].Curr PharmDes，2018，24(24)：2802-2809.)，脑组织Aβ蛋白含量增加，进一步引起瀑布式效应，最终干扰脑组织神经元基本结构和功能。反之，RAGE和NF-κB p65表达下降(Huang XW，Xu Y，SuiX，et al.Scutellarein suppresses Aβ-induced memory impairment via inhibitionof the NF-κB pathway in vivo and in vitro[J].Oncol Lett，2019，17(6)：5581-5589.)，伴有LRP1和Apo J表达上调，会促使脑组织Aβ蛋白进入毛细血管内，脑组织Aβ蛋白含量降低，减少脑组织Aβ蛋白对机体损伤，最终可改善脑组织海马神经元基本结构和功能。

资料显示，诸多药物对老年痴呆症肾虚质有效，如维生素B6(Kalani A，CHAcurvedi P，Kalani K，et al.A high methionine low folate and vitamin B6/B12containing diet can be associated with memory loss by epigenetic silencingof netrin-1[J].Neural Regen Res，2019，14(7)：1247-1254.)、抗Aβ药物(Liu D，Li W，Jiang X，et al.Using near-infrared enhanced thermozyme and scFv dualconjugated Au nanorods for detection and targeted photothermal treatment ofAlzheimer's disease[J].Theranostics，2019，9(8)：2268-2281.)、抗神经元细胞凋亡药物、雌激素(Lai YJ，Zhu BL，Sun F，et al.Estrogen receptorαpromotesCav1.2ubiquitination and degradation in neuronal cells and in APP/PS1mice[J].Aging Cell，2019，18(4)：e12961.)、新型纳米硒、抗氧化剂(Sharma R，Kuca K，Nepovimova E，et al.Traditional Ayurvedic and herbal remedies for Alzheimer'sdisease:from bench to bedside[J].Expert Rev Neurother，2019，19(5)：359-374.)、美金刚等，但是，这些药物往往有一定的副作用且不具有整体调节作用。而依据中医学理论可以选择靶点多、副作用小、发挥整体协调特点的中药组合物来治疗老年痴呆症肾虚质。

现代中医理论认为，肾气充沛则髓海充盈，机体学习能力、记忆能力及分析能力明显增强(张帅，韦云，李浩.基于肾脑相关理论探讨阿尔茨海默病患者中枢神经再生[J].中医杂志，2018，59(2)：120-123.)；肾气亏耗则髓海空虚，会出现学习记忆能力减退、意识模糊，甚至精神障碍。肾虚质不能完成精气上达、化髓冲脑、灌髓海为阳。机体阴阳平衡被打破，脑组织自由基产生增加且清除减少，脑组织异常蛋白质产生增加且无法被降解或降解较少，异常蛋白质在脑组织内形成病理性产物积聚(郑敏，张黎，张洁，等.肾气丸对衰老大鼠学习记忆能力和脑组织过氧化的影响[J].动物医学进展，2013，34(6)：32-35.；武峻艳，王杰.从“肾脑相关”看“作强之官”[J].中华中医药杂志，2017，32(9)：4198-4200.)，异常病理性产物会促进脑组织小胶质细胞及星形胶质细胞活化，将会诱发老年痴呆症肾虚质。

资料显示，老年痴呆症肾虚质又称老年呆病。年高无记性者，肾精亏虚，阳气始衰，脑髓渐空，老年痴呆症肾虚质病变部位集中在脑组织，提示治疗老年痴呆症肾虚质需要补肾潜阳。人五十以上，阴气不足，湿毒积聚，清除细胞内异常代谢产物能力减弱，诱发机体出现学习记忆能力减退、意识模糊及精神障碍，提示老年痴呆症肾虚质需要滋阴利湿。常有老年呆病，善痰为癫，血瘀痰积，诱发脑组织结构及功能改变，提示老年痴呆症肾虚质需要化瘀消痰。机体营卫失和，卫气壅滞，卫气结而血滞，易出现健忘，魂魄离散，言语混乱，诱发脑组织出现自由基积聚，引起脑组织海马小胶质细胞及星形胶质细胞活化，炎症介质积聚，病理性异常蛋白积聚，异常病理性产物形成，同时老年人多伴有脑髓损伤，神明失养，学习能力下降，记忆力衰退，分析能力减弱，提示老年痴呆症肾虚质需要散结活血。

因此，最终本发明确定治疗老年痴呆症肾虚质的基本治疗原则为补肾潜阳、滋阴利湿、化瘀消痰、散结活血，并依此提出了一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物及其制备方法和应用。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明针对老年痴呆症肾虚质的基本治疗原则——补肾潜阳、滋阴利湿、化瘀消痰、散结活血，提供了一种包括8味中药材组成的中药组合物，其包括粟米、生龙骨、旱莲草、落得打、马鞭草、瓦楞子、急性子以及凌霄花。

其中，粟米，又名小米，性寒，味凉、咸，归肾经、胃经、脾经，具有补肾解毒、和中清热的功效；生龙骨，性平，味甘、涩，归肾经、心经、肝经，具有潜阳固涩、安神收敛、止泻镇静的功效；旱莲草，又名墨斗草，性寒，味甘，归肾经、肝经，具有滋阴补肝、止血凉血的功效；落得打，又名积雪草，性寒，味苦、辛，归肾经、肝经、脾经，具有利湿消肿、清热化瘀、软坚解毒的功效；马鞭草，又名凤颈草，性微寒，味苦，归肝经、脾经，具有化瘀清热、利水破血、消肿杀虫的功效；瓦楞子，又名蚶子壳，性平，味甘、咸，归肝经、胃经、脾经，具有消痰软坚、制酸散结、止痛化瘀的功效；急性子，又名凤仙花子，性温，味微苦、辛，归肝经、胃经，具有散结软坚、消积通经、破血活血的功效；凌霄花，性寒，味辛、酸，归肝经、心包经，具有活血解毒、凉血祛风、消肿散瘀的功效。

在本发明中，治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物中，君药粟米、生龙骨主要具有补肾潜阳的功效；臣药旱莲草、落得打主要具有滋阴利湿的功效；佐药马鞭草、瓦楞子主要具有化瘀消痰的功效；使药急性子、凌霄花主要具有散结活血的功效。综合分析，本发明治疗老年痴呆症肾虚质中药组合物的主要功效为补肾潜阳、滋阴利湿、化瘀消痰、散结活血，对老年痴呆症肾虚质具有较好的治疗效果。

具体的，本发明的一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物，其由以下重量份的各原料组成：粟米80-120重量份、生龙骨15-20重量份、旱莲草25-35重量份、落得打10-15重量份、马鞭草20-25重量份、瓦楞子10-15重量份、急性子2-5重量份以及凌霄花5-10重量份。

其中，优选的，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：粟米100重量份、生龙骨18重量份、旱莲草30重量份、落得打12重量份、马鞭草23重量份、瓦楞子12重量份、急性子4重量份以及凌霄花6重量份。

进一步的，本发明还提出了所述的中药组合物在制备用于治疗老年痴呆症肾虚质的药物中的应用。

其中，优选的，向所述的中药组合物中加入制剂成型所需的辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种药物制剂。

其中，优选的，所述的药物制剂为水煎剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

更进一步的，本发明还提出了一种制备所述的用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的方法，包括以下步骤：

(1)按照所述的重量份称取各原料；

(2)将步骤(1)称取得到的各原料混合后，加入原料总重量8-10倍的蒸馏水，浸泡1.5-2.5h，之后煎煮1.5-2.5h，过滤，得到第一次中药组合物滤液以及残渣；

(3)向步骤(2)获得的中药组合物残渣中加入与步骤(1)相同体积的蒸馏水，浸泡中药组合物残渣1.5-2.5h，煎煮中药组合物残渣1.5-2.5h，过滤后，得到第二次中药组合物滤液；

(4)将第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物滤液合并，混匀，即得到用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的水煎剂。

其中，优选的，所述的过滤是指依次采用3层白色纱布、4层白色纱布分别过滤。

其中，优选的，还包括将合并后的滤液于鼓风干燥箱中干燥，得到所述的用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的干膏。

其中，优选的，还包括使用高速万能粉碎机将所述的中药组合物的干膏多次粉碎，细心研磨，分别依次通过20目筛网、60目筛网、100目筛网以及200目筛网过滤，得到所述的中药组合物的干粉。

为了进一步证明本发明的中药组合物具有补肾潜阳、滋阴利湿、化瘀消痰、散结活血的功效，本发明开展了大量实验研究，主要探讨中药组合物高剂量、中药组合物中剂量、中药组合物低剂量对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆能力、海马β-淀粉样蛋白前体蛋白相关蛋白、海马炎症介质、海马抗氧化能力、海马乙酰胆碱代谢酶、海马β-淀粉样蛋白转运酶、脏器指数和体重，主要评估中药组合物治疗老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠疗效及其副作用。

资料显示，通过Morris水迷宫可以评估老年痴呆症肾虚质学习记忆能力减退程度(Medrano-Jimenez E，Jiménez-Ferrer Carrillo I，Pedraza-Escalona M，et al.Malvaparviflora extract ameliorates the deleterious effects of a high fat diet onthe cognitive deficit in a mouse model of Alzheimer's disease by restoringmicroglial function via a PPAR-γ-dependent mechanism[J].J Neuroinflammation，2019，16(1)：143.)。本实验使用Morris水迷宫测定清洁级昆明小鼠学习记忆能力及学习记忆保持能力，结果表明，对照组与假手术组潜伏期、游泳距离、目标象限停留时间、跨平台次数无明显差异，提示对照组与假手术组的学习记忆能力及学习记忆保持能力相似，可以排除手术对模型建立的相关干扰，提示手术不会对模型产生干扰；与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠潜伏期、游泳距离、目标象限停留时间、跨平台次数存在明显差异，清洁级昆明小鼠尚不能将可移动平台的位置记忆到自己脑内，脑组织神经元不可以存储位置信息，导致清洁级昆明小鼠不可以寻找可移动平台，提示模型组清洁级昆明小鼠的学习记忆能力及学习记忆保持能力下降，模型建立的实际效果很好。经过中药组合物治疗后，与模型组比较，中药组合物高、中剂量可以促使潜伏期、游泳距离、目标象限停留时间、跨平台次数逐渐改善，清洁级昆明小鼠记住可移动平台位置，提示中药组合物高、中药组合物中剂量可以改善老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠模型的学习记忆能力及学习记忆保持能力，这对后续开展相关实验研究奠定了基础。

研究指出，老年痴呆症肾虚质会出现APP相关蛋白代谢异常，致使脑组织APP相关蛋白表达增加，脑组织Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，激活小胶质细胞产生炎症介质、促进海马神经元细胞凋亡及细胞焦亡，最终引起脑组织海马神经元结构及功能异常(Harper MM，Hedberg-Buenz A，Herlein J，et al.Blast-Mediated Traumatic BrainInjury Exacerbates Retinal Damage and Amyloidosis in the APPswePSENd19e MouseModel of Alzheimer's Disease[J].Invest Ophthalmol Vis Sci，2019，60(7)：2716-2725.)。本实验通过酶联免疫吸附实验方法测定海马APP相关蛋白，实验结果表明，对照组与假手术组清洁级昆明小鼠海马APP相关蛋白较低，脑组织Aβ生成减少伴有Aβ降解增加，而模型组清洁级昆明小鼠海马APP相关蛋白含量增加，脑组织Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，激活小胶质细胞产生炎症介质、促进海马神经元细胞凋亡及细胞焦亡，结合模型组清洁级昆明小鼠的学习记忆能力及学习记忆保持能力下降，说明老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马区域淀粉样物质增加同时伴有老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆能力及学习记忆保持能力下降，说明脑组织海马APP相关蛋白含量增加是老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆能力及学习记忆保持能力的主要因素。经过中药组合物治疗后，中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以有效地降低海马APP相关蛋白含量，则脑组织Aβ生成减少伴有Aβ降解增加，不利于老年斑形成，不易激活小胶质细胞及星形胶质细胞，同时伴有清洁级昆明小鼠的学习记忆能力及学习记忆保持能力逐渐改善，说明中药组合物高剂量、中剂量可以通过下调海马APP相关蛋白来治疗老年痴呆症肾虚质，且下调海马APP相关蛋白利于清洁级昆明小鼠学习记忆能力及学习记忆保持能力不断改善，这对于老年痴呆症肾虚质小鼠来说是一种保护机制。

资料显示，老年痴呆症肾虚质主要特征是脑组织Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，激活小胶质细胞及星形胶质细胞产生炎症介质，炎症介质又可以促进小胶质细胞及星形胶质细胞产生更多的炎症介质(Li C，Hu C，Wang R，et al.Protectiveeffect of sakuranetin in brain cells of dementia model rats[J].Cell Mol Biol，2019，65(5)：54-58.)，出现炎症介质含量等异常，如炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6含量异常。本实验通过酶联免疫吸附实验方法测定海马炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6含量，结果表明，对照组与假手术组清洁级昆明小鼠脑组织海马炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6含量较低，说明对照组小胶质细胞和星形胶质细胞并未活化，脑炎症反应不明显，伴有脑组织Aβ生成减少伴有Aβ降解增加，不利于老年斑形成。模型组清洁级昆明小鼠脑组织海马炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6含量增加，说明模型组清洁级昆明小鼠脑内部小胶质细胞和星形胶质细胞异常活跃，小胶质细胞和星形胶质细胞可以分泌大量炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6且形成瀑布式效应，结合脑组织Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，脑内海马炎症介质变化与APP相关蛋白变化趋势同步，提示APP相关蛋白是促使炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6含量增加的原因之一。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以降低海马炎症介质IL-1β、TNF-α和IL-6含量，减弱小胶质细胞和星形胶质细胞活跃程度，结合脑组织Aβ生成减少伴有Aβ降解增加，不利于老年斑形成，说明Aβ蛋白学说与炎症介质学说彼此相互关联，Aβ蛋白学说与炎症介质学说均是老年痴呆症肾虚质的主要学说。

文献报道，老年痴呆症肾虚质会出现Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，引起体内自由基代谢平衡失调，自由基清除效率下降，这与机体抗氧化酶如SOD、GSH-PX等含量降低有关(Bai D，Jin G，Zhang D，et al.Natural silibinin modulates amyloidprecursor protein processing and amyloid-βprotein clearance in APP/PS1mice[J].J Physiol Sci，2019，69(4)：643-652.；Kim J，Kim J，Huang Z，et al.TheracurminAmeliorates Cognitive Dysfunctions in 5XFAD Mice by Improving SynapticFunction and Mitigating Oxidative Stress[J].Biomol Ther，2019，27(3)：327-335.)。本实验使用试剂盒测定清洁级昆明小鼠海马SOD、GSH-PX、T-AOC、MDA含量，结果表明，对照组与假手术组清洁级昆明小鼠脑组织海马SOD、GSH-PX、T-AOC含量较高，伴有MDA降低，说明对照组清洁级昆明小鼠脑组织海马抗氧化酶含量较多，抗氧化能力较强，脑组织海马自由基大部分被清除，结合体内脑组织Aβ生成减少伴有Aβ降解增加，不利于老年斑形成，即机体抗氧化能力增强的同时伴有Aβ含量降低。模型组清洁级昆明小鼠脑组织海马SOD、GSH-PX、T-AOC含量较低，伴有MDA增加，说明模型组清洁级昆明小鼠脑组织海马抗氧化酶含量较少，脑组织海马的抗氧化能力减弱，并不能及时将脑组织自由基清除，可见清洁级昆明小鼠脑组织海马自由基的清除效率下降，结合脑组织Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，即机体抗氧化能力减弱的同时伴有Aβ含量增加。而经过中药组合物的治疗后，中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以增加清洁级昆明小鼠脑组织海马SOD、GSH-PX、T-AOC含量，减少MDA含量，说明中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以促使清洁级昆明小鼠脑组织海马抗氧化酶含量较多，抗氧化能力较强，脑组织海马自由基大部分被清除，最终中药组合物高剂量、中药组合物中剂量通过增加清洁级昆明小鼠脑组织海马SOD、GSH-PX、T-AOC含量，来改善老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马的抗氧化能力，起到治疗老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠的积极作用。

研究指出，老年痴呆症肾虚质伴有脑组织Aβ生成增加伴有Aβ降解减少，促使老年斑形成，这与脑组织乙酰胆碱含量降低有关，也与Aβ转运异常有关。其中，CHAc、AChE表达异常会引起乙酰胆碱含量异常，如CHAc表达上调伴有AChE表达下调，会促使脑组织乙酰胆碱含量增加，延缓老年痴呆症肾虚质的发生发展，而CHAc表达下调伴有AChE表达上调，会促使脑组织乙酰胆碱含量降低，加速老年痴呆症肾虚质的发生发展(Unsal-Tan O，Tuylu

T，Ayazgok B，et al.Synthesis molecular docking and biologicalevaluation of novel 2-pyrazoline derivatives as multifunctional agents forthe treatment of Alzheimer's disease[J].Medchemcomm，2019，10(6)：1018-1026.)；RAGE、LRP1表达异常会引起脑组织Aβ转运异常，如RAGE上调伴有LRP1下调，会促进老年痴呆症肾虚质的发生发展，而RAGE下调伴有LRP1上调，Aβ含量降低，会延缓老年痴呆症肾虚质的发生发展(Hsu HW，Rodriguez-Ortiz CJ，Lim SL，et al.Copper-Induced Upregulationof MicroRNAs Directs the Suppression of Endothelial LRP1in Alzheimer'sDisease Model[J].Toxicol Sci，2019，170(1)：144-156.)。本实验使用免疫组织化学方法、Real-time-PCR方法测定与老年痴呆症肾虚质密切相关的CHAc、AChE、RAGE、LRP1蛋白和基因表达。结果表明，对照组与假手术组清洁级昆明小鼠脑组织海马CHAc和LRP1蛋白和基因表达上调，AChE、RAGE蛋白和基因表达下调，说明CHAc表达上调伴有AChE表达下调，会促使脑组织乙酰胆碱含量增加，延缓老年痴呆症肾虚质的发生发展，同时RAGE下调伴有LRP1上调，会延缓老年痴呆症肾虚质的发生发展，这与脑组织乙酰胆碱含量增加及Aβ含量降低有关。模型组清洁级昆明小鼠脑组织海马CHAc和LRP1蛋白和基因表达下调，AChE、RAGE蛋白和基因表达上调，说明CHAc表达下调伴有AChE表达上调，会促使脑组织乙酰胆碱含量降低，加速老年痴呆症肾虚质的发生发展，同时RAGE上调伴有LRP1下调，会促进老年痴呆症肾虚质的发生发展，这与脑组织乙酰胆碱含量降低及Aβ含量增加有关结合，结合模型组清洁级昆明小鼠脑组织炎症介质含量增加、APP相关蛋白表达增加及学习记忆能力减退，说明模型组清洁级昆明小鼠因为Aβ堆积及乙酰胆碱含量降低而引起学习记忆能力降低、炎症介质含量增加。经过中药组合物治疗后，中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以促使CHAc表达上调伴有AChE表达下调，会促使脑组织乙酰胆碱含量增加，延缓老年痴呆症肾虚质的发生发展，同时RAGE下调伴有LRP1上调，会延缓老年痴呆症肾虚质的发生发展，这与脑组织乙酰胆碱含量增加及Aβ含量降低有关，结合中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可降低脑组织炎症介质含量、APP相关蛋白表达，并改善学习记忆能力，说明中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以通过影响脑组织乙酰胆碱含量增加及Aβ含量降低，来改善清洁级昆明小鼠学习记忆能力并降低炎症介质水平。

资料显示，老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠常伴有免疫功能低下及不同程度地脑萎缩(Gupta P，Sil S，Ghosh R，et al.Intracerebroventricular Aβ-InducedNeuroinflammation Alters Peripheral Immune Responses in Rats[J].J MolNeurosci，2018，66(4)：572-586.)。本实验使用电子天平测定清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数。结果显示，对照组与假手术组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数较高，预示脾脏产生较多B细胞及胸腺较多产生T细胞，同时脑组织未见萎缩，说明清洁级昆明小鼠脾脏、胸腺、脑组织结构正常。模型组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数降低，预示脾脏产生较少B细胞及胸腺较多产生T细胞，同时脑组织可见萎缩，说明清洁级昆明小鼠脾脏、胸腺、脑组织结构异常。经过中药组合物的治疗后，中药组合物高剂量、中药组合物中剂量可以促使清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数和脑指数增加，预示脾脏产生较多B细胞及胸腺较多产生T细胞，同时脑组织未见萎缩，说明清洁级昆明小鼠脾脏、胸腺、脑组织结构逐渐恢复，免疫功能逐渐恢复，脑组织萎缩程度逐渐减轻，提示中药组合物高剂量、中药组合物中剂量对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠的免疫功能和脑组织有一定的保护作用。

资料显示，中药组合物副作用可通过重要器官脏器指数及体重来进行评定。为此，本实验使用电子天平测定了清洁级昆明小鼠的心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重。结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组与假手术组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重改变不明显，差异无统计学意义。经过中药组合物治疗后，与模型组比较，中药组合物高、中、低剂量组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重改变也不明显，差异无统计学意义，提示中药组合物治疗老年痴呆症肾虚质不会改变清洁级昆明小鼠心指数、肺指数、肾指数、肝指数和体重，提示可以放心使用中药组合物治疗老年痴呆症肾虚质，可见中药组合物高、中、低剂量治疗老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠没有副作用。

以上实验表明，本发明中药组合物高、中剂量(53.30g/kg、26.65g/kg)可改善老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆能力，还可改善APP相关蛋白、海马炎症介质、抗氧化能力等，更可促进海马CHAc表达上调伴有AChE表达下调，且促进海马RAGE下调伴有LRP1上调，同时中药组合物高、中剂量(53.30g/kg、26.65g/kg)对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠重要脏器的脏器指数和体重无影响，说明该中药组合物高、中剂量(53.30g/kg、26.65g/kg)治疗老年痴呆症肾虚质有效并且无副作用。

附图说明

图1为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习能力的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是潜伏期(s)；

图2为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠记忆能力的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是游泳距离(cm)；

图3为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠跨平台次数的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是跨平台次数(次)；

图4为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠目标象限停留时间的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是目标象限停留时间(s)；

图5为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马APP含量的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是海马APP(ng/L)；

图6为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马Aβ_1-40和海马Aβ_1-42含量的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是海马Aβ_1-40，右侧海马Aβ_1-42；纵坐标是海马Aβ_1-40和海马Aβ_1-42含量(ng/L)；

图7为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马炎症介质IL-1β和TNF-α的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是海马IL-1β，右侧海马TNF-α；纵坐标是海马炎症介质IL-1β和TNF-α含量(pg/mL)；

图8为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马炎症介质IL-6的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是海马IL-6(pg/mL)；

图9为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马T-AOC的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是海马T-AOC(nU/mg)；

图10为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马SOD的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是海马SOD(U/mg)；

图11为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马GSH-PX的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是海马GSH-PX(nmol/g)；

图12为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马MDA的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是海马MDA(μmol/g)；

图13为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马CHAc和AChE表达的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是海马CHAc，右侧海马AChE；纵坐标是海马CHAc和AChE(平均光密度值)；

图14为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马RAGE和LRP1表达的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是海马RAGE，右侧海马LRP1；纵坐标是海马RAGE和LRP1(平均光密度值)；

图15为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是CHAc mRNA表达(相对表达量)；

图16为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是AChE mRNA(相对表达量)；

图17为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是RAGE mRNA(相对表达量)；

图18为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是LRP1mRNA(相对表达量)；

图19为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是脾指数，右侧胸腺指数；纵坐标是脾指数、胸腺指数(mg/g)；

图20为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脑指数的影响；

注：横坐标是组别；纵坐标是脑指数(mg/g)；

图21为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠心指数、肺指数的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是心指数，右侧肺指数；纵坐标是心指数、肺指数(mg/g)；

图22为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数的影响；

注：横坐标是组别，每个组别内左侧是肾指数，右侧肝指数；纵坐标是肾指数、肝指数(mg/g)；

图23为中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠体重的影响；

注：横坐标是组别，每组内从左边开始依次是0d体重、7d体重、14d体重、21d体重、28d体重；纵坐标是体重(g)。

具体实施方式

下面结合具体实施例和附图来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

实施例1一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的制备

所述的中药组合物由以下重量的各原料组成：粟米100g、生龙骨18g、旱莲草30g、落得打12g、马鞭草23g、瓦楞子12g、急性子4g以及凌霄花6g。

实施例2一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的制备

所述的中药组合物由以下重量的各原料组成：粟米80g、生龙骨20g、旱莲草25g、落得打15g、马鞭草20g、瓦楞子15g、急性子3g以及凌霄花5g。

实施例3一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的制备

所述的中药组合物由以下重量的各原料组成：粟米120g、生龙骨15g、旱莲草32g、落得打10g、马鞭草25g、瓦楞子10g、急性子2g以及凌霄花10g。

实施例4一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物(粉剂)的制备

(1)配制3份中药组合物

分别取粟米100g、生龙骨18g、旱莲草30g、落得打12g、马鞭草23g、瓦楞子12g、急性子4g、凌霄花6g各4份，配制3份中药组合物。3份中药组合物共计615g。

(2)获取中药组合物第一次滤液

将3份中药组合物放入20000mL大容量圆底烧瓶中，加入蒸馏水6000mL，浸泡2h，100℃下煎煮2h，分别依次使用4层纱布、3层纱布、4层纱布过滤、后，获取中药组合物的第一次滤液。

(3)获取中药组合物第二次滤液

将中药组合物的残渣放到大容量圆底烧瓶中，加入蒸馏水6000mL，浸泡中药组合物残渣2h，100℃下煎煮2h，分别依次使用4层纱布、3层纱布、4层纱布过滤、后，获取中药组合物的第二次滤液。

(4)获取中药组合物干膏

合并第一次滤液及其第二次滤液，鼓风干燥箱于65℃下干燥6d，获取中药组合物干膏156.31g，则该中药组合物出膏率为(干膏/中药组合物)×100％，即(156.31g/615g)×100％＝25.42％，即1g中药组合物干膏相当于中药组合物原药材3.93g。

(5)获取中药组合物干粉

使用高速万能粉碎机将中药组合物干膏多次粉碎，细心研磨，然后分别依次通过20目筛网、60目筛网、100目筛网、200目筛网过滤后，电子天平称重，获取中药组合物干粉146.32g，则该中药组合物出粉率＝(干粉/中药组合物)×100％＝(146.32g/615g)×100％＝23.79％。

(6)保存中药组合物干粉

最终，实验使用615g中药组合物，将可以获取中药组合物干粉146.32g，即1g中药组合物干粉相当于中药组合物原药材4.20g。

(7)分装中药组合物干粉

该中药组合物干粉按照10g/袋，装好14袋，最后一袋6.32g，于-80℃冰箱保存备用。

实施例5中药组合物在治疗老年痴呆症肾虚质中的应用

1材料

1.1实验动物

雄性清洁级昆明小鼠，4月龄，清洁级，体质量(22±2)g，120只，由北京维通利华实验动物技术有限公司，动物质量合格证号SCXK(京)2012-0001，由黑龙江中医药大学实验动物中心饲养，动物饲养环境为温度19～26℃、相对湿度达45％～65％、氨浓度适中、光照强度适中。由黑龙江中医药大学药物安全评价中心实验动物中心李宝龙教授负责4月龄雄性清洁级昆明小鼠的饲养工作。

1.2实验仪器

HH-11420-BS型电热恒温培养箱，上海五久自动化设备有限公司；PLZOZ-S型电子天平，赛多利斯公司；6100型酶标仪，美国RT公司；ZH-C型脑立体定位仪，河北慧采科技有限责任公司；BW-MWM101型Morris水迷宫，安徽淮北正华生物仪器有限公司；TGL-16G型台式离心机，上海安亭科学仪器厂；HMIAS型彩色分析系统，武汉千屏影像技术有限公司；AppliedBiosystems型定量PCR仪，美国应用生物系统公司等。

1.3实验药品

粟米、生龙骨、旱莲草、落得打、马鞭草、瓦楞子、急性子、凌霄花，由黑龙江中医药大学周忠光教授购买于黑龙江中医药大学附属第一医院，由黑龙江中医药大学田明教授进行鉴定原药材，原药材鉴定标准依据为国家药品监督管理局制定的标准。其中，生龙骨及瓦楞子需打碎成0.3cm³小块。

1.4实验试剂

盐酸多奈哌齐片，20141201，中国重庆植恩药业有限公司；APP、Aβ_1-42、Aβ_1-40试剂盒，20170901，南京建成生物工程公司；Aβ_1-42，美国Sigma公司；IL-1β、TNF-α和IL-6试剂盒，20180301，南京建成生物工程公司；SOD、GSH-PX、T-AOC、MDA试剂盒，20180601，南京建成生物工程研究所；Prime

RT reagent KIT，日本TaKaRa公司；CHAc、AChE、β-action、RAGE、LRP1，美国Santa Cruz Biotechnology公司；其他试剂均为国产分析纯由黑龙江中医药大学周忠光教授及齐齐哈尔医学院张英博副教授提供。

2方法

2.1动物分组

140只4月龄雄性清洁级昆明小鼠在黑龙江中医药大学药物安全评价中心实验动物中心由李宝龙教授适应饲养1周后，按照随机数字表排列方式，将140只4月龄雄性清洁级昆明小鼠随机分成对照组、假手术组、模型组、多奈哌齐组、中药组合物高剂量组(高剂量组)、中药组合物中剂量组(中剂量组)、中药组合物低剂量组(低剂量组)，共分7组，每组20只4月龄雄性清洁级昆明小鼠。

2.2模型复制

本实验老年痴呆症肾虚质模型采取复合式制备方法，包括Aβ_1-42海马注射、氢化可的松灌胃、猫吓鼠复合方式制备老年痴呆症肾虚质模型。每天实验时间安排如下：针对清洁级昆明小鼠，每天上午8点Aβ_1-42海马注射，每天中午12点氢化可的松灌胃，每天下午16点采用猫吓鼠方法，均持续20天。

(1)Aβ_1-42海马注射

依据Aβ蛋白诱导老年痴呆症肾虚质理论，本实验参考文献(He B，Xu F，Yan T，etal.Tectochrysin from Alpinia Oxyphylla Miq.alleviates Aβ_1-42induced learningand memory impairments in mice[J].Eur J Pharmacol，2019，5(842)：365-372.；张晓杰，费洪新，刘得水，等.丹溪痛风方对阿尔茨海默病小鼠血脑屏障通透性和海马β淀粉样蛋白的影响及机制[J].中国实验方剂学杂志，2016，22(22)：118-123.)制备模型。选择4月龄雄性清洁级昆明小鼠，麻醉后固定雄性清洁级昆明小鼠，剪去雄性清洁级昆明小鼠头部毛发，消毒雄性清洁级昆明小鼠头部皮肤，剪开雄性清洁级昆明小鼠皮肤，使用脑立体定位仪定位雄性清洁级昆明小鼠海马区域，暴露雄性清洁级昆明小鼠头部颅骨，使用微量加样器对雄性清洁级昆明小鼠海马区域双侧脑室一次性注入5μL凝聚态Aβ_1-42(80pmol/μL)，留针2min后封闭颅骨孔，滴加庆大霉素，消毒雄性清洁级昆明小鼠皮肤，包扎雄性清洁级昆明小鼠头部，单笼饲养雄性清洁级昆明小鼠。另外，假手术组需要麻醉后固定雄性清洁级昆明小鼠，剪去雄性清洁级昆明小鼠头部毛发，消毒雄性清洁级昆明小鼠头部皮肤，剪开雄性清洁级昆明小鼠皮肤，使用脑立体定位仪定位雄性清洁级昆明小鼠海马区域，暴露雄性清洁级昆明小鼠头部颅骨，注射无菌生理盐水。对照组雄性清洁级昆明小鼠不做干预。

(2)采用氢化可的松灌胃方法

依据应激诱发老年痴呆症肾虚质理论，需要参考文献(Hu ZP，Browne ER，Liu T，et al.Metabonomic profiling of TASTPM transgenic Alzheimer's disease mousemodel[J].J Proteome Res，2012，11(12)：5903-5913.；潘志强，钱宏梁，王晓敏，等.不同剂量氢化可的松诱发小鼠药源性脾肾虚证的评价研究[J].中国中西医结合杂志，2019，39(4)：480-485.)制备老年痴呆症肾虚模型。选择4月龄雄性清洁级昆明小鼠，抓取4月龄雄性清洁级昆明小鼠，右手持灌胃器灌胃氢化可的松，每天灌胃氢化可的松剂量为3mg/kg，持续20天，观察模型组、多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠出现眼中无神、倦怠无力、活动减少、皮毛松弛等基本现象。另外，对照组、假手术组雄性清洁级昆明小鼠等体积生理盐水灌胃。

(3)采用猫吓鼠方法

依据惊恐伤肾诱发老年痴呆症肾虚质理论，需要参考文献(孙筱婷，刘宣，李琦.肾虚证动物模型研究概况[J].中华中医药杂志，2017，32(2)：659-662.；朱梦茹.六味地黄丸对焦虑小鼠血清GABA与海马GR表达控作用的初步研究[D].云南中医学院，2016.)制备肾虚质模型。本实验将模型组、多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠放入13cm×20cm×20cm铁丝笼内，再将鼠笼置于50cm×40cm×40cm铁丝笼内，将未进食的猫放入50cm×40cm×40cm铁丝笼内，让猫在50cm×40cm×40cm铁丝笼内自由活动，每天未进食猫活动时间为120min，且保证猫无法攻击到13cm×20cm×20cm铁丝笼内的清洁级昆明小鼠，清洁级昆明小鼠可通过听觉、视觉、嗅觉、知觉等感觉到未进食猫的存在，始终维持未进食猫对清洁级昆明小鼠保持攻击性，持续20天。观察模型组、多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组、低剂量组雄性清洁级昆明小鼠出现眼中无神、倦怠无力、活动减少、皮毛松弛等基本现象。另外，对照组与假手术组雄性清洁级昆明小鼠不采用猫吓鼠方法，常温常湿饲养清洁级昆明小鼠。

(4)确定模型

实验通过Aβ_1-42海马注射、氢化可的松灌胃、猫吓鼠复合方式，会制备出老年痴呆症肾虚质模型。在Aβ_1-42海马注射、氢化可的松灌胃、猫吓鼠复合方式同步化过程中，对照组20只清洁级昆明小鼠存活，假手术组18只清洁级昆明小鼠存活，模型组14只清洁级昆明小鼠存活，多奈哌齐组15只清洁级昆明小鼠存活，高剂量组13只清洁级昆明小鼠存活，中剂量组13只清洁级昆明小鼠存活，低剂量组16只清洁级昆明小鼠存活。

2.3药物提取

(1)计算每份中药组合物剂量

本实验中药组合物包括粟米100g、生龙骨18g、旱莲草30g、落得打12g、马鞭草23g、瓦楞子12g、急性子4g、凌霄花6g，共计205g，此剂量为正常人标准体重每份中药组合物的总体剂量，由黑龙江中医药大学栗明教授和周忠光教授进行鉴定。

(2)药物提取

按照实施例5的方法制备。

(3)使用中药组合物干粉

需要将含有粟米、生龙骨、旱莲草、落得打、马鞭草、瓦楞子、急性子、凌霄花中药组合物室温内融化，搅拌中药组合物，并按照清洁级昆明小鼠的体表面积及其体重数值精细换算中药组合物给药量。

2.4药物剂量的设定

按照公式计算给药剂量，Y(g/kg)＝[(X(g)×0.0026)/(20g清洁级昆明小鼠)]×50，其中，Y是给药剂量，X是临床上人中药组合物常规剂量。中药组合物包括粟米100g、生龙骨18g、旱莲草30g、落得打12g、马鞭草23g、瓦楞子12g、急性子4g、凌霄花6g，一共205g，经过黑龙江中医药大学栗明教授评定是临床患者安全剂量。将粟米100g、生龙骨18g、旱莲草30g、落得打12g、马鞭草23g、瓦楞子12g、急性子4g、凌霄花6g，依据清洁级昆明小鼠和人体表面积比值0.0026：1进行换算，计算求得含有粟米100g、生龙骨18g、旱莲草30g、落得打12g、马鞭草23g、瓦楞子12g、急性子4g、凌霄花6g的中药组合物常规剂量为[(205g×0.0026)/20g清洁级昆明小鼠]×50，即26.65g/kg。此为中药组合物中剂量，设定中药组合物高剂量、中药组合物中剂量、中药组合物低剂量分别是53.30g/kg、26.65g/kg、13.33g/kg。经过黑龙江中医药大学周忠光教授评定，临床上多奈哌齐治疗老年痴呆症肾虚质的常规可用剂量是(5～10)mg，按照公式计算为[5×0.0026×50～10×0.0026×5]mg/kg，(0.00065～0.0013)g/kg，本实验选择0.001g/kg多奈哌齐开展实验研究。

2.5实验动物给药

(1)灌胃给药前清洁级昆明小鼠数量

本实验老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠模型造模后，对照组20只清洁级昆明小鼠存活，假手术组18只清洁级昆明小鼠存活，模型组14只清洁级昆明小鼠存活，多奈哌齐组15只清洁级昆明小鼠存活，高剂量组13只清洁级昆明小鼠存活，中剂量组13只清洁级昆明小鼠存活，低剂量组16只清洁级昆明小鼠存活。

(2)实验清洁级昆明小鼠灌胃给药

本实验各组清洁级昆明小鼠均需要灌胃给药，其中对照组清洁级昆明小鼠给予等量生理盐水灌胃，模型组清洁级昆明小鼠给予等量生理盐水灌胃，假手术组清洁级昆明小鼠给予等量生理盐水灌胃，多奈哌齐组清洁级昆明小鼠给予多奈哌齐0.001g/kg灌胃，高剂量组清洁级昆明小鼠给予相当于中药组合物原药材53.30g/kg灌胃，中剂量组清洁级昆明小鼠给予相当于中药组合物原药材26.65g/kg灌胃，低剂量组清洁级昆明小鼠给予相当于中药组合物原药材13.33g/kg灌胃。各组清洁级昆明小鼠给药28d。

(3)灌胃给药后清洁级昆明小鼠数量

本实验各组清洁级昆明小鼠灌胃结束后，对照组18只清洁级昆明小鼠存活，假手术组16只清洁级昆明小鼠存活，模型组11只清洁级昆明小鼠存活，多奈哌齐组10只清洁级昆明小鼠存活，高剂量组8只清洁级昆明小鼠存活，中剂量组11只清洁级昆明小鼠存活，低剂量组14只清洁级昆明小鼠存活。

2.6检测学习记忆能力

本实验参考文献(Du C，Shi L，Wang M，et al.Emodin attenuates Alzheimer'sdisease by activating the protein kinase C signaling pathway[J].Cell MolBiol，2019，65(5)：32-37.；费洪新，李林，赵坤，等.芒柄花黄素对阿尔茨海默病清洁级昆明小鼠学习记忆能力及海马毛细血管超微结构的影响[J].中国老年学杂志，2018，38(20)：5051-5054.)进行行为学测试。BW-MWM101型Morris水迷宫实验设定的基本条件包括水温(23±2)℃，水深20cm，高于平台1.5cm，将平台置于第IV象限，保持室内外参照物一致。同时，清洁级昆明小鼠头部用墨汁着色，水池底部及周边均使用黑色麻布覆盖。使用BW-MWM101型Morris水迷宫让清洁级昆明小鼠在第I、II、III象限进行4d训练测试，每次60s，如果60s内搜寻不到平台则停留15s。第5d时定位航行测试，计算清洁级昆明小鼠到达平台的潜伏期，评价清洁级昆明小鼠学习能力。第5d时空间探索测试，计算清洁级昆明小鼠到达平台的游泳距离，评价清洁级昆明小鼠记忆能力。最后，在测试第5d时撤去平台，测试在60s内清洁级昆明小鼠跨越第IV象限跨平台次数及目标象限(第IV象限)停留时间，评价清洁级昆明小鼠的学习记忆保持能力。

2.7检测海马APP相关蛋白及炎症介质

本实验各组清洁级昆明小鼠Morris水迷宫实验测定结束后，参考文献(Wang SW，Liu DQ，Zhang LX，et al.A vaccine with Aβoligomer-specific mimotope attenuatescognitive deficits and brain pathologies in transgenic mice with Alzheimer'sdisease[J].Alzheimers Res Ther，2017，9(1)：41.；张英博，费洪新，郭家，等.蝙蝠葛碱对阿尔茨海默病小鼠海马晚期糖基化终产物受体和核转录因子-κBp65的影响[J].中国老年学杂志，2017，37(19)：4697-4700.)进行实验。实验人员戴上手套，抓取清洁级昆明小鼠，迅速在冰上取材清洁级昆明小鼠全脑，去除清洁级昆明小鼠小脑和脑干，取材清洁级昆明小鼠海马，匀浆，4℃静置匀浆液1h，TGL-16G型台式离心机3000rpm/min离心20min，取上清液，分装，检测各组清洁级昆明小鼠海马蛋白含量，余下样品保存于-80℃冰箱备用。按照试剂盒说明书，采用6100型酶标仪进行测定450nm波长处吸光度值(OD)，根据标准曲线方程及各孔吸光度值(OD)计算清洁级昆明小鼠海马APP相关蛋白及炎症介质含量。

2.8测定抗氧化能力

本实验各组清洁级昆明小鼠Morris水迷宫实验测定结束后，参考文献(Zhou Y，Wang ZF，Li W，et al.Protective effects of microRNA-330on amyloidβ-proteinproduction,oxidative stress,and mitochondrial dysfunction in Alzheimer'sdisease by targeting VAV1via the MAPK signaling pathway[J].J Cell Biochem，2018，119(7)：5437-5448.)开展实验研究。实验人员戴上手套，使用10％水合氯醛麻醉清洁级昆明小鼠，取清洁级昆明小鼠全脑，流水清洗清洁级昆明小鼠全脑，取材清洁级昆明小鼠海马，匀浆，静置1h，TGL-16G型台式离心机3000rpm/min离心清洁级昆明小鼠海马20min，取各组清洁级昆明小鼠海马上清液，进行分装，按照试剂盒说明书测定各组清洁级昆明小鼠脑海马SOD、GSH-PX、T-AOC、MDA含量。

2.9测定海马蛋白表达

本实验各组清洁级昆明小鼠Morris水迷宫实验测定结束后，参考文献(Derk J，Bermudez Hernandez K，Rodriguez M，et al.Diaphanous 1(DIAPH1)is HighlyExpressed in the Aged Human Medial Temporal Cortex and Upregulated in MyeloidCells During Alzheimer's Disease[J].J Alzheimers Dis，2018，64(3)：995-1007.)开展实验研究。实验人员戴上手套，使用10％水合氯醛麻醉各组清洁级昆明小鼠，固定清洁级昆明小鼠，剪开清洁级昆明小鼠皮肤，充分暴露清洁级昆明小鼠心脏，剪开清洁级昆明小鼠右心耳，输液针头刺入清洁级昆明小鼠左心室心尖处，缓慢匀速点滴各组清洁级昆明小鼠生理盐水90mL，缓慢匀速灌注4％多聚甲醛约50mL，取材清洁级昆明小鼠全脑，去除清洁级昆明小鼠小脑和脑干，经过固定、脱水、透明、融化、切片、烤片、保存。按照试剂盒说明书采用免疫组织化学方法测定各组清洁级昆明小鼠脑海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1蛋白表达，应用Image-Pro Plus 6.0软件计算清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1蛋白的平均光密度值，分析清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1蛋白表达水平。

2.10测定海马mRNA的表达

本实验参考文献(Aarons T，Bradburn S，Robinson A，et al.Dysregulation ofBDNF in Prefrontal Cortex in Alzheimer's Disease[J].J Alzheimers Dis，2019，69(4)：1089-1097.；Yin K，Jin J，Zhu X，et al.CART modulates beta-amyloidmetabolism-associated enzymes and attenuates memory deficits in APP/PS1mice[J].Neurol Res，2017，39(10)：885-894.)开展实验研究。本实验使用Applied Biosystems型定量PCR仪，采用Real-time-PCR测定各组清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1mRNA的表达。需要将清洁级昆明小鼠新鲜脑海马mRNA，并反转录成cDNA，设计各组清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1mRNA的特异性引物，加入特殊SYBR Green I荧光材料，设置参数包括50℃2min，95℃10min，95℃15s，60℃1min，42Cycles，采用2^-ΔΔCt法计算，使用Applied Biosystems型定量PCR仪分析计算清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1mRNA相对表达量。

2.11测定脏器指数

本实验Morris水迷宫实验测试结束后，需要断头处死清洁级昆明小鼠，在超净工作台上解剖清洁级昆明小鼠，取材清洁级昆明小鼠脾、胸腺、脑、心、肺、肾、肝等脏器，洗涤清洁级昆明小鼠脏器、吸干清洁级昆明小鼠脏器水分，使用PLZOZ-S型电子天平称量清洁级昆明小鼠脏器质量，计算清洁级昆明小鼠脏器指数，评价中药组合物对各组清洁级昆明小鼠副作用。计算公式：脏器指数(mg/g)＝脏器质量(mg)/清洁级昆明小鼠体重(g)

2.12测定清洁级昆明小鼠体重

本实验Morris水迷宫实验测试结束后，测定各组清洁级昆明小鼠体重，统计各组清洁级昆明小鼠在给药过程中0d、7d、14d、21d、28d体重数据变化，评价中药组合物对各组清洁级昆明小鼠副作用。

2.13统计分析

本实验采用SPSS19.0软件分析各组清洁级昆明小鼠实验数据，各组清洁级昆明小鼠实验数据采用

表示，多组间各组清洁级昆明小鼠实验数据比较采用单因素方差分析，P＜0.05表示各组清洁级昆明小鼠实验数据差异有统计学意义，P＞0.05表示各组清洁级昆明小鼠实验数据差异无统计学意义。

3结果

3.1中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆能力的影响

清洁级昆明小鼠潜伏期可以评价老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习能力，清洁级昆明小鼠游泳距离评价老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠记忆能力。分析测试第5d各组清洁级昆明小鼠潜伏期和游泳距离，结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠潜伏期明显延长(P＜0.05)且游泳距离明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠潜伏期和游泳距离改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠潜伏期明显缩短(P＜0.05)且游泳距离明显减少(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠潜伏期和游泳距离改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表1、见图1、见图2。

表1中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆能力的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.2中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆保持能力的影响

清洁级昆明小鼠目标象限停留时间和跨平台次数可以评价清洁级昆明小鼠学习记忆保持能力。分析第5d各组清洁级昆明小鼠目标象限停留时间和跨平台次数，结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠跨平台次数明显降低(P＜0.05)，目标象限停留时间明显缩短(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠目标象限停留时间和跨平台次数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠跨平台次数明显增加(P＜0.05)，目标象限停留时间明显延长(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠目标象限停留时间和跨平台次数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表2、见图3、见图4。

表2中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠学习记忆保持能力的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.3中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马APP相关蛋白的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马APP、海马Aβ_1-40、海马Aβ_1-42含量明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马APP、海马Aβ_1-40、海马Aβ_1-42含量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马APP、海马Aβ_1-40、海马Aβ_1-42含量明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马APP、海马Aβ_1-40、海马Aβ_1-42含量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表3、图5、见图6。

表3中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马APP相关蛋白含量的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.4中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马炎症介质的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马炎症介质IL-1β、TNF-α、IL-6含量明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马炎症介质IL-1β、TNF-α、IL-6改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马炎症介质IL-1β、TNF-α、IL-6含量明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马炎症介质IL-1β、TNF-α、IL-6含量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表4、见图7、见图8。

表4中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马炎症介质的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.5中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马抗氧化能力的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马T-AOC、SOD、GSH-PX含量明显降低(P＜0.05)，海马MDA含量明显升高(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马T-AOC、SOD、GSH-PX、MDA含量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马T-AOC、SOD、GSH-PX含量明显升高(P＜0.05)且MDA明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马T-AOC、SOD、GSH-PX、MDA含量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表5、见图9、见图10、见图11、见图12。

表5中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马抗氧化能力的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.6中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1表达的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马CHAc平均光密度值明显减少(P＜0.05)，AChE平均光密度值明显增加(P＜0.05)，RAGE平均光密度值明显增加(P＜0.05)，LRP1平均光密度值明显减少(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1平均光密度值改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马CHAc平均光密度值明显增加(P＜0.05)，AChE平均光密度值明显减少(P＜0.05)，RAGE平均光密度值明显减少(P＜0.05)，LRP1平均光密度值明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1平均光密度值改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表6、见图13、见图14。

表6中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马CHAc、AChE、RAGE、LRP1表达的影响(

n＝8，平均光密度值)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.7中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA表达的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA相对表达量明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA相对表达量明显升高(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表7、图15。

表7中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马CHAc mRNA表达的影响(

n＝8，2^-ΔΔCt法)

3.8中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA表达的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA相对表达量明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA相对表达量明显减少(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表8、图16。

表8中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马AChE mRNA表达的影响(

n＝8，2^-ΔΔCt法)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.9中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA表达的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA相对表达量明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA相对表达量明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表9、图17。

表9中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马RAGE mRNA表达的影响(

n＝8，2^-ΔΔCt法)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.10中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA表达的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA相对表达量明显减少(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA相对表达量明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA相对表达量改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表10、图18。

表10中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠海马LRP1mRNA表达的影响(

n＝8，2^-ΔΔCt法)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.11中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表11、图19。

表11中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脾指数、胸腺指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.12中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脑指数的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠脑指数明显降低(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠脑指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组清洁级昆明小鼠脑指数明显增加(P＜0.05)，差异具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，低剂量组清洁级昆明小鼠脑指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表12、图20。

表12中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠脑指数的影响

n＝8)

注：与对照组比较：¹⁾P＜0.05，²⁾P＞0.05；与模型组比较：³⁾P＜0.05，⁴⁾P＞0.05

3.13中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠心指数、肺指数的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠心指数、肺指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表13、图21。

表13中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠心指数、肺指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

3.14中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数的影响

结果表明，与对照组清洁级昆明小鼠比较，模型组清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与对照组清洁级昆明小鼠比较，假手术组清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组清洁级昆明小鼠比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组、低剂量组清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表14、图22。

表14中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠肾指数、肝指数的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

3.15中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠体重的影响

结果表明，与对照组0d、7d、14d、21d、28d清洁级昆明小鼠体重比较，模型组0d、7d、14d、21d、28d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与对照组0d、7d、14d、21d、28d清洁级昆明小鼠体重比较，假手术组0d、7d、14d、21d、28d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义；与模型组0d、7d、14d、21d、28d清洁级昆明小鼠体重比较，多奈哌齐组、高剂量组、中剂量组、低剂量组0d、7d、14d、21d、28d清洁级昆明小鼠体重改变不明显(P＞0.05)，差异不具有统计学意义。见表15、见表16、见图23。

表15中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠体重的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

表16中药组合物对老年痴呆症肾虚质清洁级昆明小鼠体重的影响

注：与对照组比较：¹⁾P＞0.05；与模型组比较：²⁾P＞0.05

Claims (9)

1.一种用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：粟米80-120重量份、生龙骨15-20重量份、旱莲草25-35重量份、落得打10-15重量份、马鞭草20-25重量份、瓦楞子10-15重量份、急性子2-5重量份以及凌霄花5-10重量份。

2.如权利要求1所述的中药组合物，其特征在于，所述的中药组合物由以下重量份的各原料组成：粟米100重量份、生龙骨18重量份、旱莲草30重量份、落得打12重量份、马鞭草23重量份、瓦楞子12重量份、急性子4重量份以及凌霄花6重量份。

3.权利要求1或2所述的中药组合物在制备用于治疗老年痴呆症肾虚质的药物中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，向权利要求1或2所述的中药组合物中加入制剂成型所需的辅料，按照药物制剂常规方法做成临床上适宜的各种药物制剂。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述的药物制剂为水煎剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、颗粒剂、片剂或口服液。

6.一种制备权利要求1所述的用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)按照权利要求1或2所述的重量份称取各原料；

(2)将步骤(1)称取得到的各原料混合后，加入原料总重量8-10倍的蒸馏水，浸泡1.5-2.5h，之后煎煮1.5-2.5h，过滤，得到第一次中药组合物滤液以及残渣；

(3)向步骤(2)获得的中药组合物残渣中加入与步骤(1)相同体积的蒸馏水，浸泡中药组合物残渣1.5-2.5h，煎煮中药组合物残渣1.5-2.5h，过滤后，得到第二次中药组合物滤液；

(4)将第一次中药组合物滤液和第二次中药组合物滤液合并，混匀，即得到用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的水煎剂。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的过滤是指依次采用3层白色纱布、4层白色纱布分别过滤。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，还包括将合并后的滤液于鼓风干燥箱中干燥，得到所述的用于治疗老年痴呆症肾虚质的中药组合物的干膏。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，还包括使用高速万能粉碎机将所述的中药组合物的干膏多次粉碎，细心研磨，分别依次通过20目筛网、60目筛网、100目筛网以及200目筛网过滤，得到所述的中药组合物的干粉。

Images