CN111297839A - 白藜芦醇寡聚体DipG在制备治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用 - Google Patents
白藜芦醇寡聚体DipG在制备治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了白藜芦醇寡聚体Dip G在制备治疗三阴性乳腺癌的药物及促进三阴性乳腺癌细胞分化的药物中的应用，以及相应的药物。本发明首次发现Dip G可以通过促进三阴性乳腺癌细胞由基底样型向管腔上皮型分化，抑制细胞增殖和侵袭，从而达到治疗三阴性乳腺癌的作用，为三阴性乳腺癌提供新的治疗策略。
Description
技术领域
本发明专利涉及白藜芦醇寡聚体Dip G在制备治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用，属于药学领域。
背景技术
三阴性乳腺癌(Triple-negative breast cancer,TNBC)约占乳腺癌的15-20％，是一种雌激素受体、孕激素受体以及人表皮因子生长受体2均为阴性的乳腺癌。具有增殖活力高、抗药性强、复发率高、侵袭和转移能力强等特征。目前临床仍无有效的靶向性治疗方案，化疗仍是TNBC的标准治疗方法。但TNBC易对化疗药物产生耐药性，且局部复发率和全身转移率高，疾病预后差，因此迫切需要寻找新的治疗方法。
Diptoindonesin G(Dip G)是白藜芦醇的非整倍体，可从热带植物如狭叶坡垒(Hopea chinensis)的树皮中分离获得或人工全合成。目前尚未发现关于Dip G治疗TNBC作用的报导。
发明内容
本发明的目的是提供白藜芦醇寡聚体Dip G在制备治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用。
本发明的另一目的是提供一种治疗三阴性乳腺癌的药物，其特征在于：其有效成分包括白藜芦醇寡聚体Dip G。
本发明的又一目的是提供白藜芦醇寡聚体Dip G在制备促进三阴性乳腺癌细胞分化的药物中的应用。
本发明的再一目的是提供一种促进三阴性乳腺癌细胞分化的药物，其特征在于：其有效成分包括白藜芦醇寡聚体Dip G。
本发明首次发现Dip G可以通过促进三阴性乳腺癌细胞由基底样型向管腔上皮型分化，抑制细胞增殖和侵袭，从而达到治疗三阴性乳腺癌的作用，为三阴性乳腺癌提供新的治疗策略。
附图说明
图1为Dip G的结构式。
图2为Dip G对TNBC细胞增殖的影响。
图3为Dip G对TNBC细胞侵袭能力的影响。
图4为Dip G对TNBC细胞形态的影响。
图5为Dip G对TNBC细胞分化的影响。
图6为给予Dip G对小鼠TNBC异种移植模型中移植瘤生长的影响。
图7为给予Dip G对小鼠TNBC异种移植模型中移植瘤重量的影响。
下面结合附图对本发明的具体实施方式做进一步说明。
具体实施方式
实施例1
一、Dip G的药理试验
1、细胞培养
人源TNBC细胞株MDA-MB-231、SUM1315来自中国科学院上海细胞生物学研究所。MDA-MB-231、SUM1315用DMEM培养基(含10％FBS)培养于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中。
2、细胞增殖实验
取MDA-MB-231、SUM1315细胞种于24孔板中，每个孔种1×105个细胞，分别用0、1.875、3.75、7.5、15μM的Dip G处理0、24、48、72、96小时后，进行台盼蓝染色，用血细胞计数器对细胞进行计数。其中1.875μM的Dip G是指反应液中Dip G浓度达到1.875*10-6mol/L，以下同。
3、划痕实验
取MDA-MB-231细胞种于6孔板中，每个孔种5×105个细胞，分别用0、7.5、15μM的Dip G处理，待细胞长满后，用枪头划痕，用PBS洗细胞3次，洗去划下的细胞，加入培养基继续培养，在0、6小时拍照。
4、细胞形态分析
取MDA-MB-231、SUM1315细胞种于96孔板中，每个孔种2×104个细胞，分别用0、7.5μM的Dip G处理72小时后用光学显微镜观察并拍照。
5、实时荧光定量PCR检测细胞分化
取MDA-MB-231细胞种于6孔板，用7.5μM的Dip G处理0、24、48、72、96小时后用PBS洗涤1次并收集细胞。肿瘤组织使用1mL的玻璃匀浆器将肿瘤组织磨碎。向细胞或肿瘤组织中加入1mL Trizol将细胞吹匀后转移至无核酶EP管内，然后加入200μL三氯甲烷剧烈摇晃20s，静置15min后12000rpm 4℃离心15min。接着吸取上清至新的EP管中，加入等体积异丙醇，来回颠倒数次，静置10min后12000rpm 4℃离心10min。弃去上清加入75％乙醇洗涤mRNA，静置15min后7500rpm 4℃离心5min。弃去乙醇并晾干后用DEPC水溶解mRNA沉淀。然后使用普通PCR仪将提取的RNA逆转录为cDNA，利用SYBR GREEN实时定量PCR检测体系将样品置于PCR仪中进行检测。最后根据各组Ct值进行归一化处理后按照2(-△△Ct)计算相对表达量。
6、BALB/c Nude小鼠TNBC乳腺原位接种模型的建立及给药
收集对数生长期的MDA-MB-231细胞，用预冷的PBS洗涤和重悬，使细胞浓度为1×108个/mL，每只BALB/c Nude小鼠(6-8周龄)右下方乳腺脂肪垫处原位注射20μL(2×106个细胞)的细胞悬液。接种10天后，肿瘤平均大小约为50mm3，将小鼠随机分为四组：对照组、DipG 10mg/kg组、Dip G 20mg/kg组、PTX 10mg/kg组，每组5-6只。腹腔注射给药，Dip G每天一次，PTX每7天一次，共持续14天。分组后每两天用游标卡尺测量肿瘤的大小。肿瘤体积计算公式：V＝0.5236×L1×(L2)2(L1是肿瘤的长度，L2是肿瘤的宽度)。第15天时脱颈处死小鼠，剥离肿瘤，称重并拍照。
7、统计分析
数据以mean±S.D.表示。各组间的比较采用Student’s t test和one-way ANOVA。所有的统计学分析是运用SPSS软件(版本10.0)。*代表P<0.05，**代表P<0.01,***代表P<0.005。P<0.05认为具有统计学意义。
二、Dip G的体外与体内药理试验结果及分析
如图2所示，细胞增殖实验结果表明Dip G(1.875-15μM)可以剂量且时间依赖性地抑制TNBC细胞株MDA-MB-231和SUM1315的增殖。
如图3所示，细胞划痕实验结果表明划线6小时后，经Dip G处理的MDA-MB-231细胞的划痕面积比未处理细胞大，表明细胞侵袭转移能力减弱。
如图4所示，显微镜观察结果表明MDA-MB-231和SUM1315细胞经Dip G(7.5μM)处理72小时后，细胞形态由典型的基底样型细胞(呈膨胀性，纺锤状)向管腔上皮型细胞(扁而细长)形态转变。
如图5所示，实时荧光定量PCR结果表明，TNBC细胞经Dip G(7.5μM)处理24-96小时后，基底样型乳腺癌的细胞表面标记分子CK44、CK5时间依赖性表达下调，而管腔上皮样型乳腺癌的细胞表面标记分子FOXA1、GATA3时间依赖性表达上调，证明Dip G可以促进TNBC细胞由基底样型向管腔上皮样型乳腺癌分化。
如图6和图7所示，在小鼠乳腺癌原位接种模型中，与对照组相比，7.5mg/kg和15mg/kg的Dip G均能够显著抑制肿瘤的生长(***P<0.005)，在治疗终点(给药后第15天)肿瘤的平均重量比对照组小2～3倍左右(***P<0.005)。且Dip G的效果明显优于10mg/kg的紫杉醇PTX对小鼠肿瘤生长的抑制作用。这些体内实验数据说明Dip G可以有效地抑制TNBC的进展。
采用白藜芦醇寡聚体Diptoindonesin G治疗三阴性乳腺癌。体外实验发现Dip G能够显著抑制人源TNBC细胞株的增殖和侵袭，并促进TNBC细胞的分化。Dip G处理后肿瘤组织中基底样型相关基因表达显著下调，而管腔上皮样相关基因表达显著上调。在BALB/cNude小鼠TNBC乳腺原位接种实验中发现给予Dip G可以显著抑制肿瘤的生长，肿瘤的平均重量也明显下降，且对肿瘤生长的抑制作用明显优于乳腺癌临床化疗药物紫杉醇。表明DipG可以通过促进TNBC细胞的分化，从而抑制其体内生长。
以上结果表明Dip G可以通过抑制TNBC细胞的增殖和侵袭，促进TNBC细胞的分化和转型，从而抑制TNBC的进展，可用于制备治疗TNBC的新型药物。
Claims (4)
1.白藜芦醇寡聚体Dip G在制备治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用。
2.一种治疗三阴性乳腺癌的药物，其特征在于：其有效成分包括白藜芦醇寡聚体DipG。
3.白藜芦醇寡聚体Dip G在制备促进三阴性乳腺癌细胞分化的药物中的应用。
4.一种促进三阴性乳腺癌细胞分化的药物，其特征在于：其有效成分包括白藜芦醇寡聚体Dip G。
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106822069A (zh) * | 2017-03-21 | 2017-06-13 | 南京大学 | 白藜芦醇寡聚体DipG在制备治疗急性髓性白血病的药物中的应用 |
| US10508092B2 (en) * | 2016-09-02 | 2019-12-17 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Synthesis of novel analogs of diptoindonesin G, compounds formed thereby, and pharmaceutical compositions containing them |
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2020
- 2020-04-03 CN CN202010257086.1A patent/CN111297839A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US10508092B2 (en) * | 2016-09-02 | 2019-12-17 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Synthesis of novel analogs of diptoindonesin G, compounds formed thereby, and pharmaceutical compositions containing them |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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| CN114404398A (zh) * | 2022-01-28 | 2022-04-29 | 武汉大学 | Ros抑制剂nac在制备用于治疗三阴性乳腺癌的药物中的应用 |
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