CN111297725A - 恢复皮肤屏障功能的护肤组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种恢复皮肤屏障功能的护肤组合物及其制备方法和应用，所述护肤组合物含有0.05‑10wt％的β葡聚糖和0.05‑10wt％的甘露糖蛋白，且β葡聚糖和甘露糖蛋白的总含量大于1wt％。本发明含有特定比例和含量的β葡聚糖和甘露糖蛋白组合物在恢复皮肤屏障功能，促进皮肤细胞更新，促进皮肤天然保湿因子的合成等方面有突出的效果，适于用做各类护肤产品。
Description
技术领域
本发明涉及护肤品组合物，具体涉及一种恢复皮肤屏障功能的组合物。
背景技术
皮肤由表皮和真皮构成，位于皮肤的最外侧的角质层是保护活体不受外部环境的物理、化学刺激及微生物等的影响，并适当调节水分的蒸发，从而保持活体的稳态性的皮肤屏障。为了保持健康的皮肤状态，角质层需要含一定量的水分，角质细胞(砖)需要与脂质成分和氨基酸、尿素、有机酸等天然保湿因子(泥沙)及皮脂形成均衡，从而形成固定的“砖墙”结构，形成皮肤的屏障。而如果这样的要素的均衡被打破或缺乏，则皮肤角质层的水分量下降，皮肤屏障功能发生障碍，导致皮肤干燥，容易发生感染和过敏。
为了提高皮肤屏障功能，目前所使用的皮肤外用剂的主要功能是通过涂抹该皮肤外用剂来保持皮肤表面的水分保持量，其中表现出保湿效果的成分被分为作为基本成分的湿润剂、密封剂和作为药剂成分的天然提取物、维生素以及神经酰胺。湿润剂作为水分较多的物质，根据成分本身所具有的含湿能力而表现出保湿效果，密封剂作为维持成分而在皮肤表面形成密封膜，从而防止水分的蒸发而在皮肤表现出保湿效果，或者利用维持成分剂不饱和脂肪酸的含湿能力而提供保湿效果。天然物和神经酰胺会进一步提高保湿效果，为了恢复角质层的皮肤屏障功能，目前使用各种来自天然物的保湿成分。此外，作为具备皮脂分泌促进作用的公知物质，还有胚芽菁华、泛酰巯基乙胺及脂肪酸酯等，但是因物质的性质而难以制造成剂型。近年来，由于生态环境恶化、各类工业添加剂滥用等原因，过敏人群逐年增加，皮肤过敏已成为影响人类健康的一大因素。敏感性皮肤是一种特殊的皮肤类型，指皮肤在受到外界刺激时，易出现红斑、丘疹、毛细血管扩张等客观症状伴随瘙痒、刺痛、灼烧、紧绷感等主观症状。
专利申请CN201610216262.0公开了一种修复皮肤屏障的组合物，该组合物按重量百分比由下述原料制成：透明质酸钠0.1％-1％，海藻糖0.5％-3％，保湿剂5％-25％和水71-94.4％。实验证明，修复皮肤屏障的组合物，能够有效缓解治疗经由激光美容、果酸换肤等美容手段后皮肤所致的红肿、热痛、褪皮、瘙痒等症状，吸收效果佳，制备方法简单，生产周期短，处方精简，成本低。
专利申请CN201610869725.3公开了一种植物组合物，所述组合物的原料组成及重量份数配比为：苦参5-10份，麦冬10-20份，三白草10-15份，荩草5-10份，仙人掌15-25份。所制得的植物组合物具有多糖、多酚、蛋白苦参碱和氧化苦参碱等化学成分，在抗敏、止痒方面起到协同促进作用，能减少水分散失，增强皮肤屏障功能，在一定程度上能提升皮肤的自我保护能力，降低敏感程度。
发明内容
目前现有技术中存在的技术问题是，现有产品使用常规或植物来源的保湿、抗过敏成分，这些成分用于皮肤补水或炎症修复时不能恢复皮肤自身免疫功能，因此难以修复皮肤屏障功能。
本发明人为解决上述技术问题发现，酵母来源的葡聚糖和甘露聚糖能够有效激活皮肤免疫细胞活性，从而达到恢复皮肤抵抗外界刺激的作用，同时能够快速补充皮肤水分和激活表皮细胞更新速度。含有特定比例的酵母β-葡聚糖和甘露糖蛋白在恢复皮肤屏障功能，促进皮肤细胞更新，促进皮肤天然保湿因子的合成等方面有突出的效果。
酵母β-葡聚糖和甘露糖蛋白来自于天然酿酒酵母细胞壁，是完全水溶的大分子多糖。酵母β-葡聚糖结构为以β-1,3糖苷键连接的葡萄糖主链和4～8个葡萄糖组成的支链，主链和支链以β-1,6糖苷键连接。多项研究证明，酵母β-葡聚糖具有显著的增强免疫力的作用，促进皮肤朗格汉斯细胞活性，提高皮肤抵抗力。酵母甘露糖蛋白结构是以α-1,6-甘露聚糖为主链，以α-1,2-甘露聚糖和α-1,3-甘露聚糖为支链的多糖，并通过氨基葡萄糖连接到多肽链上，其中多肽占甘露糖蛋白分子的10％左右。甘露糖蛋白具有很好的保湿功效，并能够促进皮肤免疫功能的提升。
以往技术文献还没有将酵母β-葡聚糖和甘露糖蛋白同时用于皮肤屏障功能恢复中。
具体来说，本发明提出了如下技术方案：
一方面，本发明提供了一种护肤组合物，所述组合物含有0.05-10wt％的β葡聚糖和0.05-10wt％的甘露糖蛋白，且β葡聚糖和甘露糖蛋白的总含量大于1wt％；优选含有0.1～5wt％的β葡聚糖和0.1～5wt％的甘露糖蛋白，进一步优选的是含有0.1～5wt％的β葡聚糖和2.5～5wt％的甘露糖蛋白。
优选的是，上述的护肤组合物，其中，所述组合物含有润湿剂，优选的是，所述润湿剂的含量范围为大于0到20wt％。
优选的是，上述的护肤组合物，其中，所述β葡聚糖为酵母β-葡聚糖和/或其水溶性衍生物，所述甘露糖蛋白为酵母甘露糖蛋白；优选的是，所述水溶性衍生物选自羧甲基酵母β-葡聚糖、硫酸酯化酵母β-葡聚糖和/或磷酸酯化酵母β-葡聚糖。
优选的是，上述的护肤组合物，其中，所述润湿剂选自一元醇、多元醇、透明质酸、壳聚糖和尿素中的一种或两种以上；优选的是，所述多元醇选自丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、2-甲基-2,4-戊二醇、丙三醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇和聚丙二醇中的一种或两种以上，进一步优选的是，所述多元醇选自丙三醇，丁二醇和丙二醇中的一种或两种以上。
优选的是，上述护肤组合物，其中，所述组合物可使HaCaT细胞的AQP3蛋白的增长率提高5％以上，优选6～9％；优选的是、所述组合物可使HaCaT细胞的Filaggrin蛋白表达的增长率提高2％以上，优选3％～4％。
另一方面，本发明提供了上述护肤组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将含有β葡聚糖和甘露糖蛋白的原料混合均匀，得到第一混合物；
(2)向第一混合物中加入水，继续混合，得到第二混合物；和
(3)灭菌。
优选的是，上述的制备方法，其中，步骤(3)中通过将第二混合物加热至90-100℃灭菌；优选保温30-120min。
本发明提供了上述方法制备的护肤组合物。
另一方面，本发明提供了一种护肤品或化妆品，其特征在于，所述护肤品或化妆品含有上述的护肤组合物。
优选的是，上述护肤品或化妆品，包括水剂型、凝胶型、乳液型或霜剂型护肤品或化妆品。
本发明还提供了上述护肤组合物或上述护肤品或化妆品在护肤领域的应用，优选在修复皮肤屏障功能领域的应用。
本发明的有益效果包括：
本发明提供的组合物能够有效恢复皮肤屏障功能，促进皮肤细胞更新，促进皮肤天然保湿因子的合成，加快皮肤“砖墙”结构的恢复。
下面通过各个具体实施方式，对本发明及其有益技术效果进行详细说明。
具体实施方式
如上所述，本发明的目的是为了提供一种恢复皮肤屏障功能的组合物，本发明优选的组合物包括水溶性酵母β-葡聚糖0.1％-5％，酵母甘露糖蛋白0.1％-5％，润湿剂(化妆品用多元醇，如甘油、丁二醇、丙二醇等)0％-20％，水70％-99％。本发明的组合物可使HaCaT细胞的AQP3蛋白相比于空白组的增长率提高5％以上，优选6～9％；可使HaCaT细胞的Filaggrin蛋白表达相比于空白组的增长率提高2％以上，优选3％～4％。
本发明的功能组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将含有β葡聚糖和甘露糖蛋白以及润湿剂的原料混合均匀，得到第一混合物；
(2)向第一混合物中加入水，继续混合，得到第二混合物；和
(3)加热第二混合物至90～100℃，并保温30～120min，以实现灭菌。
下面通过具体实施例来说明本发明的功能组合物，利用本发明的组合物进行皮肤测试的效果验证。
下面实施例中所用到各试剂和仪器来源如下，本发明没有记载的仪器或者试剂均为本领域普通技术人员可以常规确认的内容：
表1实施例所用试剂和仪器
实施例1-9
实施例1-9所用原料如下表2所示：
表2实施例所用原料
实施例1-9分别按照表2中的质量百分比配制物料，组合物的制备方法如下：
(1)将酵母β-葡聚糖或其衍生物、甘露糖蛋白与润湿剂混合均匀；
(2)将步骤(1)制备的混合物与水混合；
(3)将步骤(2)得到的混合物加热到90℃，保温30分钟，以灭菌；
(4)将步骤(3)获得的液体灌装。
酵母β-葡聚糖和甘露糖蛋白的用量太高时会难以溶解，导致液体无法流动，难以生产。因此其优选的用量为β-葡聚糖0.05～5％；甘露糖蛋白0.05～5％。
对比例1-2
对比例1-2所用原料如下表3所示，制备方法与实施例1相同：
表3
对比例3-4
对比例3-4所用原料如下表4所示，制备方法与实施例1相同：
表4
应用例1Western blotting检测AQP3、Filaggrin蛋白表达
将上述实施例1-9和对比例1-4组合物与HaCaT细胞(人永生化表皮细胞)共同作用24小时后(其中，组合物的用量为5wt％)，采用Western blotting法(蛋白质印迹法)测定实施例和对比例的组合物对HaCaT细胞的AQP3蛋白(水通道蛋白)、Filaggrin蛋白(丝聚合蛋白)表达相比于空白组(不加入组合物的HaCaT细胞)的增长率。其结果如表5所示。
Western blotting法检测AQP3、Filaggrin蛋白表达包括以下步骤：
1.总蛋白的提取
各组收集5×106-1×107细胞于4mL的EP管中，加入1mL蛋白裂解液RIPA(强)(含苯甲基磺酰氟(PMSF)，终浓度为1mmol/L)，于冰上进行匀浆，裂解30min，4℃，12000rpm离心15min，取上清分装于0.5mL的灭菌EP管中，-20℃保存。
2.BCA法(BicinchoninicAcid，)测定蛋白含量
使用碧云天蛋白浓度测定试剂盒：
1)按标准品0，1，2，4，8，16，20μL加入到96孔板上，不足20μL的孔以灭菌水补足体积到20μL。标准品蛋白浓度为5mg/ml。
2)各孔加入200μL BCA工作液，37℃反应30min。
3)用酶标仪测定其在570nm时的OD值，做标准曲线，并按相同方法测定样品的OD值，确定待测样品的浓度。
4)根据样品中的蛋白含量计算一定蛋白上样量50μg所需的样品体积。
3.聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western Blot印迹
1)电泳：使用10％的分离胶和5％浓缩胶，以Tris-甘氨酸为电泳缓冲体系；恒压60V，电泳30min后，调整电压90V，继续电泳约100min结束。
2)转膜：加入新鲜Tris-甘氨酸电泳转移液，制造海绵垫-滤纸-PAGE胶-硝酸纤维素膜-滤纸-海绵垫夹层，按电极方向装入转移槽，恒流300mA，转膜90min。
3)封闭：转膜结束后，将硝酸纤维素膜用Tris缓冲液(TBS)漂洗，浸入5％的脱脂奶粉封闭液中封闭，室温1h。
5)免疫反应：封闭完成，将膜转入含相应浓度抗体的TBST溶液中(β-actin为1:3000稀释，AQP3为1:500稀释，filaggrin为1:1000稀释)，一抗室温孵育2h，以TBST漂洗3次，每次10min。然后同样方法孵育二抗2h，以TBST漂洗3次，每次10min。
6)显定影：于暗房中，将荧光染料滴加于硝酸纤维素膜上，待反应1-2min有荧光出现时，将膜转移至X光片夹中，放入X光胶片，根据荧光强度选择不同的曝光时间，压片成像后显影、定影。
7)用Tanon T600凝胶成像分析系统对X光胶片上各免疫印迹条带的光密度进行分析。
表5
Filaggrin蛋白在皮肤更新过程中，能够转化为天然保湿因子，促进皮肤天然屏障功能的恢复。AQP3蛋白能够促进皮肤水分的恢复，加快皮肤水分的透皮吸收。通过表5可以看出，加入实施例和对比例的样品均对HaCaT细胞的AQP3蛋白(水通道蛋白)、Filaggrin蛋白(丝聚合蛋白)表达有所提高，而实施例-～实施例8的增长率明显高于对比例1～对比例4以及实施例9，说明特定比例的β葡聚糖和甘露糖蛋白的组合物能够显著提高AQP3蛋白(水通道蛋白)、Filaggrin蛋白(丝聚合蛋白)表达。
应用例2
采用上述实施例1-9和对比例1-4样品(原液)，按5wt％添加量添加到O/W膏霜(配方见下表)中。
表6测试样品组方
O/W膏霜的制备方法如下：
1、将A相搅拌并加热至85±2℃，维持30分钟；
2、冷却至45±2℃，将B相、C相加入A相中，并搅拌20-25分钟，调节pH值为4～6。
选择20名志愿者进行半脸试用，采用皮肤水分测试仪(Cornemeter CM825)和皮肤弹性测试仪MPA580(德国CK公司)测试使用2周后皮肤水分及弹性变化情况，实验结果见下表。
表7
| 样品 | 皮肤水分含量MMV值 | 皮肤弹性R2值 |
| 基质组 | 40.88±4.33 | 0.0236±0.0051 |
| 实施例1 | 48.56±3.21 | 0.0332±0.0089 |
| 实施例2 | 45.44±5.54 | 0.0343±0.0071 |
| 实施例3 | 46.66±7.43 | 0.0318±0.0061 |
| 实施例4 | 46.08±6.39 | 0.0304±0.0043 |
| 实施例5 | 52.98±7.33 | 0.0487±0.0172 |
| 实施例6 | 61.67±3.27 | 0.0657±0.0051 |
| 实施例7 | 44.88±4.73 | 0.0278±0.0049 |
| 实施例8 | 47.81±4.54 | 0.0247±0.0042 |
| 实施例9 | 30.09±5.32 | 0.0140±0.0065 |
| 对比例1 | 37.83±3.92 | 0.0218±0.0055 |
| 对比例2 | 39.16±4.32 | 0.0245±0.0066 |
| 对比例3 | 32.71±5.63 | 0.0247±0.0045 |
| 对比例4 | 33.81±6.82 | 0.0289±0.0082 |
其中皮肤水分含量MMV值单位为C.U.(Corneometer Units)。
R2＝Ua/Uf，回弹部分的弹塑性总量/拉伸部分的弹塑性总量，两个过程的弹塑性性能相比，越接近1越好。
其中：Uf＝Ue+Uv
Uf—皮肤最大拉伸量
Ue—弹性部分拉伸量
Uv—Uf-Ue为皮肤的粘弹性部分或称为塑性部分。
Ua—从取消负压到下一次连续测试皮肤表面再加负压时皮肤的恢复值。
通过表7可以看出，实施例1-～实施例8的对于皮肤水分含量和弹性的改善明显高于对比例1～对比例4以及实施例9，说明特定比例的β葡聚糖和甘露糖蛋白的组合物能够显著提高皮肤水分含量和弹性。
Claims (11)
1.一种护肤组合物，其特征在于，所述组合物含有0.05-10wt％的β葡聚糖和0.05-10wt％的甘露糖蛋白，且β葡聚糖和甘露糖蛋白的总含量大于1wt％；优选含有0.1～5wt％的β葡聚糖和0.1～5wt％的甘露糖蛋白，进一步优选的是含有0.1～5wt％的β葡聚糖和2.5～5wt％的甘露糖蛋白。
2.根据权利要求1所述的护肤组合物，其中，所述组合物含有润湿剂，优选的是，所述润湿剂的含量范围为大于0到20wt％。
3.根据权利要求1或2所述的护肤组合物，其中，所述β葡聚糖为酵母β-葡聚糖和/或其水溶性衍生物，所述甘露糖蛋白为酵母甘露糖蛋白；优选的是，所述水溶性衍生物选自羧甲基酵母β-葡聚糖、硫酸酯化酵母β-葡聚糖和/或磷酸酯化酵母β-葡聚糖。
4.根据权利要求2或3所述的护肤组合物，其中，所述润湿剂选自一元醇、多元醇、透明质酸、壳聚糖和尿素中的一种或两种以上；优选的是，所述多元醇选自丙二醇、丁二醇、戊二醇、己二醇、2-甲基-2,4-戊二醇、丙三醇、山梨醇、木糖醇、聚乙二醇和聚丙二醇中的一种或两种以上，进一步优选的是，所述多元醇选自丙三醇，丁二醇和丙二醇中的一种或两种以上。
5.权利要求1-4任一项所述护肤组合物，其中，所述组合物可使HaCaT细胞的AQP3蛋白增长率提高5％以上，优选6～9％；优选的是、所述组合物可使HaCaT细胞的Filaggrin蛋白表达增长率提高2％以上，优选3％～4％。
6.权利要求1-5任一项所述护肤组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将含有β葡聚糖和甘露糖蛋白的原料混合均匀，得到第一混合物；
(2)向第一混合物中加入水，继续混合，得到第二混合物；和
(3)灭菌。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其中，步骤(3)中通过将第二混合物加热至90-100℃灭菌；优选保温30-120min。
8.权利要求6或7制备的护肤组合物。
9.一种护肤品或化妆品，其特征在于，所述护肤品或化妆品含有权利要求1-5和8任一项所述的护肤组合物。
10.根据权利要求9所述护肤品或化妆品，包括水剂型、凝胶型、乳液型或霜剂型的护肤品或化妆品。
11.权利要求1-5任一项或权利要求8所述护肤组合物或权利要求9或10所述护肤品或化妆品在护肤领域的应用，优选在修复皮肤屏障功能领域的应用。
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