CN111228208A

CN111228208A - 一种包含共生菌组合发酵物的祛皱组合物、祛皱眼霜及其制备方法

Info

Publication number: CN111228208A
Application number: CN202010120533.9A
Authority: CN
Inventors: 龚德明; 温伟红; 莫霖霭; 徐洁琼
Original assignee: Guangzhou Liujin Scientific Research Co Ltd
Current assignee: Guangzhou Biotechnology Co.,Ltd.
Priority date: 2020-02-26
Filing date: 2020-02-26
Publication date: 2020-06-05
Anticipated expiration: 2040-02-26
Also published as: CN111228208B

Abstract

本发明提供一种包含共生菌组合发酵物的祛皱复合物、祛皱眼霜及其制备方法。所述祛皱复合物按重量份计包括0.01‑5份乙酰基六肽‑8、0.1‑10份寡肽‑4、0.1‑10份海茴香愈伤组织培养物滤液、0.1‑10份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、0.01‑5份茶叶提取物、0.1‑10份咖啡提取物、0.1‑10份视黄醇类化合物和1‑10份共生菌组合发酵物。所述祛皱复合物不仅能够促进细胞增殖再生，增加皮肤弹性，还能有效抗氧化、防止胶原分解。所述祛皱眼霜不仅能够去除眼部周围已经生成的动态纹、静态纹和干性纹，防止皱纹的产生，并提供持久的保湿力，使肌肤更强韧健康。

Description

一种包含共生菌组合发酵物的祛皱组合物、祛皱眼霜及其制备方法

技术领域

本发明属于化妆品制备领域，具体涉及一种祛皱组合物、祛皱眼霜及其制备方法，尤其涉及一种包含共生菌组合发酵物的祛皱组合物、祛皱眼霜及其制备方法。

背景技术

随着年龄的增加，人体神经内分泌功能减退，蛋白质合成率下降，真皮层的纤维细胞活性减退或丧失，胶原纤维减少或断裂，导致皮肤弹性减退，新陈代谢的能力也会慢慢减弱，皮肤老化，皱纹正是皮肤老化的外在表现。眼部皮肤是人体最薄的皮肤，细致而脆弱，同时又是活动最频繁的部位。眼部皮肤的水脂膜缺乏水份及油份分泌，加上平日眼眶肌肉经常收缩，胶原组织容易失去弹性，眼部肌肤因松弛渐形成眼纹，并且一旦长出就很难消除。

眼霜，护肤类化妆产品之一，用来保护眼睛周围比较薄的皮肤，具有滋润的功效，除了可以缓解黑眼圈、眼袋问题外，同时也兼具改善皱纹、细纹的功效。眼霜的种类很多，大致分为眼膜、眼胶、眼部啫喱、眼贴、眼霜等；从功能上分为滋润眼霜、紧实眼霜、保湿眼霜、抗老化眼霜、抗敏眼霜等。

CN105943475A公开了一种含有中药成分的抗皱眼霜及制备方法和应用，所述的抗皱眼霜包括甘油、甲基葡萄糖甙二十环氧乙烷、硬脂酸、硅质顺滑剂、透明质酸、异构糖、玫瑰精油、黄芪提取物、剌五加提取物、红景天提取物、绞股蓝提取物、紫蕊草提取物。此发明所提供的抗皱眼霜，清爽柔滑，温和无刺激，能长时间维持眼部肌肤的水分，促进眼部血液循环，有效眼部减少细纹的产生，但是无法修复已经产生的细纹。

CN108904414A公开了一种快速祛皱眼霜，所述眼霜包含如下原料：二丙二醇、26-环氧己烯甘油醚、透明质酸、馨鲜酮、丙烯酰二甲基牛磺酸铵/VP共聚物、羟丙基甲基纤维素、辅酶Q10、环五聚二甲基硅氧烷、BT-9268、异十六烷、聚二甲基硅氧烷/乙烯基聚二甲硅氧烷交联聚合物、丙烯酸钠/丙烯酰二甲基牛磺酸钠共聚物、奥婷敏、乙酰基六肽-8、SYN-COLL、BSASM、1,2-已二醇、SYN-AKE和香精。此发明所述的快速祛皱眼霜，不但对眼部祛皱的即时效果好，而且祛皱效果持续时间长、祛皱持续效果好，但是该眼霜刺激性较大。

目前，市场上眼霜产品有很多，但是普遍存在渗透性差、不易吸收，使用效果不明显等问题，而且抗皱成分单一，无法满足老化肌肤的全面需求，同时刺激性较大，添加量超过肌肤耐受力，导致皮肤敏感，得不偿失。

因此，本领域亟需开发一种温和不刺激、能够全面对抗动态纹、静态纹和干性纹等多种皱纹的眼霜，以满足市场需求。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种祛皱复合物、祛皱眼霜及制备方法。本发明提供的祛皱复合物能够快速识别皱纹细纹信号，修复皱纹处细胞，舒缓皱纹处肌肤，放松面部动态纹与静态纹，使皱纹变浅，同时本发明提供的祛皱眼霜除了能够快速祛皱，还能够提升肌肤含水量，并提供持久的保湿力。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种包含共生菌组合发酵物的祛皱复合物，所述祛皱复合物按重量份计包括0.01-5份乙酰基六肽-8、0.1-10份寡肽-4、0.1-10份海茴香愈伤组织培养物滤液、0.1-10份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、0.01-5份茶叶提取物、0.1-10份咖啡提取物、0.1-10份视黄醇类化合物和1-10份共生菌组合发酵物。

本发明提供的祛皱复合物中，乙酰基六肽-8和二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐能够抑制肌肉收缩、防止皱纹产生，寡肽-4和海茴香愈伤组织培养物滤液促进细胞增殖再生、增加皮肤弹性，茶叶提取物、咖啡提取物和视黄醇类化合物能够有效抗氧化、防止胶原分解，从预防皱纹产生、皱纹修复和高效抗氧化等多个方面改善皮肤皱纹问题，所述共生菌组合发酵物能够激发肌肤免疫力，强化环境应激耐受力，使肌肤更强韧健康，有效预防敏感反应，上述祛皱活性物质之间协同增效，阻断皱纹生长通路，既能防止皱纹的产生，也能去除已经生成的动态纹、静态纹和干性纹，从根源上解决皮肤皱纹问题。

本发明中，乙酰基六肽-8的重量份数为0.01-5份，例如可以是0.01份、0.05份、0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、3份、4份或5份等。

乙酰基六肽-8(Acetyl Hexapeptide-8)是一种神经递质抑制类胜肽，乙酰基六肽-8参与竞争SNAP-25在融泡复合体的位点，从而影响复合体的形成。当融泡复合体稍有不稳定，囊泡不能有效释放神经递质，从而致使肌肉收缩减弱，防止皱纹的形成，其抗皱活性高，副作用小。

本发明中，寡肽-4(OLIGOPEPTIDE-4)的重量份数为0.1-10份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、4份、5份、6份、8份或10份等。

寡肽-4是由2-6个氨基酸组成的小分子，能直接有效的被细胞的吸收利用，迅速补充胶原蛋白，从而起到很好的调理作用，如促进新陈代谢，刺激细胞再生，增殖、新生胶原，成效较慢，但安全性较高。

本发明中，海茴香(CRITHMUM MARITIMUM)愈伤组织培养物滤液的重量份数为0.1-10份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、4份、5份、6份、8份或10份等。

海茴香愈伤组织培养物滤液是一种植物海茴香干细胞提取物，具有调节皮肤色素沉着，保湿，抗氧化，调节皮肤角质生成，刺激皮肤愈合的功效，增加肌肤弹性。

本发明中，二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐的重量份数为0.1-10份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、4份、5份、6份、8份或10份等。

二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐又称类蛇毒血清蛋白样肽或SYN-AKE，作用于突触后膜，是肌肉烟碱乙酰胆碱受体(nmAChR)可逆转的拮抗剂，是一种模拟蛇毒毒素Waglerin I活性的小肽，临床试验表明蛇毒肽能够通过抑制肌肉收缩而减少皱纹的产生，具有优秀的祛皱性能。

本发明中，茶(CAMELLIA SINENSIS)叶提取物的重量份数为0.01-5份，例如可以是0.01份、0.05份、0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、3份、4份或5份等。

茶叶提取物具有茶多酚、儿茶素等多种功能成分，对半胱天冬蛋白酶有抑制作用，半胱天冬蛋白酶是细胞凋亡的核心分子，对它抑制意味着延长细胞的生命，结合茶叶提取物的抗氧性、对人体自由基的清除、对两种金属蛋白酶的抑制和对胶原酶的抑制，表明茶叶提取物是一种较为有效的化妆品防皱抗衰老添加剂。

本发明中，咖啡(COFFEA ARABICA)提取物的重量份数为0.1-10份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、4份、5份、6份、8份或10份等。

咖啡提取物含有高浓度的抗氧化能力很强的多酚，所以它对皮肤具有潜在的抗衰老的作用，可以改善由光照引起的皮肤老化，显著改善斑点、斑片状的皮肤变色、细纹和皱纹，以及皮肤的整体外观。

本发明中，视黄醇类化合物的重量份数为0.1-10份，例如可以是0.1份、0.5份、1份、1.5份、2份、4份、5份、6份、8份或10份等。

视黄醇类化合物具有调节表皮及角质层新陈代谢的功效，能有效减少细纹和皱纹，抚平粗糙皮肤，改善皮肤纹理，通过增加细胞更新，防止胶原分解，从而让肤质得到改善。

本发明中，共生菌组合发酵物的重量份数为1-10份，例如可以是1份、1.5份、2份、2.5份、4份、5份、6份、8份或10份等。

本发明中添加的共生菌组合发酵物具有优异的修复皮肤屏障、改善皮肤细纹、干纹等优点，同时还能舒缓、消炎，防止肌肤敏感，使肌肤更加健康。

优选地，所述共生菌组合发酵物的共生菌包括裂裥菌、嗜热栖热菌、酵母菌和乳酸杆菌的组合，所述共生菌组合发酵物的发酵原料包括大米、川谷籽、人参、巨藻和覆盆子。

优选地，所述共生菌中裂裥菌、嗜热栖热菌、酵母菌和乳酸杆菌的质量比为(8-18):(4-8):(2-6):(1-3)。

在本发明中，所述共生菌中裂裥菌、嗜热栖热菌、酵母菌和乳酸杆菌的质量比为(8-18):(4-8):(2-6):(1-3)，进一步优选12:3:2:1。

其中，所述8-18可以为9、10、11、12、13、14、15、16或17等。

所述4-8可以为4.2、4.5、4.8、5、5.2、5.5、5.8、6、6.2、6.5、6.8、7、7.2、7.5、7.7或7.9等。

所述2-6可以为2.2、2.5、2.8、3、3.2、3.5、3.8、4、4.2、4.5、4.8、5、5.2、5.5、5.7或5.9等。

所述1-3可以为1.2、1.4、1.6、1.8、2、2.2、2.4、2.6、2.8或2.9等。

优选地，所述发酵原料中大米、川谷籽、人参、巨藻和覆盆子的质量比为(40-60):(40-60):1:(20-30):(20-30)。

上述质量比中，两个40-60各自独立地可以为42、44、45、46、48、50、52、54、55、56、58等；两个20-30各自独立地可以为22、24、25、26、28、30等。

优选地，所述共生菌的质量和为所述发酵原料质量和的20-30％，例如可以是21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％或29％等。

本发明中，所述共生菌组合发酵物的制备方法包括如下步骤：

(1)将大米、川谷籽、人参、巨藻和覆盆子粉碎后与水混合，得到待发酵液，并进行灭菌处理；

(2)将步骤(1)得到的灭菌后的待发酵液接种酵母菌和乳酸杆菌进行第一次发酵，然后加入裂裥菌进行第二次发酵，最后加入嗜热栖热菌进行第三次发酵，得到所述共生菌组合发酵物。

本发明所述共生菌组合发酵物在制备过程中，考虑到不同菌种的不同生活环境，因此，发酵过程分步进行，首先使酵母菌和乳酸杆菌增菌发酵，然后加入裂裥菌进行发酵，酵母菌和乳酸杆菌对裂裥菌有诱导活化作用，可以增加裂裥菌素的产生，而产生的裂裥菌素又对酵母菌和乳酸杆菌有进一步促进作用，促进二者对原料的发酵，最后加入嗜热栖热菌，酵母菌对嗜热栖热菌同样具有诱导活化的作用，从而得到高活性的共生菌组合发酵物。

在本发明中，对酵母菌、乳酸杆菌、嗜热栖热菌和裂裥菌的培养使其数量和活性满足接种要求的方式并不做具体限定，现有技术中的常用的方式均可以采用。

作为本发明优选的技术方案，所述视黄醇类化合物包括视黄醇、视黄醇棕榈酸酯或视黄醇乙酸酯中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述祛皱复合物按重量份计包括0.1-2份乙酰基六肽-8、1-5份寡肽-4、1-8份海茴香愈伤组织培养物滤液、1-5份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、0.1-2份茶叶提取物、1-5份咖啡提取物、2-5份视黄醇棕榈酸酯和1-10份共生菌组合发酵物。

第二方面，本发明还提供一种祛皱眼霜，所述祛皱眼霜包括第一方面所述的祛皱复合物。

作为本发明优选的技术方案，所述祛皱眼霜按质量分数计包括：5-20％第一方面所述的祛皱复合物、0.3-2％糖类同分异构体、1-2％软毛松藻提取物、0.02-0.3％增稠剂和0.01-0.1％螯合剂，余量为玫瑰花水。

本发明提供的祛皱眼霜，添加第一方面所述的祛皱复合物，还添加糖类同分异构体与软毛松藻提取物作为保湿活性物，即时提升肌肤含水量，并提供持久的保湿力，能够使干性纹淡化、隐匿，获得及时的祛皱效果。

本发明中，所述祛皱复合物的质量分数为5-20％，例如可以是5％、6％、8％、10％、12％、14％、15％、16％、18％或20％等。

所述糖类同分异构体的质量分数为0.3-2％，例如可以是0.3％、0.5％、0.8％、1％、1.2％、1.5％、1.6％、1.8％或2％等。

所述软毛松藻提取物的质量分数为1-2％，例如可以是1％、1.2％、1.4％、1.5％、1.6％、1.8％或2％等。

所述增稠剂的质量分数为0.02-0.3％，例如可以是0.02％、0.05％、0.1％、0.12％、0.15％、0.2％、0.22％、0.25％或0.3％等。

所述螯合剂的质量分数为0.01-0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.04％、0.05％、0.06％、0.08％或0.1％等。

作为本发明优选的技术方案，所述祛皱眼霜还包括0.05-3％(例如可以是0.05％、0.1％、0.2％、0.5％、1％、1.5％、2％、2.5％或3％等)的植物和/或真菌提取物。

优选地，所述植物提取物包括苦参根提取物、胀果甘草根提取物或黄芩根提取物中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述真菌提取物包括银耳提取物和/或白松露菌提取物。

作为本发明优选的技术方案，所述增稠剂包括黄原胶。

优选地，所述螯合剂包括乙二胺四乙酸二钠。

优选地，所述祛皱眼霜还包括3-18％(例如可以是3％、5％、8％、10％、12％、14％、15％、16％或18％等)的保湿剂。

优选地，所述保湿剂包括肌醇、甘油聚醚-26、透明质酸钠、1,2-己二醇、丁二醇或吡咯烷酮羧酸钠中的任意一种或至少两种的组合。

优选地，所述祛皱眼霜中还包括0.4-0.6％(例如可以是0.4％、0.42％、0.44％、0.48％、0.5％、0.52％、0.54％、0.58％或0.6％等)的抗氧化剂。

优选地，所述抗氧化剂包括对羟基苯乙酮。

作为本发明优选的技术方案，所述祛皱眼霜按质量分数计包括：5-20％第一方面所述的祛皱复合物、0.3-2％糖类同分异构体、1-2％软毛松藻提取物、0.01-0.5％苦参根提取物、0.01-0.5％胀果甘草根提取物、0.01-0.5％黄芩根提取物、0.01-0.2％银耳提取物、0.01-1％白松露菌提取物、0.5-2％肌醇、0.01-0.2％甘油聚醚-26、0.01-2％透明质酸钠、0.4-0.6％1,2-己二醇、2-10％丁二醇、0.3-2％吡咯烷酮羧酸钠、0.02-0.3％增稠剂、0.01-0.1％螯合剂和0.4-0.6％抗氧化剂，余量为玫瑰花水。

第三方面，本发明还提供一种如第二方面所述的祛皱眼霜的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将配方量的乙酰基六肽-8、寡肽-4、海茴香愈伤组织培养物滤液、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、茶叶提取物、咖啡提取物、视黄醇类化合物和共生菌组合发酵物混合搅拌，得到第一方面所述的祛皱复合物；

(2)将步骤(1)所得的祛皱复合物、配方量的糖类同分异构体、软毛松藻提取物和玫瑰花水混合搅拌得到混合液；

(3)将配方量的增稠剂和螯合剂混合，而后与步骤(2)所得的混合液混合、搅拌并过滤得到所述祛皱眼霜。

作为本发明优选的技术方案，步骤(1)所述混合搅拌的温度为40-45℃，例如可以是40℃、41℃、42℃、43℃、44℃或45℃等；时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min或10min等。

优选地，步骤(2)所述混合搅拌的温度为40-45℃，例如可以是40℃、41℃、42℃、43℃、44℃或45℃等；时间为10-15min，例如可以是10min、11min、12min、13min、14min或15min等。

优选地，步骤(3)所述增稠剂和螯合剂混合的温度为80-85℃，例如可以是80℃、81℃、82℃、83℃、84℃或85℃等；时间为5-10min，例如可以是5min、6min、7min、8min、9min或10min等。

优选地，步骤(3)所述搅拌的温度为40-45℃，例如可以是40℃、41℃、42℃、43℃、44℃或45℃等；时间为10-20min，例如可以是10min、12min、14min、16min、18min或20min等。

作为本发明优选的技术方案，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将配方量的乙酰基六肽-8、寡肽-4、海茴香愈伤组织培养物滤液、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、茶叶提取物、咖啡提取物、视黄醇类化合物和共生菌组合发酵物在40-45℃下混合搅拌5-10min，得到第一方面所述的祛皱复合物；

(2)将步骤(1)所得的祛皱复合物、配方量的糖类同分异构体、软毛松藻提取物、植物和/或真菌提取物、保湿剂和玫瑰花水在40-45℃下混合搅拌10-15min得到混合液；

(3)将配方量的增稠剂、螯合剂和抗氧化剂在80-85℃混合5-10min，而后与步骤(2)所得的混合液在40-45℃下混合搅拌10-20min，冷却至35-38℃后过100-200目筛得到所述祛皱眼霜。

本发明所述的数值范围不仅包括上述例举的点值，还包括没有例举出的上述数值范围之间的任意的点值，限于篇幅及出于简明的考虑，本发明不再穷尽列举所述范围包括的具体点值。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)本发明提供的祛皱复合物通过多种祛皱活性物质之间的协同作用，能够抑制肌肉收缩、防止皱纹产生，促进细胞增殖再生、增加皮肤弹性，同时该复合物还能有效抗氧化、防止胶原分解，因此本发明提供的祛皱复合物既能防止皱纹的产生，也能去除已经生成的动态纹、静态纹和干性纹，从根源上解决皮肤皱纹问题；

(2)本发明提供的祛皱眼霜中添加祛皱复合物和糖类同分异构体等多种活性物质，其保湿率为70.2-80.7％，经皮失水变化率较小，为12.9-16.7％，使用4h后皮肤水分含水量39.1-46.1％，说明使用后皮肤能够保持水润，有助于干性纹淡化；同时所述祛皱眼霜具有较好的氧化自由基清除能力，清除率为60.4-67.4％，优秀的抗氧化能力能够减少静态纹的产生；所述祛皱眼霜还能够促进弹性蛋白的表达，弹性蛋白的表达量为4.0-5.3，增加皮肤弹性，使皱纹变浅、变短，改善肌肤已形成的皱纹，全方面解决皮肤皱纹问题。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

以下实施例中，所述共生菌组合发酵物可以通过如下方法进行制备：

(1)将33.11g大米、33.11g川谷籽、0.66g人参、16.56g巨藻和16.56g覆盆子粉碎，然后与180g水混合，用80目滤布过滤，得到待发酵液，并在100℃下加热20min进行灭菌处理；

(2)将灭菌后的待发酵液利用精氨酸调节pH为4.5，置于种子罐中，接种4g酵母菌和2g乳酸杆菌，在5m³/h/50L的通气量，以150rpm搅拌转动下，30℃培养22h；

(3)然后加入精氨酸调节pH为6.5，加入12g裂裥菌，在5m³/h/50L的通气量，以150rpm搅拌转动下，30℃培养22h；

(4)最后利用精氨酸调节pH为8.0，加入6g嗜热栖热菌，在5m³/h/50L的通气量，以150rpm搅拌转动，35℃培养22h后升温至58℃培养18h，得到初步产物；

(5)将初步产物进行过滤，取清液，在其中加入活性炭搅拌10min，进行吸附纯化处理，然后利用过滤的方式再次取清液，灭菌，得到共生菌组合发酵物。

其中，大米为东北大米，川谷籽购自贵州，人参为长白山白参，巨藻购自山东长岛县，覆盆子购自安徽。酵母菌选自啤酒酵母，乳酸杆菌选自嗜热乳酸杆菌。

实施例1

本实施例提供一种祛皱复合物，所述祛皱复合物按重量份计包括：

1份乙酰基六肽-8、2份寡肽-4、4份海茴香愈伤组织培养物滤液、3份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、1份茶叶提取物、3份咖啡提取物、4份视黄醇棕榈酸酯和5份共生菌组合发酵物。

实施例2

2份乙酰基六肽-8、5份寡肽-4、8份海茴香愈伤组织培养物滤液、5份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、2份茶叶提取物、5份咖啡提取物、5份视黄醇棕榈酸酯和8份共生菌组合发酵物。

实施例3

0.1份乙酰基六肽-8、1份寡肽-4、1份海茴香愈伤组织培养物滤液、1份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、0.1份茶叶提取物、1份咖啡提取物、2视黄醇棕榈酸酯和2份共生菌组合发酵物。

实施例4

0.01份乙酰基六肽-8、0.1份寡肽-4、0.1份海茴香愈伤组织培养物滤液、0.1份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、5份茶叶提取物、10份咖啡提取物、10视黄醇棕榈酸酯和10份共生菌组合发酵物。

实施例5

5份乙酰基六肽-8、10份寡肽-4、10份海茴香愈伤组织培养物滤液、10份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、0.01份茶叶提取物、0.1份咖啡提取物、0.1份视黄醇棕榈酸酯和1份共生菌组合发酵物。

实施例6

本实施例提供一种祛皱复合物，与实施例1的区别仅在于所述祛皱复合物中共生菌组合发酵物的重量份增加为10份。

实施例7

本实施例提供一种祛皱复合物，与实施例1的区别仅在于所述祛皱复合物中共生菌组合发酵物的重量份减少为1份。

对比例1～8

为单一的祛皱活性物质，分别为：乙酰基六肽-8(对比例1)、寡肽-4(对比例2)、海茴香愈伤组织培养物滤液(对比例3)、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐(对比例4)、茶叶提取物(对比例5)、咖啡提取物(对比例6)、视黄醇棕榈酸酯(对比例7)、共生菌组合发酵物(对比例8)。

对比例9～16

为七种祛皱活性物质进行复配的祛皱组合物，按重量份计各对比例的配方如下表1所示：

表1

应用实施例1～7

提供一种祛皱眼霜，所述眼霜的配方按质量份数计包括如下组分：

其中，应用实施例1～7中的祛皱复合物分别为实施例1～7提供的祛皱复合物。制备方法为：

(1)将配方量的乙酰基六肽-8、寡肽-4、海茴香愈伤组织培养物滤液、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、茶叶提取物、咖啡提取物、视黄醇棕榈酸酯和共生菌组合发酵物在40℃下混合搅拌10min，得到祛皱复合物；

(2)将步骤(1)所得的祛皱复合物、配方量的糖类同分异构体、软毛松藻提取物、植物提取物、真菌提取物、保湿剂和玫瑰花水在40℃下混合搅拌15min得到混合液；

(3)将配方量的增稠剂、螯合剂和抗氧化剂在80℃混合5-10min，而后与步骤(2)所得的混合液在40℃下混合搅拌10min，冷却至37℃后过200目筛得到所述祛皱眼霜。

应用实施例8

提供一种祛皱眼霜，与应用对比例1相比区别仅在于，所述眼霜中祛皱复合物的含量增加为20％，其余组分及含量同应用实施例1。

应用实施例9

提供一种祛皱眼霜，与应用对比例1相比区别仅在于，所述眼霜中祛皱复合物的含量减少为5％，其余组分及含量同应用实施例1。

应用对比例1～16

与应用对比例1相比，将其中的祛皱复合物分别替换为对比例1～16提供的祛皱活性物质或祛皱组合物，其余组分及含量同应用实施例1。

应用对比例17

与应用对比例1相比，不含祛皱复合物，其余组分及含量同应用实施例1。

性能测试1

对应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的祛皱眼霜进行安全性能测试，方法如下：

(1)红细胞溶血实验

红细胞悬液的制备：选择健康家兔，心脏取血9mL，加入2％的草酸钾溶液1mL，离心，弃去上清液，用20mmol/L的PBS溶液将沉淀物稀释至20mL，4℃保存备用。选择样品用PBS溶液稀释至不同浓度，每个样品设置5个浓度梯度。取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液(控制样品终浓度分别为5、10、20、50、100mg/mL)，以蒸馏水作为全溶血对照，PBS溶液作为阴性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计测试其在560nm处的吸光度(A₅₆₀)，按如下公式计算溶血率；

绘制溶血率-样品浓度标准曲线，计算50％红细胞发生溶血时的样品浓度(HD₅₀)。

(2)蛋白变性实验：

将样品用PBS溶液稀释至10g/L，取10mL待测样品的稀释液，加入200μL上述红细胞悬液，以蒸馏水作为空白对照，1mg/mL十二烷基硫酸钠(SDS)溶液作为阳性对照，轻轻混匀，37℃下孵育30min，在2000r/min的转速下离心10min，取上清液，用分光光度计分别测试其在540nm和575nm处的吸光度A₅₄₀和A₅₇₅，按照如下公式计算蛋白变性指数(DI)；

其中，R₁＝空白对照组A₅₇₅/空白对照组A₅₄₀，R₂＝实验组A₅₇₅/实验组A₅₄₀，R₃＝阳性对照组A₅₇₅/阳性对照组A₅₄₀。

根据L/D值对待测样品的刺激性进行评价，其中L/D值为HD₅₀/DI，红细胞溶血实验刺激性分级标准如下表2所示：

表2

L/D	分级
		>100	无刺激性
10<L/D≤100	微刺激性
		1<L/D≤10	轻度刺激性
0.1<L/D≤1	中度刺激性

上述红细胞溶血实验和蛋白变性实验的测试结果如下表3所示：

表3

由安全性能测试可知，本发明提供的祛皱眼霜的L/D均大于100，刺激性分级为无刺激性，说明本发明提供的祛皱眼霜具有温和无刺激的特点，同时由应用实施例1、应用对比例7和应用对比例14-15可知，视黄醇棕榈酸酯的添加量会影响产品的刺激性，其添加量越高，刺激性越强；由应用实施例1、6-9比较可知，共生菌组合发酵物在祛皱眼霜中的含量越高，产品的刺激性越小，产品越温和安全。

性能测试2

对应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的祛皱眼霜进行保湿性能测试，方法如下：

(1)体外称重法保湿性能测试

称取样品0.2g，分别均匀涂敷在贴有微孔通气胶带的5cm×5cm的玻璃板上，并将玻璃板放入恒温恒湿的干燥器中，分别称量玻璃板放置4h后的质量，计算其保湿率。保湿率计算公式为：

保湿率/％＝(M₂-M₀)/(M₁-M₀)×100％。

其中，M₀为玻璃板板质量/g，M₁为加样后玻璃板质量/g，M₂为干燥器中放置若干小时后玻璃板质量/g。

(2)经皮失水变化率

选取250名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成25组，每组5名男性、5名女性，分别使用应用实施例1～9和应用对比例1～17(应用对比例7由于刺激性较强，因此无法进行人体实验)提供的祛皱眼霜。测试仪器为德国CK公司的TewameterTM300，测试外部环境：室温25℃，湿度60％。

在使用前皮肤组合物前，以及连续使用4天后，分别测试各位受试者的经皮失水变化率，每个数据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位。

(3)水分保持率

选取250名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成25组，每组5名男性、5名女性，分别应用实施例1～9和应用对比例1～17(应用对比例7由于刺激性较强，因此无法进行人体实验)提供的祛皱眼霜。仪器为德国Courage+Khazaka electronic型号：Derma Unit SSC，测试温度25℃，湿度60％。

在使用前以及使用4h后分别测试各位受试者的皮肤水分含水量，每个数据测试三次，取平均值后，计算每组平均值，保留小数点后一位，测试结果如表4所示。

表4

由上表数据可知，本发明提供的祛皱眼霜保湿效果较好，其保湿率为70.2-80.7％，经皮失水变化率较小，为12.9-16.7％，使用4h后皮肤水分含水量39.1-46.1％，说明使用后皮肤能够保持水润，有助于干性纹淡化，且由应用实施例1、6和8比较可知，随着共生菌组合发酵物含量的提高，祛皱眼霜的保湿锁水能力也会进一步提高。

性能测试3

对应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的祛皱眼霜的抗氧化能力进行测定，具体方法如下：

对超氧阴离子自由基清除能力的测定

取0.05mol/L pH为8.2的Tris-HCl缓冲液4.5mL，于25℃水浴锅中预热20min，再分别加入1mL实验样品，再加入0.4mL 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后，于25℃水浴中反应5min，加入8mol/L的HCl 1.0mL终止反应。

以Tris-HCl缓冲液作参比，在299nm处测吸光度值。空白对照用1mL蒸馏水来替代样品，计算得到清除率(D)。

清除率公式(％)D＝[1-(A₂/A₁)]×100％；式中A₁为空白对照的吸光度值；A₂为样品的吸光度值，实验结果如表5所示。

表5

由表5可以看出，本发明提供的祛皱眼霜具有较好的自由基清除能力，清除率为60.4-67.4％，优秀的抗氧化能力能够减少静态纹的产生，且清除能力明显优于单独使用祛皱活性物质的祛皱眼霜，相比于缺少某一种祛皱活性物质复配使用的效果也较好，且应用实施例6和7、应用实施例8和9比较可知，共生菌组合发酵物能够明显提高所述眼霜的自由基清除能力。

性能测试4

对应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的祛皱眼霜进行性能测试，方法如下：

(1)促进弹性蛋白生成实验

将人成纤维细胞按照每孔20000枚的密度接种在96孔板上，加入培养基，在37℃培养箱中培养24小时，待细胞贴壁后，更换新的培养基，并分别加入应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的祛皱眼霜(控制样品终浓度为50mg/mL)，以20mmol/L的PBS溶液作为空白对照，然后在37℃培养箱中培养2天。

培养结束后，利用细胞裂解液将细胞洗脱下来，并超声破碎。采用Biocolor弹性蛋白检测试剂盒对弹性蛋白的含量进行检测：用弹性蛋白沉淀剂处理样本，使弹性蛋白沉淀下来，离心分离，去除上清液，向沉淀中加入染料和反应液，反应形成弹性蛋白-染料复合物，离心分离并用PBS溶液洗涤三次，去除未结合的染料，添加染料释放剂，使弹性蛋白-染料复合物中的染料释放出来，采用分光光度计测定样品在513nm处的吸光度，根据吸光度-染料浓度标准曲线计算弹性蛋白的表达量(以空白组的表达量为1)。

(2)抗皱效果实验

选取250名皮肤健康的18-40岁的志愿者，男女比例各占一半，随机分成25组，每组5名男性、5名女性，采用硅树脂获取受试者眼周测试部位的皱纹印记，然后分别在受试者一边眼周应用实施例1～9和应用对比例1～17提供的祛皱眼霜(应用对比例7由于刺激性较强，因此无法进行人体实验)，另一边涂抹安慰剂膏霜，每天2次，连续30天。分别获取处理15天和30天后的受试者眼周测试部位的皱纹印记，用共聚焦显微镜测试皱纹深度。计算处理15天和30天后的皱纹深度减小的百分比，结果如下表6所示。

表6

由上表数据可知，本发明提供的祛皱眼霜能够促进弹性蛋白的表达，弹性蛋白的表达量为4.0-5.3，所述祛皱眼霜通过刺激细胞生长，增加皮肤弹性，使皱纹变浅、变短，改善肌肤状态；由应用实施例1、6和8比较可知，共生菌组合发酵物能够进一步增加弹性蛋白的表达量，由应用对比例1～8可知，单一的祛皱活性物质虽然能够增加弹性蛋白量的表达量，但是效果较差，弹性蛋白的表达量较少。使用本发明提供的祛皱眼霜30天后，受试者的皱纹减小值为19.4-22.0％，说明本发明提供的眼霜祛皱效果好，皱纹减小值的变化量较大，说明使用时间越长，祛皱效果越明显。

综上所述，本发明提供的祛皱组合物和祛皱眼霜温和安全，能够有效对抗皮肤皱纹，通过提高皮肤抗氧化能力减缓皮肤老化的过程，减少静态纹的产生，通过促进皮肤弹性蛋白的表达和细胞的增殖生长改善皮肤的动态纹，通过提高皮肤含水量和保湿力改善皮肤尤其是眼周皮肤的干性纹，同时，添加共生菌组合发酵物进一步提高眼霜的保湿能力和祛皱能力。

申请人声明，以上所述仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，所属技术领域的技术人员应该明了，任何属于本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims

1.一种包含共生菌组合发酵物的祛皱复合物，其特征在于，所述祛皱复合物按重量份计包括0.01-5份乙酰基六肽-8、0.1-10份寡肽-4、0.1-10份海茴香愈伤组织培养物滤液、0.1-10份二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、0.01-5份茶叶提取物、0.1-10份咖啡提取物、0.1-10份视黄醇类化合物和1-10份共生菌组合发酵物。

2.根据权利要求1所述的祛皱复合物，其特征在于，所述共生菌组合发酵物的共生菌包括裂裥菌、嗜热栖热菌、酵母菌和乳酸杆菌的组合，所述共生菌组合发酵物的发酵原料包括大米、川谷籽、人参、巨藻和覆盆子；

优选地，所述共生菌中裂裥菌、嗜热栖热菌、酵母菌和乳酸杆菌的质量比为(8-18):(4-8):(2-6):(1-3)；

优选地，所述发酵原料中大米、川谷籽、人参、巨藻和覆盆子的质量比为(40-60):(40-60):1:(20-30):(20-30)；

优选地，所述共生菌的质量和为所述发酵原料质量和的20-30％。

3.根据权利要求1或2所述的祛皱复合物，其特征在于，所述视黄醇类化合物包括视黄醇、视黄醇棕榈酸酯或视黄醇乙酸酯中的任意一种或至少两种的组合；

4.一种祛皱眼霜，其特征在于，所述祛皱眼霜包括权利要求1-3任一项所述的祛皱复合物。

5.根据权利要求4所述的祛皱眼霜，其特征在于，所述祛皱眼霜按质量分数计包括：

5-20％权利要求1-3任一项所述的祛皱复合物、0.3-2％糖类同分异构体、1-2％软毛松藻提取物、0.02-0.3％增稠剂和0.01-0.1％螯合剂，余量为玫瑰花水；

优选地，所述祛皱眼霜还包括0.05-3％的植物和/或真菌提取物；

优选地，所述植物提取物包括苦参根提取物、胀果甘草根提取物或黄芩根提取物中的任意一种或至少两种的组合；

6.根据权利要求5所述的祛皱眼霜，其特征在于，所述增稠剂包括黄原胶；

优选地，所述螯合剂包括乙二胺四乙酸二钠；

优选地，所述祛皱眼霜还包括3-18％的保湿剂；

优选地，所述保湿剂包括肌醇、甘油聚醚-26、透明质酸钠、1,2-己二醇、丁二醇或吡咯烷酮羧酸钠中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述祛皱眼霜中还包括0.4-0.6％的抗氧化剂；

优选地，所述抗氧化剂包括对羟基苯乙酮。

7.根据权利要求5或6所述的祛皱眼霜，其特征在于，所述祛皱眼霜按质量分数计包括：

5-20％权利要求1-3任一项所述的祛皱复合物、0.3-2％糖类同分异构体、1-2％软毛松藻提取物、0.01-0.5％苦参根提取物、0.01-0.5％胀果甘草根提取物、0.01-0.5％黄芩根提取物、0.01-0.2％银耳提取物、0.01-1％白松露菌提取物、0.5-2％肌醇、0.01-0.2％甘油聚醚-26、0.01-2％透明质酸钠、0.4-0.6％1,2-己二醇、2-10％丁二醇、0.3-2％吡咯烷酮羧酸钠、0.02-0.3％增稠剂、0.01-0.1％螯合剂和0.4-0.6％抗氧化剂，余量为玫瑰花水。

8.一种如权利要求5-7任一项所述的祛皱眼霜的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将配方量的乙酰基六肽-8、寡肽-4、海茴香愈伤组织培养物滤液、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、茶叶提取物、咖啡提取物、视黄醇类化合物和共生菌组合发酵物混合搅拌，得到权利要求1-3任一项所述的祛皱复合物；

(2)将步骤(1)所得的祛皱复合物、配方量的糖类同分异构体、软毛松藻提取物和玫瑰花水混合搅拌，得到混合液；

(3)将配方量的增稠剂和螯合剂混合，而后与步骤(2)所得的混合液混合、搅拌并过滤，得到所述祛皱眼霜。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述混合搅拌的温度为40-45℃，时间为5-10min；

优选地，步骤(2)所述混合搅拌的温度为40-45℃，时间为10-15min；

优选地，步骤(3)所述增稠剂和螯合剂混合的温度为80-85℃，时间为5-10min；

优选地，步骤(3)所述搅拌的温度均为40-45℃，时间为10-20min。

10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：

(1)将配方量的乙酰基六肽-8、寡肽-4、海茴香愈伤组织培养物滤液、二肽二氨基丁酰苄基酰胺二乙酸盐、茶叶提取物、咖啡提取物、视黄醇类化合物和共生菌组合发酵物在40-45℃下混合搅拌5-10min，得到权利要求1-3任一项所述的祛皱复合物；

(3)将配方量的增稠剂、螯合剂和抗氧化剂在80-85℃混合5-10min，而后与步骤(2)所得的混合液在40-45℃下混合，搅拌10-20min，冷却至35-38℃后过100-200目筛得到所述祛皱眼霜。