CN111296408A - 一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂及其应用，属于海洋生物防霉防腐技术领域。该复合防霉防腐剂主要由以下浓度含量的组分组成：野生蓝莓提取物100‑10000PPM、卡卡杜李提取物100‑10000PPM、麝香草酚100‑10000PPM、余量为水。该复合防霉防腐剂成分为天然植物提取物，环保绿色，无味无色低毒，有效减少挥发性气味对人体的损害，对人体和环境危害很小，同时制作容易，方法简便，对标本具有良好的保存、固定、杀菌、防霉防腐作用，具有极大的推广价值，是福尔马林保存液的理想替代产品。

Description

一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂及其应用

技术领域

本发明涉及海洋生物防霉防腐技术领域，具体涉及一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂及其应用。

背景技术

海洋生物种类繁多，不同类型的生物标本制作和保藏的方法也不尽相同。随着海洋生物研究的进一步深入，海洋生物标本的收集和保存显得意义重大，同时海洋生物标本作为生物学科的重要素材，是教学的重要模型，也是科学传播的重要载体。因此，将海洋生物制作成标本具有重要的教学和科研意义。

标本易因霉菌的危害而受损，导致使用寿命缩短，从而造成经济损失，因此防霉防腐是标本保存的关键一环，直接决定标本的保存寿命。标本霉菌主要包括烟曲霉、棒曲霉、黑曲霉等22个菌株，目前的标本消杀霉菌方法主要为化学药品法，而大多防腐配方中含有毒化学品，易对工作人员及参观者的身体健康造成伤害，并且现存方法难以实现完全控制标本霉菌的效果。因此市场急需一种安全无毒、无二次污染，安全环保且防霉防腐效果优良的标本防霉防腐剂

天然植物提取物因具有绿色、安全、高效无残留等特点而成为近些年研究开发的热点。目前研究的具有抗菌作用的植物提取物包括蒲公英提取物、蜜蜂花提取物、金银花提取物、厚朴提取物、白柳皮提取物、紫锥菊提取物、洋葱提取物等。这些植物提取的抗菌机制主要通过以下方式实现：1)破坏、降解细胞壁；2)破坏细胞质膜；3)破坏细胞膜蛋白质结构；4)使细胞内容物泄露等。由于不同种类的植物提取物活性成分不同，其相应的抗菌机制也不同，同时一种抗菌机制的反应可能受到另一种机制中反应物或生成物的影响。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂，该防霉防腐剂通过以野生蓝莓提取物、卡卡杜李提取物、麝香草酚为主要组份制备合成一种新型抑霉防腐材料，应用于标本的保存处理，高效、环保，具有很好的推广应用价值。

野生蓝莓提取物：蓝莓又称越橘、蓝浆果，是一种极耐寒的野生植物。其果实不仅肉质细腻、酸甜适中，而且营养丰富，因此被誉为“浆果之王”。蓝莓果实中富含花青素与酚类物质，具有提高机体免疫力等多种生理活性功能。研究发现蓝莓提取物对沙门氏菌、大肠杆菌、单增李斯特菌、金黄色葡萄球菌、酿酒酵母、枯草杆菌等多种细菌均有抑制作用，主要是通过破坏菌体细胞膜的完整性，从而影响其生长代谢功能。

卡卡杜李提取物：卡卡杜李，也称为雄山羊李，是来自使君子科的有花植物，其果实富含维生素C。卡卡杜李提取物具有抑制癌的抗氧化物性质，具备抗菌、抗病毒和抗真菌活性，同时亦可抗炎、抗肿瘤、抗诱变和抗支气管扩张的活性，多用于皮肤护理领域。

麝香草酚：麝香草酚，又称百里酚、百里香酚，其杀菌作用比苯酚强，且毒性低，能促进气管纤毛运动，有利于气管粘液的分泌，易起祛痰作用，再加有杀菌作用，故可用于治疗气管炎、百日咳等。

本发明提供的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂创新性地将野生蓝莓提取物、卡卡杜李提取物、麝香草酚等天然植物提取物组合起来，制备具安全无毒、无二次污染，安全环保且防霉防腐效果优良的标本环保型复合防霉防腐剂，实现对传统保存液的理想替代。

为达到上述目的，本发明第一方面提供一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂，主要由以下浓度含量的组分组成：野生蓝莓提取物100-10000PPM、卡卡杜李提取物 100-10000PPM、麝香草酚100-10000PPM、余量为水。

本发明第二方面提供一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的制备方法，包括以下步骤：按照所述本发明第一方面所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的组成称取各组分，搅拌混合均匀制备所得。

本发明第三方面提供一种生物标本的制备方法，包括以下步骤：

1)将待浸制的生物样品浸泡于40-50％乙醇1-3天；

2)将步骤1)所得样品浸泡于75-85％乙醇1-4天，取出晾干；

3)将步骤2)所得样品浸泡于无水乙醇1-2天；

4)将步骤3)所得样品浸泡于100-10000ppm双乙酸钠液体10-20天；

5)将步骤4)所得样品取出，浸泡于75-85％乙醇1-2天；

6)将步骤5)所得样品浸泡于本发明第一方面所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂中，即可得生物标本。

在本发明一实施例中，所述生物标本的制备方法的步骤1)，待浸制的生物样品浸泡于45％乙醇2天。

在本发明一实施例中，所述生物标本的制备方法的步骤2)，将步骤1)所得样品浸泡于80％乙醇1-2天，取出晾干。

在本发明一实施例中，所述生物标本的制备方法的步骤3)，将步骤2)所得样品浸泡于无水乙醇1天。

在本发明一实施例中，所述生物标本的制备方法的步骤4)，将步骤3)所得样品浸泡于100ppm双乙酸钠液体15天。

在本发明一实施例中，所述生物标本的制备方法的步骤5)，将步骤4)所得样品取出，浸泡于80％乙醇1天。

本发明第三方面提供如本发明第一方面所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂、如本发明第二方面所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的制备方法或如本发明第三方面所述的生物标本的制备方法在生物标本防霉防腐中的应用，其中，所述生物标本防霉防腐剂中的应用包括对脊椎动物、哺乳动物和软体动物标本，皮张及组织进行长期防霉防腐保存处理。

在本发明一实施例中，所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂在生物标本防霉防腐中的应用时以涂抹、浸泡或者喷淋标本，起到标本防霉防腐作用。

本发明有益效果如下：

1、本发明以野生蓝莓提取物、卡卡杜李提取物、麝香草酚等天然植物提取物组合起来，制备环保型海洋生物浸制标本的复合防霉防腐制剂，其配方合理、成分科学安全、环境友好，无二次污染，是一种天然无毒素的环保型防腐制剂；

2、本发明提供的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂有较强抑菌抗霉效果，其对动物标本的组织器官无任何破坏、发暗、变色作用，保持自然状态，可以长久保存，对保护标本，减少因标本霉变带来的经济损失，以及保护人类健康具有重要的现实意义。

附图说明

图1为本发明实施例提供的海洋生物标本保存的标本外观图；

图2为本发明实施例提供的海洋生物标本保存的标本肌肉形态观察图；

图3为本发明实施例提供的海洋生物标本保存的标本电子显微镜观察图。

具体实施方式

以下所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。

实施例1：天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的制备

本发明提供天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂主要由以下浓度含量的组分组成：野生蓝莓提取物100-10000PPM、卡卡杜李提取物100-10000PPM、麝香草酚100-10000PPM、余量为水。

根据上述组分配制，即可得天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂。

实施例2：天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的抗霉变效果检测

1、选测菌种：黑曲霉菌、米曲霉菌、木霉菌、青霉菌、白曲霉菌、黄曲霉菌(均为标本上分离到的霉菌)；

2、检测方法：平板抑菌圈法(采用营养琼脂平板)；

3)检测温度：26℃±2℃；

4、检测时间：72小时；

5、检测结果：本发明防腐制剂对所选菌种均有明显的抑制效果，抑菌圈直径如下：白曲霉菌185mm、黑曲霉菌132mm、黄曲霉140mm、青霉菌134mm、木霉菌79mm、米曲霉菌145mm。

实施例3：天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的抑菌效果检测

1、选测菌种：枯草杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、链球菌、金黄色葡萄球菌等(皆为实验室常规菌种)；

2、检测方法：平板抑菌圈法(采用营养琼脂平板)；

3)检测温度：35℃±1℃；

4、检测时间：24小时；

5、检测结果：用卡尺测量。实验结果显示本发明防腐制剂对所选菌种均有明显的抑制效果，抑菌圈直径介于18-36mm之间。

实施例4：天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂对海洋生物标本的保存效果检测

1、实验材料：鱼、虾、蟹和贝购自湛江东风市场；本发明实施例1制备的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂；10％甲醛保存液，广东省化学试剂工程技术研究开发中心生产；无水乙醇，广东省化学试剂工程技术研究开发中心；2.5％戊二醛EM电镜固定液：50mL0.2M PBS(ph7.2)与10mL25％戊二醛混合后用双蒸水定容至100ml，4℃保存备用。

2、实验方法：

2.1样品浸泡处理

将鱼、虾、蟹和贝等样品平分两份，一份为实验组，一份为对照组。先用钩子取出鱼类的内脏，洗刷干净甲壳类动物表面，放入透明塑料箱中。

生物标本的制备方法，按下述步骤进行：

1)将待浸制的生物样品浸泡于45％乙醇2天；

2)将步骤1)所得浸泡于80％乙醇1-2天，取出晾干；

3)将步骤2)所得样品浸泡于无水乙醇1天；

4)将步骤3)所得样品浸泡于100ppm双乙酸钠液体15天；

5)将步骤4)所得样品取出，浸泡于80％乙醇1天；

6)将步骤5)所得样品浸泡于标本保存液中，即可得生物标本。

其中，步骤2)中虾、蟹和贝的浸泡时间为1天，鱼的浸泡时间为2天；步骤5)中虾、蟹和贝需要沥干后再浸泡于标本保存液中，而鱼类则不需要沥干即可浸泡于标本保存液中。步骤6)中实验组采用本发明实施例1提供的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂作为保存液，对照组采用10％甲醛作为保存液。

上述生物标本制备完成后，密封保存，3个月、6个月后定期取肌肉组织观察。

2.2取样方法

5mL离心管、镊子、手术剪高压灭菌后，取75％酒精备用。甲壳类动物，贝类打开壳，取贝肉的肌肉组织；蟹、虾剥壳取肌肉部分；鱼类取背鳍左右部分的肌肉组织。实验组和对照组平行取样，一个样品取样2次，每管3-4个1立方毫米大小的肌肉组织，置于5mL 离心管中，加EM电镜固定液至管口约1-2cm处，盖紧离心管盖，用封口膜将盖子与管身接口处进行密封，置于泡沫箱中，快递至中山大学生命科学院电镜室。

观察长时间浸泡后实验组与对照组对样品的肌肉组织伤害差别及各自的保存效果。

3、实验结果：

1)标本外观观察

实验组浸泡的标本色彩保留度良好，可清晰辨认，与原样品相似度较高，骨骼僵硬，与刚放入保存液时的状态相近；而对照组标本表面表皮掉落，有明显褪色现象，有较大的刺鼻气味，骨骼软化，整体较软，无其他变化，结果详见图1。

2)标本肌肉形态观察

实验组标本，脱水较为严重。甲壳类标本肌肉组织溶解程度高，甚至会出现肌肉组织自溶，变成黄色粘稠液体流出，肉质较软但颜色黄，得率低；对照组贝类肉质偏硬，不易开壳，但整体完整性较好，较好的保存了里面的肌肉组织，结果详见图2。

3)电镜结果分析

电子显微镜结果如图3所示，实验组标本组织更密集，细胞排列较紧密，但是出现部分溶解；对照组断裂部分多，肌纤维断裂痕迹有长有短，细胞凋亡程度更剧烈。但对照组可见高尔基体，实验组未见明显细胞器。

综上所述，通过从标本外观观察、标本肌肉形态观察以及电子显微镜等结果分析，本发明提供的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂对浸泡标本的整体保存效果要优于传统的福尔马林保存液，同时其无味无色低毒，极大减少了挥发性气味对人体的损害及本身颜色对浸泡标本样品带来的影响，虽然其成分可能会造成样品较为严重的脱水，导致长期保存中防腐效果略微逊色于福尔马林保存液，但是进行规律的置换浸泡液可以解决这个问题。该复合防霉防腐剂成分为天然植物提取物，环保绿色，符合当今社会总体发展趋势，同时在达到良好效果的前提下，对样品不会造成不可逆的伤害，外观的保存上完全符合浸制标本的要求，制作容易，方法简便，具有极大的推广价值，是福尔马林保存液的理想替代产品。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂，其特征在于，主要由以下浓度含量的组分制备所得：野生蓝莓提取物100-10000PPM、卡卡杜李提取物100-10000PPM、麝香草酚100-10000PPM、余量为水。

2.一种天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：按照权利要求1所述天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的组成称取各组分，搅拌混合均匀制备所得。

3.一种生物标本的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将待浸制的生物样品浸泡于40-50％乙醇1-3天；

2)将步骤1)所得样品浸泡于75-85％乙醇1-4天，取出晾干；

3)将步骤2)所得样品浸泡于无水乙醇1-2天；

4)将步骤3)所得样品浸泡于100-10000ppm双乙酸钠液体10-20天；

5)将步骤4)所得样品取出，浸泡于75-85％乙醇1-2天；

6)将步骤5)所得样品浸泡于如权利要求1所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂中，即可得生物标本。

4.如权利要求3所述的生物标本的制备方法，其特征在于，所述步骤1)，待浸制的生物样品浸泡于45％乙醇2天。

5.如权利要求3所述的生物标本的制备方法，其特征在于，所述步骤2)，将步骤1)所得样品浸泡于80％乙醇1-2天，取出晾干。

6.如权利要求3所述的生物标本的制备方法，其特征在于，所述步骤3)，将步骤2)所得样品浸泡于无水乙醇1天。

7.如权利要求3所述的生物标本的制备方法，其特征在于，所述步骤4)，将步骤3)所得样品浸泡于100ppm双乙酸钠液体15天。

8.如权利要求3所述的生物标本的制备方法，其特征在于，所述步骤5)，将步骤4)所得样品取出，浸泡于80％乙醇1天。

9.如权利要求1所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂、如权利要求2所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂的制备方法或如权利要求3所述的生物标本的制备方法在生物标本防霉防腐剂中的应用，其中，所述生物标本防霉防腐中的应用包括对脊椎动物、哺乳动物和软体动物标本，皮张及组织进行长期防霉防腐保存处理。

10.如权利要求3所述的应用，其特征在于，所述的天然植物提取物的标本环保型复合防霉防腐剂在生物标本防霉防腐中的应用时以涂抹、浸泡或者喷淋标本，起到标本防霉防腐作用。

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