CN111269962A - 一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，属于生物检测技术领域。所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述的R1包括：表面活性剂A、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、显色剂和缓冲溶液；所述的R2包括：表面活性剂B、过氧化物酶、4‑氨基安替比林、稳定剂和缓冲溶液；通过控制试剂R1中表面活性剂的具体组分以及试剂R2中聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的浓度比，不仅使试剂盒的灵敏度，准确度显著增加，提高了试剂盒的稳定性，而且该试剂盒中，组分简单易得，制备成本低，有利于临床广泛应用。

Description

一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用
技术领域
本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用。
背景技术
随着生活水平的提高，人们的血脂水平逐渐升高，血脂异常患病率明显提高。以低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)或血清总胆固醇(serum total cholesterol，TC)升高为特点的血脂异常是动脉粥样硬化性心血管疾病重要的危险因素。近年来发现小而密低密度脂蛋白胆固醇(smalland low densitylipoprotein cholesterol，sd LDL-C)与普通低密度脂蛋白胆固醇相比，更容易被氧化，其致动脉粥样硬化能力更强，为发生冠状动脉粥样硬化性心脏病即冠心病风险因素之一，逐步引起国内外学者的关注。
小而密低密度脂蛋白胆固醇的临床意义在国内外很早就已被发现，早在2007年的中国成人血脂异常防治指南中亦有指出，其作为低密度脂蛋白胆固醇的亚组分之一，更容易导致动脉粥样硬化，但受于方法学限制，使得临床检测并未广泛开展，随着科学的不断发展进步，其临床检测的方法也不断的在更新。
目前针对小而密低密度脂蛋白胆固醇的测定方法主要有核磁共振光谱法、分子筛色谱法、电子显微镜技术、动态光散射法、微流控芯片毛细管电泳法。其中常用的有：(1)密度梯度超速离心法，是一种扩展型脂质特征测定产品，可报告22种血液胆固醇成分(包括对非空腹LDL亚型及脂蛋白所有子类的直接测定)，是目前国际上小而密低密度脂蛋白胆固醇测定的参考方法。(2)管式凝胶电泳：采用管式聚丙烯酰氨凝胶电泳原理，可完全分离鉴定所有脂蛋白(含7种LDL亚型，10种HDL亚型)。但上述两种检测方法均需要特殊实验设备，并且耗时久，操作复杂，并不适合临床常规检测。(3)过氧化物酶法：在国际上，日本电化生研公司最先推出了适用于临床常规开展的均相酶法，在中国与九强生物和生研技术合作，开发出了过氧化物酶法检测sd LDL-C的方法，在所有临床实验室应用当前设备都可以进行检测，也使得小而密低密度脂蛋白胆固醇作为冠心病的一个标志物将可能具有更广泛的临床实用性。
但是目前在检测过程中普遍存在的问题是试剂盒稳定性差，检测准确度和精密度不高。
例如，中国专利申请201810034866.2中公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇试剂盒，由两个独立的试剂R1和试剂R2组成，R1含缓冲液、脂蛋白脂肪酶、非离子表面活性剂、血清白蛋白、肝素钠、镁离子、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶或过氧化物酶、Trinder’s反应剂A、稳定剂、防腐剂；R2含缓冲溶液、非离子表面活性剂、Trinder’s反应剂B、叠氮钠、防腐剂。以试剂1先与标本混合消除SD-LDLC之外的胆固醇，在试剂2加入后针对SD-LDLC反应，Trinder’s反应剂B呈色测定吸光度，计算其含量。但是该申请中使用叠氮钠作为防腐剂会对试剂2中的胆固醇酯酶产生一定程度的抑制作用，因此影响测定的准确度。
又如，中国专利申请201910065449.9中公开一种低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用，该试剂盒由试剂R1和试剂R2组成；试剂R1包括：表面活性剂a、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、氯化镁和缓冲液；试剂R2包括：表面活性剂b、显色剂、氯化镁和缓冲液，该发明为了提高试剂盒的灵敏度和准确度在试剂R2中加入了松三糖和乳果糖，但是松三糖和乳果糖的价钱相对比较贵，因此会在一定程度上提升试剂盒的成本，导致试剂盒的价钱提高，给病人造成一定的经济压力，因此还需要继续开发价格适中的试剂盒。
为了解决现有技术中检测试剂盒存在的问题，在保证检测准确度和精密度的基础上，降低试剂盒的成本，提供一种稳定性好，准确度和精密度高，且价格适中的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒十分必要。
发明内容
针对现有技术在测定sd LDL-C含量过程中存在的试剂盒稳定性差，检测准确度和精密度低，且价格比较贵的问题，提供了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其应用，该试剂盒通过控制试剂中表面活性剂的种类以及浓度比，明显提高了试剂盒的稳定性，并使检测的准确度和精密度明显提高，并且降低了试剂盒的成本。
为了实现上述技术效果，本发明采用如下技术方法：
一方面，本发明提供了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
所述的R1包括：表面活性剂A、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、显色剂和缓冲溶液；
所述的R2包括：表面活性剂B、过氧化物酶、4-氨基安替比林、稳定剂和缓冲溶液。
其中，所述的表面活性剂A为椰油基羟乙基磺酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱和十六烷基异丙酯中的一种或几种；
优选地，所述的表面活性剂A为椰油基羟乙基磺酸钠和/或十六烷基异丙酯；
再优选地，所述的表面活性剂A为浓度比为2-6：1的椰油基羟乙基磺酸钠和十六烷基异丙酯。
所述的表面活性剂B为吐温-20、吐温-80、司盘-60、司盘-80和曲拉通X-100中的一种或几种；
优选地，所述的表面活性剂B为吐温-20、司盘-60和曲拉通X-100中的一种或几种；
再优选地，所述的表面活性剂B为曲拉通X-100。
所述的稳定剂为聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的混合物，所述的聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的浓度比为1：1-5。
所述的显色剂为N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠。
所述的缓冲液为磷酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液、枸橼酸缓冲液和HEPES缓冲液中的一种或几种，优选为HEPES缓冲液。
优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠80-120mmol/L、十六烷基异丙酯20-50mmol/L、胆固醇酯酶1500-2500U/L、胆固醇氧化酶1000-2000U/L、过氧化物酶1500-2500KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠1-3mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸50-80mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 80-100mmol/L、过氧化物酶5000-6500U/L、4-氨基安替比林1-3mmol/L、聚氧乙烯月桂醚2-5mmol/L、羟丙基甲基纤维素5-10mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸50-80mmol/L。
再优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠90-110mmol/L、十六烷基异丙酯30-40mmol/L、胆固醇酯酶1800-2200U/L、胆固醇氧化酶1500-1800U/L、过氧化物酶1800-2200KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠1.5-2.5mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸60-70mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 90-100mmol/L、过氧化物酶5500-6000U/L、4-氨基安替比林1.5-2.5mmol/L、聚氧乙烯月桂醚3-4mmol/L、羟丙基甲基纤维素7-9mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸60-70mmol/L。
进一步优选地，所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠100mmol/L、十六烷基异丙酯40mmol/L、胆固醇酯酶2000U/L、胆固醇氧化酶1500U/L、过氧化物酶2000KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠2mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 100mmol/L、过氧化物酶5000U/L、4-氨基安替比林2mmol/L、聚氧乙烯月桂醚3.5mmol/L、羟丙基甲基纤维素8mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L。
所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，还包括低密度脂蛋白胆固醇标准品冻干粉2g，需要生理盐水溶解后使用。
本发明还提供了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒的使用方法。
本试剂盒适用于杜邦AR、日立7080/7170/7600/7180、迈瑞BS320、迪瑞CS600、雅培C8000、东芝TBA40FR、奥林巴斯AU2700、贝克曼DXC800、西门子ADVIA2400、罗氏P800等全自动生化分析仪。
该测定试剂盒的测定方法为两点终点法，反应方向为升反应：
(1)将300μL试剂R1和3μL待测样本混合均匀，37℃孵育5min后得到反应液1，测定吸光度A1，测定主波长为546nm、次波长为660nm；
(2)加入100μL试剂R2混合均匀，反应5min，得到反应液2，测定吸光度A2，测定主波长为546nm、次波长为660nm；
(3)按照步骤(1)-(2)，对不同浓度的低密度脂蛋白胆固醇标准品的吸光度进行测定，得到吸光度A空白和A标准；
(4)以标准品的吸光度变化值ΔA(A标准-A空白)为纵坐标，以相应的标准品浓度c为横坐标，绘制标准曲线，得到标准曲线方程；
(5)计算样本的吸光度变化值ΔA(A2-A1)，根据标准曲线方程，得到样本中低密度脂蛋白胆固醇浓度。
与现有技术相比本发明的有益效果在于：
(1)本发明提供的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，通过向试剂R2中加入稳定剂聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素，并控制两者的浓度比，使得试剂盒的灵敏度，准确度显著增加，提高了试剂盒的稳定性；
(2)本发明提供的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，通过控制试剂R1中表面活性剂的具体组分以及浓度比，可以有效的选择性地保护LDL，清除非LDL(HDL、VLDL、CM)减少其对LDL-C含量测定的干扰；试剂2中的非离子表面活性剂(曲拉通X-100)能够打开LDL，使LDL-C与显色剂反应而显色；
(3)本发明提供的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒准确度高，理论浓度与实测浓度的线性相关系数r≧0.9970；
(4)本发明提供的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所需标本量少(3μL血清即可)，且基本不受血红蛋白、甘油三酯、胆红素等影响；当血红蛋白、甘油三酯、胆红素分别高至5g/L、18.2mmol/L和250μmol/L时，对LDL-C测定无明显影响。
(5)本发明提供的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒中，组分简单易得，制作成本低。
附图说明
图1为低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒标准曲线；
图2为本发明低密度脂蛋白胆固醇试剂盒线性范围图。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐明本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
测试条件与方法：
仪器：日立7080全自动生化分析仪
参数：
主波长 546nm 样品 3μL
次波长 660nm 试剂1 300μL
反应温度 37℃ 试剂2 100μL
反应方向 升反应 反应类型 终点法
操作步骤：
Figure BDA0002416183060000061
实施例1
本实施例的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒组分及其浓度如下：
试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠80mmol/L、十六烷基异丙酯20mmol/L、胆固醇酯酶1500U/L、胆固醇氧化酶1000U/L、过氧化物酶1500KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠1mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸50mmol/L；
试剂R2包括：曲拉通X-100 80mmol/L、过氧化物酶5000U/L、4-氨基安替比林1mmol/L、聚氧乙烯月桂醚2mmol/L、羟丙基甲基纤维素5mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸50mmol/L。
实施例2
本实施例的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒组分及其浓度如下：
试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠120mmol/L、十六烷基异丙酯50mmol/L、胆固醇酯酶2500U/L、胆固醇氧化酶2000U/L、过氧化物酶2500KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠3mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸80mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 100mmol/L、过氧化物酶6500U/L、4-氨基安替比林3mmol/L、聚氧乙烯月桂醚5mmol/L、羟丙基甲基纤维素10mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸80mmol/L。
实施例3
本实施例的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒组分及其浓度如下：
试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠90mmol/L、十六烷基异丙酯45mmol/L、胆固醇酯酶1800U/L、胆固醇氧化酶1600U/L、过氧化物酶2200KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠1.8mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸60mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 95mmol/L、过氧化物酶5600U/L、4-氨基安替比林1.5mmol/L、聚氧乙烯月桂醚5mmol/L、羟丙基甲基纤维素5mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸60mmol/L。
实施例4
本实施例的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒组分及其浓度如下：
试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠120mmol/L、十六烷基异丙酯20mmol/L、胆固醇酯酶2400U/L、胆固醇氧化酶1800U/L、过氧化物酶2300KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠2.5mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸70mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 90mmol/L、过氧化物酶6300U/L、4-氨基安替比林2.8mmol/L、聚氧乙烯月桂醚2mmol/L、羟丙基甲基纤维素10mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L。
实施例5
本实施例的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒组分及其浓度如下：
试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠100mmol/L、十六烷基异丙酯40mmol/L、胆固醇酯酶2000U/L、胆固醇氧化酶1500U/L、过氧化物酶2000KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠2mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 100mmol/L、过氧化物酶5000U/L、4-氨基安替比林2mmol/L、聚氧乙烯月桂醚3.5mmol/L、羟丙基甲基纤维素8mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L。
对比例1
与实施例5相比，试剂R1中椰油基羟乙基磺酸钠和十六烷基异丙酯的浓度比为0.5：1，即椰油基羟乙基磺酸钠20mmol/L、十六烷基异丙酯40mmol/L，其他步骤与操作与实施例5相同。
对比例2
与实施例5的区别在于：试剂R1中椰油基羟乙基磺酸钠和十六烷基异丙酯的浓度比为10：1，即椰油基羟乙基磺酸钠100mmol/L、十六烷基异丙酯10mmol/L，其他步骤与操作与实施例5相同。
对比例3
与实施例5的区别在于：试剂R2中聚氧乙烯月桂醚和羟丙基甲基纤维素的浓度比为1：0.5，即聚氧乙烯月桂醚3.5mmol/L、羟丙基甲基纤维素1.75mol/L，其他步骤与操作与实施例5相同。
对比例4
与实施例5的区别在于：试剂R2中聚氧乙烯月桂醚和羟丙基甲基纤维素的浓度比为1：10，即聚氧乙烯月桂醚3.5mmol/L、羟丙基甲基纤维素35mol/L，其他步骤与操作与实施例5相同。
对比例5
中国专利申请CN109628553A所述的试剂盒。
实验例1小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒标准曲线
采用低密度脂蛋白胆固醇标准品，浓度分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mmol/L，以实验例5为例，按照上述测定步骤得到，测定低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒标准曲线(如图1所示)。其中，标准品的吸光度变化值ΔA(A标准-A空白)为纵坐标，以相应的标准品浓度c为横坐标，标准曲线方程：y＝0.1005x+0.0023，R2＝0.9993。
实验例2线性范围测试
使用生理盐水分别配制浓度为2.0、4.0、6.0、8.0、10.0、12.0、13.0mmol/L的低密度脂蛋白胆固醇标准品，分别用实施例1-5和对比例5所述的试剂盒测定低密度脂蛋白胆固醇的含量，结果见下表1。
表1
Figure BDA0002416183060000091
根据表1的检测结果可知，在浓度为0-13mmol/L时，本发明实施例1-5制备的试剂盒的测试结果能达到理论值且两者的相关性较好，以实施例5为例，R2＝0.9997(如图2所示)，相关性优于对比例5制备的试剂盒(R2＝0.9995)，能够满足要求，本发明提供的试剂盒线性范围较宽。
实验例2稳定性试验
在2℃～8℃、无腐蚀性气体的避光环境中贮存低密度脂蛋白胆固醇浓度为4.0mmol/L的样本试剂，检测实施例1-5及对比例1、3、5试剂盒的稳定性。每月1号分别用两组试剂测定同一混合血清样本，测定三次取平均值，检测数据如表2所示。
表2
Figure BDA0002416183060000092
Figure BDA0002416183060000101
由上表2的检测数据可以看出本发明实施例1-5制备的试剂盒的稳定性明显高于对比例1、3、5中制备的试剂盒，对比例3改变稳定剂组分的浓度比不在本发明公开的范围内，其制备的试剂盒稳定性明显降低，长期放置试剂盒的检测变化率高达17.5％，稳定性较差。
实验例3精密度试验
将实施例1-5以及对比例2、4、5所制得的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒对浓度为4.0mmol/L的同一待测样本进行的多次反复测定，对所得的结果进行SD和CV的计算，检测数据如表3。
表3
Figure BDA0002416183060000102
Figure BDA0002416183060000111
根据上表3的检测数据可以看出本发明实施例1-5制备的试剂盒的精密度明显高于对比例2、4、5，本发明实施例5制备的试剂盒的变异系数仅为1.3％，明显低于其他实施例，对比例2改变试剂R1中表面活性剂组分的浓度比不在本发明保护范围内时试剂盒的精密度明显降低，对比例4改变R2中稳定剂组分的浓度比不在本发明保护范围内，也会对试剂盒的精密度造成影响，使精密度降低。
实施例4干扰实验
在正常血清中各自添加一定量血红蛋白、甘油三酯、胆红素和抗坏血酸，同时加入等体积的去离子水作为无干扰物血清，使用实施例1-5的LDL-C测定试剂盒，同时测定样本的浓度。以干扰程度为5％为测定系统对干扰物的最高忍受限，血清中血红蛋白5g/L以下、甘油三酯10g/L以下、胆红素400mg/L以下和抗坏血酸500mg/L以下，不影响LDL-C测定结果。
本发明所使用的试剂简单易得，通过控制各种试剂的浓度比，明显提高了试剂盒的准确性、精密性以及稳定性，降低了试剂盒的成本，有利于试剂盒在临床的广泛应用。
以上述数仅为本发明的较佳实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，其特征在于：所述的试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
所述的R1包括：表面活性剂A、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、过氧化物酶、显色剂和缓冲溶液；
所述的R2包括：表面活性剂B、过氧化物酶、4-氨基安替比林、稳定剂和缓冲溶液；
其中，所述的表面活性剂A为椰油基羟乙基磺酸钠、椰油酰胺丙基甜菜碱和十六烷基异丙酯中的一种或几种。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂A为椰油基羟乙基磺酸钠和/或十六烷基异丙酯。
3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂A为浓度比为2-6：1的椰油基羟乙基磺酸钠和十六烷基异丙酯。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂A为浓度比为2-4：1的椰油基羟乙基磺酸钠和十六烷基异丙酯。
5.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的表面活性剂B为吐温-20、吐温-80、司盘-60、司盘-80和曲拉通X-100中的一种或几种。
6.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂为聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的混合物。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述的聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的浓度比为1：1-5。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述的聚氧乙烯月桂醚和和羟丙基甲基纤维素的浓度比为1：1.5-3。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于：所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠80-120mmol/L、十六烷基异丙酯20-50mmol/L、胆固醇酯酶1500-2500U/L、胆固醇氧化酶1000-2000U/L、过氧化物酶1500-2500KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠1-3mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸50-80mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 80-100mmol/L、过氧化物酶5000-6500U/L、4-氨基安替比林1-3mmol/L、聚氧乙烯月桂醚2-5mmol/L、羟丙基甲基纤维素5-10mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸50-80mmol/L。
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述的小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒，所述的试剂R1包括：椰油基羟乙基磺酸钠100mmol/L、十六烷基异丙酯40mmol/L、胆固醇酯酶2000U/L、胆固醇氧化酶1500U/L、过氧化物酶2000KU/L、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠2mmol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L；
所述的试剂R2包括：曲拉通X-100 100mmol/L、过氧化物酶5000U/L、4-氨基安替比林2mmol/L、聚氧乙烯月桂醚3.5mmol/L、羟丙基甲基纤维素8mol/L和pH＝7.0的4-羟乙基哌嗪乙磺酸65mmol/L。
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