CN111235222A - 一种甘油三酯检测试剂盒 - Google Patents
一种甘油三酯检测试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN111235222A CN111235222A CN202010049934.XA CN202010049934A CN111235222A CN 111235222 A CN111235222 A CN 111235222A CN 202010049934 A CN202010049934 A CN 202010049934A CN 111235222 A CN111235222 A CN 111235222A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- stirring
- magnetic stirrer
- solution
- dissolved
- reagent
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 56
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 38
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 46
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 19
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 239000007990 PIPES buffer Substances 0.000 claims abstract description 17
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical compound [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 claims abstract description 12
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 9
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 claims abstract description 9
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 claims abstract description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 59
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 33
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 15
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims description 14
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 108090000371 Esterases Proteins 0.000 claims description 11
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 claims description 11
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 claims description 11
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims description 11
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims description 11
- MWFOPMKUGZLPQA-UHFFFAOYSA-M sodium;3-(n-ethyl-3-methoxyanilino)propane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].[O-]S(=O)(=O)CCCN(CC)C1=CC=CC(OC)=C1 MWFOPMKUGZLPQA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 11
- 102000057621 Glycerol kinases Human genes 0.000 claims description 10
- 108700016170 Glycerol kinases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 10
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 10
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Natural products OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 9
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 9
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 9
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 8
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 8
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 8
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 8
- 238000007865 diluting Methods 0.000 claims description 7
- RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 4-aminoantipyrine Chemical compound CN1C(C)=C(N)C(=O)N1C1=CC=CC=C1 RLFWWDJHLFCNIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 claims description 6
- 229960001484 edetic acid Drugs 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 108010008604 L-alpha-glycerol-phosphate oxidase Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 claims description 3
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 3
- 108010024957 Ascorbate Oxidase Proteins 0.000 claims description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 abstract description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 8
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 abstract description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 5
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N Triolein Natural products O([C@H](OCC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC)C(=O)CCCCCCC/C=C\CCCCCCCC BAECOWNUKCLBPZ-HIUWNOOHSA-N 0.000 description 2
- PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N Trioleoylglycerol Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCC=CCCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 108010090622 glycerol oxidase Proteins 0.000 description 2
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 2
- 238000007127 saponification reaction Methods 0.000 description 2
- PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N triolein Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PHYFQTYBJUILEZ-IUPFWZBJSA-N 0.000 description 2
- 229940117972 triolein Drugs 0.000 description 2
- PVNIQBQSYATKKL-UHFFFAOYSA-N tripalmitin Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCC PVNIQBQSYATKKL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011481 absorbance measurement Methods 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M hexadecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 125000000325 methylidene group Chemical group [H]C([H])=* 0.000 description 1
- 238000011022 operating instruction Methods 0.000 description 1
- 238000011197 physicochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 229960001947 tripalmitin Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/61—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving triglycerides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种甘油三酯检测试剂盒，涉及甘油三酯检测试剂盒技术领域，包括第一试剂，所述第一试剂包括第一原辅料以及所述R‑1原料，所述R‑1原料包括以下成分：40‑60mmol/L的PIPES、0.5‑1.5g/L的叠氮钠、1‑3g/L的乙二胺四乙酸、0.05‑0.15mmol/L的吐温20、1.40‑1.50mmol/L的5’‑三磷酸腺苷二钠。本发明灵敏度高、线性范围、重复性、批间差、准确度等各项指标，符合该产品拟定的产品技术要求，能够满足临床实际需要，且使用方便，操作简单；参与偶联反应的成分都很稳定，不会引起内外源物质的干扰，稳定性好，可以长时间使用。
Description
技术领域
本发明涉及甘油三酯检测试剂盒技术领域，尤其涉及一种甘油三酯检测试剂盒。
背景技术
血清甘油三酯(TG)是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化(AS)作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危险因素日益受到重视。越来越多的临床与实验证据提示，富含TG脂蛋白(TRL)在AS病因学中扮演重要角色，可能作用于AS病变早期。
血清甘油三酯(TG)其测定方法需要较高的灵敏度和特异性。由最初血清TG测定方法一般分为物理化学法、化学法及酶法三大类。
血清中TG的化学组成并不单一，准确求其分子量较为困难。因标准不同，测定结果存在差异。化学法多采用三棕榈精(软脂精)(分子量807.3)、三油精(分子量895.4)，按摩尔浓度计算。酶法测定以三油精为标准物进行换算。1.法化学测定法包括：①TG的抽提分离；②皂化；③甘油糖的氧化；④氧化生成甲撑显色定量等四个阶段。操作较为繁杂，影响测定因素太多，共法准确性差，一般很少用。2.测定酶法测定包括：①TG的抽提与皂化；②加水分解生成甘油糖定量两个阶段。
目前常规检测应用的方法有甘油激酶(glycerolkinase，GK)法和甘油氧化酶(glyceroloxidase，glyod，GOD)法。操作简便，快速准确，并能在自动化生化分析仪上进行批量测定。但是上述存在灵敏度，精密度、准确性、线性范围等方面的问题，在临床应用上存在着差异性，为此我们设计出了一种甘油三酯检测试剂盒来解决以上问题。
发明内容
本发明的目的是为了解决现有技术中存在的缺点，而提出的一种甘油三酯检测试剂盒。
为了实现上述目的，本发明采用了如下技术方案：
一种甘油三酯检测试剂盒，包括第一试剂，所述第一试剂包括第一原辅料以及所述R-1原料，所述R-1原料包括以下成分：40-60mmol/L的PIPES、0.5-1.5g/L的叠氮钠、1-3g/L的乙二胺四乙酸、0.05-0.15mmol/L的吐温20、1.40-1.50mmol/L的5’-三磷酸腺苷二钠、0.7-0.8mmol/L的ADPS、2500-3500U/L的脂蛋白酯酶、800-1200U/L的抗坏血酸氧化酶、2500-3500U/L的过氧化物酶、8-12ml/L的庆大霉素。
优选的，所述R-1原料包括以下成分含量：50mmol/L的PIPES、1g/L的叠氮钠、2g/L的乙二胺四乙酸、0.1mmol/L的吐温20、1.49mmol/L的5’-三磷酸腺苷二钠、0.75mmol/L的ADPS、3000U/L的脂蛋白酯酶、1000U/L的抗坏血酸氧化酶、3000的过氧化物酶、10ml/L的庆大霉素。
优选的，还包括第二试剂，所述第二试剂包括第二原辅料以及R-2原料，所述R-2原料包括以下成分：40-60mmol/L的PIPES、0.5-1.5g/L的叠氮钠、0.94-0.95mmol/L的4-氨基安替比林、0.05-0.15mmol/L的甘露醇、2500-3500U/L的甘油激酶、20000-30000U/L的L-α-磷酸甘油氧化酶。
优选的，所述R-2原料包括以下成分：50mmol/L的PIPES、1g/L的叠氮钠、0.945mmol/L的4-氨基安替比林、0.1mmol/L的甘露醇、3000U/L的甘油激酶、24000U/L的L-α-磷酸甘油氧化酶。
优选的，所述第一试剂的制作规程包括如下步骤：
S1、称量所述第一试剂以及R-1试剂中的对应成分，称量时一人称量一人复核，称量误差控制在0.5％范围内；
S2、于1升容器内加水约0.8L，加入称量好的PIPES，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液A；
S3、将步骤S2中的溶液A调PH值至7.0，搅拌加入称量好的乙二胺四乙酸，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的吐温20，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的5’-三磷酸腺苷二钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的ADPS，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的脂蛋白酯酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的抗坏血酸氧化酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的过氧化物酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的庆大霉素，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液B；
S4、用工艺用水将步骤S3中得到的溶液B稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h，得到溶液C；
S5、将步骤S4中得到的溶液C PH值在7.0室温。
优选的，所述第一试剂的制作规程的所述S2中，搅拌时间为27-33min。
优选的，所述第二试剂的制作规程包括如下步骤：
S1、称量所述第二试剂以及R-2试剂中的对应成分，称量时一人称量一人复核，称量误差控制在0.5％范围内；
S2、于1L容器内加水约0.8L，加入称量好的PIPES，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液D；
S3、将步骤S2中的溶液D调PH值6.75室温,加入称量好的4-氨基安替比林，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的甘露醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的甘油激酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的L-α-磷酸甘油氧化酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液E；
S4、用工艺用水将步骤S3中得到的溶液E稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h，得到溶液F；
S5、将步骤S4中得到的溶液F PH值在6.75室温。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明提出的一种甘油三酯检测试剂盒，灵敏度高、线性范围、重复性、批间差、准确度等各项指标，符合该产品拟定的产品技术要求，能够满足临床实际需要，且使用方便，操作简单；参与偶联反应的成分都很稳定，不会引起内外源物质的干扰，稳定性好，可以长时间使用。
附图说明
图1为本发明提出的一种甘油三酯检测试剂盒的制备工艺流程图；
图2为本发明提出的一种甘油三酯检测试剂盒的生产工艺流程图。
具体实施方式
下面结合实施例及对本发明作进一步的详细说明，但本发明的实施方式不仅限于此。
参考图1-2，其中，图2中灰色图示代表10万级净化生产区域；无色图示代表清洁生产区域；
制备例
1、主要材料以及仪器
第一试剂：50mmol/L的PIPES、1g/L的叠氮钠、2g/L的乙二胺四乙酸、0.1mmol/L的吐温20、1.49mmol/L的5’-三磷酸腺苷二钠、0.75mmol/L的ADPS、3000U/L的脂蛋白酯酶、1000U/L的抗坏血酸氧化酶、3000的过氧化物酶、10ml/L的庆大霉素；
第二试剂：40-60mmol/L的PIPES、0.5-1.5g/L的叠氮钠、0.94-0.95mmol/L的4-氨基安替比林、0.05-0.15mmol/L的甘露醇、2500-3500U/L的甘油激酶、20000-30000U/L的L-α-磷酸甘油氧化酶。
仪器：AL104精密电子天平：灵敏度0.1mg，用于称量工序；
TC30K型精密电子天平：灵敏度10mg,用于称量工序；
T1000Y型电子天平：灵敏度10mg,用于称量工序；
磁力搅拌器：99-1型，用于溶解工序。
精密酸度计：FE20,用于PH工序。
电子秤：灵敏度20g,用于定容工序。
其中，玻璃烧杯等玻璃器皿。使用前确认玻璃烧杯等玻璃器皿已经按照《配制用容器清洗规程》处理完毕。
定量加量器：1ml、100-1000ul、20-200ul。
移液管：10ml、5ml。
2、制备步骤
2.1第一试剂的制作规程
S1、称量所述第一试剂以及R-1试剂中的对应成分，称量时一人称量一人复核，称量误差控制在0.5％范围内；
S2、于1升容器内加水约0.8L，加入称量好的PIPES，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液A；
S3、将步骤S2中的溶液A调PH值至7.0，搅拌加入称量好的乙二胺四乙酸，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的吐温20，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的5’-三磷酸腺苷二钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的ADPS，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的脂蛋白酯酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的抗坏血酸氧化酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的过氧化物酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的庆大霉素，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液B；
S4、用工艺用水将步骤S3中得到的溶液B稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h，得到溶液C；
S5、将步骤S4中得到的溶液C PH值在7.0室温。
2.2第二试剂的制作规程：
S1、称量所述第二试剂以及R-2试剂中的对应成分，称量时一人称量一人复核，称量误差控制在0.5％范围内；
S2、于1L容器内加水约0.8L，加入称量好的PIPES，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液D；
S3、将步骤S2中的溶液D调PH值6.75室温,加入称量好的4-氨基安替比林，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的甘露醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的甘油激酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的L-α-磷酸甘油氧化酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液E；
S4、用工艺用水将步骤S3中得到的溶液E稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h，得到溶液F；
S5、将步骤S4中得到的溶液F PH值在6.75室温。
在对第一试剂盒第二试剂制备后，均对第一试剂和第二试剂进行分装、包装和物料平衡。
其中：第一试剂试用的工序：1配制(称重、溶解、调ph、定容)、2分装、3包装、4物料平衡；
第二试剂试用的工序：1配制(称重、溶解、调ph、定容)、2分装、3包装、4物料平衡。
需要说明的是，分装：见《生产过程作业指导书》中分装操作程序；
包装：见《生产过程作业指导书》中包装操作程序；
物料平衡：领料单领出料配制后的重量之和与成品的重量之和的差值应该在领料的15％范围之内。
实施例
3、性能测试
3.1甘油三酯(TG)试剂盒批次和规格
分别制作不同批次的前述的制备例中的试剂盒，根据批次命名，分别为样品1、样品2、样品3，本产品共有12种包装规格，只是大小包装不同，对性能评估结果没有影响，因此只对其中一种最常用规格进行了测定，规格采用60ml(第一试剂:1×40ml,第二试剂:1×20ml)。
3.2校准品和质控品
用于性能评估的校准品：RANDOX Calibrator SERUM CAL 2，Lot:900UN，标示值:1.36mmol/L；
用于准确度性能评估的参考物质：Cobas公司的Calibrator for automatedsystems，Lot:171650，标示值:1.39mmol/L；
质控品为：RANDOX-HUM ASY CONTROL，Lot:844UN，target:1.14mmol/L，range:0.96-1.33mmol/L；Lot:578UE，target:2.88mmol/L，range:2.42-3.34mmol/L。
3.3实验仪器以及原理
实验仪器：西门子1200型全自动生化分析仪。
实验原理：
在一定波长处比色，吸光率(△A)与TG浓度成正比。
3.4产品性能指标
外观:试剂盒外观应整洁，文字符号标识清晰；试剂R1和R2为透明液体，不得有沉淀和絮状物；
装量：各规格试剂瓶装量应不少于标示量；
试剂空白吸光度：A546nm(1.0cm)≤0.2；
分析灵敏度:测定理论浓度2.26mmol/L样品，吸光度变化要求>0.100A；
线性区间：在0mmol/L-11.3mmol/L线性区间内，r≥0.990；
准确度：使用参考物质进行测定，实测值与标示值的相对偏差应在±15％内；
重复性：批内精密度CV≤5.0％；批间差≤10.0％；
稳定性:产品在2℃～8℃条件下存放至有效期末，检测指标符合以上1～7的指标要求。
3.5试剂空白检测
3.5.1产品技术要求
试剂空白吸光度：A546nm(1cm)≤0.10
3.5.2实验方法
用纯水测试样品1、样品2、样品3在测试主波长546nm下，记录测试启动时的吸光度(A1)和约5分钟(T)后的吸光度(A2)，A2测试结果即为试剂空白吸光度测定值。
3.5.3实验结果
3.5.4结论
样品1、样品2、样品3的TG试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果符合试剂空白吸光度：A546nm(1cm)≤0.10。
3.6分析灵敏度
3.6.1产品技术要求
用已知浓度的样品测试样品1、样品2、样品3，记录在试剂盒规定参数下产生的吸光度变化；本试验测定2.26mmol/L样品，吸光度变化要求>0.100A。
3.6.2实验方法
测定理论浓度约2.26mmol/L样本。
3.6.3实验结果
3.6.4结论：样品1、样品2、样品3的TG试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果表明测定理论值在2.26mmol/L样品，吸光度变化要求>0.100A。
3.7线性范围
3.7.1要求及制备方法
用接近线性范围上限的高浓度样品和接近线性范围下限的低浓度样品，混合成6个稀释浓度(x i)。分别测试试剂盒，每个稀释度测试3次，分别求测定均值(yi)。以稀释浓度(x i)为自变量，以测定均值(yi)为因变量求出线性回归方程及相关系数(r)。按公式(1)计算相关系数(r)。
用上述方法中稀释浓度xi代入线性回归方程，计算yi的估算值与yi的线性偏差，应符合产品技术要求的规定。
3.7.2产品技术要求
要求试剂盒在样本浓度0mmol/L-11.3mmol/L范围内，整个反应呈线性，r≥0.990，线性相对偏差<±15％。
3.7.3实验结果
3.7.4结论：样品1、样品2、样品3的TG试剂盒分别在西门子1200生化仪测定，实验结果表明在0mmol/L-11.3mmol/L测定范围内，线性误差均未出现线性异常状况,所有R2值均大于行业普遍认可的0.990的标准，线性相对偏差均<±15％。
3.8测量精密度
3.8.1重复性
在重现性条件下，用质控品测试试剂盒。测试10次，分别计算测量值的平均值和标准差，按公式(2)计算变异系数(CV)，应符合产品技术要求。
3.8.2产品技术要求
批内精密度 CV≤4.0％
3.8.3实验结果
3.8.4结论
在高低两个不同浓度水平的质控血清测试下，使用西门子1200生化分析仪测得的批内不精密度均小于4％，属于可接受范畴。
3.8.5批间差
用质控品分别测试3个不同批次的试剂盒。每个批次测试3次，分别计算每批3次检测的均值
以及总计9次的均值
按公式(3)、(4)计算相对偏差(R)，结果应符合产品技术要求的规定。
3.8.6产品技术要求
批间相对偏差≤5.0％
3.8.7实验结果
3.8.8结论
用质控品分别测试3个不同批次的样品1、样品2、样品3，使用西门子1200生化分析仪测得的批间相对偏差小于5％，属于可接受范畴。
3.9准确度
3.9.1产品技术要求
与有证参考物质的相对偏差不超过±15％。
3.9.2实验方法
测定TG Cobas公司的Calibrator for automated systems 3次，计算3次结果平均值，按公式(5)计算相对偏差，结果应符合产品技术要求：
式中：
X靶---有证参考物质的标示值。
3.9.3实验结果
3.9.4结论：
使用西门子1200生化分析仪测得的相对偏差均小于±15％，属于可接受范畴。
其中，产品配方工艺与此次进行性能分析的试剂无改变，本发明的试剂盒的检测结果具有较高的准确性。
综上所述，本发明实施例部分采用大量的试验证明本发明试剂盒的产品性能，甘油三酯(TG)检测试剂盒(酶比色法)在西门子1200型全自动生化仪上检测试剂空白、分析灵敏度、线性范围、重复性、批间差、准确度等各项指标，符合该产品拟定的产品技术要求，能够满足临床实际需要，且使用方便，操作简单；参与偶联反应的成分都很稳定，不会引起内外源物质的干扰，稳定性好，可以长时间使用。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，包括第一试剂，所述第一试剂包括第一原辅料以及所述R-1原料，所述R-1原料包括以下成分：40-60mmol/L的PIPES、0.5-1.5g/L的叠氮钠、1-3g/L的乙二胺四乙酸、0.05-0.15mmol/L的吐温20、1.40-1.50mmol/L的5’-三磷酸腺苷二钠、0.7-0.8mmol/L的ADPS、2500-3500U/L的脂蛋白酯酶、800-1200U/L的抗坏血酸氧化酶、2500-3500U/L的过氧化物酶、8-12ml/L的庆大霉素。
2.根据权利要求1所述的一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，所述R-1原料包括以下成分含量：50mmol/L的PIPES、1g/L的叠氮钠、2g/L的乙二胺四乙酸、0.1mmol/L的吐温20、1.49mmol/L的5’-三磷酸腺苷二钠、0.75mmol/L的ADPS、3000U/L的脂蛋白酯酶、1000U/L的抗坏血酸氧化酶、3000的过氧化物酶、10ml/L的庆大霉素。
3.根据权利要求1所述的一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，还包括第二试剂，所述第二试剂包括第二原辅料以及R-2原料，所述R-2原料包括以下成分：40-60mmol/L的PIPES、0.5-1.5g/L的叠氮钠、0.94-0.95mmol/L的4-氨基安替比林、0.05-0.15mmol/L的甘露醇、2500-3500U/L的甘油激酶、20000-30000U/L的L-α-磷酸甘油氧化酶。
4.根据权利要求3所述的一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，所述R-2原料包括以下成分：50mmol/L的PIPES、1g/L的叠氮钠、0.945mmol/L的4-氨基安替比林、0.1mmol/L的甘露醇、3000U/L的甘油激酶、24000U/L的L-α-磷酸甘油氧化酶。
5.根据权利要求1所述的一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂的制作规程包括如下步骤：
S1、称量所述第一试剂以及R-1试剂中的对应成分，称量时一人称量一人复核，称量误差控制在0.5％范围内；
S2、于1升容器内加水约0.8L，加入称量好的PIPES，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液A；
S3、将步骤S2中的溶液A调PH值至7.0，搅拌加入称量好的乙二胺四乙酸，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的吐温20，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的5’-三磷酸腺苷二钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的ADPS，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的脂蛋白酯酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的抗坏血酸氧化酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的过氧化物酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的庆大霉素，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液B；
S4、用工艺用水将步骤S3中得到的溶液B稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h，得到溶液C；
S5、将步骤S4中得到的溶液C PH值在7.0室温。
6.根据权利要求1所述的一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂的制作规程的所述S2中，搅拌时间为27-33min。
7.根据权利要求3所述的一种甘油三酯检测试剂盒，其特征在于，所述第二试剂的制作规程包括如下步骤：
S1、称量所述第二试剂以及R-2试剂中的对应成分，称量时一人称量一人复核，称量误差控制在0.5％范围内；
S2、于1L容器内加水约0.8L，加入称量好的PIPES，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的叠氮钠，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液D；
S3、将步骤S2中的溶液D调PH值6.75室温,加入称量好的4-氨基安替比林，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的甘露醇，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的甘油激酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解；加入称量好的L-α-磷酸甘油氧化酶，用磁力搅拌器2-3档搅拌至溶解，得到溶液E；
S4、用工艺用水将步骤S3中得到的溶液E稀释至1L，用磁力搅拌器2-3档搅拌2h，得到溶液F；
S5、将步骤S4中得到的溶液F PH值在6.75室温。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010049934.XA CN111235222A (zh) | 2020-01-17 | 2020-01-17 | 一种甘油三酯检测试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202010049934.XA CN111235222A (zh) | 2020-01-17 | 2020-01-17 | 一种甘油三酯检测试剂盒 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN111235222A true CN111235222A (zh) | 2020-06-05 |
Family
ID=70874690
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202010049934.XA Pending CN111235222A (zh) | 2020-01-17 | 2020-01-17 | 一种甘油三酯检测试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN111235222A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116718785A (zh) * | 2023-06-28 | 2023-09-08 | 河南健士莱杰医疗科技有限公司 | 一种稳定性强的甘油三酯试剂盒及其制备方法 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106399460A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-02-15 | 四川迈克生物科技股份有限公司 | 用于测定甘油三酯的试剂盒和方法 |
-
2020
- 2020-01-17 CN CN202010049934.XA patent/CN111235222A/zh active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106399460A (zh) * | 2016-09-29 | 2017-02-15 | 四川迈克生物科技股份有限公司 | 用于测定甘油三酯的试剂盒和方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 芮球红等: "甘油三酯测定中不同色原物质的性能评价" * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116718785A (zh) * | 2023-06-28 | 2023-09-08 | 河南健士莱杰医疗科技有限公司 | 一种稳定性强的甘油三酯试剂盒及其制备方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5801059A (en) | Method for detecting total ketone bodies in urine | |
| CN108008130A (zh) | 基于胶乳增强免疫比浊法测定Lp-PLA2的试剂盒及其制备方法 | |
| CN109557065B (zh) | 一种检测土壤中β-D-葡萄糖苷酶活性的分析方法 | |
| SE444863B (sv) | Forfarande for bestemning av jern i blodserum med ferrozinkomplex | |
| CN111235222A (zh) | 一种甘油三酯检测试剂盒 | |
| Zinterhofer et al. | Nephelometric determination of pancreatic enzymes II. Lipase | |
| NO791493L (no) | Kinetisk maaling av glucosekonsentrasjon i kroppsvaesker og formuleringer for anvendelse ved denne | |
| US5759860A (en) | Automated analysis method for detecting bacterial nitrite in urine | |
| Sharma et al. | A method for the sequential colorimetric determination of serum triglycerides and cholesterol | |
| CA2164167A1 (en) | Assay normalization method | |
| CN113702473A (zh) | 基于电位滴定法测定表面活性剂碱度的方法 | |
| WO2024148766A1 (zh) | 葡萄糖氧化酶活力的测定方法 | |
| CN107153044A (zh) | 一种改良型的同型半胱氨酸试剂盒及其检测方法 | |
| Wentz et al. | An integrated approach to lipid profiling: enzymatic determination of cholesterol and triglycerides with a centrifugal analyzer. | |
| CN111206071A (zh) | 一种总胆固醇检测试剂盒及其生产工艺 | |
| CN109799356A (zh) | 一种测定高密度脂蛋白胆固醇的试剂盒及方法 | |
| CN105842437A (zh) | 一种测定d-3-羟丁酸的试剂盒及其制备方法 | |
| CN111443050A (zh) | 一种糖胺聚糖制剂中溶出曲线检测的新方法 | |
| CN106442496A (zh) | 游离脂肪酸检测试剂盒 | |
| US4347313A (en) | Analytical determination of lipase | |
| CN111157744A (zh) | 一种载脂蛋白b检测试剂盒 | |
| CN111690716A (zh) | 一种小而密低密度脂蛋白胆固醇检测试剂盒的制备方法 | |
| CN111690715A (zh) | 一种小而密低密度脂蛋白胆固醇测定试剂盒及其测定方法 | |
| CN109613274A (zh) | 一种测定肌酐的试剂盒及方法 | |
| CN115201186B (zh) | 一种检测唾液尿酸的检测试纸条及制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20200605 |