CN111228248A - 一种治疗肝损伤的药物及花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用 - Google Patents

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范玲玲
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Abstract

本发明涉及一种治疗肝损伤的药物及花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用，属于化学医药领域。本发明的治疗肝损伤的药的活性成分为花姜酮。本发明的花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用，主要针对CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤及对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤。花姜酮用于小鼠急性肝损伤疾病模型，从小鼠生化指标和小鼠肝脏病理切片方面进行研究，结果可以看出，花姜酮对急性肝损伤有明显的治疗作用。

Description

一种治疗肝损伤的药物及花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面 的应用
技术领域
本发明涉及一种治疗肝损伤的药物及花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用，属于化学医药领域。
背景技术
肝脏是机体主要的代谢器官，能够通过氧化、还原、水解、结合等作用将体内外的非营养物质进行转化，它是物质合成代谢、能量产生和转换的重要枢纽。目前肝脏疾病成为威胁人类健康的常见疾病之一，由各种原因所导致的肝损伤目前是人们研究的热点。
急性肝损伤是最常见的肝脏疾病，它是指机体暴露于有害条件下，如病毒感染、肝毒性药物、有毒物质、乙醇及放射等，短期内出现肝功能指标(如谷草转氨酶AST、谷丙转氨酶ALT、超氧化物歧化酶SOD)的异常。急性肝损伤动物模型是用于研究急性肝损伤的重要工具，它为病理机制的研究、药物有效性及药物的新的作用靶点的研究提供了广泛的应用平台。当前，酒精性肝损伤、CCl4诱导的急性肝损伤以及脂多糖诱导的急性肝损伤模型已被广泛应用于治疗急性肝损伤药物的筛选、药物作用靶点及药理机制的研究，为临床药物的开发利用提供了基础。
急性肝损伤是慢性肝病的基础，严重或者持续的肝脏损伤可导致肝脏不可修复的损伤，致使肝脏功能衰竭。然而，当前并没有能够有效治疗急性肝损伤手段，主要表现在：(1)没有能够有效治疗急性肝损伤的药物；(2)联合用药会产生药物相互作用，甚至是毒性；(3)某些其他药物的使用会加重肝损伤的程度；(4)药物使用剂量较高，副作用大等。因此亟需寻找新的治疗药物，寻找新的药物靶点，为其治疗提供新途径。
有研究报道，花姜酮具有抗炎的作用，是一种强效的免疫调节剂，其免疫调节作用主要涉及蛋白激酶(MAPK)和核因子-κB(NF-κB)通路、一氧化氮(NO)的产生和炎症反应。此外文献报道，花姜酮还具有抗肿瘤的活性，是一种有效的抗肿瘤药物，能够诱导癌细胞的凋亡，抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移能力。目前，并没有研究报道花姜酮对急性肝损伤的作用。
发明内容
本发明的目的是提供一种治疗肝损伤的药物。该药物对CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤和对乙酰氨基酚诱导的急性肝损伤有治疗作用。
本发明还提供花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用。
为了实现上述目的，本发明的治疗肝损伤的药物所采用的技术方案如下：
一种治疗肝损伤的药物，所述药物的活性成分为花姜酮。
花姜酮(又名球姜酮，英文名Zerumbone)(2，6，9，9-四甲基-[2E，6E，10E]-环内酯-2，6，10-三烯-1-酮)是从多种姜科植物，特别是姜黄和姜黄属植物根状茎中分离到的一种环状11元倍半萜类化合物，它包含α，β-羰基结构和三个双键，c-6位置有一个孤立的键，c-2和c-10位置有两个双键，c-2和c-10处的双键是共轭二烯酮体系的一部分，花姜酮的相对分子质量为218.33，花姜酮化学结构如式如式(I)所示：
Figure BDA0001885098460000021
上述治疗肝损伤的药物中，所述的肝损伤为急性肝损伤。
所述急性肝损伤为CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤和对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤。
所述治疗肝损伤药物为降低谷丙转氨酶ALT和谷草转氨酶AST的活力、丙二醛MDA水平或提高超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活力的药物。
本发明的花姜酮的应用的技术方案如下：
花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用。
所述花姜酮的使用剂量为1.25～20μmol/kg。
优选的，所述花姜酮的使用剂量为5～20μmol/kg。
花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用中，所述的肝损伤为急性肝损伤。
花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用中，所述的急性肝损伤为CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤和对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤。
所述治疗肝损伤药物为降低谷丙转氨酶ALT和谷草转氨酶AST的活力、丙二醛MDA水平或提高超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活力的药物。
本发明的有益效果：
本发明的治疗肝损伤药物的活性成分为花姜酮，通过建立小鼠急性肝损伤疾病模型，从小鼠生化指标和小鼠肝脏病理切片方面研究发现花姜酮具有降低谷丙转氨酶ALT酶活力、谷草转氨酶AST酶活力及丙二醛水平的作用，对急性肝损伤有治疗作用，本发明对进一步开发与利用更具有临床实际意义与价值。
附图说明
图1为本发明实施例1中花姜酮对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中AST酶活力的影响；
图2为本发明实施例1中花姜酮对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中ALT酶活力的影响；
图3为本发明实施例1中花姜酮对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中SOD酶活力的影响；
图4为本发明实施例1中花姜酮对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠血清中GSH-Px酶活力的影响；
图5为本发明实施例1中花姜酮对CCl4诱导的急性肝损伤小鼠组织中MDA水平的影响；
图6为本发明实施例1中空白组小鼠肝脏组织切片图；
图7为本发明实施例1中CCl4诱导的急性肝损伤模型组小鼠肝脏组织切片图；
图8为本发明实施例1中CCl4诱导的急性肝损伤并花姜酮高剂量处理组小鼠肝脏组织切片图；
图9为本发明实施例2中花姜酮对酒精诱导的急性肝损伤小鼠血清中AST酶活力的影响；
图10为本发明实施例2中花姜酮对酒精诱导的急性肝损伤小鼠血清中ALT酶活力的影响；
图11为本发明实施例2中花姜酮对酒精诱导的急性肝损伤小鼠血清中SOD酶活力的影响；
图12为本发明实施例2中花姜酮对酒精诱导的急性肝损伤小鼠血清中GSH-Px酶活力的影响；
图13为本发明实施例2中花姜酮对酒精诱导的急性肝损伤小鼠组织中MDA水平的影响；
图14为本发明实施例2中空白组小鼠肝脏组织切片图；
图15为本发明实施例2中酒精诱导的急性肝损伤模型组小鼠肝脏组织切片图；
图16为本发明实施例2中酒精诱导的急性肝损伤并花姜酮高剂量处理组小鼠肝脏组织切片图；
图17为本发明实施例3中花姜酮对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠血清中AST酶活力的影响；
图18为本发明实施例3中花姜酮对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠血清中ALT酶活力的影响；
图19为本发明实施例3中花姜酮对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠血清中SOD酶活力的影响；
图20为本发明实施例3中花姜酮对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠血清中GSH-Px酶活力的影响；
图21为本发明实施例3中花姜酮对对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤小鼠组织中MDA水平的影响；
图22为本发明实施例3中空白组小鼠肝脏组织切片图；
图23为本发明实施例3中对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤模型组小鼠肝脏组织切片图；
图24为本发明实施例3中对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤并花姜酮高剂量处理组小鼠肝脏组织切片图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的实施方式作进一步说明。
本发明实施过程中使用的花姜酮购自美国Sigma公司，SPF级ICR小鼠购自山东省实验动物中心。
实施例1
花姜酮在制备治疗CCl4诱导的急性肝损伤药物中的应用
将72只ICR小鼠，6周龄，自由喂养1周，随机分为6组，包括空白对照组、CCl4诱导的急性肝损伤模型组、CCl4诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组(高剂量组、中剂量组、低剂量组)及CCl4诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组，每组12只。CCl4诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组按照高剂量组20μmol/kg、中剂量组5μmol/kg、低剂量组1.25μmol/kg，每天腹腔注射花姜酮；CCl4诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组给予联苯双酯350μmol/kg；CCl4诱导的急性肝损伤模型组和空白组给予等体积的DMSO；6个分组均连续注射五天。
最后一次注射2h后，CCl4诱导的急性肝损伤模型组、CCl4诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组、CCl4诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组均腹腔注射0.2％CCl4 0.1ml/kg(溶于大豆油)；空白组注射等体积的大豆油。
禁食不禁水12h后，小鼠摘眼球取血，将小鼠处死，取小鼠相同位置的完整肝脏一片固定于10％福尔马林中，制作小鼠肝脏病理切片，用HE染色。
检测小鼠血清中谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST酶活力，检测组织中超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px酶活力及丙二醛MDA的水平。
结果如图1、2、3、4、5所示，与模型组相比，花姜酮处理组小鼠血清中ALT、AST酶活力显著下降，组织中MDA水平也明显降低，肝组织在SOD、GSH-Px酶活力提升，且差异具有统计学意义。病理切片结果如图6、7、8所示，图6为空白组小鼠的肝脏组织，其细胞结构完整，形态正常，细胞排列整齐，无淤血，无细胞坏死现象；图7为CCl4所致的小鼠急性肝损伤模型的肝脏组织，其细胞间隙扩大，出现炎症浸润、淤血和细胞坏死现象；图8为花姜酮治疗后小鼠肝脏组织，肝细胞形态恢复正常，淤血与炎症减少，坏死面积显著减少，肝损伤情况得到明显改善。
实施例2
花姜酮在制备治疗酒精诱导的急性肝损伤药物中的应用
将72只ICR小鼠，6周龄，自由喂养1周，随机分为6组，包括空白对照组、酒精诱导的急性肝损伤模型组、酒精诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组(高剂量组、中剂量组、低剂量组)及酒精诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组，每组12只。酒精诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组按照高剂量组20μmol/kg、中剂量组5μmol/kg、低剂量组1.25μmol/kg，每天腹腔注射花姜酮；酒精诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组给予联苯双酯350μmol/kg；酒精性诱导的急性肝损伤模型组和空白组给予等体积的DMSO；6个分验组均连续腹腔注射五天。
上述处理2h后，酒精诱导的急性肝损伤模型组、酒精诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组、酒精诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组均灌胃56°红星二锅头15ml/kg，空白组小鼠灌等体积生理盐水，连续五天。
末次酒精灌胃处理后，小鼠禁食不禁水12h后摘眼球取血，将小鼠处死，取小鼠相同位置的完整肝脏一片固定于10％福尔马林中，制作小鼠肝脏病理切片，用HE染色。
检测小鼠血清中谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST、血清中超氧化物歧化酶SOD、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活力和组织中丙二醛MDA的水平。
结果如图9、10、11、12、13所示，在酒精诱导作用下，花姜酮处理组与模型组相比，小鼠血清中ALT、AST、MDA酶活力均有不同程的下降，血清中超氧化物歧化酶SOD酶活力、谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px活力升高。病理切片结果如图14、15、16所示，图14为空白组小鼠肝脏组织，细胞结构完整，形态正常，细胞排列整齐，无淤血，无细胞坏死现象；图15是酒精所致的小鼠急性肝损伤模型，细胞间隙扩大，出现炎症浸润，淤血和细胞坏死现象；图16为花姜酮治疗后小鼠肝脏组织，肝细胞形态趋近正常，淤血与炎症减少，坏死面积显著减少，肝损伤情况得到明显改善。
实施例3
花姜酮在制备治疗对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤药物中的应用
将72只ICR小鼠，6周龄，自由喂养1周，随机分为6组，包括空白对照组、APAP诱导的急性肝损伤模型组、APAP诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组(高剂量组、中剂量组、低剂量组)及APAP诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组，每组12只。APAP诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组按照高剂量组20μmol/kg、中剂量组5μmol/kg、低剂量组1.25μmol/kg，每天腹腔注射花姜酮；APAP诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组给予联苯双酯350μmol/kg；APAP诱导的急性肝损伤模型组和空白组给予等体积的DMSO；6个分组均连续腹腔注射五天。
最后一次注射2h后，APAP诱导的急性肝损伤模型组、APAP诱导的急性肝损伤并花姜酮处理组、APAP诱导的急性肝损伤并阳性药物处理对照组均腹腔注射APAP 300mg/kg(溶于0.9％生理盐水)；空白组注射等体积的生理盐水。
禁食不禁水12h后，小鼠摘眼球取血，将小鼠处死，取小鼠相同位置的完整肝脏一片固定于10％福尔马林中，制作小鼠肝脏病理切片，用HE染色。
检测小鼠血清中谷丙转氨酶ALT、谷草转氨酶AST，组织中超氧化物歧化酶SOD和谷胱甘肽过氧化物酶GSH-Px酶活力，组织中丙二醛MDA的水平。
结果如图17、18、19、20、21所示，与模型组相比，花姜酮处理组小鼠血清中AST、ALT酶活力显著下降，组织中MDA水平显著下降，肝组织中SOD、GSH-Px酶活力提升，差异具有统计学意义。病理切片结果如图22、23、24所示，图22为空白组小鼠肝脏组织切片，其细胞结构完整，形态正常，细胞排列整齐，无淤血，无细胞坏死现象；图23是APAP所致的小鼠急性肝损伤模型的肝脏组织切片，其细胞间隙扩大，出现炎症浸润、淤血和细胞坏死现象；图24为花姜酮治疗后小鼠肝脏组织切片，肝细胞形态恢复正常，淤血与炎症减少，坏死面积显著减少，肝损伤情况得到明显改善。
综上所述，本发明在CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤及对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤动物模型中，应用较低剂量的花姜酮治疗能显著降低血清中AST、ALT酶活力，改善肝组织中SOD、GSH-Px酶活力和MDA水平，并能有效逆转小鼠肝脏病理状况。在具有治疗作用的高、中、低剂量组中，高剂量对急性肝损伤的保护效果等于或者高于市面上常用治疗肝损伤的阳性药的效果。
实施例4
本实施例提供一种治疗肝损伤的药物，其药物的活性成分为花姜酮。所述药物能够接受用于食品、药学等方面的多种辅料，包括固态、液态等形式。固态制剂为粉剂，该粉剂制剂包括90％重量组分的花姜酮，其余为辅料。所述花姜酮原料在治疗肝损伤药物中纯度为99.5％以上。
固态制剂还可以药丸、颗粒、胶囊、片剂、栓剂、咀嚼片、肠溶片、口崩片、糖衣剂形态，花姜酮在固态制剂中的重量组分为90％，其余为辅料。所述花姜酮原料在治疗肝损伤药物中的纯度为99.5％以上。
液态形式的制剂，可以为乳液、溶液、悬浮液、注射用溶液、喷雾剂、添加甜味剂的口服液以及注射用水针、冻干粉针与输液剂等。花姜酮在液态形式的制剂中的重量组份为90％，其余为辅料。所述花姜酮原料在治疗肝损伤药物中的纯度为99.5％。
以上是本申请的优选实施例，并不用于限制本申请。在本领域的技术层面上，本申请可有所更改与变换。但凡在本申请的精神和原则之内，所做的任何修改，等同替换，改进等，均包含在本申请的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种治疗肝损伤的药物，其特征在于：所述药物的活性成分为花姜酮，花姜酮的化学结构如式(I)所示：
Figure FDA0001885098450000011
2.根据权利要求1所述的治疗肝损伤的药物，其特征在于：所述的肝损伤为急性肝损伤。
3.根据权利要求2所述的治疗肝损伤的药物，其特征在于：所述的急性肝损伤为CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤和对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤。
4.花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用，其特征在于：花姜酮的化学结构如式(I)所示。
5.根据权利要求4所述的花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用，其特征在于：所述的肝损伤为急性肝损伤。
6.根据权利要求5所述的花姜酮在制备治疗肝损伤药物方面的应用，其特征在于：所述的急性肝损伤为CCl4诱导的急性肝损伤、酒精诱导的急性肝损伤和对乙酰氨基酚(APAP)诱导的急性肝损伤。
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